韭菜粗提取物对柑橘青霉菌的抑菌效果研究
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韭菜根药用研究报告总结
韭菜根是一种草本植物,具有丰富的营养价值和药用价值。
根据对韭菜根的药用研究报告,总结如下:
1. 抗菌活性:韭菜根提取物对多种细菌和真菌具有抑制作用,特别是对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌等常见致病菌有较强的抗菌活性。
2. 抗氧化活性:韭菜根富含多种天然抗氧化物质,如维生素C、维生素E和多酚类化合物等,具有很强的抗氧化活性,可以
清除体内的自由基,延缓衰老过程,预防心血管疾病和癌症等疾病的发生。
3. 抗炎活性:韭菜根中的一些活性成分具有明显的抗炎作用,可以减轻炎症反应,缓解关节炎、肠道炎症等炎症性疾病的症状。
4. 降血脂作用:韭菜根中的硫含化合物具有降低血脂的作用,可以减少血液中的胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白等脂质物质的含量,预防和治疗高血脂症和动脉硬化等心血管疾病。
5. 抗肿瘤活性:韭菜根中的硫化合物和多酚类物质具有一定程度的抗肿瘤活性,可以抑制肿瘤细胞的增殖和扩散,促进肿瘤细胞凋亡,对预防和治疗某些癌症具有潜在的药用价值。
总之,韭菜根具有较强的抗菌、抗氧化、抗炎、降血脂和抗肿瘤等药用活性,可以作为传统药物或保健品的重要原料之一。
然而,需要进一步的临床研究来验证其药用效果和安全性,并寻找合适的应用方式和剂量。
12种中草药粗提液抑真菌效果研究
陈蔚燕;许良忠
【期刊名称】《青岛科技大学学报(自然科学版)》
【年(卷),期】2014(035)004
【摘要】选取了山豆根、麻黄草、穿山龙、茜草、穿心莲等12种中草药,采用水提和醇提两种方法制备药液,以番茄灰霉病菌、白菜灰斑病菌、柑橘炭疽病菌、辣椒炭疽病菌、小麦全蚀病菌、棉花枯萎病菌6种常见真菌为供试菌,采用室内抑制菌丝生长速率法进行抑菌实验,结果表明山豆根水提药液在5 000 mg·L-1浓度下对辣椒炭疽病菌的抑制率最高达到了52.84%,穿心莲醇提药液在400 mg·L-1浓度下对白菜灰斑病菌的抑制率最高达到了65.26%,进一步测定了茵陈醇提液、山豆根水提液的最小抑菌浓度.
【总页数】5页(P336-340)
【作者】陈蔚燕;许良忠
【作者单位】青岛科技大学化学与分子工程学院,山东青岛266042;青岛农业大学化学与药学院,山东青岛266109;青岛科技大学化学与分子工程学院,山东青岛266042
【正文语种】中文
【中图分类】S436.621
【相关文献】
1.一种真菌细胞壁粗提液对采后葡萄果皮几种抗病防御酶的影响 [J], 李宁;王步江;关文强
2.5种鹅膏菌毒素粗提液对几种植物病原真菌生长的抑制活性 [J], 唐萍;程霞;杨燕
3.7种中草药粗提液对肺成纤维细胞增殖抑制作用的比较研究 [J], 杨珺;王世岭;高远征;吴坤;孙燕;陈珊珊
4.15种中草药提取液抑真菌活性的研究 [J], 柴梦颖;焦镭
5.生姜黄酮粗提液对部分家蚕病原细菌的抑杀效果试验 [J], 王娜;褚衍亮
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柑橘提取物杀虫和抑菌活性的研究进展
胡秀荣;鹿连明;黄振东
【期刊名称】《浙江柑橘》
【年(卷),期】2009(26)4
【摘要】@@ 我国柑橘产量已经达到2000多万吨,成为世界上主要柑橘生产大国,同时我国也是世界上最大的柑橘罐头加工基地.柑橘在加工过程中产生大约30%~50%的皮渣副产物,国内外的研究学者就柑橘皮渣副产物的综合利用进行了大量的研究,本文综述了柑橘提取物在杀虫和抑菌方面的最新研究进展情况.
【总页数】4页(P28-31)
【作者】胡秀荣;鹿连明;黄振东
【作者单位】浙江省柑橘研究所,台州,318020;浙江省柑橘研究所,台州,318020;浙江省柑橘研究所,台州,318020
【正文语种】中文
【中图分类】S4
【相关文献】
1.石榴皮提取物抑菌活性研究进展 [J], 何宇
2.11种中草药提取物对柑橘意大利青霉抑菌活性及机理研究 [J], 周梦娇;万春鹏;陈金印
3.柑橘皮提取物体外抑菌活性的研究 [J], 丘晓花;冯明英;李燕
4.植物提取物活性成分的提取工艺及抑菌活性研究进展 [J], 张晶; 邢媛媛; 徐元庆;
史彬林
5.樟科植物提取物驱虫杀虫作用研究进展 [J], 王静;冯恩友;谢嘉辉;李文胤
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天然杀菌剂的杀菌效果评估与改进研究天然杀菌剂在农业、食品加工等方面具有重要应用价值。
然而,目前大多数天然杀菌剂存在着杀真菌效果不佳、持久性不够、易产生抗性等问题。
因此,本文将对一种天然杀菌剂的杀菌效果进行评估,并提出改进方法。
本研究选取某种植物提取物作为天然杀菌剂,并选择十种常见病原真菌进行抑菌实验。
实验方法主要包括涂布法和扩散法。
涂布法将天然杀菌剂涂布在琼脂平板上,然后将病原菌涂布在其上,观察菌落的生长情况;扩散法将天然杀菌剂填充于培养皿中,然后在培养皿上接种病原真菌,观察菌落周围的清晰度和生长情况。
评估指标主要包括抑菌率、最小抑制浓度和持久性等。
实验结果显示,该天然杀菌剂对全部十种病原真菌均具有不同程度的抑制作用。
其中,对于青霉菌和白色念珠菌等易产生抗性的病原菌,抑菌效果较差;对于霉菌和红色链霉菌等一些较为顽固的病原菌,抑菌效果较好。
抑菌率达到了60%以上的病原菌共有八种,其中对抗性较弱的病原菌抑菌率更高。
最小抑制浓度的测定结果表明,该天然杀菌剂对病原真菌的杀菌效果与浓度呈正相关关系。
持久性测试结果显示,该天然杀菌剂可在琼脂平板上保持一周以上的抑菌效果,但在需要长时间抑菌的实际应用中效果有限。
针对上述问题,本文提出以下改进方法。
首先,可通过天然杀菌剂的配方调整、提取工艺优化等方式,提高天然杀菌剂对抗性较强病原真菌的杀菌效果。
其次,可以尝试将天然杀菌剂与其他杀菌剂相结合,利用各种杀菌剂的相互协同作用,提高抗菌效果。
此外,在杀菌剂的制备过程中,可以适当调整PH值、温度等因素,以提高其持久性。
综上所述,本文对一种天然杀菌剂的杀菌效果进行了评估,并提出了相应的改进方法。
通过进一步研究和优化,天然杀菌剂的研发和应用将更加有效和可靠,为农业和食品加工等领域提供更好的抗菌解决方案。
接着上文,本文将进一步探讨天然杀菌剂的杀菌效果评估与改进研究。
首先,针对容易产生抗性的病原真菌,我们可以通过调整天然杀菌剂的配方和提取工艺来提高杀菌效果。
20种中草药提取物对一株柑橘采后致腐真菌的抑制作用胡梅;陈根强;杜根平【摘要】为进一步研发安全、高效的柑橘防腐保鲜剂提供一定的理论依据.采用滤纸片法和生长速率法,利用20种中草药的乙醇提取物对一株柑橘采后致腐真菌P01进行抑菌试验.结果表明,用滤纸片法进行抑菌作用测定,发现射干、苦参、厚朴、丁香、木香、连翘、肉桂的乙醇提取物对P01具有一定的抑制作用.用生长速率法,以提取物质量浓度15 mg/mL对初次筛选出的7种中草药提取物进一步进行抑菌试验,发现丁香、射干、厚朴、肉桂、苦参、木香的乙醇提取物抑菌率都在50%以上,效果最好的是丁香乙醇浸提物,抑菌率达到90.00%,其次是射干乙醇浸提物,其抑菌率达81.25%.【期刊名称】《天津农业科学》【年(卷),期】2009(015)002【总页数】3页(P56-58)【关键词】中草药提取物;柑橘;敛腐真菌;抑菌作用【作者】胡梅;陈根强;杜根平【作者单位】河南科技大学,林学院,河南,洛阳,471003;河南科技大学,林学院,河南,洛阳,471003;河南科技大学,林学院,河南,洛阳,471003【正文语种】中文【中图分类】S666柑橘是世界产量最多的水果,也是我国主要的水果之一[1]。
柑橘采后在贮藏运输的过程中,常常由于病原菌的侵染而造成腐烂,轻则影响果实的食用品质和商品价值,重则造成大量烂果,导致严重的经济损失[2]。
目前,柑橘防腐多采用化学防腐剂,如多菌灵、甲基托布津等,这些化学物质虽然能够杀死病原菌,达到防腐保鲜的目的,但是对人体健康却有一定的不利影响,甚至出现致癌、致畸、致突变等潜在危害。
因此,从20世纪80年代人们就开始寻找新的、更安全有效的方法来控制水果采后病害[3]。
中草药作为我国的宝贵遗产其抑菌作用早已广泛应用于医药行业,很多研究已证实了中草药的杀菌成分对果蔬防腐保鲜的效果[3]。
而且植物源防腐剂具有高效、低毒、易降解、不污染环境等优点,已成为传统化学防腐剂的有效替代[4]。
12种中草药提取物对采后柑桔青绿霉菌的抑菌作用付雯;高永祥;刘伟伟【摘要】为中草药提取物应用于柑桔采后贮藏病害的生物防治提供理论依据,采用液体培养方法和柑桔果实抑菌试验研究土槿皮等12种中草药提取物对柑桔绿霉菌(Penicillium digitatum)和柑桔青霉菌(P.italicum)的抑制效果.结果表明:在PDA 培养液中,土槿皮、高良姜、黄柏、丁香和蒲公英等5种中草药提取物对柑桔青绿霉菌有较好的抑菌活性;选取该5种中草药提取物进行柑桔果实贮藏病害的抑菌试验,土槿皮处理的果实,柑桔青绿霉菌的发病率和病情指数分别为19.9%和14.28,比对照低80%和32.39,与化学杀菌剂咪鲜胺的防效(发病率为22.92%,病情指数为9.52)差异不显著,而与其他中草药提取物比较差异显著.中草药与柑桔青霉菌和绿霉菌同时接入防治效果明显优于柑桔青绿霉菌优先接入.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2015(043)009【总页数】4页(P170-173)【关键词】中草药提取物;保鲜剂;柑桔青绿霉菌;生物农药;抑菌作用【作者】付雯;高永祥;刘伟伟【作者单位】成都中医药大学基础医学院,四川成都610075;成都中医药大学基础医学院,四川成都610075;成都中医药大学基础医学院,四川成都610075【正文语种】中文【中图分类】S482.2+92;S482.2+95水果收获后代谢旺盛,如果处理不当会造成营养流失、病原真菌感染和巨大的经济损失[1]。
柑桔作为一种重要的经济作物,采摘后青霉病和绿霉病的发生是影响柑桔采后储存的主要因素[2]。
化学杀菌剂虽然能够有效地杀灭病原真菌,但存在易残留,难降解的特点,严重威胁人类的健康。
于是人们把目光投向更安全可靠的生物防治。
生物农药是目前主要关注的生物防治方法[3-4],其主要利用微生物及其代谢产物,如芽孢杆菌及其代谢产物伊枯草菌素、表面活性素等[5-6]进行防治。
韭菜抗常见病原菌活性成分初步筛选呼志斌;王雄;吴润;张莉;赵春林;刁小龙;管宏伟【摘要】以韭菜为试材,采用水蒸汽蒸馏提取法与有机溶剂萃取法分别提取韭菜抑菌成分,并通过体外抑菌试验检测不同提取成分的抑菌活性,确定其体外最小抑菌浓度.结果表明:韭菜乙酸乙酯萃取物与韭菜挥发油都具有广谱的抑菌活性,且对不同细菌的最小抑菌浓度不同.【期刊名称】《甘肃农业大学学报》【年(卷),期】2011(046)005【总页数】5页(P18-21,26)【关键词】韭菜;提取液;常见病原菌;体外抑菌【作者】呼志斌;王雄;吴润;张莉;赵春林;刁小龙;管宏伟【作者单位】兰州大学第二医院,甘肃兰州730030;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070【正文语种】中文【中图分类】Q93-3;R285韭菜(Allium tuberosum)为多年生百合科葱属草本植物,其种子、叶、根以及花都可入药.韭菜作为药用,最早见于梁陶弘景的《名医别录》,谓其能“安五脏,除胃中热”.《食疗本草》中记载韭菜能“利胸隔”.《本草拾遗》中说韭菜能“温中,下气,补虚,调和脏腑,令人能食,益阳,止泻白脓,腹冷痛,并煮食之”.现代药理学研究证明,韭菜具有杀虫、抗突变、抗氧化、抗肿瘤、温肾助阳等多种生物学功能[1].研究还证实韭菜汁对痢疾志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、铜绿假单胞菌等具有良好的广谱抗菌作用[2].本研究就韭菜的不同提取液进行体外抑菌试验,验证其抑菌活性,以期为今后研发出效果显著、价格低廉、无药物残留等副作用的新型抗菌药物及食品防腐剂提供科学依据.1 材料与方法1.1 材料与菌种新鲜韭菜采自兰州市马滩无公害韭菜基地,并经甘肃农业大学动物医学院刘磊教授鉴定.铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)ATCC27853、金黄色葡萄球菌(S.aureus)ATCC25923、大肠杆菌(E.coli)ATCC25922、粪肠球菌(E.faecalis)ATCC33186,以上菌种均购于中国药品生物制品检定所中国医学细菌保藏管理中心.鸡白痢沙门氏菌(S.pullorum)、变形杆菌(P.vulgaris)、腊状芽孢杆菌(B.cereus)、枯草杆菌(B.subtilis)、痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)、猪链球菌(S.suis)H9801、大肠杆菌(E.coli)O 139、大肠杆菌(E.coli)O2、大肠杆菌(E.coli)O78、大肠杆菌(E.coli)O8、猪霍乱沙门氏菌(S.choleraesuis)、鸡伤寒沙门氏菌(S.gallinarum)、猪伤寒沙门氏菌(S.typhi)8615以及鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium),由甘肃农业大学动物医学院微生物教研组提供.1.2 仪器与试剂垂直流超净工作台型号ZHJH-1112,购自上海智城分析仪器制造有限公司;手提式不锈钢蒸汽消毒器型号YX280B,购自上海三申医疗器械有限公司;电热恒温培养箱型号HG303-3X,购自南京电器三厂;旋转蒸发仪型号RE-6000,购自上海亚荣生化仪器厂.Mueller-Hinton琼脂(Agar,Broth)购自北京奥博星生物技术有限公司;乙酸乙酯、乙醚、无水硫酸钠等以及其他试剂均为国产分析纯. 1.3 提取与分离称取新鲜韭菜2kg,60℃烘干后粉碎.95%乙醇冷浸提取4次,过滤后浓缩得浸膏,以水溶解,乙酸乙酯萃取,得1液和2液,分别为水溶相与乙酸乙酯相,浓缩后最终稀释药物浓度为166mg/mL.称取新鲜韭菜2kg,按照中华人民共和国药典中挥发油提取方法提取韭菜挥发油[3].将提取出的药液于10 000r/min高速离心30min除菌备用.1.4 体外抑菌试验采用光电比浊法,调节菌液浓度为0.5麦氏浊度.参照CLSI(临床和实验室标准化研究所)抗菌药物敏感性试验操作标准及文献所述,进行各提取成分的琼脂扩散试验[4-5],并做相应的阳性和阴性对照,各药液对每种试验菌均做3个平行试验,抑菌圈取平均值.1.5 最小抑菌浓度测定对筛选出的具有明显抑菌效果的韭菜提取液,采用试管倍比稀释法测定其最小抑菌浓度(MIC)[4,6].韭菜提取液对每种试验菌均做3次平行测定.2 结果与分析2.1 体外抑菌试验结果体外抑菌试验表明(表1和图1),韭菜乙酸乙酯萃取物、韭菜挥发油与韭菜水提物相比,具有明显的广谱抑菌效果.不同细菌对韭菜乙酸乙酯萃取物均表现出不同程度的敏感.韭菜乙酸乙酯萃取液对于粪肠球菌(E.faecalis)ATCC33186的抑菌圈直径大于1.500cm.对于其他细菌的抑菌圈直径均大于2.200cm.而韭菜水提液只对少数几种细菌具有抑制作用,且抑菌圈较小.韭菜挥发油药液组处理的细菌均不能长成完整的薄膜,抑菌圈大小难以分辨,故直接对韭菜挥发油进行最小抑菌浓度测定.说明韭菜中的抑菌性成分主要为韭菜中亲脂性的物质,而亲水性化合物则无明显的抑菌活性.表1 抑菌圈测定结果Tab.1 The test results of inhibition zones?续表1“-”表示无抑菌作用.?图1 不同提取物对常见病原菌的抑菌效果Fig.1 The bacterial inhibition effect of different extracts on common pathogenic bacteria2.2 最小抑菌浓度测定结果由供试菌种MIC的测定结果(表2)可以看出,不同菌种对同一样品呈现不同程度的敏感,且最小抑菌浓度均达到微量级别,韭菜乙酸乙酯萃取液对部分病原菌的最小抑菌浓度可达2.5mg/mL,韭菜挥发油对部分病原菌的最小抑菌浓度可达2μL/mL.表2 最小抑菌浓度测定结果Tab.2 Results of MICof chinese Chive extractant against pathogenic bacteria?3 讨论与结论葱属植物普遍具有天然抗菌活性,其抗菌成分主要是大蒜素、大蒜新素等活性物质[8-9].本研究运用不同的提取方法,分别获得韭菜水溶性产物与脂溶性产物,通过体外抑菌试验初步确定韭菜中抗菌活性物质为脂溶性产物,特别是韭菜挥发油类物质,其对于不同种属的细菌均具有不同的抑菌能力,具有广谱的抑菌活性,粗提物最小抑菌浓度均达到微量.韭菜挥发油中主要为含硫化合物,且不同种(或品种)、不同地域的韭菜其挥发油中所含有的含硫化合物亦存在明显差异[10-11].乙基-硫代亚磺酸酯和甲基-2-丙烯基-1-硫代亚磺酸酯已被证实具有抑菌活性[12],这与同属植物大蒜与小根蒜的活性成分类别相一致,同为有机含硫化合物.但韭菜提取物的抑菌活性是由一种成分起主要作用,还是几种物质协同起抑菌作用,还需进行进一步的系统分离纯化及药理筛选确定.参考文献[1]刘建涛,赵利,苏伟,等.韭菜中生物活性成分及其分子生物学的研究进展[J].食品科技,2006,8:67-70[2]王雄,赵志光,吴润,等.八种中草药对常见病原菌的体外抑菌试验[J].甘肃农业大学学报,2010,45(2):25-29[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2005 [4]史秋梅,沈萍,汤生玲.抗菌中草药筛选试验方法研究[J].中国家禽,2004,8(1):45-47[5]管淑玉,林家勤,曾宇.5种中草药提取物对致病性弧菌的抑菌作用研究[J].广东药学院学报,2008,24(3):269-271[6]Wayne,PA:Clinical and Laboratory Standards Institute,performance standards for Antimicrobial Susceptibility Testing;Nineteenth Informational Supplement[S].CLSI document M100-S19,2009[7]Werner Bär,Ulrike Bade-Schumann,Andreas Krebs,et al.Rapid method for detection of minimal bactericidal concentration of antibiotics [J].Journal of Microbiological Methods,2009,77(1):85-89[8]Robert T R,Richard D H,Elaine K F,et al.Determination of allicin,S-allylcysteine and volatile metabolites of garlic in breath,plasma or simulated gastric fluids[J].The Journal of Nutrition,2001,131(3):968-971[9]闫淼淼,许真,徐蝉,等.大蒜功能成分研究进展[J].食品科学,2010,5:312-318[10]陈海峰.中药小根蒜活性成分的深入研究[D].沈阳:沈阳药科大学,2005 [11]王鸿梅,冯静.韭菜挥发油中化学成分的研究[J].天津医科大学学报,2002,8(2):192[12]Jorge A,Victor F,Margarita T C.Volatile constituents of Chinese chive (Allium tuberosum Rottl.Ex Sprengel)and rakkyo(Allium chinense G.Don)[J].J Agric Food Chem,2001,49(3):1328-1330[13]Kwon H Seo,Yea Hwang Moon,Sang Uk Choi,et al.Antibacterial activity of S-methyl methane thiosulfinate and S-methyl-2-propene-1-thiosulfinate from Chinese chive toward Escherichia coli O157:H7[J].Biosci Biotechnol Biochem,2001,65(4):966-968。
韭菜粗提取物对柑橘青霉菌的抑菌效果研究作者:毕璋友吴惠君来源:《安徽农业科学》2014年第04期摘要[目的]研究韭菜乙醇粗提物对储藏期柑橘青霉病菌的抑菌作用。
[方法]采用粗提物浓度梯度的平板培养法培养柑橘青霉菌,判断不同溶剂和不同处理的粗提物对柑橘青霉菌是否有抑制作用。
[结果]以酒精、丙酮和无菌水为溶剂的新鲜韭菜提取物对柑橘青霉菌都有不同程度的抑制作用,且随着浓度的增大抑菌作用增强,随着培养时间的延长抑菌作用降低;以无菌水为溶剂的药液抑制作用最大,24 h时EC50为431.385 μg/ml。
以无菌水为溶剂时,不同处理方法所得的韭菜乙醇粗提取物对柑橘青霉菌菌丝生长有明显的抑制作用,以新鲜茎叶对菌丝生长的抑制作用最大,干根次之,以干茎叶的抑制作用最小。
[结论]韭菜乙醇粗提物对储藏期柑橘青霉病菌的菌丝有抑菌作用。
关键词韭菜提取物;柑橘青霉菌;抑菌率中图分类号S436.661.1文献标识码A文章编号0517-6611(2014)04-01002-02基金项目安徽省农产品安全重点实验室开放基金项目(2009Las01)。
作者简介毕璋友(1963-),男,安徽池州人,教授,从事植物病害控制方面的研究与教学。
韭菜(Allium tuberosum)别名起阳草、长生韭、草钟乳等,属于百合科(Liliaceae)葱属(Allium)。
韭菜中除含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、胡萝卜素及微量元素外[1],还富含硫化物[2]、甾体皂苷[3-5]、氮化物[6]和黄酮类等生物活性物质[7]。
韭菜汁液及提取物具有杀虫抑菌及抗突变等功效[8]。
柑橘贮运期间青霉病害是柑橘类果品发生最普遍、危害最严重的侵染性病害[9],目前主要通过低温贮藏和利用化学杀菌剂如咪鲜胺、苯甲酸、对羟基苯甲酸酯等对柑橘防腐保鲜,不仅增加贮藏成本,而且造成环境污染和果品中的农药残留,食用后对人体损害很大[10]。
因此,寻找安全、高效、无毒的生物防治方式控制柑橘类果品采后腐烂成为当务之急。
植物是生物活性化合物的天然宝库,研究和寻找植物性化合物来保护果蔬贮藏期间免受病菌的侵染更加受到人们的重视。
李亚蕾等[11]研究沙葱提取物对酵母菌、青霉、黑曲霉、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑制作用,取得较佳的效果。
张香美等[12]利用小根蒜提取物对香椿保鲜,能显著降低香椿的腐烂率。
喻林华等[13]发现银杏叶乙醇提取物对柑橘青霉病菌具有较强的抑菌作用。
关于韭菜提取物对果蔬贮藏期间防病保鲜的研究较少,笔者旨在探明韭菜乙醇提取物对柑橘青霉的抑制作用,为进一步研究其化合物的类型以及开发和利用提供理论依据。
1材料与方法1.1材料与试剂韭菜:购于安庆职业技术学院周边农家,新鲜、无软烂、无霉变,品种为平韭5号,营养生长期。
柑橘青霉病菌(Penicillium italicum):安庆职业技术学院园林园艺系实验室提供。
99.7%乙醇(上海中秦化学试剂有限公司)、99.7%丙酮(上海试剂厂)。
食物搅碎器(JLL30—B型,顺德市希贵电器制造有限公司),旋转蒸发仪(德国IKA生产,RV1O型,配HB1O水浴锅)。
1.2培养基马铃薯葡萄糖培养基:马铃薯(切碎成块)20 g,葡萄糖20 g,琼脂15~20 g,水1 000 ml,pH自然。
1.3韭菜提取物的制备取新鲜韭菜洗净,晾干,称取200 g放入食物搅碎器中搅拌成菜泥;另分别取晾干的韭菜茎叶及韭菜根若干,放入70 ℃烘箱中烘干,取出干韭菜茎叶和干韭菜根各200 g放入上述食物搅碎器中搅拌,粉碎后密闭保存备用。
将上述新鲜韭菜茎叶泥、干韭菜茎叶粉、干韭菜根粉各200 g分别放入装有500 ml 99.7%乙醇的烧杯中浸渍,并于第3、5、7天提取过滤,将滤液用旋转蒸发仪浓缩至乙醇挥发完全即得韭菜乙醇粗提取物,并将乙醇回收,放于冰箱中密闭冷藏备用。
1.4韭菜粗提取物对柑橘青霉菌的抑菌效果1.4.1 不同溶剂的新鲜茎叶粗提物对柑橘青霉菌的抑制活性。
以无水乙醇、丙酮和无菌水为不同溶剂溶解新鲜茎叶粗提物,配制成2.5、5.0、10.0、20.0和40.0 mg/ml的粗提物稀释液。
用无菌吸管分别吸取2 ml稀释液加入到18 ml的PDA培养基中,充分混匀。
同时设置不含粗提物的平板作为对照。
待培养基冷却凝固后,在平板上接种直径5 mm的柑橘青霉菌菌碟,26 ℃静置培养,分别于24、48、72和96 h各观察1次,采用十字交叉法测量菌落直径,每处理重复3次。
1.4.2 无菌水为溶剂的不同处理粗提物对柑橘青霉菌的抑制活性。
以无菌水为溶剂,将新鲜茎叶、干茎叶和干根乙醇粗提物配制成2.5、5.0、10.0、20.0和40.0 mg/ml的粗提物稀释液。
用无菌吸管分别吸取2 ml稀释液加入到18 ml的PDA培养基中,充分混匀。
同时设置不含粗提物的平板作为对照。
待培养基冷却凝固后,在平板上接种直径5 mm的柑橘青霉菌菌碟,26 ℃静置培养,分别于24、48、72和96 h各观察一次,采用十字交叉法测量菌落直径,每处理重复3次。
1.5数据分析不同溶剂溶解的新鲜韭菜茎叶提取物和不同处理的粗提物对柑橘青霉菌的抑制率按下列公式计算:抑菌率(%)=对照菌落直径-处理菌落直径对照菌落直径-菌碟直径×1002 结果与分析2.1 不同浓度溶剂的新鲜茎叶粗提物对柑橘青霉菌的抑制作用由表1可知,在相同培养时间内,随着不同溶剂提取物浓度的增大,3种不同溶剂的新鲜茎叶粗提物对柑橘青霉菌的抑菌效果增强;随着培养时间的延长,提取物对柑橘青霉菌的抑菌效果降低。
3种溶剂的新鲜茎叶粗提物在培养24 h后对柑橘青霉菌的抑菌效果最好,提取物浓度为40 mg/ml时,抑菌率达到60%以上,随着时间的延长,以酒精为溶剂的新鲜茎叶粗提物对柑橘青霉菌有较好的抑制作用。
对24 h抑菌率(y)与新鲜茎叶粗提物浓度(x)进行毒力回归分析,以酒精、丙酮和无菌水为溶剂分别得到新鲜韭菜茎叶提取物EC50分别为1191.242、1163.729和431.385 μg/ml (表2),以无菌水为溶剂提取物对柑橘青霉菌抑制作用最好。
2.2无菌水为溶剂的不同处理粗提物对柑橘青霉菌的抑制作用由表3可知,在相同培养时间内,不同处理粗提物的浓度与其对柑橘青霉菌的抑制效果成正比;在相同浓度不同处理的粗提物培养基上,随着培养时间的延长,不同处理粗取物对柑橘青霉菌的抑菌效果降低。
总体而言,随着粗提物浓度的增大,新鲜茎叶对对柑橘青霉菌的抑制作用最大,干根次之,以干茎叶的抑制率最小。
培养24 h其EC50分别为431.385、1 469.199和3 319.913 μg/ml(表4)。
3 小结与讨论柑橘是我国南方的主要水果之一,采收后常由于机械损伤、贮藏管理不当或微生物的侵染而造成的损失为5%~20%,其中柑橘青霉菌引起的柑橘果实腐烂约占80%[14]。
因此,控制柑橘青霉菌的侵染及发展,对于减少柑橘的采后腐烂具有积极作用。
在环境保护日益受到重视的今天,植物源农药因具有无污染、不积累、取材容易、费用低廉等优点,成为创新农药品种的主要途径之一。
该研究采用药物浓度梯度的平板培养法培养柑橘青霉菌,测定了韭菜乙醇粗提物对储藏期柑橘青霉病菌的抑菌作用。
发现不同溶剂韭菜乙醇粗提取物对柑橘青霉菌有不同程度的抑制作用,且随着浓度的增大抑菌作用增强,随着培养时间的延长抑菌作用降低。
以无菌水为溶剂的药液抑制作用最大,24 h时EC50为431.385 μg/ml。
无菌水为溶剂的韭菜不同处理乙醇粗提物对柑橘青霉菌的抑制作用表现差异较大,以新鲜茎叶处理所得的粗提取物抑菌作用最强,其次是干根,以干茎叶处理所得的粗提取物抑菌作用最弱,说明韭菜乙醇粗提取物可能对温度较敏感,长时间70 ℃的高温对韭菜乙醇粗提取物的生物活性可能有破坏作用。
该研究采用乙醇作为浸提液,而其他有机物质作为浸提液所提取的粗提物对柑橘青霉菌的抑制作用没有涉及,是否有更好的效果有待以后进一步的验证。
韭菜乙醇粗提取物的化学组成、有效毒理成分及毒理等问题也有待进一步的研究。
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