第一章植物组培快繁实验室(学时)

《植物组织培养实验指导》《植物组织培养实验指导》的相关说明一、本指导用于《植物组织培养概论》课程的实验教学。

二、各专业班级根据实际情况做相应调整，调整情况详见各专业班级的授课计划。

其中15个课时的内容调整如下：实验一、二、五 3学时实验六 3学时实验七 3学时实验九、实验十二 3学时实验十三 3学时实验一实验室基本设备及其用途的识别一、目的认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。

二、实验室的基本结构（一）化学实验室（工作室）培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸馏水。

设备、药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱，手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。

安装水、电、排气等装置。

（二）接种室①无菌操作室②接种箱③超净工作台（三）培养室（四）洗涤、消毒室；卧式高压消毒锅。

（五）温室（培养大棚）。

实验二常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制一、目的认识植物组织培养必需的仪器、器皿，几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制。

二、常用仪器1.蒸馏水器（学习操作）2.手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅（学习使用、操作）3.天平⑴药物天平（工业天平）、粗天平、（精密度1/10）⑵扭力天平（精密度1/100）⑶分析天平（精密度1/10000）4.超净工作台（学习、使用、操作）5.电热干燥箱（烘箱）6.恒温光照培养箱（学习、操作）7.电冰箱8.显微镜和解剖镜①手提式解剖镜（学习、使用、操作）②立体解剖镜③普通显微镜9.旋转培养机10.离心机（学习、使用、操作）11.酸度测定仪：⑴精密PH4－7试纸；⑵笔型袖珍酸度计。

三、必要的器皿（一）玻璃器皿1.培养器皿①试管②三角烧瓶（锥形瓶）③圆形高形培养瓶（罐头瓶）④培养皿⑤扁身培养瓶⑥L型和T型管⑦凹面载玻片2.盛装器皿①试剂瓶②烧杯3.计量器皿①量筒②容量瓶③吸管4.其它器皿滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。

甘蔗组培快繁技术生物08本尚丽萍 34号组员：陈洁程燕娜甘蔗是禾本科甘蔗属植物，是世界上重要的糖料作物，也是中国蔗糖工业的重要支柱。

在甘蔗栽培上，通常是以蔗茎节上的腋芽繁殖，或在每年砍伐后，利用残留在土中的茎基上的腋芽作宿根繁殖。

茎段繁殖速度慢，用种量大，而且种茎在远途运输中颇为不便，每年秋植蔗种来源难以解决，这对快速繁殖良种甘蔗以满足甘蔗生产的需要极为不利，因此，采用组织培养的方法，规模化生产遗传性状整齐一致的种苗供生产上应用，现将甘蔗组培快繁技术介绍如下。

1材料与方法1.1材料甘蔗腋芽及茎尖1.2方法1.2.1 材料处理将所取外植体腋芽（带少量茎节组织）、茎尖（带部分新叶包裹）用洗衣粉水洗净，清水冲洗半小液处理15分钟，用无菌蒸时，在消过毒的接种间超净工作台上用75%酒精浸泡30秒，再用0.1%HgCl2馏水冲洗4-5次后待接种。

1.2.2 培养基诱导外植体培养基：MS+BA 1mg/L+活性炭1g/L+2%蔗糖+琼脂8g/L。

诱导腋芽增殖培养基：MS+BA 5mg/L+活性炭0.5g/L+20g/L蔗糖；MS+BA 10mg/l+活性炭0.5g/L+2%蔗糖。

诱导生根增殖培养基：1/2MS+NAA 2mg/L+IBA0.4mg/L+多效唑2mg/L。

1.2.3培养过程将处理好的材料接入诱导外植体培养基中进行培养，光照时间10-12小时/天，光照强度（自然散射或荧光灯照明）1500-2000lux，培养温度25-30℃。

培养3-5天后，若培养基出现混浊，说明已污染，应立即清除。

培养10-15天，芽转绿将边缘褐色部分剥除转入同样培养基中培养，芽长到2-3cm时，转入诱导腋芽增殖培养基中，如此重复进行，直到所需数量后转入诱导生根培养基中进行生根培养，根长至3-5cm后进入炼苗阶段。

将幼苗不开口移到自然光照下锻炼2-3d，让幼苗接受强光的照射，然后再开口练苗1-2d。

从试管中取出发根的幼苗，用自来水洗掉根部粘着的培养基。

楚雄师范学院化学与生命科学系生物技术专业《植物组织培养技术》课程教学大纲一、课程基本信息课程代码：031106014课程中文名称：植物组织培养技术课程英文名称：Plant Tissue Culture Technology课程性质：专业选修课使用专业：生物技术专业、葡萄与葡萄酒工程专业开课学期：第7学期总学时：36+27总学分：3预修课程：植物学、植物生理学课程简介植物组织培养技术是将植物的离体材料器官、组织、细胞、原生质体等）无菌培养，使其生长、分化，进而再生完整植株的无性繁殖技术，是实践性较强的专业课之一。

本课程在介绍了组织培养的含义、特点及其意义；组织培养的概念、类型、特点；组织培养技术的基本原理及操作规范；组织培养的发展简史、发展趋势及其应用。

通过本课程的学习，使学生掌握组培实验室、家庭组培室、组培育苗工厂的组成、设计原则与设计要求；熟练掌握各种培养基的特点与应用；熟练掌握茎尖、茎段、叶及花器官培养消毒灭菌、接种及培养的技术；理解种质资源离体保存的意义，掌握种质资源离体保存常用方法；掌握一些常见植物的组培脱毒与快繁技术的应用。

教材建议《植物组织培养原理与技术》，李胜、李唯主编，化学工业出版社，2008年。

参考书《植物细胞组织培养》，刘庆昌编著，北京：中国农业大学出版社，2002年，标准书号：7-81066-529-4。

《植物组织培养（第三版）》，潘瑞炽编著，广州：广东高等教育出版社，2003年，标准书号：7-5361-2501-1。

《植物组织培养教程》，李浚明编著，北京：中国农业大学出版社，1996年，标准书号：7-81066-466-2。

《高等植物组织离体培养的形态建成及调控》，黄学林编著，北京：科学技术出版社，1995 年，标准书号：7-03-004377-4。

《植物组织培养》，王水琦编著，北京：中国轻工业出版社，2007年，标准书号：978-7-5019-5818-4。

《植物组织与细胞培养》，陈耀锋编著，北京：中国农业出版社，2007年，标准书号: 978-7-109-11844-7。

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潍坊市职业学院项目课程实验设计项目名称：植物的组培快繁实训地点：学院组培中心实验设计者：王珏（0903199）09级园林工程系生物技术及应用专业设计时间：2010年12月26日—2011年7月9日指导教师：丁雪珍一实验名称：长寿花的组培快繁二实验目的：1、通过对长寿花进行组培快繁从而进一步了解植物组培快繁的原理；2、熟悉并掌握植物组配快繁的工艺流程；3、更熟练的掌握组培快繁的多项技术；4、对植物的组织培养的方法及有关知识拥有更深的了解；三实验原理植物的组织培养是指在无菌条件下，将植物的离体器官、组织、细胞以及原生质体，应用人工培养基，创造适宜的培养条件，使其长成完整小植株的过程。

植物的组织培养也就是根据植物细胞的全能性（每个具有完整细胞核的细胞都具有该植物的全部遗传信息和产生完整植物体的能力）利用外植体（从植物体上切取下的根、茎、叶、花、果实、种子、器官以及各种组织和细胞）进行了转接、继代培养以及驯化的过程，虽然此过程投资少、成本低而且历时短但是植物组织培养拥有很多优点。

如：1、研究材料单一，无性系遗传信息相同；进而保证了遗传性状的一致性，避免了误差，实验材料的纯度高，可以减少实验的重复而不影响实验的精度。

2、经济方便，效率高；进行实验时投资少、成本低但是利润高从而节约了人力和物力。

3、培养条件了可控，可周年实验或生产；避免了由于节气带来的影响。

4、生长快，周期短，重复性强；5、管理方便，利于自动化控制；通过仪器来提供试管苗的培养环境，大大节省了人力、物力及土地，也有利于工厂化生产。

本次实训以植物花月为对象用其幼叶作外植体进行组织培养（无菌短枝型），来领悟植物组织培养的原理。

四实验仪器及其他用具1、玻璃器具玻璃棒；烧杯；量筒；三角瓶；试剂瓶；胶头滴管；果酱瓶；酒精灯；漏斗；2、所需的实验仪器酒精灯；电子天平；磁力搅拌器；冰箱；超净工作台；接种器具消毒器；立式高压蒸汽灭菌锅；电炉；培养架；空调；3、实验药剂蒸馏水；葡萄糖；琼脂粉；MS母液（大量元素、微量元素、铁盐、维生素）；6-BA；2,4-D；IBA；IAAF；活性炭；95%酒精；氯化汞溶液；洗洁精；高锰酸钾；4、其他用具纱布；喷壶；搁置架；打火机；弯刀剪；麻线；牛皮纸；封口膜；剪刀；试管刷；洗耳球；引流器；PH试纸；周转箱；胶皮手套；秒表；废空箱子；马铃薯；刀；案板；铁架台；铝锅；麦麸；穴盘等五设计方案1、实验研究对象植物长寿花拉丁名：winter pot kalanchoe科属：景天科，蔷薇属别名：寿星花原产地：东非马达加斯加岛长寿花（Kalanchoe blossfeldiana cv tom Thumb）别名寿星花、假川莲、圣诞伽1.1植物简介长寿花是一种多肉植物，由肥大、光亮的叶片形成的低矮株丛终年翠绿。

园林植物组培快繁实验方案一、引言园林植物的繁殖繁忙是园林植物繁殖的一种常见方法，它通过组织培养技术，可以大幅度提高植物的繁殖效率。

园林植物组培快繁实验方案是一种在实验室条件下进行的植物繁殖方法，它可以快速繁殖大量健康的植株，为园林绿化提供了可行的解决方案。

二、实验材料准备1. 组培基质：选择富含营养物质的培养基，如MS培养基。

2. 植物材料：选择具有繁殖潜力的园林植物，如常见的月季、紫薇等。

3. 器具和试剂：培养瓶、无菌操作台、无菌器皿、无菌手套、无菌剪刀、植物生长调节剂（如激素）等。

三、实验步骤1. 植物的材料准备：选择生长健康、无病虫害的植物作为母株，将其进行无菌处理，以保证实验的无菌性。

2. 组织培养基的制备：按照MS培养基的配方，将培养基溶解于无菌蒸馏水中，调整pH值，并加入植物生长调节剂，如激素等。

3. 材料切割和处理：将母株的茎尖、叶片等进行切割和处理，去除边缘部分，取中间健康部分，进行无菌处理。

4. 培养瓶组装和接种：将切割好的材料放置在培养瓶中，加入适量的培养基，封口并进行无菌处理。

5. 培养条件和观察：将培养瓶放置在恒温恒湿的培养箱中，设置适宜的光照和温度条件，定期观察植株的生长情况。

6. 转移和扩繁：当植株生长到一定大小时，可将其转移到新的培养瓶中进行扩繁，以快速繁殖大量健康的植株。

四、注意事项1. 实验过程中要保持无菌操作，避免外界细菌和病毒的污染。

2. 培养基的配制要准确，pH值的调整要合适，以保证植物的正常生长。

3. 培养箱的光照和温度条件要适宜，以促进植株的生长和分化。

4. 实验过程中要定期观察植株的生长情况，及时发现问题并进行调整。

5. 实验完成后，要对培养瓶进行无菌处理，避免植物的二次感染。

五、实验结果与讨论园林植物组培快繁实验的结果将根据不同的植物材料和培养条件而有所差异。

在实验过程中，观察植株的生长情况，包括根系的生长情况、茎叶的生长情况等，以评估实验的成功程度。

一、实验简介实验名称：植物组织培养实验目的：通过植物组织培养技术，了解植物细胞生长、分化和再生的过程，掌握组培技术的操作方法，并应用于植物繁殖和遗传改良。

二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性，通过特定的培养基和外界条件，使植物组织在体外进行生长、分化和再生，最终形成完整的植株。

该技术广泛应用于植物繁殖、遗传改良、基因工程等领域。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：植物外植体（如叶片、茎段、愈伤组织等）培养基（MS培养基、改良MS培养基等）诱导培养基（1/2MS培养基、添加生长调节剂的培养基等）细菌培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）灭菌剂（如75%酒精、1%次氯酸钠溶液）其他：超净工作台、接种针、酒精灯、移液器、培养皿、培养箱等2. 实验仪器：电子天平高压蒸汽灭菌器移液器超净工作台培养箱显微镜四、实验步骤1. 材料预处理：选择健康、无病虫害的植物材料，用流水冲洗干净。

将外植体浸泡在1%次氯酸钠溶液中消毒5-10分钟，然后用无菌水冲洗3-5次。

将消毒后的外植体用无菌滤纸吸干水分。

2. 培养基制备：称取适量的培养基粉末，加入少量蒸馏水溶解。

将溶解后的培养基过滤除菌，加入适量的琼脂和生长调节剂。

将培养基倒入培养皿中，待凝固后备用。

3. 外植体接种：在超净工作台中，用无菌接种针将外植体接种到培养基上。

每个外植体接种3-5个，确保接种密度适宜。

4. 培养与观察：将接种后的培养皿放入培养箱中，控制适宜的温度、光照和湿度。

定期观察外植体的生长情况，记录愈伤组织形成、芽生长和根生长等过程。

5. 培养基调整与继代培养：当外植体形成愈伤组织或芽生长到一定长度时，可进行培养基调整和继代培养。

将愈伤组织或芽切割成小块，重新接种到新的培养基上。

根据生长情况，适时调整培养基成分和生长调节剂浓度。

五、实验结果与分析1. 愈伤组织形成：在适宜的培养基和条件下，外植体可形成愈伤组织。

愈伤组织是细胞增殖和分化的基础，是组织培养成功的关键。

马铃薯组培快繁实验报告
实验目的: 探究马铃薯组织培养快速繁殖的效果及影响因素。

实验材料:
1.马铃薯鲜根茎；
2.呋喃、氯仿、乙酸乙酯等有机试剂；
3.组织培养基。

实验方法:
1.将马铃薯鲜根茎表皮和细胞分离；
2.制备酵母提取物培养基；
3.将马铃薯组织进行无菌培养；
4.对组培快繁效果进行观察并记录；
5.探究温度、光照、培养基成分等因素对马铃薯组培快繁的影响。

实验结果:
经过6个月的组培, 马铃薯组织得到快速繁殖, 从单个组织增殖到100个以上, 可见组织培养在马铃薯鲜根茎中具有较好的效果。

在探究因素对组培快繁的影响过程中, 发现温度、光照和培养基成分三者间都有显著影响。

较高的温度有利于组织培养, 但也容易导致组织失去活性。

光照则会影响植物代谢活动以及组织培养过程中细菌或真菌的生长, 长时间暴露在强光下会导致组
织死亡。

而培养基成分则是影响效果较大的因素之一, 其中激素的添加比例、营养因素的比例、蔗糖的浓度等都将会影响组培效果。

实验结论:
马铃薯组培快繁具有一定的优势, 适宜的培养条件下, 可实现快速繁殖, 以便进行后续的育种和研究工作。

同时在培养过程中, 需根据不同的因素进行调节, 保证组织能够生长、分化、产生完整的植株。

植物组织培养课程标准《植物组织培养》课程标准课程名称：《园林植物植物组织培养》课程性质：职业能⼒必修课学分：3分计划学时：45适⽤专业：园艺技术、园林技术、种⼦⽣产与经营专业1.前⾔1.1课程定位《植物组织培养技术》是⼀门园艺技术、园林技术等专业的基础课，也是⼀门实践性很强的课程。

通过本门课程学习，主要培养学⽣将来能从事相关⼯作，如能够独⽴设计组培⽅案、具备培养基制备、进⾏⽆菌操作、快繁、控制污染、褐化、玻璃化等不良现象发⽣和分析解决问题的能⼒，还能够独⽴从事植物组织培养经营管理的⼯作。

该课程以化学、植物学、植物⽣理学、遗传学等学科为基础建⽴起来的，为适应时代发展，结合当前⾼职教育改⾰实际，压缩理论课时，精选教学内容，增加单位时间内的知识传授量，增加实验实训课的课时。

培养技能型、应⽤型⼈才，使课程教学朝着⾼职院校校企合作的办学模式，⼯学结合的⼈才培养模式，教学做合⼀的教学模式⽅向发展。

1.2设计思路本课程理论课时48学时。

根据植物组织培养岗位对从业⼈员知识、能⼒和素质要求，以“应⽤”为主旨和特征，构建课程内容模块体系。

课程内容打破传统的“⽼三段”模式，打破学科特性，理论知识要求“必需、够⽤”，实践教学突出能⼒培养，注重知识的应⽤性、实践性和针对性，并以此来构建组培课结构和内容体系。

在实践教学上，以“项⽬教学法”为主导，强化实训项⽬的实⽤性。

本课程⼀般按照“实验室设计与培养条件要求―培养基制备―⽆菌操作技术―器官培养―个体植物组织培养与园艺植物栽培”的顺序进⾏。

2．课程⽬标2.1总体⽬标通过理论学习和实践锻炼，掌握植物组织培养的基本理论，能识别常见的污染、褐变、玻璃化等现象，掌握组培培养⽅案设计程序和器官培养要求，掌握组培各流程环节与技术要求。

通过参观组培实验室，掌握组培实验室的场地选择和⼚房设计的原理和⽅法；通过配制母液、培养基的制作、使⽤⽆菌操作技术，能熟练掌握培养基母液和激素母液的配制，并且能够独⽴完成培养基的制作和⾼压灭菌锅的使⽤，还要掌握不通植物材料⽆菌接种技术。