下载文档原格式
·１９０·星堕墅墅盘查！！！！生篁！！鲞釜ｉ塑！里！』曼！！丛！！至！坠：！！塑！！！！：！！：堕！：！流感病毒的实验室检测方法及进展李月越陈杭薇李兵【摘要】流行性感冒（流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其在人群中蔓延快，且具有高发病率及致死率的特点。
流感的诊断不仅要根据临床症状和体征，其确诊还有赖于实验室检查。
流感病毒的检测技术大致分为４个方面，即病毒分离培养、血清学诊断、现代免疫学诊断及分子生物学诊断。
现分别从以上几个方面对流感病毒实验室检测方法及进展进行综述。
【关键词】流感病毒；检测方法Ｌａｂ帅ｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓ狮ｄｐ哪哪艄０ｆｄ咖ｔｉＩｌｇｉＩＩｆｌｕ眦ａｖｉｎ麟Ｕｙ访ｙ獬，ＣＨＥＮ协咒ｇ－讹ｉ，ＵＢｉ恕ｇ．＆加仃批，ｚｆｏ，尺Ｐｓ加ｍ￡ｏ删Ｍ毒ｄ觑九８，＆巧ｉ挖ｇＣＤｍ凇挖ｄ＆咒８ｍ￡Ｈｏｓｐｉ￡ｎＺｏ，ＰＬＡ，＆巧锄ｇ１００７００，吼ｉ御（乃ｒｒ已ｓ户Ｄ行矗ｉ７２９口“腩ｏｒ：（ＨＥ小，Ｈ口ｎｇ一议，Ｐｉ【ＡｂｓｔＩ’ａｃｔ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓｃａｕｓｅａｎａｃｕｔｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｔｈａｔｓｐｒｅａｄｓｅｐｉｄｅｍｉｃａｌｌｙｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｏｆＩｎｆｌｕｅｎｚａｉｓｈｉｇｈｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙ．ＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｉｎｆｌｕｅｎｚａｄｅｐｅｎｄｓｏｎｎｏｔｏｎｌｙｃｌｉｎｉｃｉａｌｓｙｍｐｔｏｍｓａｎｄｓｉｎｇｓｂｕｔａｌｓｏｌａｂｏｒａｔｏｒｉａＩｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ．Ｖｉｒａｌｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｉｍｍｕｍｏｌｏ—ｇｉｃａｌａｓｓａｙａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏＩｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓａｒｅｆｏｕｒｍｅｔｈｏｄｓｔｈａｔｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｅｄｆｏｒｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓｏｆｄｅｔｅｃｔｉｎｇｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓａｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｉｎｔｈｅｆ０１ｌｏｗｉｎｇｔｅｘｔ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓ；Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ流行性感冒简称流感，是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，传染性强，蔓延快，其抗原易变异，对人群尤其是儿童、老年人及机体免疫力低下的人群有较高的发病率及致死率，危害很大。
临床流感病毒的分子鉴定随着现代医学技术的不断进步和发展，研究各种疾病的分子鉴定方法也不断提升。
其中之一便是临床流感病毒的分子鉴定。
流感是一种常见的传染病，具有高致病性和高传染性。
识别和鉴定流感病毒的分子可以帮助医学界在疾病防治方面有更深入的了解和更加精准的分析。
下面将介绍临床流感病毒分子鉴定的相关知识。
一、临床流感病毒简介流感病毒是一种RNA病毒，共分为A、B、C三种类型。
其中，A型与B型流感病毒是人类急性呼吸道感染最常见的病原体。
在现代医学中，对于临床疾病的分析和防治不仅需要了解流感病毒的分类，还需要对其分子鉴定有一定基础的认识。
二、临床流感病毒分子鉴定临床流感病毒的分子鉴定是通过分子生物学方法，对其基因序列进行检测和分析确认。
目前常用的临床流感病毒分子鉴定方法包括PCR的实时荧光定量技术和基于DNA芯片的灵敏检测技术等。
通过这些技术可以对流感病毒的基因组进行快速检测和鉴定，并对其流行和演变趋势进行进一步分析和预测。
三、临床流感病毒分子鉴定的意义临床流感病毒分子鉴定技术无疑会对流感病毒的研究和防治产生深远的影响，具体表现在以下几个方面：1. 精准研究病毒的基因序列和演化规律，为流感病毒的预防和控制提供更准确的依据。
2. 对流感病毒的快速检测，可及时预警和预防流感疫情的扩散和爆发。
3. 为流感疫苗研发提供更加准确的数据和依据，大大提高疫苗的研发效率和成功率。
四、存在的问题和展望目前流感疫苗研发尚未完全成熟，临床流感病毒分子鉴定技术也面临着一些挑战和问题。
1. 对于流感病毒的基因序列尚未完全解析，提高精度和准确率的同时，也需要继续加强对其基因的解析和研究。
2. 流感病毒的进化速度和变异性较高，需要加强对其演变规律和趋势的分析和研究。
未来，需要继续针对流感病毒分子鉴定技术进行深入研究和开发，推动其发展，以更好地应对流感疫情和提高疫苗的研发成功率。
浅析研究禽流感病毒检测方法相关进展禽流感是一种高度传染性的疾病，对禽类产业造成了巨大的损失，同时对人类健康也带来了极大的威胁。
因此，准确、快速地检测禽流感病毒对于防控禽流感具有重要意义。
本文将对禽流感病毒检测方法相关进展进行浅析。
一、传统检测方法1. 细胞培养法细胞培养法是一种常用的传统禽流感病毒检测方法。
该方法将病毒接种到特定的细胞培养物中并进行培养，观察细胞的形态变化、病毒感染区域出现的细胞变形、塑像等特征来判断样本中是否存在禽流感病毒。
该方法具有操作简单、成本较低等优点，但需要一定时间进行细胞培养以便检测，且检测结果需要通过显微镜观察，此法的数据精度相对较低，不能对病毒毒株作差异分析。
此外，细胞培养法只能检测能够感染特定细胞系的禽流感病毒株，不能检测全部毒株。
2. 血清学方法血清学方法是利用血清学技术，检测血清中是否存在禽流感病毒特异性抗体或抗原的方法。
血清学方法具有操作方便、标本保存期长等优点，同时可对不同毒株作差异分析，且可以作为定量方法来测定病毒的抗体或抗原含量。
但是该方法的灵敏度相对较低，不能检测到病毒感染初期的病例；同时抗体响应不稳定，因此不能用于诊断急性感染，只能用于长期的流行病学监测。
二、分子生物学检测法随着现代分子生物学技术的不断发展，在禽流感病毒检测方面也出现了一系列基于分子生物学技术的新型检测方法，如PCR法、实时荧光定量PCR法（RT-PCR法）、LAMP法、核酸微芯片法等。
1. PCR法PCR法是指用聚合酶链反应技术，通过扩增目标病毒基因片段使其呈指数倍增长从而检测样本中的禽流感病毒。
PCR法具有闭管式系统、扩增特异性高、灵敏度高、快速检测等优点，但PCR法检测中存在假阳性、假阴性等误差，并且PCR扩增后的目的产物需要进行凝胶电泳分析，需要一定实验经验，操作相对较复杂。
RT-PCR法是在传统PCR法基础上，通过引入逆转录过程得到RNA模板进行扩增，从而实现对RNA病毒如禽流感病毒检测。
不同代次MDCK细胞对流感病毒的敏感性比较比较不同代次的狗肾传代（MDCK）细胞对流感病毒的敏感性差异。
方法选择生长状态及形态良好的、不同代次的MDCK细胞，在相同培养条件下同时接种流感样病例咽拭子标本，观察细胞病变，细胞收获后采用血凝试验测定病毒血凝效价和分离率；以参考流感病毒株测定TCID50值，比较不同代次MDCK细胞对流感病毒的敏感性。
结果3个不同代次的MDCK 细胞对流感样病例标本的分离阳性率、血凝效价相比差异无统计学意义，且3者TCID50 值相比，相差不超出1个Lg。
结论在相同实验条件以及细胞生长状态和形态良好的情况下，不同代次的MDCK细胞对流感病毒的敏感性无差异。
病毒分离培养是流感病原学监测的基础，是流感病毒诊断最常用和最可靠的方法之一[1]。
狗肾传代（MDCK）细胞成本低，对流感病毒较敏感[2]，广泛应用于对流感病毒的常规监测中。
有资料表明，MDCK细胞的胞龄、密度等因素均会影响流感病毒分离的阳性率[3]。
之前有人对细胞种类、培养液中胎牛血清浓度等影响病毒分离的因素做了研究[4,5]，但MDCK细胞传代次数是否会影响流感病毒的分离效果还未见报道。
研究旨在探讨代次相差较大的MDCK细胞对流感病毒的分离培养是否存在差异。
1 材料与方法1.1 主要试剂和耗材进口DMEM培养基，0.25%EDTA-胰蛋白酶，进口胎牛血清，1%豚鼠血红细胞，细胞培养板。
1.2 MDCK细胞及标本来源3个代次的MDCK细胞（P23、P45、P143）由四川省疾控中心微生物实验室日常传代保存，细胞生长状态和形态良好，细胞传代方法见参考文献[1]；流感样病例标本采集自四川省流感监测哨点医院。
1.3 参考病毒株实验用参考流感病毒株（B/四川安岳/139/2011）分离自哨点医院流感样病例标本，由四川省疾控中心微生物实验室鉴定后经国家流感中心复核，血凝效价1:32，半数细胞感染量（TCID50）为6.0，-70℃冰箱保存。
