木质素含量测定

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3.1.2.2木质素含量测定

用紫外分光光度法测定木质素含量,10天幼苗木质素提取方法,参照Syros 等方法[153,154]并略作修改。如下:

1.0.5g鲜样用95%的乙醇研磨成匀浆,4500rpm离心10 min后收集沉淀。

2.用95%乙醇冲洗沉淀3次,再用乙醇:正已烷=1:1(V/V)冲洗3次,

收集沉淀并干燥。

3.干燥物用0.5 ml 25%溴乙酰(冰乙酸配置)溶解,70℃水浴加塞保温30 min,

然后加0.9 ml 2 mol/L NaOH终止反应,加5 ml冰乙酸和0.1 ml 7.5 mol/L盐酸 羟胺,混匀后;

4.4500rpm离心5 min,吸取上清液0.1 ml,加3.0 ml冰乙酸稀释

5.测定A280nm,以A280nm·mg protein-1表示木质素的含量。 成熟植株与幼苗含量不同,提取及处理方法不同:

1.剪取拟南芥的主茎,用液氮速冻处理后冷冻干燥(过夜),将样品研磨成

粉(<20目)。 2.称取10~15 mg样品放入20 ml带刻度试管,加入10 ml去离子水,在65

℃烘箱加热1 h,每隔10 min振荡一次。

3.每个样品用GF/A玻璃纤维滤纸过滤,残渣依次用水、乙醇、丙酮、乙醚

各漂洗3次,每次1~2分钟。

4.将滤纸置于20 ml闪烁瓶(不加盖)内,在70℃烘箱中加热过夜。

5.在每个闪烁瓶中加入2.5 ml 25%溴乙酰-乙酸溶液,置于50℃烘箱加热2 h

(加盖),不时摇动。

6.预备50 ml容量瓶,加入10 ml 2 mol/L NaOH溶液及12 ml冰乙酸。

7.将样品置于冰箱冷却后转移入容量瓶,用冰乙酸漂洗滤纸后定容至50 ml。

静置1 h(最好过夜)。

8.测量280 nm处吸光率。

木质素的含量按公式3.1计算: Abs Lignin%= (Abs× liters×100% )/(W sample×A standard)

式中,Lignin%为木质素的含量,Abs为样品溶液在280nm处吸光率,liters 为样品溶液定容时的体积(L),Wsample为样品的绝干重量(g),Astandard为拟南

芥木质素标准吸光率,Astandard=17.2