- 1 - 生物显微技术
第一章
1、生物显微技术：是应用各种光学显微镜或电子显微镜观察和辨认微小生物（动物、植物和微生物）的细胞形态及其显微、亚显微结构，也包括植物染色体技术与原位杂交等新的方法和技术。
2、列文虎克发明显微镜。
罗伯特胡克用自己设计与制造的显微镜（放大倍数为40-140倍)观察了软木（栎树皮)的薄片，第一次描述了植物细胞的构造，并首次用拉丁文cellar（小室)这个词来称呼他所看到的类似蜂巢的极小的封闭状小室（实际上只是观察到到纤维质的细胞壁)。
第二章
1、材料采集注意事项：①选择新鲜的、健康的、有代表性的实验材料；②在保证材料完整的条件下，注意实验材料要“精而小”，而不是“大而多”；③注意实验材料的生长季节和发育时期；④选用刀刃锋利的刀片，切割时用力应均匀，避免组织破裂，影响制片效果；⑤实验材料选好后，应在极短的时间内杀死和固定。
2、切取纵切面时应注意使刀的切向与根茎的长轴方向平行。这种切面分为两种
①、径切面 ②、切向切面（弦切面）
3、固定：应用某种方法以最快的速度，将生物细胞或组织杀死，投入某类化学药液中，借助化学药品的作用使细胞组织保持原来的形状与结构。
4、固定时的注意事项：
①材料新鲜：组织采集与分割后须立即固定。否则时间相隔过久，体积就要收缩变形或发生自溶现象。一般以神经、造血组织自溶速度较快，胰腺、胃肠道的粘膜亦较易发生改变。
②防止变形：对一些柔嫩或薄的材料如神经、肠系膜等，应先平铺于吸水纸上再固定，可防止因蛋白质凝固而引起的扭转变形。对含气而浮于液体表面的组织如肺等，可缚以重物使其下沉，或吸出肺内气体，使其下沉于固定剂内。
③固定剂用量：一般为组织体积的10~20倍。避免组织内水分在固定时渗出，影响固定剂的浓度。勿使组织贴于瓶底或瓶壁，以免影响固定剂的渗入。在平时往往用棉花垫以瓶底，而使固定剂能均匀地渗入。
④固定时间：根据组织的不同种类、性质、大小，固定剂种类、性质、渗透力的强弱而定。有的需要1~2h至10~20h，有的长达几天。一些小的材料，仅需几十分钟。某些固定剂（如Carnoy）对组织的硬化作用较强，固定时间不宜过长；但有些固定剂（如Bouin）固定时间稍长也无关系，一般固定24h左右即可。
简析石蜡切片法
学院：生命科学与技术学院 班级：101班 姓名：陈苗苗 学号：10241123
动植物的一切生命活动，都是以细胞作为基本结构和功能单位进行的。因此，对动植物的组织、器官的研究就显得非常重要。石蜡切片法是动物、植物和病理组织切片制作上最重要、最常用的一种方法。
其制作过程是：取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→烤片→脱蜡→复水→染色→脱水→透明→封藏。现分述如下：
１、取材和固定：
固定的目的在于保存组织内细胞原有的结构和形态，使其与生活时相似，因此要求固定的材料越新鲜越好。把动物杀死后应立即割取组织块，并快速投入固定液中。将蛙或小白鼠快速剪去头部，打开腹腔，用锐利的刀片割取小块组织（肝、肠等）。组织块的大小以厚度不超过５mm为宜。然后，将取下的组织块迅速投入Bouin氏固定液中。固定时间为数小时至24小时（需视组织块的大小而定）。
２、冲洗：
经固定的材料，可根据不同的固定液，分别用水或酒精冲洗，以洗去固定液，否则固定液留在组织会有碍染色。用Bouin氏液固定的材料,可直接移入70％酒精中，多换几次酒精，直至无黄色时为止。也可在酒精中加入几滴氨水或饱和碳酸锂溶液，以迅速洗去黄色。但留少许黄色也无妨碍,浸洗后的材料若暂时不制片，可保存于70％酒精中。
３、脱水：
柔软并含有多量水分的组织是易切成薄片的，故必须增加组织的硬度。石蜡切片法就是使石蜡渗入组织，以达到支持增硬的作用。但水与石蜡是不相混合的，因此，在浸蜡、包埋前须将组织中的水分完全除去，这一步骤即为脱水。常用的脱水剂是酒精。脱水时，先从低浓度的酒精开始，然后，递增浓度，直至无水酒精。具体方法是，将材料经70％酒精→80％酒精→95％酒精（Ⅰ）→95％酒精（Ⅱ）→无水酒精（Ⅰ）→无水酒精（Ⅱ），各级酒精１－２小时。脱水应彻底，否则材料不能透明，影响石蜡的浸入，致使难以切片。
４、透明：
酒精与石蜡不能混和，因此，脱水后的材料在浸蜡前，还必须经过透明。透明剂既可替代组织中的酒精，又能溶解石蜡，以利石蜡的渗入。二甲苯是常用的一种透明剂。将脱水后的材料经１：1无水酒精与二甲苯→二甲苯（Ⅰ）→二甲苯（Ⅱ），各级时间为0.5－２小时，务使组织达到透明为止。
生物显微技术在微生物中的应用
姓名：马永见 学号：13231005
生物显微技术是指应用各种光学显微镜或电子显微镜观察和辨认微小生物（动物、植物和微生物）的细胞形态及其显微、亚显微结构，也包括植物染色体技术与原位杂交等新的方法和技术。19世纪显微技术的发展推动了生物学，特别是细胞学的迅速发展。例如，19世纪后叶细胞学家对受精作用、染色体的结构和行为的研究，就是在不断改进显微技术的过程中取得很大成就的，而这些成就又为细胞遗传学的建立和发展打下了基础。此外，显微技术在细胞学、组织学、胚胎学、植物解剖学、微生物学、古生物学及孢粉学发展中，已成为一个主要研究手段。
下面就让我们看看生物显微技术在微生物学中的具体应用。
我们都知道，微生物个体微小，其大小、形态用肉眼都是难以看清的，尤其是在研究其内部结构，只能借助显微放大系统才能进行观察和研究，这样就决定了显微技术是进行微生物研究的一项重要技术。显微技术包括显微标本的制作、观察、测定、分析和记录等方面的内容。正是由于显微技术的建立才使我们得以认识丰富多彩的微生物世界，并真正使对微生物的研究发展成为一门科学。
显微镜可以说是显微技术中最常用也最重要的一项实验仪器，无论观察微生物的活性、繁殖或是其内部的结构都必须用显微镜来观察，可以说显微镜在微生物的应用中占据了主导地位。显微镜(microscope)是一种借助物理方法产生物体放大影象的仪器。最早发明于16世纪晚 期，至今已有400多年的历史。
用显微镜对微生物进行显微观察时，主要就是将被观察的样本进行放大，以便肉眼透过显微镜观察，但除了放大外，显微镜的分辨率和反差也嫩能够影响显微观察效果。现代意义上的显微技术，已经不仅仅局限在观察物体的形态、结构，而且发展到了对物体的组成成分进行定性与定量，特别是与计算机科学技术的结合出现的图像分析、模拟仿真等技术，更是为探索微生物的奥秘增添了强大武器。
传统上，光学显微镜是主要的观察仪器，但随着研究的深入与复杂，简单的光学显微镜已经不能够再满足研究的应用，随之，电子显微镜随之问世，电子显微镜的发明促使生物学中微观现象的研究从显微水平发展到超显微水平。超微结构的研究结合生物化学的研究，使以形态描述为主的细胞学发展成为以研究细胞的生命活动基本规律为目的细胞生物学。20世纪70年代以来，由于电子显微镜分辨率的不断提高并与电子计算机的结合应用，许多分子生物学的现象，例如DNA的转录、DNA分子杂交等在生物化学中用同位素技术可证实的现象，也可在电子图象中获得直观的证实，许多生物大分子的结构和功能也可从电子图象的分析中加以认识。总之，利用显微技术进行的生物学研究可以反映细胞水平、超微
《生物显微技术》教学大纲
Biological Microscope
课程编码： 27A11701 学分： 2.5 课程类别： 专业任选课
计划学时： 56 其中讲课： 24 实验： 32
适用专业： 生物技术
推荐教材： 王庆亚，《生物显微技术》，中国农业出版社，2010。
参考书目： 1. 康莲娣，《生物电子显微技术》，中国科学技术大学出版社，2003。
2. 杨星宇，《生物科学显微技术》，华中科技大学出版社，2010。
3. 张耘生，陈铭德，杨克合《生物学技术［M］》，高等教育出版社，1994。
4. 黄承芬，《生物显微制片技术》，北京科学技术出版 1991。
5. 郑国昌，《生物显微技术［M］》，人民教育出版社，1978。
课程的教学目的与任务
生物制片技术已经成为研究生物组织和细胞结构的一种重要方法，是从事生物、农、林、牧、医科研人员应掌握的一项基本技能。在大学和中学，学生学习生物时，也常用生物制片技术和生物玻片标本。因而生物制片技术在教学和科研领域被广泛使用。通过本课程的学习，使学生了解生物制片技术的一般原理和程序，知道制片方法的分类，掌握生物制片技术的方法。综合运用所学知识、分析和解决今后学习、实验过程中遇到的多种问题。
课程的基本要求
本课程以动物显微制片技术为主，重点讲授常用的动物显微制片的方法和步骤（以石蜡切片为主），使学生具体掌握临时装片法、整体封固法、离析法、压片法、徒手切片法、石蜡切片法等动物制片的方法和步骤；能正确使用实验室常用的几种光学显微镜，对相关实验结果进行观察、分析；让学生了解激光共聚焦显微镜及其它特殊显微镜的基本知识；为学生今后从事相关工作奠定技术基础。
各章节授课内容、教学方法及学时分配建议（含课内实验）
第一章：概论 建议学时：2
