APOE基因检测临床版本

ApoE和SLCO1B1基因多态性分析及临床意义许娇娇;郭珊珊;宗传杰;杨梅;于万岭;张博;王淑梅【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2024(16)4【摘要】目的研究载脂蛋白E(ApoE)和有机阴离子转运多肽1B1(SLCO1B1)基因多态性在河北地区的分布情况,以及基因多态性与血脂水平关键指标的相关性,为他汀类药物临床合理用药提供依据。

方法收集2019年8月至2023年8月于沧州市人民医院进行ApoE和SLCO1B1基因检测的315例河北地区患者,统计并分析其ApoE和SLCO1B1总体及不同性别基因多态性分布和基因型分布情况。

结果315例患者中共检出6种ApoE基因型,由多到少依次为E3/E3(66.98%),E3/E4(18.41%),E2/E3(13.02%),E2/E4(0.95%),E4/E4(0.32%)及E2/E2(0.32%)。

共检出6种SLCO1B1基因型,由多到少分别为^(*)=1b/^(*)=1b(40.64%),^(*)=1a/^(*)=1b(33.97%),^(*)=1b/^(*)=15(13.33 %),^(*)=1a/^(*)=1a(7.30%),^(*)=1a/^(*)=15(4.44%)和^(*)=15/^(*)=15(0.32%)。

ApoE各基因型及各基因表型在不同性别分布间的比较,差异有统计学意义(χ^(2)=11.40,9.11,P<0.05),SLCO1B1各基因型及基因表型在不同性别分布间的比较,差异有统计学意义(χ^(2)=13.05,7.83,P<0.05)。

在各血脂水平方面,ApoE基因多态性与血脂水平LDL-C具有相关性(r=0.167,P<0.05),SLCO1B1基因表型与各血脂指标水平均无明显相关性(P>0.05)。

结论河北地区人群的ApoE和SLCO1B1基因多态性分别以E3型和I类正常代谢基因型为主,且不同性别中ApoE、SLCO1B1的各基因型及基因表型存在差异,ApoE基因表型会影响LDL-C水平。

A po E 基因多态性与轻度认知障碍的相关性研究谷愉愉１,２,王㊀丹１,２,龚㊀晨１,２,刘㊀杰１,２,王利娟１,２,康熙雄１,２,张国军１,２(１．首都医科大学附属北京天坛医院检验科,北京１０００７０;２．北京市免疫试剂临床工程技术研究中心,北京１０００７０)D O I :１０．１１７４８/b j m y．i s s n ．１００６－１７０３．２０２１．０１．００２收稿日期:２０２０Ｇ０８Ｇ１９;修回日期:２０２０Ｇ１０Ｇ１１基金项目:北京市自然科学基金(编号:７１９４２６１)作者简介:谷愉愉,女,博士.研究方向:分子生物学.E Ｇm a i l :g t g y ２００７＠１２６．c o m 通讯作者:张国军.E Ｇm a i l :t i a n t a n z g j ＠１６３．c o m 摘要:目的㊀探讨载脂蛋白E (A p o E )基因多态性与轻度认知障碍(m i l dc o g n i t i v e i m pa i r m e n t ,M C I )的关系.方法㊀应用实时定量荧光P C R 方法,检测１３８例轻度认知障碍患者和１３４例健康对照者的A p o E 基因型,根据A p o E 基因型分为基因表现型A po E ２组(A p o E ２/E ２和A p o E ２/E ３)㊁A p o E ３组(A p o E ３/E ３)㊁A p o E ４组(A p o E ４/E ４和A p o E ３/E ４).检测血脂六项,包括三酰甘油(T G )㊁胆固醇(T C H O )㊁低密度脂蛋白胆固醇(L D L ＧC )㊁高密度脂蛋白胆固醇(H D L ＧC )㊁载脂蛋白A １(A p o ＧA １)㊁载脂蛋白B (A p o ＧB ).分析A p o E 基因表现型和A po E 等位基因在轻度认知障碍组与健康对照组中的分布情况,比较两组的血脂水平,并分析A po E 基因多态性对轻度认知障碍患者血脂的影响.计数资料比较采用χ２检验或F i s h e r 确切概率法;计量资料比较采用单因素方差分析或t 检验.P ＜０．０５为差异具有统计学意义.结果㊀在轻度认知障碍和健康对照组中,A p o E 基因表现型的分布差异具有统计学意义(P ＜０．００１).轻度认知障碍组中,A p o E ４基因表现型为３１．９％,显著高于对照组A p o E ４表现型１２．７％(P ＜０．００１);A p o E ３基因表现型为５５．８％,显著低于对照组A po E ３表现型７２．４％(P ＝０．００４).A po Eε２等位基因在两组之间分布差异无统计学意义(P ＝０．３６２);３４．１％轻度认知障碍患者携带ε４等位基因,显著高于对照组１２．７％的携带率(P ＜０．００１);９３．５％轻度认知障碍患者携带ε３等位基因,低于对照组９９．３％的携带率(P ＝０．０１９).轻度认知障碍组中,T C HO ㊁H D L ＧC ㊁L D L ＧC ㊁A p o ＧA １和A po ＧB 水平均低于健康对照组的血脂水平,差异具有统计学意义(P ＜０．０５).但在轻度认知障碍组内,不同A p o E 基因表现型组间的血脂差异无统计学意义(P ＞０．０５).结论㊀A p o E ４基因表现型或A p o Eε４等位基因是轻度认知障碍的风险因素,A p o E ３基因表现型或A po E ε３等位基因是轻度认知障碍的保护因素,可能作为疾病的早期辅助诊断指标.A po E 可能不通过调节血脂的方式影响轻度认知障碍的发生或发展.关键词:A p o E 基因多态性;㊀轻度认知障碍;㊀血脂中图分类号:R ７４９㊀㊀文献标识码:AAS t u d y o n t h eC o r r e l a t i o no fA po EG e n eP o l y m o r p h i s m w i t h M i l dC o g n i t i v e I m pa i r m e n t G U Y u y u １,２,WA N G D a n １,２,G O N G C h e n １,２,L I U j i e １,２,WA N G L i ju a n １,２,K A N G X i x i o n g １,２,Z H A N G G u o ju n １,２(１．D e p a r t m e n t o fC l i n i c a lL a b o r a t o r y ,B e i j i n g T i a n t a nH o s p i t a l ,C a p i t a lM e d i c a lU n i v e r s i t y ,B e i j i n g １０００７０,C h i n a ;２．B e i j i n g E n g i n e e r i n g R e s e a r c hC e n t e r o f I m m u n o l o g i c a lR e a g e n t sC l i n i c a lR e s e a r c h ,B e i j i n g １０００７０,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e r e l a t i o n s h i p o fA p o E g e n e p o l y m o r p h i s mw i t hm i l d c o g n i t i v e i m pa i r m e n t ．M e t h o d s B l o o ds a m p l e sf r o m １３８p a t i e n t sw i t h m i l dc o g n i t i v ei m p a i r m e n t (M C I )a n d １３４h e a l t h yp e o p l e (c o n t r o l g r o u p )f r o m p h y s i c a le x a m i n a t i o n w e r ec o l l e c t e df r o m B e i j i n g T i a n t a n h o s pi t a l ,C a p i t a lM e d i c a lU n i v e r s i t y ．A p o E g e n o t y p e sw e r ed e t e c t e db y PC Rf l u o r e s c e n t p r o b e m e t h o da n d p a t i e n t sw e r ed i v i d e d i n t o g r o u p A p o E ２(A p o E ２/E ２a n dA p o E ２/E ３),A p o E ３(A p o E ３/E ３),A p o E ４(A p o E ４/E ４a n dA p o E ３/E ４)．T G ,T C H O ,LD L ＧC ,H D L ＧC ,A p o ＧA １a n d A po ＧB w e r e t e s t e d ．T h e A p o E g e n e p h e n o t y p e s a n dd i s t r i b u t i o no fA p o Ea l l e l e sw e r e a n a l y z e d ．T h e d i f f e r e n c e s i nb l o o d l i pi d i n d e xb e t w e e n t h e p a t i e n t sw i t h M C Ia n dc o n t r o l g r o u p a n dt h e i m p a c to f p o l y m o r ph i s m o nb l o o d l i p i d i n d e x i n p a t i e n t sw i t h M C Iw e r ea l s oa n a l y z e d ．Q u a l i t a t i v ea n a l y s i sw a s p e r f o r m e db y χ２t e s t ,a n d q u a n t i t a t i v e d a t a w e r ec h e c k e d b y tt e s to r A N O V A．P ＜０．０５w a sc o n s i d e r e ds t a t i s t i c a l l y ５标记免疫分析与临床㊀２０２１年１月第２８卷第１期s i g n i f i c a n t．R e s u l t s A p o E g e n e p h e n o t y p e sd i s t r i b u t i o ns h o w e ds t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n td i f f e r e n c ei n p a t i e n t sw i t h M C I c o m p a r e d w i t h t h e h e a l t h y c o n t r o l g r o u p(P＜０．００１)．I n m i l d c o g n i t i v e i m p a i r m e n t,t h e f r e q u e n c y o fA p o E４p h e n o t y p ew a s３１．９％i n t h e p a t i e n t sw i t h M C I a n dw a s１２．７％i n t h e c o n t r o l g r o u p(P＜０．００１)．T h e f r e q u e n c y o fA p o E３p h e n o t y p ew a s５５．８％i n t h e p a t i e n t sw i t h M C I a n d７２．４％i n t h e c o n t r o l g r o u p(P＝０．００４)．A s f o r t h eA p o Eε２a l l e l e,t h e r ew a s n o s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e n t h e p a t i e n t sw i t hM C I a n d t h e c o n t r o l g r o u p(P＝０．３６２)．３４．１％o f t h e p a t i e n t sw i t h M C I c a r r i e d t h eε４a l l e l e,s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t o f t h ec o n t r o l g r o u p(１２．７％) (P＜０．００１);９３．５％o f t h e p a t i e n t sw i t h M C I c a r r i e dt h eε３a l l e l e,s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a nt h a to f t h e c o n t r o l g r o u p(９９．３％)(P＝０．０１９)．T h e l e v e l s o fT C H O,L D LＧC,H D LＧC,A p oＧA１a n dA p oＧB i n t h e p a t i e n t s w i t h M C I w e r es i g n i f i c a n t l y l o w e rt h a nt h o s eo ft h ec o n t r o l g r o u p(P＜０．０５)．H o w e v e r,i nt h e p a t i e n t sw i t h M C I,t h e r ew a sn os t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n td i f f e r e n c e i nb l o o dl i p i d a m o n g d i f f e r e n tA p o E g e n o t y p e s(P＞０．０５)．C o n c l u s i o n A p o E４g e n e p h e n o t y p e s o rε４a l l e l ew a s a r i s k f a c t o r f o rm i l dc o g n i t i v e i m p a i r m e n t,A p o E３g e n e p h e n o t y p e so rε３a l l e l ew a sa p r o t e c t i v ef a c t o r, w h i c hc o u l ds e r v ea sa na u x i l i a r y d i a g n o s t i c i n d e xf o re a r l y m i l dc o g n i t i v ei m p a i r m e n t．A p o E w a s u n l i k e l y t oa f f e c t t h eo c c u r r e n c ea n dd e v e l o p m e n t o fm i l dc o g n i t i v e i m p a i r m e n t b y r e g u l a t i n g b l o o d l i p i d l e v e l s．K e y w o r d s:A p o E g e n e p o l y m o r p h i s m;㊀M i l dc o g n i t i v e i m p a i r m e n t;㊀B l o o d l i p i d㊀㊀轻度认知障碍是一种正常衰老与痴呆的过渡状态,影响１０％~１５％的６５岁以上人群,每年有１６％~１７．２％的轻度认知障碍患者进展为痴呆[１Ｇ２].随着我国人口老龄化进程的加快,轻度认知障碍患者和痴呆患者逐年增加,不仅危害人们健康和生活质量,也给患者家庭和社会带来了严重的经济负担.由于阿尔茨海默痴呆较难治疗,针对轻度认知障碍这一 窗口期 及时干预,从而延缓轻度认知障碍患者进展为痴呆的过程,是当前防治痴呆的策略之一.因此,及早识别轻度认知障碍风险人群具有重要意义.㊀㊀载脂蛋白E(A p o E)是由１９号染色体的A p o E 基因编码,２９９个氨基酸组成的糖蛋白,分子量约为３４k D a,具有遗传多态性.A p o E基因有两个遗传多态性位点,即r s４２９３５８(T＞C)和r s７４１２(C＞T),分别导致A p o E蛋白第１１２位和第１５８位氨基酸的改变,从而产生３种A p o E亚型,分别是A p o E２㊁A p o E３和A p o E４.A p o E３被认为是野生型,第１１２位是半胱氨酸,１５８位是精氨酸.突变型A p o E２的两个位点都是半胱氨酸,A p o E４的两个位点都是精氨酸[３].对应的三个常见等位基因为ε２㊁ε３和ε４,可组成６种不同的基因型,即A p o E２/E２(３８８T T ５２６T T)㊁A p o E３/E３(３８８T T５２６C C)㊁A p o E４/E４(３８８C C５２６C C)㊁A p o E２/E３(３８８T T５２６C T)㊁A p o E２/E４(３８８T C５２６C T)和A p o E３/E４(３８８T C ５２６C C).A p o E主要的生理功能是参与胆固醇转运和血浆脂蛋白代谢,并对树突生长㊁突触可塑性的维持㊁神经元的修复也有一定的作用,与脑梗死㊁冠心病㊁阿尔茨海默等疾病的发生发展密切相关[４].本研究主要探讨了A p o E基因多态性与轻度认知障碍的相关性,旨在为轻度认知障碍患者的风险评估和早期诊断提供新的检验指标.材料和方法㊀㊀１㊀一般资料㊀㊀１．１㊀研究对象㊀收集自２０１６年１月至２０２０年５月北京天坛医院系统登记在内的轻度认知障碍患者１３８例,包括男性７９例,女性５９例,年龄３９~７９岁,平均年龄６１．１ʃ８．９岁;健康对照组１３４例来自同期体检人群,包括男性７２例,女性６２例,年龄３９~７８岁,平均年龄６０．７ʃ８．９岁.所选研究对象在性别和年龄进行比较,差异无统计学意义(P＞０．０５).㊀㊀１．２㊀入组与排除标准㊀轻度认知障碍组:入组标准参照１９９９年P e t e r s o n等提出的轻度认知障碍诊断标准:①主观感觉有记忆力减退,且病程超过６个月;②没有或很少伴有其他认知域损害;③临床痴呆量表(C D R)评分为０．５;④精神状态简易速查表(MM S E)评分２４~２７分;⑤日常生活活动量表(A D L)评分＜２６分;⑥非痴呆.排除标准:排除阿尔茨海默病㊁血管性痴呆㊁帕金森痴呆及脑器质性疾病所致的各种痴呆.健康对照组符合以下入组标准:①无记忆力减退主诉;②日常生活能力正常;③C D R评分为０;④MM S E评分＞２７分;⑤年龄㊁性别与轻度认知障碍组相匹配.排除标准同轻度认知障碍组.㊀㊀２㊀检测方法和判定标准㊀㊀２．１㊀基因型检测㊀使用武汉友芝友医疗科技有限公司提供的人类A p o E基因检测试剂盒.抽取６L a b e l e d I mm u n o a s s a y s&C l i n M e d,J a n．２０２１,V o l．２８,N o．１患者及对照者E D T A ＧK ２抗凝静脉全血,提取D N A并应用实时荧光定量P C R 方法,检测A po E ２５２６(C ＞T )/A p o E ４３８８(T ＞C )位点.通过R O X 荧光通道判定内参扩增情况,通过F AM 和V I C 通道的荧光曲线判断A p o E ２５２６和A p o E ４３８８位点(见表１),并通过两位点结果的简单相加获得最终基因型(见表２).根据基因型鉴定结果,将A p o E 基因表现型分为３组:E ２组,E ３组和E ４组.E ２组包括A p o E ２/E ２和A p o E ２/E ３型;E ３组为A po E ３/E ３型;E ４组包括A p o E ４/E ４和A p o E ３/E ４;A p o E ２/E ４另成一组.根据A po E 等位基因进行分组:①ε２携带组即患者至少有１个ε２等位基因,包括A po E E ２/E ２㊁E ２/E ３㊁E ２/E ４;②ε３携带组即患者至少有１个ε３等位基因,包括A p o EE ２/E ３㊁E ３/E ３㊁E ３/E ４;③ε４携带组即患者至少有１个ε４等位基因,包括A po EE ２/E ４㊁E ３/E ４㊁E ４/E ４.表１㊀A p o E ２５２６与A po E ４３８８位点结果判定反应液基因型F AM 通道C t 值V I C 通道C t 值A po E ２反应液A po E ２５２６C /C 纯合野生＜３８ȡ３８或无A po E ２５２６C /T 杂合突变＜３８＜３８A po E ２５２６T /T 纯合突变ȡ３８或无＜３８A po E ４反应液A po E ４３８８T /T 纯合野生＜３８ȡ３８或无A po E ４３８８T /C 杂合突变＜３８＜３８A po E ４３８８C /C 纯合突变ȡ３８或无＜３８表２㊀A po E 基因型结果判定A po E ２５２６A po E ４３８８基因型A po E ２５２６C /C A po E ４３８８T /T A po E ３/E ３(３８８T T ５２６C C )A po E ４３８８T /C A po E ３/E ４(３８８T C ５２６C C )A po E ４３８８C /C A po E ４/E ４(３８８C C ５２６C C )A po E ２５２６C /T A po E ４３８８T /T A po E ２/E ３(３８８T T ５２６C T )A po E ４３８８T /C A po E ２/E ４(３８８T C ５２６C T )A po E ２５２６T /T A po E ４３８８T /T A po E ２/E ２(３８８T T ５２６T T )㊀㊀２．２㊀生化检测㊀患者及对照者清晨空腹采血,采用黄色促凝胶真空采血管采集静脉血３m L ,离心后分离血清,使用日立(L A B O S P E C T ００８)全自动生化分析仪检测三酰甘油(T G )㊁胆固醇(T C HO )㊁高密度脂蛋白胆固醇(H D L ＧC )㊁低密度脂蛋白胆固醇(L D L ＧC )㊁载脂蛋白A １(A p o ＧA １)㊁载脂蛋白B (A po ＧB )六项指标的水平.㊀㊀３㊀统计学处理㊀㊀采用S P S S ２０．０进行数据分析,计数资料采用率(％)表示,数据符合正态分布,组间比较采用χ２检验或F i s h e r 确切概率法;计量资料采用均数ʃ标准差(x ʃs )表示,数据符合方差齐性,两组组间比较采用独立样本t 检验,多组组间比较采用单因素方差分析.多组比较后的两组分析采用B o n f e r r o n i 法.P ＜０．０５为差异具有统计学意义.结㊀㊀果㊀㊀１㊀A po E 基因型及等位基因分布情况㊀㊀A p o E 基因型在轻度认知障碍组和健康对照组中的分布情况见表３.各组中,E ３/E ３为最常见的基因型,在轻度认知障碍组和健康对照组中占比分别为５５．８％㊁７２．４％.表３㊀A po E 基因型分布情况[n (％)]组别nE ２/E ２E ３/E ３E ４/E ４E ２/E ３E ２/E ４E ３/E ４轻度认知障碍组１３８０(０)７７(５５．８)６(４．３)１４(１０．１)３(２．２)３８(２７．５)健康对照组１３４１(０．７)９７(７２．４)０(０)１９(１４．２)０(０)１７(１２．７)㊀㊀由于总例数较少,个别基因型的例数为０,以等位基因ε２㊁ε３㊁ε４在两组中的分布情况进一步分析,差异具有统计学意义(P ＜０．００１),详见表４.进一步进行两两比较,按B o n f e r r o n i 校正式将检验水准α调整为０．０１６７,在此检验水准下,ε３是频率最高的等位基因,在轻度认知障碍组和健康对照组中分别为７４．６％㊁８５．８％,差异具有统计学意义(P ＝０．００１);ε２在两组中的分布频率相似,分别为６．２％和７．８％(P ＝０．４４３);在轻度认知障碍组中,ε４频率为１９．２％,显著高于健康对照组的频率６．３％(P ＜０．００１).以基因表现型进行分组分析,在轻度认知障碍组和健康对照组中,A po E 基因表现型分布差异具有统计学意义(P ＜０．００１),详见表５.同样进行两两比较,按B o n f e r r o n i 校正式将检验水准α调整为０．０１６７,在此检验水准下,占比最高的基因表现型为E ３型,在轻度认知障碍和健康对照中分别为５５．８％㊁７２．４％,差异具有统计学意义(P ＝０．００４);轻度认知障碍组中,E ２表现型为１０．１％,略低于健康对７标记免疫分析与临床㊀２０２１年１月第２８卷第１期照组的１５．０％,(P＝０．２３３);E４表现型为３１．９％,显著高于健康对照的频率１２．７％(P＜０．００１).表４㊀A p o E等位基因分布情况[n(％)]组别ε２ε３ε４F值P值轻度认知障碍组１７(６．２)２０６(７４．６)５３(１９．２)２０．１４３０．００１健康对照组２１(７．８)２３０(８５．８)１７(６．３)表５㊀A p o E基因表现型分布情况[n(％)]组别E２组E３组E４组A p o E２/E４F值P值轻度认知障碍组１４(１０．１)７７(５５．８)４４(３１．９)３(２．２)１８．０５９∗０．００１∗健康对照组２０(１５．０)９７(７２．４)１７(１２．７)０(０)㊀㊀㊀注:∗表示F i s h e r确切概率法㊀㊀分别分析A p o E等位基因ε２㊁ε３㊁ε４在轻度认知障碍组和健康对照组中的携带情况,分别有１２．３％和１４．９％的案例携带ε２等位基因,差异无统计学意义(P＝０．５９７);轻度认知障碍组中,９３．５％携带ε３等位基因,低于健康对照组中９９．３％的携带率(P＝０．０２７);３４．１％携带ε４等位基因,高于健康对照１２．７％的携带率(P＜０．００１),详见表６.表６㊀A p o E各等位基因携带情况[n(％)]等位基因组别携带不携带F值P值ε２轻度认知障碍１７(１２．３)１２１(８７．７)０．３９３０．５９７健康对照２０(１４．９)１１４(８５．１)ε３轻度认知障碍１２９(９３．５)９(６．５)４．８７７∗０．０２７∗健康对照１３３(９９．３)１(０．７)ε４轻度认知障碍４７(３４．１)９１(６５．９)１７．２５７０．００１健康对照１７(１２．７)１１７(８７．３)㊀㊀㊀注:∗P e a r s o n连续校正卡方检验㊀㊀２㊀血脂水平分析㊀㊀A p o E蛋白的重要生理功能之一是参与血脂水平的调节,因此对轻度认知障碍和健康对照组的血脂六项进行比较,包括三酰甘油(T G)㊁总胆固醇(T C HO)㊁低密度脂蛋白胆固醇(L D LＧC)和高密度脂蛋白胆固醇(H D LＧC)㊁载脂蛋白A１(A p oＧA１)和载脂蛋白B(A p oＧB).轻度认知障碍组中,T C HO㊁L D LＧC㊁H D LＧC㊁A p oＧA１(上述四项P＜０．００１)和A p oＧB(P＝０．００１)水平均低于对照组的血脂水平,差异均具有统计学意义.详见表７.表７㊀血脂六项水平比较(xʃs)血脂指标轻度认知障碍(n＝１３８)健康对照(n＝１３４)t值P值T G(mm o l/L)１．６５ʃ０．９６１．５６ʃ０．６００．７７５０．４３９T C H O(mm o l/L)４．３８ʃ０．９７５．００ʃ０．９７－５．３０１０．００１L D LＧC(mm o l/L)２．７３ʃ０．８３３．３２ʃ０．９１－５．４９９０．００１H D LＧC(mm o l/L)１．１８ʃ０．２７１．３２ʃ０．２８－４．２１４０．００１A p oＧA１(g/L)１．３６ʃ０．２３１．４８ʃ０．２４－４．００９０．００１A p oＧB(g/L)０．９３ʃ０．２３１．０２ʃ０．２２－３．２８８０．００１㊀㊀３㊀A p o E基因表现型对轻度认知障碍患者血脂水平的影响㊀㊀A p o E基因表现型在轻度认知障碍组和健康对照组分布具有差异,与健康对照组相比,轻度认知障碍组有较高的ε４等位基因携带率,并且轻度认知障碍组的T C HO㊁L D LＧC㊁H D LＧC㊁A p oＧA１和A p oＧB 水平均低于对照组,因此,需进一步分析A p o E基因表现型㊁A p o Eε４等位基因对轻度认知障碍患者血脂水平的影响.在轻度认知障碍组中,不同基因表现型的年龄㊁性别比例和各血脂指标的水平差异均无统计学意义,详见表８;ε４等位基因携带组与非携带组相比,年龄㊁性别比例和各血脂指标的水平差异均８L a b e l e d I mm u n o a s s a y s&C l i n M e d,J a n．２０２１,V o l．２８,N o．１无统计学意义,详见表９.表８㊀A p o E基因表现型对轻度认知障碍患者血脂水平的影响(xʃs)变量E２组E３组E４组F值P值年龄(岁)５９．１ʃ９．４６１．３ʃ８．３６２．９ʃ９．７１．０５６０．３５１男性(％)５０．０５８．９５７．１０．３８２０．８７１T G(mm o l/L)１．９１ʃ１．２５１．６１ʃ０．９９１．６２ʃ０．８１０．５５８０．５７４T C HO(mm o l/L)４．１２ʃ０．７５４．２９ʃ１．０１４．５５ʃ０．９１１．２９６０．２７７L D LＧC(mm o l/L)２．５３ʃ０．５３２．６６ʃ０．８９２．９０ʃ０．７６１．６１９０．２０２H D LＧC(mm o l/L)１．１４ʃ０．３１１．１６ʃ０．２７１．２１ʃ０．２５０．６０５０．５４８A p oＧA１(g/L)１．３２ʃ０．２２１．３６ʃ０．２５１．３６ʃ０．１９０．２４８０．７８１A p oＧB(g/L)０．８３ʃ０．１６０．９１ʃ０．２５０．９８ʃ０．２１２．４３４０．０９２表９㊀A p o Eε４等位基因对轻度认知障碍患者血脂水平的影响(xʃs)变量ε４携带组(n＝４７)ε４非携带组(n＝９１)统计值(F值/t值)P值年龄(岁)６２．４ʃ９．６６０．９ʃ８．５０．８９７０．３７２男性(％)５１．１５４．５０．２０６０．６５０T G(mm o l/L)１．６３ʃ０．８１１．６６ʃ１．０４－０．１７２０．８６４T C H O(mm o l/L)４．５７ʃ０．９６４．２７ʃ０．９７１．６７８０．０９６L D LＧC(mm o l/L)２．９１ʃ０．７９２．６４ʃ０．８４１．７７２０．０７９H D LＧC(mm o l/L)１．２２ʃ０．２４１．１６ʃ０．２８１．２５２０．２１３A p oＧA１(g/L)１．３７ʃ０．２０１．３５ʃ０．２４０．４８７０．６２７A p oＧB(g/L)０．９８ʃ０．２２０．９０ʃ０．２４１．８１７０．０７１讨㊀㊀论㊀㊀随着我国社会老龄化进程的加快,轻度认知障碍和痴呆的发病率逐年攀升,成为严重的社会公共卫生问题.一方面,轻度认知障碍被认为是痴呆前期可干预的 窗口期 而倍受关注;另一方面,轻度认知障碍患者也伴随有抑郁㊁生活质量下降的情况.因此,对轻度认知障碍疾病风险评估与早期诊断的检验指标的寻求迫在眉睫.㊀㊀A p o E分布较广,外周血浆中的A p o E主要由肝脏㊁巨噬细胞㊁骨骼㊁卵巢和肾脏合成,而在中枢神经系统中,主要由星形胶质细胞合成.已有研究表明, A p o E通过多种途径参与机体的脂质代谢,是影响机体血脂水平的重要内在因素.A p o E基因多态性是导致个体发病差异的主要原因,等位基因ε４可能是心脑血管疾病发病的风险因素[５Ｇ６].在痴呆疾病方面,有文献认为,A p o E等位基因ε４是唯一能够提示晚发型阿尔茨海默的遗传因子,但它在疾病的发展中是非必要也非充分条件[７].㊀㊀为了明确A p o E基因多态性与轻度认知障碍的相关性,本研究选取了３９至７９岁之间的轻度认知障碍患者共１３８例为病例组,并选取年龄㊁性别匹配的健康体检者共１３４例为对照组,比较A p o E基因表现型㊁各等位基因在两组中的分布情况.两组中,最常见的基因型都是A p o E３/E３;轻度认知障碍组有更高比例的A p o E４基因表现型和A p o Eε４等位基因携带率,提示A p o E４基因表现型和A p o Eε４等位基因可能是轻度认知障碍的风险因素;而健康对照组具有较高比例的A p o E３基因表现型和A p o Eε３等位基因携带率,提示A p o E３表现型和A p o Eε３等位基因可能是轻度认知障碍的保护因素.但A p o E２基因表现型和A p o Eε２等位基因携带率在两组中,差异无统计学意义.本研究结果与当前其他研究基本一致.一项M e t a分析提示,中国人群A p o E等位基因ε４与M C I发病存在关系,ε３可能为M C I的保护基因,ε２与M C I发病未发现相关性[８].也有研究通过分析A p o Eε４等位基因和主观认知下降对轻度认知障碍的联合作用,发现在女性人群中,二者具有正相互作用;但在男性人群中,主观认知下降和非ε４等位基因携带组具有更高的轻度认知障碍风险[９].A p o Eε４等位基因对认知功能具有重要影响,该作用似乎受到年龄因素的影响,许多研究显示,A p o E ε４等位基因在生命的不同阶段,对认知功能的作用并不相同,甚至相反[１０].㊀㊀A p o E４基因表现型可导致较高水平的T C HO 与L D LＧC,从而促进动脉粥样硬化的形成,在心脑血管疾病的发生发展起到重要作用[１１Ｇ１２].A p o E是否也通过影响血脂水平而影响轻度认知障碍的发病率?本研究先对轻度认知障碍组与健康对照组的血脂水平进行比较,包括T G㊁T C H O㊁L D LＧC㊁H D LＧC㊁A p oＧA１和A p oＧB六项常见的血脂指标,结果显示,９标记免疫分析与临床㊀２０２１年１月第２８卷第１期除T G以外,轻度认知障碍组的其他五项血脂指标均低于对照组.实际上,关于血脂与认知能力的研究结果存在争议.部分研究认为,较高的血清T C HO和L D LＧC水平与老年人群的认知水平降低进展较快有关,降低血脂是预防认知损害的有效方式[１３].也有研究与本研究结果相似,在８０岁以上的老年人群中,较高水平T C HO㊁L D LＧC和H D LＧC 与较低风险的认知损害相关,但在６５~７９岁的老年人群中无此相关性[１４].一项对亚洲老年人群２６年随访研究表明,血清胆固醇水平降低的人群倾向发展为轻度认知障碍,而血脂水平增加的人群仍维持正常认知水平[１５].研究结果之间的差异可能与入组人群年龄㊁性别㊁民族㊁入组标准㊁样本总数等多种因素相关.本研究也比较了轻度认知障碍组中,不同A p o E基因表现型患者的血脂水平,除T G以外,其余血脂指标在A p o E２㊁A p o E３和A p o E４中水平均呈现递增变化;ε４等位基因携带组中,T G以外的五项血脂指标均高于非携带组,但差异均无统计学意义.大脑具有较高的脂含量,胆固醇能够提供结构完整性,并调节神经元细胞的流动性.血脂也许不能精准体现脑中脂类的情况,且二者生理功能并不完全一致.可能不同于心脑血管疾病,A p o E基因多态性通过其他方式影响轻度认知障碍的发生,可能与βＧ淀粉样蛋白沉积㊁T a u蛋白磷酸化有关[１６Ｇ１７].在一定程度上,A P O E还可以影响大脑结构,如海马结构㊁杏仁核㊁内嗅皮层甚至整个脑体积的萎缩.A p o Eε４等位基因影响脑内环境(包括Aβ沉积㊁脑脊液生物标志物和糖代谢),与灰质萎缩㊁白质损坏㊁大脑激活和脑连通性相关[１０].影像研究提示,A p o E ε４携带者海马的神经元活性或密度降低更为明显,可能与A p o Eε４参与形成的Aβ复合物在脑组织内沉积对髓鞘的损伤作用有关;此外,A p o Eε４也可能与胆碱能神经元破坏㊁胶质细胞活化有关[１８].㊀㊀综上所述,A p o E４表现型或A p o Eε４等位基因是轻度认知障碍的风险因素和早期辅助诊断指标,并且A p o E可能不通过调节血脂的方式影响轻度认知障碍的发生或发展.后续的研究中,需加大研究对象样本量,以及增加新的检测指标,进一步探讨A p o E基因多态性在其中的作用机制,不仅为A p o E 作为预测和早诊指标提供充足的依据,也可为疾病的干预与治疗提供新的思路.参考文献[１]A N D E R S O N N D．S t a t e o f t h e s c i e n c e o n m i l d c o g n i t i v ei m p a i r m e n t(M C I)[J]．C N SS p e c t r,２０１９,２４(１):７８Ｇ８７．[２]L A N D A US M,H A R V E Y D,MA D I S O N C M,e t a l．C o m p a r i n g p r e d i c t o r s o f c o n v e r s i o n a n d d e c l i n e i nm i l d c o g n i t i v e i m p a i r m e n t[J]．N e u r o l o g y,２０１０,７５(３):２３０Ｇ２３８．[３]M I C H A E LEB E L L O Y,V A L E R I O N A P O L I O N I,M I C H A E L DG R E I C I U S．A q u a r t e rc e n t u r y o f A P O E a n d A l z h e i m e r s d i s e a s e:p r o g r e s st od a t ea n dt h e p a t hf o r w a r d[J]．N e u r o n,２０１９,１０１(５):８２０Ｇ８３８．[４]E V A N S RM,HU IS,P E R K I N S A,e ta l．C h o l e s t e r o la n dA P O E g e n o t y p e i n t e r a c t t o i n f l u e n c e A l z h e i m e r d i s e a s e p r o g r e s s i o n[J]．N e u r o l o g y,２００４,６２(１０):１８６９Ｇ１８７１．[５]刘淑静,常欣魁,陈柯霖,等．载脂蛋白E基因多态性与脑梗患者年龄和血脂的相关性研究[J]．标记免疫分析与临床,２０１８,２５(１１):１５９５Ｇ１５９５．[６]朱嫦琳,例炜煊,李美珠．载脂蛋白E基因多态性与心脑血管疾病的相关性[J]．实用医学杂志,２０１７,３３(１６):２７７３Ｇ２７７６．[７]彭丹涛,李鹤,张占军．２０１０欧洲神经病学联盟阿尔茨海默病诊疗指南[J]．中华老年医学杂志[J],２０１１,３０(２):８９Ｇ９５．[８]张洁,周晓辉,罗坤．中国人群轻度认知功能障碍与载脂蛋白E 基因多态性相关性的M e t a分析[J]．临床荟萃,２０１６,３１(３):３１５Ｇ３２１．[９]D I A N A M U L L E RＧG E R A R D S,C H R I S T I A N W E I M A R,J E S S I C AA B R AMOW S K I,e t a l．S u b j e c t i v e c o g n i t i v e d e c l i n e,A P O Eε４, a n d i n c i d e n tm i l d c o g n i t i v e i m p a i r m e n t i nm e na n dw o m e n[J]．A l z h e i m e r sD e m e n t(A m s t),２０１９,１１:２２１Ｇ２３０．[１０]J I A L I N GF A N,WU H A I T A O,X I NL I,e t a l．T h e c o n t r i b u t i o n o f g e n e t i c f a c t o r s t o c o g n i t i v e i m p a i r m e n t a n d d e m e n t i a:a p o l i p o p r o t e i nE g e n e,g e n e i n t e r a c t i o n s,a n d p o l y g e n i c r i s k[J]．I n tJ M o lS c i,２０１９,２０(５):１１７７．[１１]陆小林,林志伟,陈丽芳,等．A p o E基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的相关性研究[J]．中国实用神经疾病杂志,２０１８,２１(２２):２４６３Ｇ２４６９．[１２]宋扬,范雪松,王恩世,等．血清载脂蛋白E水平与颈动脉粥样硬化斑块的关系研究[J]．检验医学与临床,２０２０,１７(１５):２１２６Ｇ２１２９．[１３]C H A O R A N M A,Z H A O X U EY I N,P E N G F E I Z H U,e t a l．B l o o d c h o l e s t e r o l i n l a t eＧl i f e a n dc o g n i t i v ed e c l i n e:a l o n g i t u d i n a l s t u d y o f t h eC h i n e s e e l d e r l y[J]．M o lN e u r o d e g e n e r,２０１７,１２(１):２４．[１４]Y U EＧB I N L V,Z H A OＧX U E Y I N,C HO YＧL Y EC H E I,e t a l．S e r u m c h o l e s t e r o ll e v e l s w i t h i n t h e h i g h n o r m a lr a n g e a r e a s s o c i a t e d w i t h b e t t e rc o g n i t i v e p e r f o r m a n c e a m o n g C h i n e s e e l d e r l y[J]．JN u t rH e a r l t hA g i n g,２０１６,２０(３):２８０Ｇ２８７．[１５]R O B E R T S T E WA R T,L O N R WH I T E,Q I A NＧL IX U E,e t a l．T w e n t yＧs i xＧy e a r c h a n g e i n t o t a l c h o l e s t e r o ll e v e l s a n d i n c i d e n td e m e n t i a:t h e H o n o l u l uＧA s i a A g i n g S t u d y[J]．A r c hN e u r o l,２００７,６４(１):１０３Ｇ１０７．[１６]R E F O L OL M,F I L L I T H M．A p o l i p o p r o t e i nE４a s a t a r g e t f o r d e v e l o p i n g n e wt h e r a p e u t i c s f o ra l z h e i m e r sd i s e a s e[J]．J M o lN e u r o s c i,２００４,２３(３):１５１Ｇ１５５．[１７]Z H A O N,L I U C C,Q I A O W,e ta l．A p o l i p o p r o t e i n E, r e c e p t o r s,a n d m o d u l a t i o n o f A l z h e i m e rᶄs d i s e a s e[J]．B i o l P s y c h i a t r y,２０１８,８３(４):３４７Ｇ３５７．[１８]朱小群,周霞,赵伟,等．载脂蛋白E基因型对遗忘型轻度认知障碍和阿尔茨海默病病患者磁共振波谱的影响[J]．中华医学杂志,２０１９,９９(１５):１１５６Ｇ１１６１．０１L a b e l e d I mm u n o a s s a y s&C l i n M e d,J a n．２０２１,V o l．２８,N o．１。

基于TaqMan-TAMRA探针技术的ApoE基因快速分型方法研究摘要】目的建立基于TaqMan-TAMRA探针技术的快速、准确的载脂蛋白E(ApoE)基因型检测方法，为临床诊断、治疗和预防ApoE基因相关疾病提供依据。

方法对1049例血液样本提取DNA后，利用TaqMan-TAMRA探针对ApoE基因进行检测和分型，并利用测序法进行验证。

结果 1049例样本中，共检出1048例，ApoE基因的6种基因型（ε3/ε3、ε2/ε3、ε3/ε4、ε2/ε4、ε2/ε2、ε4/ε4）所占比例分别为68.64%、13.54%、14.97%、1.72%、0.76%、0.38%。

TaqMan-TAMRA探针法分型结果与测序结果完全一致。

结论 TaqMan-TAMRA探针法操作简便，分型结果准确度高，是一种适用于临床的ApoE基因快速分型方法。

【关键词】载脂蛋白ETaqMan-TAMRA基因分型测序【中图分类号】R319 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）35-0132-02Development of a fast genotyping forApoEbased on TaqMan-TAMRAprobes【Abstract】Objective:To establish a method for fast and accurategenotyping ApoE with TaqMan-TAMRA probes and to support the clinical diagnosis、treatment and prevention.Methods:DNA was extracted from 1049 blood samples, then detected and genotyped with TaqMan TAMRA probes. The genotypes were compared with sequencing results. Results: DNA were detected in 1048 out of 1049 samples.Of which, six genotypes of ApoE gene (ε3/ε3, ε2/ε3, ε3/ε4, ε2/ε4, ε2/ε2, ε4/ε4) accounted for 68.64%, 13.54%, 14.97%, 1.72%, 0.76%, 0.38%.TaqMan-TAMRA probe genotypes were consistent with sequencing results. Conclusion:TaqMan-TAMRA is a fast and accurate method for genotyping ApoE.【Key words】 Apolipoprotein E TaqMan-TAMRA genotyping sequencing 载脂蛋白（ApoE）基因位于人的第19号染色体，编码由299个氨基酸组成的ApoE蛋白，该蛋白具有脂蛋白转运、代谢及修复细胞膜等功能[1，2]。

apoe基因分型的临床意义The clinical significance of apoe gene typing is atopic of great interest and research in the field of medicine. The apoe gene, also known as apolipoprotein E gene, plays a crucial role in lipid metabolism and is associated with various diseases, particularly Alzheimer's disease and cardiovascular diseases. Understanding the clinical implications of apoe gene typing can provide valuable insights into disease risk assessment, prevention, and treatment strategies.One of the key clinical implications of apoe gene typing lies in its association with Alzheimer's disease (AD). The apoe gene has three major alleles: apoe2, apoe3, and apoe4. Individuals who inherit two copies of the apoe4 allele are at an increased risk of developing AD compared to those with other genotypes. The presence of apoe4 allele is associated with an earlier age of onset and a higherrisk of developing AD. This information can be used for genetic counseling and risk assessment in individuals witha family history of AD, enabling early detection and intervention.Furthermore, apoe gene typing has implications for cardiovascular diseases (CVD) as well. The apoe4 allele has been shown to be a risk factor for the development of atherosclerosis and coronary heart disease. Individuals carrying the apoe4 allele have higher levels of low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C), which is associated with an increased risk of CVD. This knowledge can aid in risk stratification and personalized treatment approaches for individuals with cardiovascular risk factors.Apart from AD and CVD, apoe gene typing has been linked to other conditions as well. For instance, the apoe4 allele has been associated with an increased risk of cerebral amyloid angiopathy, which is characterized by the accumulation of amyloid plaques in the blood vessels of the brain. Additionally, apoe gene typing has been investigated in relation to other neurodegenerative disorders such as Parkinson's disease and multiple sclerosis, although the findings are still inconclusive.In a clinical setting, apoe gene typing can also guide treatment decisions. For instance, in AD management, knowledge of an individual's apoe genotype can help determine the most suitable treatment approach. Individuals with the apoe4 allele may benefit from early initiation of preventive measures such as lifestyle modifications, cognitive training, and pharmacological interventions. On the other hand, individuals with other apoe genotypes may require alternative treatment strategies.Moreover, apoe gene typing can aid in drug development and personalized medicine. The apoe genotype can influence an individual's response to certain medications, including cholesterol-lowering drugs and anti-inflammatory agents. By identifying individuals who are more likely to respond to specific treatments, healthcare providers can optimize therapeutic outcomes and minimize adverse effects.In conclusion, the clinical significance of apoe gene typing is multifaceted and spans various medical disciplines. It provides valuable insights into diseaserisk assessment, prevention, and treatment strategies for conditions such as Alzheimer's disease, cardiovascular diseases, and other neurodegenerative disorders. Furthermore, apoe gene typing can guide treatment decisions, aid in drug development, and contribute to personalized medicine. As research in this field continues to advance, a deeper understanding of the clinical implications of apoe gene typing will undoubtedly have a profound impact on patient care and outcomes.。

作者单位：100176　北京，北京艾德摩医学检验实验室通信作者：郝繁运，Email ：**************DOI ：10.3969/j.issn.1674-7151.2020.04.004CYP2C19基因多态性和ApoE 基因分型检测质量控制品的制备郝繁运【摘要】 目的 制备CYP2C19基因多态性和ApoE 基因分型检测质量控制（质控）品并评估其质量。

方法 收集医院血库过滤血液后的滤膜，经洗脱后稀释，进行基因扩增实验，制备CYP2C19基因多态性和ApoE 基因分型检测质控品，在6个月保存期内重复检测，评价均匀性和稳定性。

结果 收集样本的CYP2C19基因多态性检测出*1/*1、*1/*2、*2/*2、*1/*3、*3/*3基因型，未检出*1/*17、*2/*3、*2/*17、*3/*17、*17/*17基因型；ApoE 基因分型检测出ε3/ε3、ε3/ε4、ε2/ε3、ε2/ε2、ε4/ε4基因型，未检出ε2/ε4基因型。

自制质控品在6个月保存周期内的检测结果随着时间延长无明显变化，与已知结果一致。

结论 自制质控品均匀性和稳定性良好，可用于临床实验室CYP2C19基因多态性和ApoE 基因分型检测的质控。

【关键词】 基因分型； 基因多态性； 自制质量控制品Preparation of quality control products for CYP2C19 polymorphism and ApoE genotyping detection Hao Fanyun. Beijing Ademo Medical Laboratory, Beijing 100176, China Correspondingauthor:HaoFanyun,Email:**************【Abstract 】 Objective To prepare quality control (QC) products for CYP2C19 polymorphism and ApoE genotyping detection. Methods The filter membrane in the hospital blood bank was collected and diluted after elution, and then the gene amplification experiment was carried out. The QC samples for CYP2C19 polymorphism and ApoE genotyping detection were prepared, and repeated detection was conducted within 6 months storage period to evaluate the homogeneity and stability. Results The genotypes of *1/*1, *1/*2, *2/*2, *1/*3 and *3/*3 were detected in CYP2C19 gene polymorphisms, while *1/*17, *2/*3, *2/*17, *3/*17 and *17/*17 were not detected; the genotypes of ε3/ε3, ε3/ε4, ε2/ε3, ε2/ε2 and ε4/ε4 were detected, and ε2/ε4 was not detected. The self-made QC products showed no obvious change in 6-month storage period, and was consistent with confirmed results. Conclusion The self-made QC products for nucleic acid testing have good uniformity and stability, and can be used for the QC of CYP2C19 polymorphism and ApoE genotyping detection.【Key words 】 Genotyping; Genetic polymorphism; Self-made quality control productsCYP2C19基因多态性检测可用于氯吡格雷等药物用药安全监测和用药指导，ApoE 基因分型检测结果可以作为心脑血管疾病及阿尔兹海默病（Alzheimer's disease，AD ）临床辅助诊断和风险评估的重要指标。