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水稻DNA提取

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水稻DNA提取方法
1.光照培养箱中（30℃）水稻催芽，8天左右，切去整株苗；
2.液氮研磨至粉末，装入离心管，藏于-20℃；
3.向粉末中加入预热至65℃左右的600μlCTAB提取液，将管置于65℃水浴锅中温育
30-60min；
4.加入600μl氯仿/异戊醇（24:1）用力上下颠倒充分混匀；
5.12000r/min离心5-10min，取上清液转入新离心管中，加入预冷异丙醇600μl，充
分摇匀，于-20℃30min；
6.12000r/min离心10min，弃上清；
7.以70%乙醇洗涤数次，12000r/min离心5min，超净台上吹干；
8.用100μl TE溶解藏于-20℃
1、CTAB提取缓冲液的经典配方
CTAB为十六烷基三甲基溴化铵，
Tris-HCl 提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏；
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性；
NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中；
Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。

CTAB 4g
NaCl 16.364 g
1M Tris-HCl 20ml(
0.5M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml
高温高压灭菌
提取时再加% 2-巯基乙醇（400ul）或PVP 2g（1%）。

2、氯仿-异戊醇（24：1）：
100ml：96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀。

200ml：192ml氯仿，再加8ml异戊醇，摇匀。

3、0.5 M EDTA (pH
1000ml
EDTA-Na·2H2O 186.1 g
NaOH ~20 g
Adjust to pH
dH2O to 1000 ml
高温高压灭菌
100ml
EDTA-Na·2H2O 1g
NaOH ~2 g
Adjust to pH
dH2O to 100 ml
高温高压灭菌
4、1×TE Buffer
组成浓度：10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=
配制量：100ml
配制方法：量取下列溶液于500ml烧杯中
1M Tris-HCl Buffer PH= 5ml
1M Tris-HC Buffer PH= 50ml(TrisBase 6.0g+HCl 2ml)
0.5M EDTA PH= 1ml
0.5M EDTA pH= 50ml ( 9.3g+NaOH 1g)
EDTA又叫做乙二胺四乙酸二钠
向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合；将溶液定容到500ml后，调节pH值=，高温高压灭菌；室温保存.。

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水稻DNA提取方法

水稻DNA提取方法

1、剪碎叶片，放入2ml离心管中，加入2颗钢珠，加入750ul CTAB提取液，放入粉碎机进行粉碎2、放入65摄氏度烘箱30-60mins,最好45mins3、加氯仿（500ul)4、摇匀、离心（12000r 10mins)5、离心后，吸取上清液（350-500ul) 于1.5ml离心管中6、加酒精（500ul)7、放置于-20摄氏度冰箱至少30mins8、离心(12000r 6mins)9、倒掉上部液体10、放入65摄氏度烘箱2h 或37摄氏度过夜11、加dd水（300-500ul) 猛摇混匀，放室温2小时1, shear the blade, in 2 ml centrifuge tube, add 2 steel balls, to join 750 ul CTAB extraction liquid, put it into the crusher for crushing2, placed into a 65 degrees oven for 30 to 60 mins, best 45 mins3, chloroform (500 ul)4, shake well, centrifugal (12000 r 10 mins)5After the centrifugal, draw on the fluid (350-500 ul)In 1.5 ml centrifuge tube 6, add alcohol (500 ul)7, placed in refrigerator for at least 30 mins (- 20 degrees Celsius)8, centrifugal (12000 r 6 mins)9, pour out the upper liquid10, placedin a 65 degrees oven 2 h or 37 degrees Celsius for the night11, with the dd water (300-500 ul) succussion blender, put 2 hours at room temperature。

CTAB法大量提取水稻DNA

CTAB法大量提取水稻DNA

10)将离心管放到超净工作台风干，保存备用
实验步骤
1)将3g黄化苗材料在液氮中磨碎
2)加入18ml预热的CTAB，65℃水浴，1h，每5min摇匀一次
3)10000rpm/min离心7min，回收上清液16ml，弃去沉淀
4)加入25:24:1 16ml，上下颠倒几次，静置10min（可用24：1替代）
5)12000rpm/min离心10min，小心吸取上清14ml
6)加入24:1 14ml，上下颠倒几次，静置10min
7)12000rpm/min离心10min，小心吸取上清13ml
8)加入1/10上清体积的3Mol/LNaAC，1-2倍上清体积的-20℃无水乙醇，-20℃静置1h
9)轻轻振荡晃动管子，使DNA缠绕在一起，用干净的针头将絮状DNA挑入1.5ml EP管，加入70%乙醇洗涤几次至DNA白色
CTAB法大量提取水稻DNA
药品配制
1.CTAB配制
药品名
终浓度
CTAB
2%（V）
NaCl
1.4Mol/L
EDTA
0.02Mol/L
TrisBasic
0.1Mol/L
pH=8.0
2.NaAC3Mol/LpH5.2
3.氯仿：异戊醇=24:1
4.Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1
5.70%乙醇
水稻单粒种子DNA提取及SSR-PCR反应体系的正交设计优化

水稻单粒种子DNA提取及SSR-PCR反应体系的正交设计优化


个碱 基 为重 复单 位组 成 的长达 几 十个核 苷酸 的 串联重 复序 列 ， 泛分 布 于水 稻 基 因组 中 。由于 Ｓ Ｒ分 子标 广 Ｓ 记具 有 分 布 广泛 、 显 性 遗传 、 共 结果 稳 定性 高等 优 点 ， 违 法 活动 ， 以以上 三种形 式 给农 业生 产造 成危 害 。 针对
含 模 板 ＤＮＡ ４ ｎ ， Ｔ ｓ 度 为 ０１ ５ｇ ｄ Ｐ 浓 Ｎ ． ｍｍｏ Ｌ 引物 浓度 为 ０ ｍｏ／ ， ５ ｌ ， ／ ． ４ ｌＬ Ｍ 浓度 为 １ ．ｍｍｏ Ｌ Ｔ ｑ酶 为 １ ５ ｌ ，ａ ／ ． Ｕ。 ６ 关 键 词 ： 稻 ； 子 ； Ａ 法 ；ＤＳ法 ；Ｓ Ｐ Ｐ 体 系优 化 水 种 ＣＴ Ｂ Ｓ Ｓ Ｒ－ Ｃ ．
径。
场 一个 稳定 ， 社会 一个 和 谐 。 还 ２１ 扩 大普 法 宣传 断送 “ ． 未审先 推” 加 大 《 子 法 》 相关 条 文 的宣 传力 度 ， 种 及 让广 大 种
植 户真 正能 懂法 ， 用法 。无 论何 种 意义 上 的“ 会 未审 先 推 ” 最 终 受 到 影 响 的是农 业 生 产 ， 遭 损 失 最大 的是 ， 受 农 民 ， 未 审先 推 ” 而“ 之所 以存 在 ， 正是 由于农 民法律 意
李 炫丽 ， 王世 才 ， 许双 全 （湖北省 种子 集 团有 限公 司禾 盛生物 育种研 究院 ， 武汉 ４０７ ３００）
摘 要： 本文 以水稻单粒干种子 为材料进行 ＤＮＡ提取 方法和 ＳＲ— Ｃ Ｓ Ｐ Ｒ反 应体 系的优化研 究 ， 结果表 明： Ｃ Ａ 用 Ｔ Ｂ法提取
的水稻干种子 ＤＮＡ较为完整 ， 降解量 少， 可获得理 想的扩增效果。在试验设计范围 内， 确定的最佳反 应体 系为 ２ Ｌ 其 中 ０ ，
植物(水稻)基因组DNA的提取

植物(水稻)基因组DNA的提取

植物分子遗传图谱的构建水稻基因组DNA提取
• DNA指纹技术及其在作物品种鉴别中的应用 • 水稻分子遗传图谱的构建与基因定位
植物基因组DNA的分离 ——CTAB微量法 • 学习从高等植物组织中提取基因组DNA的 方法
实验原理
• 破碎细胞壁释放释放DNA：1. 液氮冷冻，2. 用含渗透剂的 缓冲液直接研磨 • 保护DNA免受内源核酸酶的降解：1. SDS(十二烷基磺酸 钠）或CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）等去污剂；2. EDTA 螯合大多数核酸酶所需的辅助因子—镁离子 • 用氯仿:异戊醇去除蛋白质，RNA酶去除RNA
实验材料
• 6个水稻品种（系） • P1（E3003） • P2（E1001） • P3（E3005） • P4（E1049） • 两优287 • 红莲优6号
实验方法
• 取2ml离心管编号，取幼嫩水稻叶片（3-5cm）剪碎，放 入离心管中，加2CTAB溶液300l 和1粒钢珠，在捣碎 仪上研磨至浆状 • 取出钢珠后再加入2CTAB溶液200l，65℃温育30分钟 • 冷却至室温后，加入500l 的氯仿/异戊醇（体积比为24： 1），反复颠倒混匀，12,000rpm，离心10分钟； • 吸取上清300l至另一1.5ml离心管中，加入等体积的冰 冷异丙醇轻轻颠倒混匀，-20 ℃沉淀20分钟； • 12,000rpm，10分钟, 小心倒去上清 • 用70％的酒精1ml泡洗，12,000rpm，5分钟； • 倒掉酒精，用移液器尽量把残余酒精吸出。风干后每个样 品加去离子水50l ，4℃保存备用