生物中常见显色反应电子教案

生物化学实验指导实验一蛋白质的性质实验（一）（呈色反应）一、目的1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式。

2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。

3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、虽色反应：(一)双缩脱反应：1.原理：尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。

双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。

蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。

可用于蛋白质的定性或定量测定。

一切蛋白质或二肽以上的多肽部有双纳脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

2.试剂：(1)尿索： 10克(2)10%氢氧化钠溶液 250毫升(3)1%硫酸铜溶液 60毫升(4)2％卵清蛋白溶液 80毫升3.操作方法：取少量尿素结晶，放在干燥试管中。

用微火加热使尿素熔化。

熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。

冷后，加10％氢氧化钠溶液约1毫升，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。

观察出现的粉红颜色。

避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。

向另一试管加卵清蛋白溶液约l毫升和10％氢氧化钠溶液约2毫升，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇，观察紫玫色的出现。

(二)茚三酮反应1.原理：除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。

该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。

茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分于和氨缩合生成有色物质。

反应机理如下：此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。

2.试剂：(1)蛋白质溶液 100毫升2％卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清：水＝1：9)(2)0.5％甘氨酸溶液 80毫升(3)0.1％茚三酮水溶液 50毫升(4)0.1％茚三酮—乙醇溶液 20毫升3.操作方法：(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。

中学生物中出现的颜色反应1斐林试剂检测可溶性还原糖原理：还原糖+斐林试剂→砖红色沉淀注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件需要水浴加热。

应用：检验和检测某糖是否为还原糖；不同生物组织中含糖量高低的测定；在医学上进行疾病的诊断，如糖尿病、肾炎。

2苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪原理：苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色；苏丹Ⅳ+脂肪→红色注意：脂肪的鉴定需要用显微镜观察。

应用：检测食品中营养成分是否含有脂肪。

3双缩脲试剂检测蛋白质原理：蛋白质+双缩脲试剂→紫色注意：双缩脲试剂在使用时，先加A液再加B液，反应条件为常温（不需要加热）。

应用：鉴定某些消化液中含有蛋白质；用于劣质奶粉的鉴定。

4碘液检测淀粉原理：淀粉+碘液→蓝色注意：这里的碘是单质碘，而不是离子碘。

应用：检测食品中营养成分是否含有淀粉5DNA的染色与鉴定染色原理：DNA+甲基绿→绿色应用：可以显示DNA在细胞中的分布。

鉴定原理：DNA+二苯胺→蓝色应用：用于DNA粗提取实验的鉴定试剂。

6吡罗红使RNA呈现红色原理：RNA+吡罗红→红色应用：可以显示RNA在细胞中的分布。

注意：在观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂，而不是单独染色。

7台盼蓝使死细胞染成蓝色原理：正常的活细胞，细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；死细胞或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

应用：区分活细胞和死细胞；检测细胞膜的完整性。

8线粒体的染色原理：健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。

应用：可以用高倍镜观察细胞中线粒体的存在。

9酒精的检测原理：橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应，变成灰绿色。

应用：探究酵母菌细胞呼吸的方式；制作果酒时检验是否产生了酒精；检查司机是否酒后驾驶。

10CO2的检测原理：CO可以使澄清的石灰水变混浊，也可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿在变黄。

高中生物实验涉及的显色反应其他试剂及用法（1）班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。

和葡萄糖溶液混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。

用于尿糖的测定。

（2）20%的肝脏研磨液、3%的过氧化氢、%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。

（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）（3）3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。

（4）二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。

（5）碳酸钙：研磨绿色叶片时加入，可中和有机酸，防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏。

（6）0.3 g/mL 的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液，比植物细胞液的浓度大，可用于质壁分离实验。

（7）0.1 g/mL 的柠檬酸钠溶液：与鸡血混合，防凝血（8）氯化钠溶液：①可用于溶解DNA 。

当氯化钠浓度为2 mol/L 、 mol/L 时DNA 的溶解度最高，在氯化钠浓度为 mol/L 时，DNA 溶解度最低。

②浓度为%时可作为生理盐水。

（9）胰蛋白酶：①可用来分解蛋白质。

②可用于动物细胞培养时分解组织使组织细胞分散开。

（10）秋水仙素：人工诱导多倍体试剂。

用于萌发的种子或幼苗，可使染色体组加倍，原理是可抑制正在分裂的细胞纺锤体的形成。

（11）层析液：(成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油)可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。

(12)果胶酶：分解果胶，将植物细胞分散开；提高果汁的出汁率和澄清度 （13）果胶酶和纤维素酶：除去植物细胞的细胞壁，制备原生质体（14）%的氯化汞溶液和70%的酒精溶液：植物组织培养和花药离体培养时外植体的消毒（15）卡诺氏固定液：将无水酒精和冰醋酸按体积比为3:1的比例混匀。

用于植物组织和细胞的固定。

方案评价试题解题的一般思路腐乳的制作 12%的酒精 抑制微生物的生长；增加腐乳独特的香味 土壤小动物类群丰富度 体积分数70%酒精杀死保存小动物，防止腐烂，成为标本DNA 粗提取与鉴定体积分数为95%酒精（充分预冷）溶解杂质析出DNA一看对照。

实验一蛋白质和氨基酸的呈色反应一、目的要求验证蛋白质特性；学习和掌握蛋白质呈色反应的原理和方法；学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

二、实验原理蛋白质中的某些化学键或氨基酸残基中的某些化学基团可以与某些特殊试剂形成特定的有色物质。

这些反应称为蛋白质的呈色反应。

各种蛋白质的氨基酸残基不完全相同。

因此，呈色反应产物的颜色也不完全一样。

呈色反应不是蛋白质所特有，一些非蛋白物质也能呈现类似的呈色反应。

因此，不能仅以呈色反应结果来判别被测物质是否为蛋白质。

三、呈色反应双缩脲反应1.原理两分子尿素经加热至180°C后可以缩合成一分子双缩脲，并放出一分子氨。

双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成紫红色络合物，此反应称为双缩脲反应。

多肽及所有蛋白质均具有肽键，与双缩脲分子中亚酰胺键结构相同，也能发生此反应，因此，蛋白质在碱性溶液中与铜离子也能呈现出类似于双缩脲的颜色反应。

2.器材与试剂1)器材试管、药匙、电炉、试管夹、滴管。

2)试剂〈1〉蛋白质溶液(10%卵清蛋白溶液)：吸取鸡蛋清溶液10ml，加蒸馏水稀释，定容至100ml。

〈2〉10%氢氧化钠溶液。

〈3〉1%硫酸铜(CuSO4)溶液。

〈4〉0.1%甘氨酸(Gly)溶液：称0.1g甘氨酸溶于蒸馏水中，稀释至100ml。

〈5〉结晶尿素。

3.实验步骤双缩脲反应实验(1)制备双缩脲：取结晶尿素少许(约火柴头大小)，放入干燥的小试管中。

微火加热至尿素熔解至硬化，刚硬化时立即停止加热，尿素放出氨，此时双缩脲即已形成。

冷却后作为双缩脲样品(1号管)。

(2)另取3支试管，与1号管一起按表加样，混匀，观察各管颜色变化，记录结果并解释现象。

茚三酮反应1.原理蛋白质或氨基酸在弱碱性条件下，其上的氨基与茚三酮共热可产生蓝紫色缩合物。

此反应为一切蛋白质和α-氨基酸所共有，具有亚氨基的脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生特征性的黄色化合物，含有氨基的其他化合物也能呈此反应。

2.器材与试剂1)器材滤纸、试管、试管夹、药匙、电炉、滴管、吸管、水浴锅。

生物中常见显色反应 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】物质鉴定出现的显色反应（1）淀粉直链淀粉由a-1，4-糖苷键连接的葡萄糖分子组成，呈线状链；支链淀粉在分支处有a-1，6-糖苷键连接，其直链部分也有a-1，4-糖苷键连接。

一般的淀粉为直链及支链淀粉的混合物。

通常我们说的淀粉遇碘变蓝指的是可溶性直链淀粉，而支链淀粉遇碘呈紫或红紫色。

(2)还原糖的鉴定还原性糖：指分子结构中含有还原性基团(游离醛基或a-碳原子上连有羟基的酮基)的糖（葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖等）蔗糖、淀粉、纤维素等不是。

能与醛基发生特定颜色的指示剂斐林试剂、班氏试剂进行鉴定。

实验时，应选择含糖量较高，颜色为白色或近白色的植物组织①斐林试剂：斐林试剂是NaOH溶液，乙液CuSO4溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。

Cu(OH)2：在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的Cu20沉淀，醛基则被氧化为羧基。

此过程溶液的颜色变化为：浅蓝色一棕色一砖红色(沉淀)。

②利用班氏试剂：班氏试剂由硫酸铜溶液，柠檬酸钠和碳酸溶液配制而成。

将A溶液倾注入B液中，边加边搅拌，如有沉淀可过滤。

（柠檬酸作为Cu2+的络合物）班氏试剂可长期使用蓝色溶液-红黄色沉淀化学上常用银氨溶液来鉴定还原性糖。

(3)脂肪的鉴定苏丹Ⅲ染液和苏丹Ⅳ染液都是用于鉴定脂肪(4)蛋白质的鉴定双缩脲试剂分子中含有许多与双缩脲结构相似的肽键的物质如蛋白质、多肽等都可以与双缩脲试剂发生颜色反应。

(5)DNA的鉴定在DNA的粗提取与鉴定实验中用二苯胺试剂进行鉴定。

现配现用。

原理：DNA 分子中的脱氧核糖在酸性环境下生成叫-羟基-7-酮基戊醛，再与二苯胺试剂结合显蓝色，颜色的深浅与溶液中的DNA含量成正比。

实验时将二苯胺试剂与DNA混匀后，置于沸水中加热5min，冷却后即呈蓝色。

二苯胺有毒常温下DNA还有遇甲基绿溶液呈蓝绿色的特性。

高中生物的全部显色反应高中生物实验的显色反应(1.斐林试剂:配制：1）甲液质量浓度为0.1g/ml,取10gNaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml .2）乙液质量浓度为0.05g/ml,取5gCuSO4溶于蒸馏水,稀释至100ml .用时甲乙两夜等量混合,水浴加热,且必须现配现用.鉴别可溶性还原糖（葡萄糖,果糖,麦芽糖）时产生砖红色沉淀.2.双缩脲试剂：配制：1）甲液质量浓度为 0.1g/ml,取10gNaOH 溶于蒸馏水,稀释至100ml .2）乙液质量浓度为0.01g/ml,取1gCuSO4溶于蒸馏水,稀释至100ml .先加入甲液,再加入乙液.用于检测蛋白质中的肽键.应注意的是蛋白质一定有肽键,有肽键的不一定是蛋白质,如尿素.鉴定蛋白质时,产生紫色反应.3.班氏尿糖定性试剂：配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中,冷却后,稀释到150毫升.称取柠檬酸钠（Na2CO3）100克,加蒸馏水600毫升,加热使之溶解,冷却后,稀释到850毫升.把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中,搅匀后即为班氏尿糖定性试剂.使用方法同斐林试剂.4.苏丹红Ⅲ /Ⅳ：配制：取0.1g苏丹Ⅲ,溶解在20ml95%酒精中.用于鉴定脂肪被苏丹红Ⅲ染为橘黄色,被苏丹红Ⅳ染为红色.鉴定时,先制备临时装片,再进行显微观察.5.甲基绿吡罗红染色剂：用于观察DNA和RNA在细胞中的分布情况.必须现用现配.DNA遇到甲基绿为蓝绿色,RNA遇到吡罗红为红色.6.盐酸：配置解离液或改变溶液的PH值.7.碘液：用于鉴定淀粉的存在,遇到淀粉变为蓝色.（用于光合作用实验）.8.龙胆紫溶液：用于染色体着色,可将染色体染成紫色,显色反应.9.醋酸洋红溶液：为碱性染料.与龙胆紫溶液一样,都是用于染色体着色,但它却是将染色体染成红色.10.层析液:配置：苯+丙酮.用于色素的层析,即将色素在滤纸上分离开.11.二氧化硅：可使绿叶研磨充分.12.碳酸钙：防止在研磨时,叶绿体中的色素受到破坏.13.0.3g/ml的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液,用于质壁分离实验.不会使细胞致死,且细胞分离后可复原.14.胰蛋白酶：用于分离蛋白质.用于动物细胞培养时分解组织,使组织细胞分散开,制成细胞悬浮液.15.秋水仙素：巨毒.人工诱导染色体组加倍.原理：化学诱变因子抑制有丝分裂时纺锤体的形成.16.氢氧化钠：用于吸收二氧化碳或改变溶液的PH值.用于细胞呼吸.17.碳酸氢钠：提供二氧化碳.用于细胞光合作用.18.澄清石灰水：鉴定二氧化碳.19.溴麝香草酚蓝水溶液：检测二氧化碳.溴麝香草酚蓝水溶液由蓝色变为黄色20.重铬酸钾的浓硫酸溶液：检测酒精在酸性条件下,酒精使橙色的重铬酸钾的浓硫酸溶液变为灰绿色.用于探究酵母菌的呼吸方式.21.健那绿染色剂：专一性用于线粒体染色的活细胞染料.将线粒体染成蓝绿色22.解离液：固定细胞形态,使细胞分散开.23.95%的酒精溶液：用于提取叶绿体中的色素.用于与15%的盐酸等体积混合后解离根尖.24.二苯胺：配制：称取1.5g二苯胺,溶于100mL冰醋酸中,再加1.5mL浓硫酸,避光保存.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。

高中生物实验波及的显色反应实验名称判定〔或提取〕对象试剂颜色备注生物资料淀粉碘液蓝色脱色的叶片糖类的判定还原糖〔葡萄糖、果糖、麦芽糖〕斐林试剂〔蓝色〕砖红色现配现用，水浴加热含还原糖量高的白色或近白色的植物组织、尿液等蛋白质的判定蛋白质〔肽键〕双缩脲试剂紫色先加 A 液后加 B液，摇匀使用豆浆、牛奶、鸡蛋清脂肪的判定脂肪苏丹Ⅲ / Ⅳ橘黄色 / 红色需用高倍镜察看花生种子等含脂肪许多的种子二苯胺蓝色开水浴加热鸡血细胞DNADNA、RNA的判定甲基绿绿色口腔上皮细胞参加甲基绿和吡罗红的混淆液RNA 吡罗红红色口腔上皮细胞有丝分裂〔减数分裂〕染色体〔染色质〕醋酸洋红 / 龙胆紫红色/ 紫色洋葱根尖分生区〔有丝分裂〕蝗虫的精母细胞〔减数分裂〕色素带从上到下：叶绿体中色素的提取和分离叶绿体色素无水乙醇〔提取〕、层析液〔分离〕橙黄色的胡萝卜素、黄色的叶黄素、蓝绿色的叶绿素 a、参加二氧化硅是为了研磨得更充足；碳酸钙可防备在研磨中色素被损坏新鲜的绿叶黄绿色的叶绿素 b高倍镜察看线粒体线粒体健那绿染液蓝绿色独一的活细胞染料，死细胞中的酶会将线粒体解体，察看不到1亚硝酸盐的检测〔比色法〕亚硝酸盐对氨基苯磺酸；N-1- 萘基乙二胺盐酸盐玫瑰红色盐酸酸化条件下泡菜脲酶的检测脲酶酚红红色脲酶将尿素分解成氨，培育基碱性加强，酚红指示剂变红分解尿素的微生物纤维素分解菌的分离纤维素刚果红红色当纤维素被纤维素分解菌分解后，刚果红 - 纤维素的红色复合物就没法形成，培育基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈花药离体培育花粉细胞核醋酸洋红红色常用醋酸洋红法，不易着色时用焙花青 -铬钒法焙花青 - 铬钒法蓝黑色确立花粉能否处于单核期大肠杆菌的检测大肠杆菌伊红美蓝深紫色〔黑色〕需要用显微镜察看检测水样中能否有大肠杆菌划分细胞死活；检测细胞膜完好性细胞台盼蓝死细胞变蓝正常活细胞，细胞膜构造完好，拥有选择透过性可以排挤台盼蓝，不被染色；死细胞或细胞膜不完好的，胞膜的通透性增添，可被染成蓝色。