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RT-PCR如何取大鼠组织
取脑组织时尽量动作迅速，在冰块上操作可减少降解，最好是取出组织后立即提取RNA，如果不能，应迅速放至液氮中，不需浸泡液体。
做Western-Blot也是这样。
如果没有液氮，也可以放在-80度冰箱中，但是保存时间没有液氮长，最好尽快提取，否则也有降解的可能。
放入-80度冰箱中保存前不需要浸泡在其它液体中。
如果脑组织足够大就可以同时做两种检测，每种检测100mg 组织就够了
处死大鼠，尽快将大鼠的脑组织，放入已经浸泡过DEPC水，并高压消毒过的冻存管中，立即入液氮保存，如果有条件，建议将组织一直保存于液氮中，这样提出的RNA效果非常好的。
取脑后30分钟之内用RNA保存液保存，随便放多久ok。
做PCR放RNA保护液。
论著·基础研究 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－８３４８．２０１６．１６．００７阿尔茨海默病大鼠模型建立及葛根素对大鼠空间学习记忆的影响＊李 冬１，田 寅２△，宫 宇１，王 曦１（佳木斯大学附属第一医院：１．药剂科；２．肿瘤外科，黑龙江佳木斯１５４００７） ［摘要］ 目的 探讨葛根素对β－淀粉样蛋白（Ａβ１－４２）诱导的阿尔茨海默病（ＡＤ）大鼠空间学习记忆障碍的影响。
方法 采用双侧海马注射Ａβ１－４２诱导ＡＤ大鼠模型。
造模后３ｄ起，葛根素按不同剂量灌胃给药２８ｄ，给药结束后采用Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫测试系统，检测大鼠空间学习记忆能力。
结果 模型组大鼠表现出明显的学习记忆能力障碍，而葛根素高、中、低剂量组干预则显著地改善了ＡＤ大鼠学习记忆能力。
结论 葛根素能部分的提高ＡＤ模型大鼠的空间学习记忆能力。
［关键词］ 阿尔茨海默病；葛根素；空间学习记忆［中图分类号］ Ｒ９６５．２［文献标识码］ Ａ［文章编号］ １６７１－８３４８（２０１６）１６－２１８０－０２Ｔｈｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｒａｔｓ ｍｏｄｅｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｕｅｒａｒｉｎ ｏｎ ｒａｔ ｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ＊Ｌｉ Ｄｏｎｇ１，Ｔｉａｎ Ｙｉｎ１△，Ｇｏｎｇ Ｙｕ２，Ｗａｎｇ Ｘｉ１（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＪｉａｍｕｓｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｍｕｓｉ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ１５４００２，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｕｅｒａｒｉｎ ｏｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓ ｄｉｓｅａｓｅ（ＡＤ）ｒａｔｓ ｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｄｉｓ－ｏｒｄｅｒ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ａβ１－４２．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｂｉｌａｔｅｒａｌ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａβ１－４２ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅｄ ＡＤ ｍｏｄｅｌ ｒａｔｓ．Ａｌｌ ｒａｔｓ ｕｎｄｅｒ－ｗｅｎｔ ｇａｖａｇｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｕｅｒａｒｉｎ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅ ｆｏｒ ２８ｄｓｉｎｃｅ ｔｈｅ ３ｒｄ ｄａｙ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｄｅｌ；ａｎｄ ｔｈｅＭｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｔｅｓｔ ｔｈｅ ｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｒａｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｒａｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒ ｏｆ ｒａｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｇｈ，ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｌｏｗ ｄｏｓｅ ｏｆ ｐｕｅｒａｒｉｎ ｉｎｔｅｒｖｅｎ－ｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｐｕｅｒａｒｉｎ ｃａｎ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＡＤ ｍｏｄｅｌ ｒａｔｓ．［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ；ｐｕｅｒａｒｉｎ；ｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ 阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）是一种起病隐匿的中枢神经系统退行性疾病，其主要临床表现为严重的不可逆转、渐进性的认知功能障碍和精神异常［１－２］。
大鼠脑组织中p75基因克隆及其探针制备Mar.200319(1)23～26神经解剖学杂志(ChineseJournalofNeuroanatomy)大鼠脑组织中p75基因克隆及其探针制备①刘梅丁斐顾晓松(南通医学院生物技术系,江苏省神经再生重点实验室,南通226001) 摘要为了克隆大鼠p75基因并制备地高辛标记的p75cDNA探针(digp75cDNA),本研究采用RT—PCR法,从大鼠脑组织mRNA中扩增p75基因mRNA部分片段,克隆入T载体,并经序列测定.以dig—p75cDNA为探针,采用原位杂交方法观察成年SD大鼠海马组织中p75mRNA的表达.结果:RTPCR法扩增出一种特异产物与预期长度386bp相符,T载体克隆测序与p75基因100同源.原位杂交结果显示,阳性信号出现在成年大鼠海马组织中.结论:采用RTPCR和T载体技术获得了.大鼠脑组织p75基因克隆,dig—p75cDNA探针原位杂交显示正常SD大鼠海马组织中表达p75mRNA.关键词p75基因T—A克隆地高辛标记原位杂交大鼠GENECLONINGOFp75FROMRA TBRAINANDITSPROBELABELE DLiuMei,DingFei,GuXiaosong (DepartmentofBiotechnology,theKeyLaboratoryofNerveRegeneration ofJiangsuProvince,NantongMedicalCollege,Nantong226001) AbstractToobtainthecloneofp75fromratbrainandthenlabeledcDNAprobe bydigoxigenin,thepartialmRNAfragmentofp75wasamplifiedbyRTPCRfromratbrain.RT—PCRproductwasligatedint opGEM—Tvector,andwassequenced.Theexpressionofp75mRNAinhippocampusofadultratwasexaminedbyinsituhyb ridizationwithdig—p75cDNA.TheproductofRTPCRwasthe386bpwhichmatchedthelengthexpected.Thesequenceofp7 5wascompletelyhomogeneouswiththep75se—quencereported.Hybridizedsignalsofp75mRNA werefoundinhippocampu softheSDrat.Theresultsshowthatp75genecan beobtainedfromratbrainusingRT—PCRandTvectortechniques.Thestudy ofinsituhybridizationusingdigp75cDNAindi—catesthatthep75mRNAisexpressedinhippocampusofSDrat. Keywordsp75,cloning,dig—labeled,insituhybridization,rat神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)是神经营养因子家族中第一个被发现,也是迄今为止研究得最为清楚的一个.体内,外研究证实,它能够促进发育中的感觉神经元及交感神经元的存活及分化,营养成熟的神经元,维持其正常的生物学功能.近年来的研究发现,NGF能诱导细胞凋亡,这一现象的发现源于NGF的一个受体亚基p75的研究.NGF受体有两种:一种是以前克隆的p75,另一种①是2O世纪9O年代初克隆的酪氨酸激酶受体Tr—kA_1].最初的研究发现Trk为形成高亲和力结合位点以及介导NGF效应所必需,而p75在NGF信号传递中既不必要也不充分,使得p75长期以来被视为TrkA的辅助性受体(helperreceptor).但是有的实验发现,仅仅TrkA并不足以形成NGF高亲和力受体,而当p75与TrkA以合适的比例共表达时,则可观察到大量的高亲和力结合位点存在,同时p75国家自然科学基金(No.30070255),江苏省教育厅2000年高校科研项目(OOKJD31OO7)资助项目通信作者:顾晓松地址:南通医学院江苏省神经再生重点实验室,南通226001,电话:0513—5504510,E—mail:******************神经解剖学杂志第19卷第1期2003年3月的突变可使这些位点大为减少.另有实验表明,p75能够显着降低TrkA对NGF反应的阈值.l996年以来对p75功能的研究取得了很大进展,认为在完全没有TrkA的参与下,p75可以独立介导胞内信号传递,凋控细胞凋亡l_2].由此人们对P75的研究日益深入和广泛.本实验采用RT～PCR法,从大鼠脑组织mRNA中扩增出p75基因mRNA部分片段,克隆人T载体.以非同位素标记物～地高辛素(digoxigenin, Dig)标记p75基因片段为探针,并经原位杂交证实. 本文为进一步研究p75mRNA的表达提供了手段. 材料和方法1.动物与试剂健康新生SD大鼠,由南通医学院实验动物中心提供.Trizol试剂,第一链eDNA合成试剂(Omnis—cript丁MRTKit)购自Qiagen公司,还有测序试剂盒(nSequence州Kit)购自PharmaciaBiotech公司, pGEM@TEasyV ectorSystems,X—gal,IPTG购自Promega公司,地高辛标记试剂(DigDNALabeling andDetectionKit)购自Boehringer公司,TaqDNA聚合酶,EcoRI等常用试剂购自上海试剂公司.均按操作说明进行实验.2.引物合成根据P75基因序列设计上游引物sense:ccAGcccAcAcTTcTcTcTc,在1890～2009位点,下游弓I物antisense:TTcTGAcA TTAAGGGccGTG, 由中科院上海植物生理研究所Beckman示范实验室合成,预计扩增片段长度386bp.3.总RNA制备新生鼠脑组织100mg,立即置Trizol试剂中匀浆2min,按试剂操作说明提取总RNA,甲醛变性胶电泳检测其完整性.采用紫外分光光度计,测定OD26o及OD280值,计算RNA含量.4.逆转录反应反应在PTC一1()()型热循环仪(MJ公司)上按Kit操作步骤进行,反应总体积2Ol.在0.5mlEp—pendorf管内,加入总RNA2g,10/,mol/IOligo (dT)12182l,10×逆转录buffer2l,5mmol/I dNTPmix2l,加入逆转录酶1/,1(4U),再加入DEPC—treatedH.O至2OI,轻混匀,稍离心,置37C1h.93C5min灭活酶.产物在一2O保存.5.PCR扩增在冰上依次加入ddH2O36/~1,10×PCRbuffer5/,1,dNTPmix(each2mmol/L)2/,1,p75上下游引物sense和antisense(10/,mol/I)各2l,第一链cDNA2l,Taqpolymerase(2U/>I)1l.轻混匀,稍离心,预热热循环仪至8OC,将PCR扩增管迅速移至热循环仪上,执行以下程序:94C预变性3 min,94C50S,58C40S,72℃40S,循环32次后在72C延伸7min.1琼脂糖凝胶电泳检测.6.PCR产物的克隆采用胶回收Kit(Qiagen公司),胶上回收扩增带,将回收扩增片段3/,1(约50ng)与T载体连接, 即T—A克隆.按Kitprotocol操作,14C连接12～16h.用热震惊方法将连接产物转化大肠杆菌DH5a 感受态,涂于含X—gal和IPTG并具氨苄青霉素(Amp)抗性的1.5琼脂平皿上.37倒置培养12～16h,见蓝白斑.7.克隆鉴定和序列测定挑取白斑置IB(Amp)培养基中扩增.小量碱法抽提质粒DNA,EcoRI酶切鉴定.将酶切片段长度符合插入片段长度的质粒进行纯化,Sequence Kit序列测定,放射自显影,读片,送GenBank检索.8.P75探针制备p75片段回收:接种EasyT—p75于具Amp抗性LB培养基中,37C振摇过夜.1.5ml过夜菌液常规碱裂解法抽提质粒DNA,溶于2OlTE(含RNase20/,g/m1)中.EcoRI酶切,胶回收Kit回收短片段.随机引物法标记p75片段:取15/,1p75片段(约800ng),100C变性5min,置冰浴中,依次加入lO×Klenowbuffer(含随机引物)2l,l0×dNTPs(标记混合物)2/,1,Klenow酶1l(2U).轻混匀,稍离心,置37C反应1h.常规乙醇纯化后溶于25l灭菌双蒸水中.9.原位杂交SD大鼠(2月龄),麻醉,生理盐水,4多聚甲醛磷酸缓冲液灌流,取大脑组织,固定.常规冷冻切片,切片厚20/,m,依次入0.1mol/LPBS10min,0.1mol/L甘氨酸5min,lmg/L蛋白酶K30min.42C预杂交30min,换杂交液(含变性p75探针1 mg/L)42C杂交14～16h.切片经4×SSC至0.5×SSC梯度漂洗,3BSA包被30min后,滴加anti—dig—APmixture,4C过夜.以NBT,X—P显色,伊红复染.同时设无关DNA探针杂交为阴性对照.刘梅等:大鼠情组织巾p75基围克隆及其探什制备结果1.总RNA的检测经甲醛变性胶电泳,EB染色,28S和l8S条带清晰可见.5s条带隐约可见.提示RNA未降解. OD/OD为1.93.说明RNA纯度满意.2.RTPCR结果样晶见一特异扩增带,位于DNAMarker250bp与500bp之间,大小与预期结果相符(Fig.1)阴性对照未见扩增带..Fig.1l’hesu1tulRrPCRM,DNAMarker(DI,2{1(11】)1.RTPCRforp75fragmem(3882,Control3.PCR产物克隆与序列测定PCR产物经T载体直接克隆.转化.蓝白斑筛选.质粒酶切鉴定.与插入片段长度相符(Fig.z)一T7SequenceKit序列测定.放射自妲影,读片得133 bp送GenBank检索+与p75基因l.()同源其全长386bp序列测定由中科院上悔植物生理研究所Beckman示范实验室完成.Fig.2TheEasyTp75plasmiddigestedbyEcoRM.DAMarker(DI2(}00)1.EasyTP75plnsmiddigestedbyEcoR(p75{ragme~t386bg?EasyTvector3.U18kb)2.EasyTp75plasmidI.原位杂交结果正常大鼠脑组织可见蓝色阳性杂交信号.主要分布在悔马区(Fig.3).图B为图A的局部放大,箭头所示为阳性信号阴性对照未见杂交信号CA4Resuhofinsituhybridizatio.with(P7feDNAprobe0nhippocampus0{rtI1×4’Thepusitivehybridizationsignals(hIue)in hippocampu~()ResultofinⅥ|uhybridizmtionwithdig—p75cD NAprobe’)nhippocampusofr月t.]ocablowupc)fFig月A×t00讨论神经生长因子是一种在周围神经系统和中枢神经系统中具有重要作用的神经营养因子,为阐明其作用机理.对其受体的研究也日益深人.近年来.特别对NGF的低亲和力受体p75的报道日益增多由于它具有与B细胞抗原,CD40,肿瘤坏死因子(TNF)以及Fas抗原(APO1)相似的同源区域,即姐蛐神经解剖学杂志第19卷第1期2003年3月deathdomain,因此目前很多的研究集中在它独立介导信号传递在细胞凋亡中的作用.有研究表明在CNS的炎症反应和缺血损伤中,p75有别于TNF, 担任了重要的角色l3],有的研究则表明,p75可以转导抗氧化作用从而保护脑细胞受到的TNF介导的氧自由基产生的损伤_4j,说明它在细胞凋亡的调节中发挥着重要的作用.本研究作者等的研究兴趣也在于p75在神经系统损伤中的双刃剑作用. Radeke等在GenBank登录的p75mRNA全长3259bp,本研究按照其基因序列设计PCR引物, 运用T载体克隆技术克隆了p75mRNA部分片段, 测序结果与其报道一致.T载体克隆(即T—A克隆) 系统是由Invitrogen公司开发的分子生物学技术, 现已被广泛用于PCR产物的克隆和测序.其原理是利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A,而T载体是一种带有3’T突出端的载体,在连接酶作用下,可以快速地,一步到位地将PCR产物直接插入到质粒载体的多克隆位点(MCS)中.本研究使用的pGEM@一TEasyV ector在其插入位点两侧引入了EcoRI酶切位点,故可用单酶切方便地鉴定.非同位素一地高辛标记的探针具有较高灵敏度,与同位素比较不需要特殊的设备和人员培训,操作简单而且安全.标记好的探针由于不受放射衰变的影响,可以较长时间保存,使用方便.本文作者等曾以地高辛标记NGF_4],CNTF_6]和CNTFL7为探针进行过研究,此次制备的p75探针经正常大鼠脑组织原位杂交显示效果理想,可以清楚地看到杂交信号主要分布在海马,阴性对照未见杂交信号,说明用此方法制备的探针特异性较高,结果可靠,为研究p75的作用提供了有力的工具.参考文献[1]KleinR,JingSQ,NanduriV,eta1.Thetrkprotooncogene encodesareceptorfornervegrowthfactor.Cell,1991,65:189 ～197[21DechantG,BardeY A.Signalingthroughtheneurotrophinre ceptorp75NTR.CurrOpinNeurobiol,1997,7:413～418 [3]AkassoglouK,DouniE,BauerJ,eta1.Exclusivetumor necrosisfactor(TNF)signalingbythep75TNFreceptortrig—gersinflammatoryischemiaintheCNSoftransgenicmice. ProcNatlAcadSciU.S.A,2003,100:709～714[41DoppJM,SarafianTA,SpinellaFM,eta1.Expressionofthep75TNFreceptorislinkedtoTNF—inducedNFkappaB translocationandoxyradicalneutralizationinglialcells.Neu—rochemRes,2002,27:1535～1542[53RadekeMJ,MiskoTP,HsuC,eta1.Genetransferandmolec ularcloningoftheratnervegrowthfactorreceptor.Nature, 1987,325(6105):593～597[63CaoZ,LuI,DingF.eta1.Purificationanditsapplicationof thedigoxigenin—labeledhuman8一NGFDNAprobe.ChinJ Neuroscience,1995,2:141～144[7]刘梅,丁斐,顾晓松.大鼠脑组织中CNTF基因克隆及其探针制备.解剖学研究,2001,23:32～34。
大苞雪莲石油醚部位对缺氧大鼠脑组织的保护作用及其机制研究目的：研究大苞雪莲石油醚部位（petroleum ether extract of Saussureainvolucrata，PESI）对常压密闭缺氧大鼠脑组织的保护作用及其机制。
方法：首先采用常压密闭缺氧模型进行缺氧大鼠的PESI剂量依赖性实验，给药剂量分别为125，250，500 mg·kg-1，单次腹腔注射给药，最终确定的最佳给药剂量为PESI 高剂量。
然后取90只雄性Wistar大鼠随机分为缺氧模型组、乙酰唑胺250 mg·kg-1组和大苞雪莲石油醚部位高剂量组，每组又按不同缺氧时间分为3个亚组，各亚组10只大鼠。
采用与上述相同的方法缺氧和给药，并于缺氧处理0，3，6 h后处死大鼠，取脑组织进行常规组织学观察和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）免疫组化染色，并用Real-time RT-PCR检测HIF-1α，促红细胞生成素（EPO），血红素加氧酶（HO-1）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 （Caspase-3）基因表达情况，用蛋白印迹法检测HIF-1α蛋白的表达情况。
结果：缺氧模型组脑组织随缺氧时间的延长而出现严重的病理损伤，乙酰唑胺组和PESI高剂量组的损伤情况则明显减轻。
基因表达和蛋白印迹检测均发现，PESI高剂量抑制HIF-1α的表达，单纯基因表达检测发现，PESI高剂量增强EPO和HO-1 mRNA的表达，但抑制Caspase-3 mRNA的表达。
结论：PESI对常压密闭缺氧大鼠脑组织的保护机制可能与其抑制HIF-1α表达、增强血液输氧能力和抗脑细胞凋亡有关。
标签：大苞雪莲；缺氧；缺氧诱导因子1α；促红细胞生成素；血红素加氧酶；Caspase-3随着我国西部大开发战略的深入实施、青藏铁路的开通和高原旅游业的兴起，越来越多的人需要在较短时间内由平原进入高原，但急性高原反应（acute mountain sickness，AMS）严重影响进入高原人群的身体健康，有时甚至危及生命。
F344大鼠自发性肿瘤的病理学观察尹纪业;董延生;袁本利;余寿忠;瞿文生;原野;王和枚;丁日高【期刊名称】《实验动物与比较医学》【年(卷),期】2011(31)3【摘要】目的积累本中心F344大鼠自发肿瘤背景数据,为开展新药诱癌试验做准备.方法 SPF级F344大鼠336只,雌雄各半,体重180～200 g,本中心屏障环境下饲养,随机分为4个组,即分别于6、12、18和24个月4个时间点处死动物32、64、64,176只,称量动物心、肺、肝、脾、肾、肾上腺、胸腺、脑、睾丸(或卵巢)和附睾(或子宫)等器官并计算脏器系数,常规病理学取材制片后显微镜检查,观察统计4个时间点动物自发性肿瘤的类型和发病率.结果高发的肿瘤性病变主要包括睾丸间质细胞瘤、垂体腺瘤、单核细胞白血病、皮下纤维瘤、乳腺纤维腺瘤、嗜铬细胞瘤等.结论本实验结果丰富了现有F344大鼠自发性肿瘤的发病数据,为开展新药诱癌试验提供了背景资料.【总页数】5页(P188-192)【作者】尹纪业;董延生;袁本利;余寿忠;瞿文生;原野;王和枚;丁日高【作者单位】军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850;军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价中心北京100850【正文语种】中文【中图分类】Q95-33【相关文献】1.雄性F344大鼠自发性不育症与精子参数及精子核成熟度关系研究 [J], 王奕森;朱萍妹;徐平;施恩;潘华;周光兴2.雄性F344大鼠自发性Leydig 细胞瘤的比较医学研究 [J], 王奕森;朱萍妹;钟高仁;徐平;施恩;乔伟伟;周光兴3.F344大鼠常见非增殖性病变病理学观察 [J], 尹纪业;董延生;袁本利;瞿文生;余寿忠;原野;王和枚;丁日高4.老年SD大鼠自发性肿瘤的病理学观察 [J], 周晓丽;张倩;高峥;钱智勇5.SPF级F344大鼠的脏器重量和自发性病变的研究 [J], 王辉;陆姮磊;盛嬅;宫丽崑;任进因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项[取材内容]大鼠肺组织、大鼠肝脏组织、大鼠胰腺组织、大鼠胃部组织、大鼠空场回肠组织、大鼠肾组织、门静脉血、淋巴组织、大鼠心脏。
[试剂及药品]戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液[器材]备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材动物]大鼠[取材步骤]1. 取材前夜禁食，自由饮水。
2. 小鼠称重，按照50mg/kg的比例用5ml的注射器配合针头抽取戊巴比妥钠备用。
3. 正左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠头部向向下。
这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
右手持注射器，从腹部近腿根处刺入后再腹部皮下穿行深入，动作轻柔，缓慢注射。
注射完药物后，缓缓拔出针头，手指按住针口对小鼠腹部轻柔按摩，促进麻醉药物的吸收，掐小鼠尾部检测小鼠麻醉程度。
4.将小鼠四肢固定于解剖台上，暴露小鼠整个胸部和腹部，修剪去腹部毛发，75%酒精消毒。
5.沿腹侧正中线自阴茎上源由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露腹壁浅肌层。
沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露肝门。
6.门静脉血采集：将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉，抽取门静脉血2ml，无创血管夹夹闭门静脉止血。
将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜，4℃离心，3000-3500/min，10分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。
第 49 卷第 3 期2023年 5 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.3May 2023DOI：10.13481/j.1671‑587X.20230332新生SD大鼠原代海马组织中神经干细胞的培养和鉴定张玲娣1, 赵亮2, 由涌3, 许倩4, 杨振军1（1. 承德医学院人体解剖教研室，河北承德067000；2. 承德医学院药理学教研室，河北承德067000；3. 承德医学院免疫学教研室，河北承德067000；4. 承德医学院基础医学研究所，河北承德067000）［摘要］目的目的：观察原代海马组织中神经干细胞（NSCs）的形态表现和生长规律，为NSCs提取和培养提供依据。
方法方法：提取新生SD大鼠海马组织中NSCs，观察海马组织中NSCs形态表现，流式细胞术检测海马组织中NSCs纯度，免疫荧光法检测NSCs中Nestin和EdU蛋白表达，细胞计数法和CCK-8法检测 NSCs增殖活性。
结果：培养第0天海马组织中NSCs以单细胞形式悬浮于培养基中；培养第2天海马组织中NSCs开始聚集成大小不等和形态不规则的细胞团块，悬浮生长；培养第8天神经球大小不一，呈圆形或椭圆形，边界清晰，无明显突起。
培养第8天NSCs纯度为76.50%~85.40%。
NSCs细胞质中Nestin阳性表达呈绿色，细胞核中EdU阳性表达呈红色，神经球为Nestin与EdU共染细胞构成。
培养5~11 d，NSCs处于对数生长期，细胞增殖活性较高。
结论结论：NSCs增殖能力强，培养至第8天时纯度较高，体外培养5~11 d时细胞增殖活性较高。
［关键词］神经干细胞；海马组织；增殖活性；生长曲线；免疫荧光［中图分类号］Q813.1［文献标志码］ACulture and identification of neural stem cells in hippocampustissue of newborn SD ratsZHANG Lingdi1, ZHAO Liang2, YONG Yong3, XU Qian4, YANG Zhenjun1（1. Department of Human Anatomy， Chengde Medical University， Chengde 067000，China；2. Department of Pharmacology， Chengde Medical University， Chengde 067000，China；3. Department of Immunology，Chengde Medical University， Chengde 067000，China；4. Institute of Basic Medicine， Chengde MedicalUniversity， Chengde 067000，China）ABSTRACT Objective： To observe the morphology and growth pattern of the neural stem cells neural stem cells（NSCs）in hippocampus tissue，and to provide the basis for the extraction and culture of the NSCs.Methods：The NSCs were isolated from hippocampus tissue of the newborn SD rats.The morphology of the NSCs in hippocampus tissue was observed； flow cytometry was used to detect the purities of the NSCs in hippocampus tissue； immunofluorescence method was used to detect the expressions of Nestin and EdU proteins in the NSCs；the proliferative activities of the NSCs were analyzed by cell counting and CCK-8 methods.Results：On the 0 day of culture，the NSCs in hippocampus tissue were suspended in the culture medium with the form of single cells；on the 2nd day of culture，the NSCs in hippocampus tissue suspended in the culture medium and began to gather into the cell clumps with different sizes and irregular shapes；On the 8th day of culture，the neurospheres showed round or oval neurosphere with different sizes， and showed [文章编号] 1671‑587X(2023)03‑0795‑07[收稿日期]2022‑07‑20[基金项目]国家自然科学基金项目（81700310）；河北省科技厅重点研发计划项目（22377746D）[作者简介]张玲娣（1995－），女，山东省潍坊市人，在读硕士研究生，主要从事神经损伤与修复方面的研究。
