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第28卷,第3期光 谱 实 验 室Vol.28,No.3 2011年5月Chinese J ournal of Sp ectroscop y L abor atory May,2011甘草中金属元素与总黄酮含量测定与抗氧化研究张雷 韩丽琴 a 董顺福a 刘建华a(吉林医药学院附属医院 吉林省吉林市华山路81号 132013)a(吉林医药学院化学教研室 吉林省吉林市吉林大街5号 132013)摘 要 对中草药甘草中金属元素与总黄酮含量进行测定,并对其清除超氧自由基进行研究。
测定结果显示,甘草中含有丰富的金属元素和黄酮类化合物,其中总黄酮为16.42%,金属元素含量为铁>锌>锰>铜,对超氧自由基具有一定的清除作用。
实验结果为研究甘草治疗呼吸系统疾病及清除自由基提供了有用的数据。
关键词 甘草;总黄酮;金属元素;抗氧化中图分类号:O657.31;O657.32 文献标识码:A 文章编号:1004-8138(2011)03-1258-031 引言甘草为豆科甘草属植物,是常用中药之一。
近年来研究发现,甘草黄酮类化合物具有抑菌、抗真菌、增强机体免疫功能、抗氧化、抗肿瘤、保肝等广泛的药理作用[1]。
为探讨甘草中总黄酮的相关作用及其与治疗呼吸系统疾病的功效关系,对甘草中金属元素和总黄酮进行测定及抗氧化研究。
2 实验部分2.1 试剂与仪器甘草,市售。
HNO3,HClO4均为优级纯;M g、M n、Zn、Fe标准储备液(国家标准溶液,浓度为1mg·mL-1,国家钢铁材料测试中心);使用液:Cu为50 g·mL-1;Mn、Zn、Fe均为50 g·mL-1;芦丁标准品(F20050930,北京国药集团化学试剂有限公司)。
其他试剂均为分析纯。
实验用水为去离子高纯水(R>106 )。
HG-9600A型原子吸收分光光度计(沈阳分析仪器厂),附80586计算机及FAAS软件处理系统;UV-1200型紫外分光光度计(北京分析仪器厂)。
甘草有效成分的提取分离实验方案实验目的：通过对甘草中甘草黄酮、甘草酸和甘草多糖的提取分离，进一步理解他们的理化性质，并且初步掌握提取分离的方法。
实验原理：黄酮类化合物则泛指两个苯环（A环与B环）通过中央三碳相互联接而成的一系列化合物。
根据中央三碳的氧化程度、是否成环、B 环的联接位点等特点，可将该类化合物分为多种结构类型。
代表化合物有甘草黄酮、甘草素、异甘草素、甘草甙、异甘草甙、甘草查尔酮等。
甘草中已经发现的黄酮类化合物有一百多种，本实验只对其进行粗提，并且测定其总含量。
甘草酸是一类三萜类皂苷，主要以甘草酸钾、钙盐的形式存在，是甘草次酸的二葡萄糖醛酸甙，含量在4-20%之间；甘草酸水解脱去糖酸链变形成了甘草次酸。
超临界CO2萃取甘草总黄酮的萃取率是1. 35%，含量32. 45%，是索氏提取法提取甘草总黄酮的提取率的2.2倍，索氏提取溶剂用量是超临界CO2萃取的6倍。
本实验采取超临界CO2萃取法提取甘草黄酮。
【1】大孔树脂适于物质水溶液的分离纯化，超临界C02萃取提取的甘草总黄酮中乙醇含量过高，即使对萃取液进行浓缩处理，其中乙醇的含量仍然很高，所以大孔树脂的吸附、解吸附的效果不好。
萃取液浓缩近干加入水后，所要分离的物质析出变混浊，也不适合用大孔树脂进行分离纯化。
与大孔树脂层析比较，硅胶柱层析可以更有效的分离纯化甘草黄酮。
使用硅胶柱层析可以有效地使甘草黄酮类物质的含量达到55%以上，收率1. 12%，符合国家中药二类新药的原料要求。
【1】综合考虑，本实验选择硅胶柱层析对甘草黄酮进行分离纯化。
甘草酸和甘草次酸的极性比黄酮类物质的极性大，更易溶于极性大的低浓度乙醇中，采用85%乙醇作为夹带剂，使得在二氧化碳超临界萃取甘草黄酮类物质过程中，大部分甘草酸和甘草多糖仍然留在残渣中。
鉴于甘草酸和甘草多糖都溶于水的性质，本实验采用超声或微波辅助法对它们同时进行提取[3]。
对于提取后的甘草酸和甘草多糖的分离，可查阅到的方法包括醇沉酸沉法[3]。
甘草超滤液中总黄酮络合萃取目录一、项目背景与研究目的．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21.项目背景介绍．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32.研究目的及意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3二、甘草超滤液的制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41.甘草原料的选取与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52.超滤膜的选择及预处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53.超滤操作过程与参数设置．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6三、总黄酮的络合萃取原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．71.总黄酮的概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．82.络合萃取原理介绍．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．83.适用于甘草超滤液的萃取剂选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9四、实验材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．101.实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11（1）甘草超滤液．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12 （2）萃取剂及其他试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．132.实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14（1）总黄酮含量的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14 （2）络合萃取实验操作．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15五、实验结果分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．161.总黄酮萃取率的测定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．172.不同条件下萃取效果的比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18（1）不同萃取剂浓度的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19（2）不同萃取温度的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20六、讨论与优化建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．211.实验结果的讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22（1）实验数据与理论预期的对比．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23（2）实验过程中可能存在的误差分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．232.对实验操作的优化建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24（1）针对实验条件的优化建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25（2）针对实验流程的优化建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27七、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28一、项目背景与研究目的（一）项目背景甘草，学名Glycyrrhiza uralensis，是一种在传统中医药中广泛使用的草药，其根部被广泛应用于缓解喉咙痛、咳嗽、胃溃疡等多种疾病。
第1篇一、实验目的本实验旨在学习甘草中黄酮类化合物的提取方法，通过溶剂提取、分离纯化等步骤，获得甘草黄酮粗品，并对其理化性质进行初步分析。
二、实验原理甘草中含有丰富的黄酮类化合物，具有多种生物活性。
本实验采用溶剂提取法，利用有机溶剂（如甲醇、乙醇等）提取甘草中的黄酮类化合物，再通过有机溶剂萃取、浓缩等步骤进行分离纯化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：甘草粉末（市售）甲醇（分析纯）乙醇（分析纯）氯仿（分析纯）碳酸氢钠（分析纯）石英砂烧杯蒸馏装置漏斗滤纸烧瓶恒温水浴锅紫外-可见分光光度计2. 实验仪器：上述实验材料所列仪器四、实验步骤1. 甘草粉末的制备：将甘草粉末过筛，取40目筛的粉末备用。
2. 甘草黄酮的提取：（1）取10g甘草粉末，加入100mL甲醇，在恒温水浴锅中回流提取2小时。
（2）提取液过滤，滤液浓缩至约10mL。
3. 甘草黄酮的分离纯化：（1）将浓缩液转移至分液漏斗中，加入等体积的氯仿，充分振荡，静置分层。
（2）分取氯仿层，加入5g碳酸氢钠，充分振荡，静置分层。
（3）分取水层，用氯仿萃取2次，合并氯仿层。
（4）将氯仿层浓缩至约1mL，加入适量乙醇，溶解，转移至50mL容量瓶中，用乙醇定容。
4. 甘草黄酮的鉴定：（1）取适量甘草黄酮溶液，在紫外-可见分光光度计上测定其吸收光谱。
（2）与标准黄酮溶液进行比较，确定甘草黄酮的吸收峰。
五、实验结果与分析1. 甘草黄酮的提取率：根据实验结果，甘草黄酮的提取率为1.5%。
2. 甘草黄酮的理化性质：（1）甘草黄酮的吸收光谱：在紫外-可见分光光度计上，甘草黄酮的吸收峰位于278nm和355nm。
（2）甘草黄酮的性状：甘草黄酮为黄色粉末，无臭，味苦。
六、实验讨论本实验采用溶剂提取法提取甘草黄酮，操作简便，提取率较高。
通过有机溶剂萃取、浓缩等步骤，可获得较纯的甘草黄酮粗品。
实验结果表明，甘草黄酮具有良好的理化性质，具有进一步研究开发的潜力。
七、实验总结本实验成功地从甘草中提取了黄酮类化合物，并对甘草黄酮的理化性质进行了初步分析。
甘草中黄酮的纯化方法和含量测定
李俊松;徐德生;冯怡;陈丽华
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2007(029)007
【摘要】目的:研究聚酰胺富集甘草中黄酮的工艺参数,同时建立其含量测定方法.方法:以二氢黄酮类化合物在碱性条件下转化为查尔酮类的量作为指标,以柚皮苷为对照品,经聚酰胺吸附柱富集后,采用碱性比色法显色、测定.结果:纯化工艺条件为甘草聚酰胺比2:1(g/g),树脂径高比1:7,用5倍量柱体积70%乙醇洗脱,甘草黄酮洗脱率在90%左右;含量测定平均加样回收率为98.81%(RSD=2.00%).总固物中黄酮含量可达45%.结论:本法富集、纯化甘草总黄酮可行;甘草黄酮含量测定方法稳定,可靠.
【总页数】4页(P997-1000)
【作者】李俊松;徐德生;冯怡;陈丽华
【作者单位】上海中医药大学,上海,201203;上海中医药大学,上海,201203;上海中医药大学,上海,201203;上海中医药大学,上海,201203
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.几种甘草黄酮含量测定方法的比较与评价 [J], 王勇;赵海燕;封琳;马永平
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文全
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甘草总黄酮的提取工艺研究摘要：目的：用正交法研究提取甘草中的甘草总黄酮类化合物最佳提取工艺。
方法：选取乙醇浓度、提取时间、温度、料液比个主要影响因素，采用正交法，以甘草总黄酮类化合物得率作为检测指标。
结果：应用酸溶碱沉法获得甘草总黄酮类化合物的最佳提取工艺是：75%的乙醇，提取2h，酸沉PH 为2.5，液料比为20:1。
结论：该方法提取率高，稳定性好，操作简便，适合工业化生产。
关键词：甘草甘草总黄酮正交设计提取工艺甘草为双子叶植物豆科甘草，胀果甘草，或光果甘草的根及根茎。
始载于《神农本草经》，列为上品。
甘草性平，味甘，归十二经。
有解毒、祛痰、止痛、解痉以至抗癌等药理作用。
在中医上，甘草补脾益气，滋咳润肺，缓急解毒，调和百药。
临床应用分“生用”与“蜜炙”之别。
生用主治咽喉肿痛，痛疽疮疡，胃肠道溃疡以及解药毒、食物中毒等；蜜炙主治脾胃功能减退，大便溏薄，乏力发热以及咳嗽、心悸等。
甘草是我国传统常用中草药之一，也是我国重要的植物资源[1]。
甘草黄酮类成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、增强心血管功能、增强免疫力等作用[2-5]。
因此，开展甘草的深加工，使甘草资源得以充分利用，增加资源的附加值，前景十分可观。
为此，笔者以甘草为对象，研究了甘草黄酮的乙醇回流提取工艺，单因素试验确定各因素对提取工艺的影响，正交试验确定甘草黄酮提取的最佳工艺条件。
1、仪器与试药1.1仪器:烧杯、容量瓶、移液管、玻璃棒、量筒、回流装置、滤纸、HH24数显恒温水浴锅、分析天平、AB1042N电子天平、布氏漏斗、SHZ2C型循环水多用真空泵1.2试剂:甘草，市售;试剂:蒸馏水、氢氧化钠、盐酸2、方法与结果在利用碱溶酸沉法从甘草中获得甘草总黄酮的过程中，我们通过预试验发现影响提取得率的主要因素为乙醇浓度、提取时间、温度、料液比。
故选择乙醇浓度(A)、提取时间(B)、酸沉pH值(C)、料液比(D)作为考察的四个因素，各取三个水平(见表1)，以甘草总黄酮得率(%)为考察指标。
