木霉T2—2产多菌灵水解酶的条件及酶学特性
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Ｅ Ｃ Ｌ １０Ｏ Ｓ—Ｃ ８不锈钢柱 ， Ｘ Ｅ ２ Ｄ １ 粒径 ５ ｍ。流动相采用 甲 醇和 ０ １ ． ％磷酸缓冲液 ， 流速 ０ ８ｍ Ｚ ｉ。紫外检测 器波长 ． Ｉ ｍｎ ２ ０ｎ 进样量 为 ２ 。一个酶活力单位 （ ） ８ ｍ， ０ ｕ 定义为在本试
木霉 （ ｒｈｄｒ ａｓ． Ｔ Ｔ／ ｏ ｅ ） ２—２菌株 ， ｃ ｍ ｐ 是本试验室选育得到
试 验室选 育得 到 的 １株可 以快速 、 高效 降解 多菌灵 的菌株 。
于 提 取酶 。 １４ 粗 酶 液 的 制备 ．
将培 养 好 的 菌 液 在 室 温 下 以 ６ ０ ０ ｒｒｎ离 心 分 离 ０ ／ ｉ ａ ２ ｉ， ０ｒ ｎ 菌体用 ０ １ｍ ｌＬ ｐ ａ ． ｏ Ｈ值 ＝６ ０的 Ｐ Ｓ缓 冲液洗 涤 ２ ／ ． Ｂ 次， 洗液与 上清 液 合并 用 于胞 外酶 测定 。洗 涤 后 的菌 体 以 １： ０ １ 的体积 比悬 浮 于 Ｐ Ｓ中 ， Ｂ 然后在 冰水浴 中进行 超声破
中图分类号 ： ９ ９９ Ｑ ３ ． 文献标志码 ： Ａ 文章 编号 ：０ ２—１０ 【 １ ０ ０ ７ ０ １０ ３２ 加１ ）６— ５ ７— ２
多 菌灵 因化学性 质稳定 ， 衰期较 长… ， 导致哺乳 动 半 易 物免疫功 能下 降和染色体 畸变而 影响后代 繁衍等性 质 ， 而具 有“ 三致” 作用 ，０ ２年被我 国农业部列为环境激素类化 学农 ２０ 药 Ｊ 。因此对多菌 灵残 留 的降解研 究越来 越受 到 国 内外 关 注 一 。生物 降解是通过酶促反应去除土壤 中多菌灵残 留的 有效 途径 。利用微 生物降解 环境中 的农 药残 留， 具有投 资与 处理 费用低 、 安全性好 、 无二次 污染 等优点 ， 是一种切实 可行 的土壤生物修 复办法 。利用对农药具有降解功能的微生物来 生产 酶制剂 ， 目前广 泛使用 的活体 制剂相 比， 便于储存 、 与 更 运输 和使 用。木霉 （ ｒ ｈｄｒ ａｓ． Ｔ ２菌株 ， Ｔｉ ｏ ｅ ｐ ） ２— ｃ ｍ 是笔者所在
以多菌灵作为底物 ，Ｈ值 ＝ ． ， ２ ４ 测 定其 酶 ｐ ６ ０ 在 ２— ｏ ｃ Ｃ 活力 。稳定性测试是将酶和底物在不同温度下的恒温水浴锅 内保 温一 定时间后 ， 迅速冷 至标准温度 ， 测定酶活力并求出相
对酶 活力 。 （ ／ ： 豆 ２ ０ ｇ 葡 萄 糖 ２ ， Ｈ Ｐ ｇＬ） 土 ０ ， ０ ｇ Ｋ ：Ｏ
的 Ｐ Ｓ缓冲液 中 ， Ｂ 得到粗酶液。
１ ５ 酶 活 力 测 定 方 法 ．
本试验对该 菌株产生多 菌灵水解酶 的条件和该酶的一些基本 性质进行研究 ， 旨在为农药残 留的酶促降解提供理论依 据。
１ 材 料 与 方 法 １ １ 菌株 ．
取 ２ ０ ０ １ ｏ Ｌ的 Ｐ Ｓ １ ４ ．ｍｌ ／ Ｂ ，０ 醇溶解 至 ３ ｍ ／ Ｌ ，０ ｇｍ ）６
的一 株能对多菌灵快速 、 高效降解的菌株。
１２ 试 剂 与 培 养 基 ．
Ｐ Ｓ缓 冲 液 ： 液 Ａ ３ Ｌ 溶 液 Ｂ ６ Ｌ 加 水 至 Ｂ 溶 ９ ｍ ， １ｍ ， ２０ ｍ ， ０ Ｌ 即得到 ０ １ｍ ｌＬ ｐ ． ｏ 、 Ｈ值 ＝ ． ／ ６０的 Ｐ Ｓ Ｂ 。其 中溶液 Ａ
为３ ．Ｏｇ Ｌ Ｎ ｉ２ Ｏ ２ ： 溶 液 ， 液 Ｂ 为 ７ ． ０ ｇ Ｌ １２ ／ ａｌＰ ４・ Ｈ Ｏ 溶 １ ６ ／ Ｎ Ｐ ４・ ２ ２ ￣Ｈ Ｏ １ Ｈ Ｏ溶液。
验条件下 ， ｒ ｎ内被 降解 的底物多菌灵减少 的 ｐ ｏ 数。 １ａ ｉ ｍｌ
１６ 最 适 温 度及 酶 的 热稳 定性 测 定 ．
的多菌灵 溶液 （ 甲 用 甲醇 混
的粗 酶 液 ，８ｑ ２ ｃ下反 应 ４ ｈ 用 ，
６ｍ ｌＬ Ｈ １ 液 １０ Ｌ终止 反应 ， 入 ７０ ｏ 的 Ｃ 溶 ／ ２ 加 ０
匀， 经有机相针式过滤器过 滤后 ， 用液相 色谱测定滤液中多菌
灵含量。液相 色谱 条 件 为 ， 色谱 柱 ：４ ６Ｘ ０ ｍ Ｔ Ａ Ｅ ‘ ． ０ｍ ，Ｒ Ｃ Ｐ １
田连生
（ 扬州工业职业技术学 院化工系 ， 江苏扬州 ２ ５２ ） ２ １７
摘要： 木霉 一 是 一株 多菌灵 高效 降解菌 。为 了利用 该菌产 生的 酶为去 除环境 中的多菌灵 残 留提供理 论依 ２ 据， 对 一 产生 的多菌灵 水解 酶进行 了研 究。结果 表 明， Ｐ ２ 在 Ｄ培养 基 中，２— １ ２产生 多菌灵水解 酶 的适 宜条件 为 ＂ ｐ Ｈ值 ５０ ７０ 培养温度 ２ ， ． ～ ．， ８℃ 培养时间 ２ ； ８ｈ该酶在 ２ ２ ，Ｈ值 ＜ ． ２— ８℃ ｐ ７０的条件下 比较 稳定 ， ｐ 在 Ｈ值 ＝ ． 和 ６０ 温度为 ２ ８℃ 时显 示出最大 的多菌灵水解 酶活性 ； 酶定域试验结果显示该 酶为胞 内酶。 关 键词 ： 多菌灵 ； 酶促降解 ； 活 酶
碎（ ０ ５ ｒ ｎ×３次 ， 次 间 隔 １ｒ ｎ ， ２０ Ｗ， ｉ ａ 每 ｉ ） 细胞 破 碎 液 于 ａ
４℃ 、５００ｒｍｎ离心 ２ ｉ， １ ０ ｉ ／ ０ｒ ｎ 取上 清液 在冷冻干燥 器 中冻 ａ 干， 用前按 ２ ｇ． 的浓度重溶 于 ｐ ０ｍ ／ｍ Ｈ值 ＝６ ０ ０ ０ ｏ Ｌ ． 、 ．２ｍ ｌ ／
江苏农业科 学 ２ １ ０ １年第 ３ ９卷第 ６期
田 生．木霉 ｒ ２产多菌灵水解酶的条件及酶学特性［ ］ 连 Ｉ ２— Ｊ ．江苏农业科学 ， １ ， （ ） ５７— ７ ２ １ ３ ６ ：７ ５ ８ ０ ９
・ ７ － － ７－ — —５ — —
木霉 ， — ｒ ２产多菌灵水解酶 的条件及酶学特性 ２
木霉 （ ｒｈｄｒ ａｓ． Ｔ Ｔ／ ｏ ｅ ） ２—２菌株 ， ｃ ｍ ｐ 是本试验室选育得到
试 验室选 育得 到 的 １株可 以快速 、 高效 降解 多菌灵 的菌株 。
于 提 取酶 。 １４ 粗 酶 液 的 制备 ．
将培 养 好 的 菌 液 在 室 温 下 以 ６ ０ ０ ｒｒｎ离 心 分 离 ０ ／ ｉ ａ ２ ｉ， ０ｒ ｎ 菌体用 ０ １ｍ ｌＬ ｐ ａ ． ｏ Ｈ值 ＝６ ０的 Ｐ Ｓ缓 冲液洗 涤 ２ ／ ． Ｂ 次， 洗液与 上清 液 合并 用 于胞 外酶 测定 。洗 涤 后 的菌 体 以 １： ０ １ 的体积 比悬 浮 于 Ｐ Ｓ中 ， Ｂ 然后在 冰水浴 中进行 超声破
中图分类号 ： ９ ９９ Ｑ ３ ． 文献标志码 ： Ａ 文章 编号 ：０ ２—１０ 【 １ ０ ０ ７ ０ １０ ３２ 加１ ）６— ５ ７— ２
多 菌灵 因化学性 质稳定 ， 衰期较 长… ， 导致哺乳 动 半 易 物免疫功 能下 降和染色体 畸变而 影响后代 繁衍等性 质 ， 而具 有“ 三致” 作用 ，０ ２年被我 国农业部列为环境激素类化 学农 ２０ 药 Ｊ 。因此对多菌 灵残 留 的降解研 究越来 越受 到 国 内外 关 注 一 。生物 降解是通过酶促反应去除土壤 中多菌灵残 留的 有效 途径 。利用微 生物降解 环境中 的农 药残 留， 具有投 资与 处理 费用低 、 安全性好 、 无二次 污染 等优点 ， 是一种切实 可行 的土壤生物修 复办法 。利用对农药具有降解功能的微生物来 生产 酶制剂 ， 目前广 泛使用 的活体 制剂相 比， 便于储存 、 与 更 运输 和使 用。木霉 （ ｒ ｈｄｒ ａｓ． Ｔ ２菌株 ， Ｔｉ ｏ ｅ ｐ ） ２— ｃ ｍ 是笔者所在
以多菌灵作为底物 ，Ｈ值 ＝ ． ， ２ ４ 测 定其 酶 ｐ ６ ０ 在 ２— ｏ ｃ Ｃ 活力 。稳定性测试是将酶和底物在不同温度下的恒温水浴锅 内保 温一 定时间后 ， 迅速冷 至标准温度 ， 测定酶活力并求出相
对酶 活力 。 （ ／ ： 豆 ２ ０ ｇ 葡 萄 糖 ２ ， Ｈ Ｐ ｇＬ） 土 ０ ， ０ ｇ Ｋ ：Ｏ
的 Ｐ Ｓ缓冲液 中 ， Ｂ 得到粗酶液。
１ ５ 酶 活 力 测 定 方 法 ．
本试验对该 菌株产生多 菌灵水解酶 的条件和该酶的一些基本 性质进行研究 ， 旨在为农药残 留的酶促降解提供理论依 据。
１ 材 料 与 方 法 １ １ 菌株 ．
取 ２ ０ ０ １ ｏ Ｌ的 Ｐ Ｓ １ ４ ．ｍｌ ／ Ｂ ，０ 醇溶解 至 ３ ｍ ／ Ｌ ，０ ｇｍ ）６
的一 株能对多菌灵快速 、 高效降解的菌株。
１２ 试 剂 与 培 养 基 ．
Ｐ Ｓ缓 冲 液 ： 液 Ａ ３ Ｌ 溶 液 Ｂ ６ Ｌ 加 水 至 Ｂ 溶 ９ ｍ ， １ｍ ， ２０ ｍ ， ０ Ｌ 即得到 ０ １ｍ ｌＬ ｐ ． ｏ 、 Ｈ值 ＝ ． ／ ６０的 Ｐ Ｓ Ｂ 。其 中溶液 Ａ
为３ ．Ｏｇ Ｌ Ｎ ｉ２ Ｏ ２ ： 溶 液 ， 液 Ｂ 为 ７ ． ０ ｇ Ｌ １２ ／ ａｌＰ ４・ Ｈ Ｏ 溶 １ ６ ／ Ｎ Ｐ ４・ ２ ２ ￣Ｈ Ｏ １ Ｈ Ｏ溶液。
验条件下 ， ｒ ｎ内被 降解 的底物多菌灵减少 的 ｐ ｏ 数。 １ａ ｉ ｍｌ
１６ 最 适 温 度及 酶 的 热稳 定性 测 定 ．
的多菌灵 溶液 （ 甲 用 甲醇 混
的粗 酶 液 ，８ｑ ２ ｃ下反 应 ４ ｈ 用 ，
６ｍ ｌＬ Ｈ １ 液 １０ Ｌ终止 反应 ， 入 ７０ ｏ 的 Ｃ 溶 ／ ２ 加 ０
匀， 经有机相针式过滤器过 滤后 ， 用液相 色谱测定滤液中多菌
灵含量。液相 色谱 条 件 为 ， 色谱 柱 ：４ ６Ｘ ０ ｍ Ｔ Ａ Ｅ ‘ ． ０ｍ ，Ｒ Ｃ Ｐ １
田连生
（ 扬州工业职业技术学 院化工系 ， 江苏扬州 ２ ５２ ） ２ １７
摘要： 木霉 一 是 一株 多菌灵 高效 降解菌 。为 了利用 该菌产 生的 酶为去 除环境 中的多菌灵 残 留提供理 论依 ２ 据， 对 一 产生 的多菌灵 水解 酶进行 了研 究。结果 表 明， Ｐ ２ 在 Ｄ培养 基 中，２— １ ２产生 多菌灵水解 酶 的适 宜条件 为 ＂ ｐ Ｈ值 ５０ ７０ 培养温度 ２ ， ． ～ ．， ８℃ 培养时间 ２ ； ８ｈ该酶在 ２ ２ ，Ｈ值 ＜ ． ２— ８℃ ｐ ７０的条件下 比较 稳定 ， ｐ 在 Ｈ值 ＝ ． 和 ６０ 温度为 ２ ８℃ 时显 示出最大 的多菌灵水解 酶活性 ； 酶定域试验结果显示该 酶为胞 内酶。 关 键词 ： 多菌灵 ； 酶促降解 ； 活 酶
碎（ ０ ５ ｒ ｎ×３次 ， 次 间 隔 １ｒ ｎ ， ２０ Ｗ， ｉ ａ 每 ｉ ） 细胞 破 碎 液 于 ａ
４℃ 、５００ｒｍｎ离心 ２ ｉ， １ ０ ｉ ／ ０ｒ ｎ 取上 清液 在冷冻干燥 器 中冻 ａ 干， 用前按 ２ ｇ． 的浓度重溶 于 ｐ ０ｍ ／ｍ Ｈ值 ＝６ ０ ０ ０ ｏ Ｌ ． 、 ．２ｍ ｌ ／
江苏农业科 学 ２ １ ０ １年第 ３ ９卷第 ６期
田 生．木霉 ｒ ２产多菌灵水解酶的条件及酶学特性［ ］ 连 Ｉ ２— Ｊ ．江苏农业科学 ， １ ， （ ） ５７— ７ ２ １ ３ ６ ：７ ５ ８ ０ ９
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木霉 ， — ｒ ２产多菌灵水解酶 的条件及酶学特性 ２
