南方医科大学研究生细胞培养技术考试重点总结

第一章绪论1、细胞工程的概念，广义的细胞工程，狭义的细胞工程,⏹细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的方法,通过类似于工程学的步骤,在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或一定细胞产品的一门综合性科学技术。

⏹广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。

2、细胞工程的研究内容（研究生物类型,实验操作对象）⏹根据研究生物类型不同，细胞工程可分为动物细胞工程、植物细胞工程、微生物细胞工程。

⏹动物细胞工程包括：细胞培养技术（包括组织培养、器官培养）；细胞融合技术;胚胎工程技术 (核移植、胚胎分割等)；克隆技术（单细胞系克隆、器官克隆、个体克隆）。

⏹植物细胞工程包括:植物组织、器官培养技术；细胞培养技术；原生质体融合与培养技术；亚细胞水平的操作技术等。

3、细胞工程的重要应用（植物、动物）⏹植物细胞工程的应用：脱毒和快速繁殖细胞工程育种：利用培养变异，筛选优良突变体利用远缘杂交幼胚培养，获得杂种植株，克服其杂交不亲和性利用细胞融合技术,克服远缘杂交不亲和性倍性育种离体种质保存细胞培养生产有用物质⏹动物细胞工程的应用动物细胞培养生产医药产品（单克隆抗体）新品种培育试管动物与婴儿组织工程珍稀动物资源的保存与保护第二章细胞工程基础1、细胞分化：个体细胞发育过程中，后代细胞在形态、结构和生理功能上发生差异的过程。

2、发育潜能：指细胞分化能力的强弱。

3、细胞全能性：指细胞具有发育成完整个体的潜能.4、细胞多能性：指随着胚胎发育,有的体细胞失去全能性，具有分化出多种组织的潜能.5、去分化：又称脱分化，指某些条件下分化细胞不稳定，又回到未分化状态的这一过程6、愈伤组织:脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的、松散的细胞团称为愈伤组织。

愈伤组织的种类胚性愈伤组织（Embryonenic callus）:表面光滑、组织结构紧凑、细胞小、再生力强。

第一章：细胞组织培养的三种类型？原代外植块培养：是从人或动物体内取出一小块组织，模拟体内生理环境，在保证无菌、适宜温度和营养条件下，使之生存和生长并保持其结构和功能的方法。

器官培养：指的是应用和组织培养相似的条件，培养的是器官的原基或器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。

细胞培养：是以相似的培养方法体外培养单个细胞或单一细胞群，使其在适宜条件下生长并保持细胞特性。

第二章1.体内体外的环境不一样，细胞之间的粘附是通过什么实现的？细胞的黏附是通过特异的细胞表面受体与细胞外基质分子结合实现的。

在细胞铺展之前，细胞已分泌了细胞外基质蛋白和蛋白聚糖。

细胞外基质先黏着到带电底面上，然后再通过特异的受体附着到基质上。

因此，细胞曾经生长过的玻璃或塑料表面更适合细胞附着，用基质成分，如纤连蛋白、胶原或其衍生物（如明胶）预处理培养器皿，有利于要求复杂培养条件的细胞附着和增殖。

主要有四类跨膜蛋白参与了细胞与细胞、细胞与底物的黏附。

不依赖Ca2+的细胞间黏附分子介导同种或异种细胞与细胞粘附依赖Ca2+的钙黏着蛋白参与同源细胞间的相互作用整合蛋白，介导细胞与基质之间的相互作用，是基质分子跨膜的蛋白聚糖，能和基质成分如其他蛋白聚糖或胶原相互作用，具有稳定、活化和把生长因子转运到高亲和性受体上的作用。

2.细胞外基质成分及作用？细胞外基质（ECM）由胶原、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、透明质酸酶、蛋白多糖及膜结合生长因子（或细胞因子）等各种成分组成。

ECM能提高细胞的生存、增殖和分化能力3.概念，接触抑制：细胞在生长过程中达到相互接触时运动停止，同时细胞质膜褶皱减少，最终细胞分裂停止。

4.诱导细胞分化的条件？有助于诱导细胞分化的条件：细胞密度高细胞与细胞、细胞与基质之间作用强培养基中存在各种分化因子5.细胞信号传递的类型？体内细胞的增殖、迁移、分化、凋亡均受细胞间、细胞与基质间相互作用及营养条件和激素等信号分子的调控。

细胞培养及检测相关技术小结一、细胞培养基配制以1000ml培养基为例。

1000ml成骨细胞培养基 = 850mlα－MEM培养液 + 150 ml 特级胎牛血清FBS (15%)(1). α－MEM powder: 10.2 g/L ~~~ 8.67 g for 850 ml(2). NaHCO3: 2.2 g/L ~~~ 1.87 g for 850 ml(3). Twice distilled water 850 ml, dissolve the powder in water(4). FBS (15%,v/v) 150 ml(5). Filter to sterilized bottle(6). Label the bottle and store in 4℃.Notes: 4,5 should be operated in the sterile working place. And if necessary, we can add some antibiotics into the medium（usually in primary cell culture）. 二、PBS（10×）NaCl: 80g/LKCl: 2g/LNa2HPO4: 14.4 g/LKH2PO4: 2.4 g/LPH=7.4, with HCl or NaOHToo much PO42-is harmful to cell, so only very little amount is necessary. Get some certain to dilute this 10 times concentration PBS when we need.三、胰蛋白酶Trypsin- EDTA 消化液(10×)This solution is used for cell released from the culture flask。

细胞工程考试总结细胞工程是近年来兴起的一个研究领域，其涉及分子生物学、细胞生物学、生物化工等多个学科的交叉与融合。

细胞工程在医药、食品、能源等领域有着广泛的应用。

考试是检验学习成果的一个重要方式，通过总结细胞工程考试可以更好地发现自己的不足，提高学习水平。

一、考试形式细胞工程考试通常采用笔试形式，试卷包括选择题、填空题和简答题。

选择题占比较大，通常是单选题和多选题，试题涵盖了细胞工程的基本概念、实验技术和应用等方面。

填空题考察对实验数据的分析和理解能力，而简答题则需要考生掌握基本理论知识并能够结合实际进行分析和解决问题。

二、考试知识点1. 细胞基础知识：细胞生物学基础知识、细胞培养、细胞的生理和代谢等方面。

2. 分子生物学：DNA结构与功能、基因调控、基因克隆等。

3. 技术与方法：基因工程、PCR、蛋白质纯化、细胞流式分析等。

4. 细胞工程应用：生物药物、生物制品、生物能源等。

三、注意事项1. 模拟考试：在考试前可以进行模拟考试，模拟考试可以让我们更好地感受到考试的难度，同时也可以预测自己的得分情况，对知识掌握情况有一个比较清晰的了解。

2. 补充知识：细胞工程的内容比较广泛，考试可能会涉及到一些我们没学过或者没有掌握的知识，那么考试之前需要对一些基础知识进行巩固，同时也可以通过阅读相关的文献、视频或者向老师请教等方式来补充知识。

3. 做好笔记：在学习过程中，应尽可能的记录下自己的笔记，对于一些重要的知识点、公式、实验名称等也要做好标注，这有助于我们在考试时快速找到相关知识点，减少遗漏。

4. 做好时间规划：在考试时，应该根据试卷题目难易程度、所占分值大小、自己的掌握程度来做好时间规划，尽可能地把握好答题时间，并避免在最后没有时间答题的情况出现。

总之，细胞工程考试虽然难度较大，但只要我们掌握好基本知识并紧密结合实践，认真备考，制定好合理的考试策略，突破自我，就可以取得优良的成绩。

浙江省考研生物学复习资料细胞生物学实验技巧总结在浙江省考研生物学复习中，细胞生物学作为重要的考试内容，实验技巧是考生们需要重点掌握的知识。

本文将就细胞生物学实验技巧进行总结，以帮助考生更好地备考。

一、细胞培养技巧1. 细胞培养基的配制细胞培养基是进行细胞培养的重要基础。

在配制过程中，需要注意选择适合所需细胞的基础培养基，并按照一定比例加入必要的添加物，如胎牛血清、抗生素等。

配制好的培养基应该进行充分均匀混合，并且要进行严格的无菌操作。

2. 细胞的传代在细胞培养过程中，细胞会不断增殖，需要进行传代以保证细胞的正常生长和发育。

传代时，首先要观察细胞的形态和数量，当细胞达到一定密度时，需及时对细胞进行传代。

传代前，应将细胞培养皿中的培养基抽取或者倒掉，用PBS洗涤细胞，然后加入相应的酶解液，使细胞与培养皿充分接触。

千万不可用力刮细胞，以免造成细胞损伤。

3. 细胞的冻存和解冻细胞的冻存是为了长期保持和保存细胞，以便将来使用。

冻存前，需要使用特定的冻存液对细胞进行处理，并选择适当的冷冻温度。

解冻时，应将冻存细胞置于恒温水浴中迅速解冻，并进行逐渐稀释过程，最后进行培养。

二、细胞处理技巧1. 细胞的固定与染色在实验中，需要对细胞进行固定和染色，以便于观察和分析。

固定细胞可使用一些常见的实验方法，如甲醛固定、冷冻固定等。

染色过程中，应根据实验需要选择合适的染色试剂，如荧光染色剂、核酸染色剂等，并且在染色后进行适当的洗涤步骤，去除多余的染色剂。

2. 细胞的抽提和分离有时需要对细胞进行抽提或者分离，以获得目标细胞或细胞组分。

在抽提过程中，需要根据实验目的选择适当的抽提缓冲液，并进行适当的离心、超声等操作，使细胞或细胞组分充分释放或分离。

3. 细胞的转染细胞转染是指向靶细胞导入外源性基因或药物等物质，使其产生相关效应。

转染前，需选择适当的转染试剂，如病毒载体、转染剂等，并按照实验要求进行转染操作，尽量减少对细胞的损伤。

细胞培养cell culture:从活体中取出细胞活其它建系细胞，在体外使之能继续生存﹑生长甚至增值的一种方法。

细胞融合：指两个或两个以上的细胞合并成为双核或多核细胞的过程。

细胞系cell line:原代培养物经首次传代成功后形成的。

细胞株cell strain:通过筛选或克隆化，具有特殊性质或特异标记的细胞且这些特异在以后的培养中必须持续存在。

原代培养primary culture:从机体取得材料细胞组织或器官，在培养瓶内培养到第一次传代前，即为原代培养或初代培养。

传代培养passage:将细胞从一个培养瓶容器移植到另一培养容器中培养。

贴壁依赖性：细胞培养过程中的特性，有大部分细胞在生长过程中都是贴壁生长的就是要附着在培养用的器皿上。

细胞对培养用器皿的附着能里的不同就是细胞贴壁性能代表了细胞的活力。

贴壁率seeding effifiency:在一定时间内，接种细胞贴附于培养器皿表面的百分率，但应当说明培养时的培养条件。

体外转化in vitro transformation:细胞在体外培养过程上中发生与原代细胞形态﹑抗原﹑增殖或其他特性的可遗传的变化。

细胞周期：细胞每一次增殖所经历的全过程称为细胞的增殖周期，理论上，细胞每经过一个增值周期，在数量上就增加一倍。

1.细胞冻存与复苏的原则？慢冻快融，以最大限度的保存细胞活力。

慢冻，主要是防止细胞在冷冻过程中形成冰晶，对细胞造成损害，加DMSO也是这个原理。

快融。

主要是防止DMSO在液体状态下对细胞的毒害作用，快速使细胞进入复苏和生长状态。

分别经过4度，-20度，-80度和液氮的依次过程进行冻存；经过37度水浴1分钟之内解冻细胞冻存液进行复苏。

2. 玻璃器皿的清洗（新买的和用过的）玻璃器材清洗要领有煮沸﹑刷洗﹑冲洗﹑酸泡和浸泡步骤如下a.刷洗：热水浸泡过用软毛刷带热刷洗瓶内外和盖子使用面；b.冲洗：流水振荡冲洗15-20次；c酸泡：器材50度烤干后清洁液（高锰酸钾﹑重铬酸钾﹑去离子水）酸泡24h；d.浸泡：酸泡器材冲洗沥水后用去离子水浸泡2次每次24h。

一、名词解释（1）组织工程：应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理情况下哺乳动物组织的结构、功能和生长机制，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科（2）细胞融合：在自发或者人工诱导下，两个来源相同或不同的细胞或者原生质体，融合成一个杂种细胞的过程。

（原生质体：除去细胞壁的被细胞膜包围的“裸露细胞”。

）（3）干细胞：具有自我更新和多项分化潜能的原始细胞（4）克隆：由同一个祖先细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体。

（5）自然纯化：利用某一种类细胞的增殖优势，在长期传代过程中靠自然淘汰法，不断排挤其他生长慢的细胞，靠自然增殖的潜力，最后留下生长优势旺的细胞，达到细胞纯化的目的（6）克隆培养：挑选单个细胞或单一集落（克隆）于体外进行培养。

常用于细胞克隆化（纯化），建立细胞株，长期传代。

（7）次代培养：用胰酶等将原代细胞消化分散后，再培养一代。

此操作过程叫传代。

（8）细胞系(Cell line):：原代培养经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。

（9）传代（Passage）：体外培养细胞生长增殖达到一定密度后，需要分离出一部分细胞和更新营养液（培养基），这一过程叫传代。

（10）细胞株(Cell strain)：通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特定性质或标志的细胞群。

细胞株的这种特定性或标志必须在整个培养期间始终存在。

二、简答题1．细胞培养基制备的条件：1、营养物质2、缓冲能力3、等渗性4、无菌2．冻存的步骤：①常规技术消化并收集细胞于离心管中离心。

②去上清，加入4 ℃预冷的冻存液，轻轻重悬细胞后，均匀分装于冻存管中，做好标记。

③尽快将冻存管装于纱布袋中，悬于液氮液面上方（-70 ℃）过夜。

④次日转入液氮中。

3．转基因动物的目的基因转入的方法：①电穿孔法②显微注射法③裸露DNA直接注射法④碳酸钙-DNA直接注射法⑤脂质载体包埋法⑥病毒介导的生物学方法。

细胞培养技术考试重点名词解释：1.群体倍增时间：细胞指数增长期时，细胞群倍增所需的时间。

是由于表示群体细胞指数生长期内细胞分裂活动的程度，是判断细胞生长是否旺盛的重要指标。

2.接触抑制（contact inhibition）：细胞相互接触后失去运动的现象。

3.密度抑制（density inhibition）：由于细胞密度过大，培养液营养耗尽，代谢产物过多和生存空间消失所引起的细胞增殖的抑制现象。

4.肿瘤干细胞(tu mor stem cells，TSC)表现为一种特殊类型的干细胞，具备高度增殖能力与自我更新能力，也具备多向分化的潜能。

TSC增殖过程中，通过不均一分裂，一个TSC分裂形成一个新的TSC 和另一个可最终分化为包括肿瘤细胞在内的各种细胞的子细胞，其结果是维持TSC数目稳定并产生肿瘤。

5.细胞汇合(Confluent)：指细胞增殖生长相互连接成片占据所有底物面积现象。

6.饱和密度(Saturation density)：在特殊培养条件下，每平方厘米(单层培养)或每毫升细胞悬液内可达到的最大细胞数。

7.二倍体细胞系或株(Diploid cell line or strain)：具有二倍体染色体数的细胞系或株。

8.二倍体(Diploid)：指双倍数的染色体数或具有此数的细胞系。

9.组织工程：是应用生命科学和工程学的原则及方法，在正确认识正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。

10.细胞融合(Cell fusion)：指两个独立的细胞借媒介物(PEG等)融合成杂种细胞的过程。

11.细胞富集：当细胞分离纯化并不完全彻底，培养物中能达到以某种细胞为主（占绝大多数）的程度。

12.三维培养：把细胞悬液接种在一定立体形态的支架上，使细胞生长在三维环境中的培养方法。

13.平衡盐溶液（balanced salt solution, BSS）：简称盐溶液，集缓冲液的缓冲能力、生量盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体。