植物组织中可溶性糖和淀粉含量的测定
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植物组织中可溶性糖和淀粉含量的测定
一、原理
淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料：红薯块根。
（二）试剂
1、浓硫酸（比重1.84）。
2、9.2mol/L高氯酸。
3、80%酒精
4、葡萄糖标准液（称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg，配制成100ml溶液，既得1mg/ml的标准液）；
5、蒽酮试剂：[100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸加水至100ml）]。
（三）仪器设备
电子天平，容量瓶（100mL、50 mL），漏斗，小试管若干支，恒温水浴锅，刻度吸管（0.5mL、2.0mL、5 mL），分光光度计，记号笔。
三、实验步骤
1. 标准曲线制作。
取标准糖溶液将其稀释成一系列0-100μg/μl的不同浓度的溶液中，按上述方法分别测定OD625nm值，然后绘制标准曲线。
管 号 0 1 2 3 4 5
葡萄糖标准液（μL） 0 20 40 60 80 100
糖含量（μg） 0 20 40 60 80 100
加入的水(μL) 100 80 60 40 20 0
蒽酮试剂（mL） 1 1 1 1 1 1
OD625 0
2. 样品提取
（1）可溶性糖含量测定
称取 50～100mg粉碎过100目筛的烘干样品，置于15mL刻度试管中，加入6～7mL 80％乙醇，在80℃水浴中提取30min，取出离心（3000rpm）5min，收集上清液。重复提取两次（各10 min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于85℃恒温水浴，使乙醇蒸发至2～3mL，转移至50mL容量瓶，以蒸馏水定容。
吸取上述上清液1ml，加入5ml蒽酮试剂混合，沸水浴10min,取出冷却。在625nm处测定OD值，从标准曲线上得到提取液中糖的含量（ug）。
（2）淀粉含量的测定
向沉淀中加蒸馏水3 mL，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化15min 。冷却后，加入2 mL冷的9.2 mol/L高氯酸，不时搅拌，提取15 min 后加蒸馏水至10 mL ，混匀，离心10min，上清液倾入50mL容量瓶。再向沉淀中加入2 mL 4.6mol/L高氯酸，搅拌提取15min后加水至10mL ，混匀后离心10min ，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀1～2次，离心，合并离心液于50 mL容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。
取待测样品提取液1.0mL于试管中，再加蒽酮试剂5mL，快速摇匀，然后在沸水浴中煮10 min，取出冷却，在625 nm 波长下，用空白调零测定光密度，从标准曲线查出糖含量（μg）。
