番茄LeEIL1基因的克隆分析及表达载体构建

安徽农业科学。Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＡｎｈｕｉ　Ａ　．ｓｃｉ．２００７。３５（３）：６６５—６６６。６６８　责任编辑罗芸责任校对　罗芸　

番茄ｃｒｙ１基因果实特异性植物表达载体的构建及其转化番茄的研究　

刹、艳（四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，四川成都６ｌ００６４）　

摘要隐花色素（ｅｒｙｐｔｏｃｈｒｏｍｅ）是一类对ＵＶ—Ａ／蓝光作出应答的光受体。果实特异性植物表迭载体是用在番茄果实中特异表达的Ｌｅｆｉｍｌ　

基因的启动子（ｆｓｐ）替换质粒ｐＢＩ１２１原有的３５Ｓ启动子构建而成（称为ｐＢＩ１２１　ｆｓｐ）。将番茄隐花色素家族成员之一ｃｒｙｐｗｃｈｒｏｍｅｌ中４６５　ｂｐ　

特异片段导入到植物栽体ｐＢＩ１２１　ｆｓｐ构建成果实特异性表达的ＲＮＡｉ植物表￣￥（ｐＢＩ１２１ｆｓｐ－ｅｒｙ１），通过根癌农杆茵介导转入番茄子叶。　

经组织培养成功获得转基因植株。为后续对ＣＲＹ１与番茄果实中抗氧化剂番茄红素之间的关系研究提供了材料。　

关键词隐花色素；果实特异性启动子；子叶；番茄转化　中图分类号Ｑ３４３．１　文献标识码Ａ　文章编号０５１７—６６１１（２Ｏ昕）【Ｂ—ＯＯ６６５—０２　

‘　砷１－嘶∞０ｆＰｌａｎｔ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｖｅｃｔｏｒ　ｗｉｔｈ　Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　Ｆｒｕｉｔ　Ｐｒｏｎｍｔｅｒ　ｏｆＧｅｍ　０　１　ｉｎ．Ⅱ锄　ｉｅＩＩｉｃ　Ｔｏｍａｌｏ　ＳＵＮ　Ｙａｈ（Ｋｅｙ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｂｉｏ－ｒｅｓｏｕｍｅｓ　ａｎｄ　Ｅｃｃｒ．ｅｘ￣ｖｉｍｎｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｍｉｎｉｓ￣　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ．，Ｇｏｌｌｅ￣ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｅｉｅｍ￣。Ｓｉｅｈｕａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｃ｝ｌ印日ｄｕ，　

ｓｉｄｎ瑚１６ｔ００６４）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｃｒｙｐｔｏｃｈｒｏｍｅ　ｉｓ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＵＶ－Ａ／ｂｌｕｅ　ｌｉｇｈｔ　ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ａ　ｐａｒｔ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｃｒｙｌ　ｗａｓ　ｉｎｓｅｒｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｌｈｅ　ＤＮＡ　０ｆ　ｂｉ￣ｑ，ｐｌａｎｔ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　

番茄心室形成相关调控基因的初步分析

番茄的心室数是影响果实大小、形状和畸形果发生率的重要因素,因此,对心室形成的研究在番茄生产上具有非常重大的意义。已有研究表明,番茄fasciated (fas)基因和locule number (lc)位点与调控果实心室数相关,两个基因分别位于第11条染色体和第2条染色体上,且对心室数形成的作用值分别约为37%和12%。

本研究利用经多年筛选的性状表现稳定的高代自交系—多心室"MLK1"番茄(Lycopersicon esculentum Mill)(心室数15个左右)和少心室"FL1”番茄(Lycopersicon esculentum Mill) (心室数2-4个),分析了多心室"MLK1”和少心室"FL1”材料调控心室形成的lc位点和fas基因遗传背景的差异；同时克隆出与番茄fas基因同源性较高的番茄YABBY2基因,分析了YABBY2与其他物种YABBY基因的同源性；研究了YABBY2基因在番茄不同组织部位中的表达；进一步通过构建YABBY2基因超表达载体,在高效遗传转化体系下获得转基因植株,初步验证了番茄YABBY2基因的功能。本研究为进一步阐明心室形成的机理和明确YABBY2基因在植物生长发育过程中的作用奠定了基础。

主要结果如下：1.通过分子生物学手段验证了多心室"MLK1”和少心室"FL1”材料中lc位点的基因组差异及wuschel基因的表达。多心室"MLK1”在lc位点存在突变,属于lc位点突变型材料,而少心室"FL1”在lc位点序列正常,属于lc位点野生型材料。

wuschel基因编码区序列在多心室“MLK1”和少心室"FL1”中完全一致,但在转录水平上,wuschel的表达量在多心室"MLK1”材料高于少心室"FL1”材料,同时wuschel基因表达限于茎尖部位。2.本试验验证了多心室"MLK1"和少心室"FLl”材料中fas位点的基因组变异情况。

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番茄黄化曲叶病毒Rep基因植物表达载体的构建及对番茄的遗传转化

作者：裴华丽 刘永光 乔宁 李美芹 薛其勤 杨天慧

来源：《江苏农业科学》2015年第02期

摘要：克隆番茄黄化曲叶病毒的复制酶基因（TYLCV-Rep），并构建其植物表达载体，通过农杆菌介导法转入番茄子叶外植体。经过共培养、潮霉素筛选和分化再生，获得21株潮霉素抗性植株。PCR检测和Southern Blot检测结果表明，有3株呈阳性检测反应，说明TYLCV-Rep基因已整合到番茄基因组中，阳性率为14.3%。烟粉虱接种试验结果表明，番茄转基因植株较非转基因植株对番茄黄化曲叶病毒的抗性明显增强。

关键词：复制酶基因；黄化曲叶病毒；番茄；遗传转化；表达载体

中图分类号：S436.412.1+1 文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）02-0041-04

收稿日期：2014-03-19

基金项目：国家大宗蔬菜产业技术体系建设专项（编号：CARS-25）；山东省高等学校科技计划 （编号：J07WG06、J09LC59、J10LC73、J12LE56）；潍坊科技学院校级课题（编号：W13K029、W13K033、W13K051）；山东半岛蓝色工程研究院科研计划（编号：sdlgy2013y014）。

作者简介：裴华丽（1978—），女，山东潍坊人，硕士，讲师，主要从事蔬菜分子育种研究。E-mail：peihuali2@。

通信作者：刘永光，硕士，讲师，主要从事植物病理方面的研究。E-mail：ygliu425@。番茄在中国各蔬菜产区均有大面积的种植，在我国蔬菜周年供应中占有非常重要的地位。随着温室大棚的推广及蔬菜反季节栽培效益的提高，温室番茄栽培面积连年增长，其病害的发生也呈现逐步加重的趋势。近年来，在番茄主产区相继发现的番茄黄化曲叶病毒，对番茄植株的生长、开花、坐果等方面均产生严重的危害，给当地的番茄生产带来巨大的经济损失[1-6]。番茄黄化曲叶病毒（tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）属双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）[4-7]，是一类世界范围内广泛发生的单链环状DNA病毒。自1986年首次将烟草花叶病毒（ TMV） 外壳蛋白（ coat protein，CP）

Ｊｏ广ｕｒｎａｌ西ｏｆ　Ｇ农ｕａｎｇｘ业ｉ　Ａｇｒ生ｉｃ．ａｎ物ｄ　Ｂｉｏ　ｌ　Ｓｃｉｅ学ｎｃｅ　●　●　２００７年９月　Ｓｅｐｔ．，２００７　

文章编号：１００８—３４６４（２００７）０３—０１８３—０７　

番茄中一个ＬＳｍｌ蛋白同源基因ＬｅＬＳｍｌ　

的克隆及表达分析　

蒙姣荣ｈ。，陈本勇。，何小丹。，陈保善ｈ。　

（广西大学　１广西亚热带生物资源保护利用重点实验室，广西南宁５３０００５　２生命科学与技术学院，广西南宁５３０００５）　

摘要：从番茄品种超级大明星中克隆ＬＳｍ１蛋白同源基因ＬｅＬＳｍ　１。ＬｅＬＳｍ　１基因全长ｃＤＮＡ共有　１　０３８个核苷酸，包含一个３８７个核苷酸的编码区，以及３１８个核苷酸的５　非编码区和３３３个核苷酸的３　非　编码区，编码一个含１２８个氨基酸的蛋白质，分子质量为１４．５　ｋｕ，等电点为４．９４。ＬｅＬＳｍ１编码的氨基酸序　列包含ＬＳｍｌ蛋白的保守功能域，与截形苜蓿、拟南芥和水稻等植物的类似ＬＳｍ蛋白具有高度的同源性，在　氨基酸水平上的一致性依次为８２．８　、８２．０　和７２．１　。用ＰＣＲ方法克隆了ＬｅＬＳｍ１基因，其全长　转录　区共４　７５１　ｂｐ，其中包含５个外显子和４个内含子。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果显示，ＬｅＬＳｍ１是单拷贝基因。半定量　ＲＴ—ＰＣＲ分析表明，ＬｅＬＳｍｌ在番茄五叶期和结果期的根、茎、叶以及花和果实中均有表达，且表达量无明　显差异，是一个组成型表达基因。　关键词：ＬＳｍｌ蛋白；番茄；ＬｅＬＳｍ１；基因克隆　中图分类号：Ｑ７８　文献标识码：Ａ　

Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｏｍａｔｏ　ＬｅＬＳｍ　ｌ，　

ａ　ＬＳｍ　Ｊ　ｐｒｏｔｅｉｎ—ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｇｅｎｅ　

ＭＥＮＧ　Ｊｉａｏ—ｒｏｎｇ　～，ＣＨＥＮ　Ｂｅｎ—ｙｏｎｇ　，ＨＥ　Ｘｉａｏ—ｄａｎ　，ＣＨＥＮ　Ｂａｏｓｈａｎ　‘　

（１　Ｃｕａｎｇｘｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ　Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００５，Ｃｈｉｎａ；