水果中VC含量测定实验

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水果中VC含量的测定

一 实验仪器与试剂

紫外-可见分光光度计,电子天平,高速离心机,

抗坏血酸标准液(Vc标准液 )1mg/ml(现用现配)

棕色容量瓶

提取剂 1%HCL

二 原理:

根据Vc对紫外线产生吸收和在碱性环境中不稳定容易被氧化的特性,于波长243nm处测样品溶液与碱处理样品(参照)的吸光度之差,通过查校准曲线,计算样品中Vc的含量 。

三 步骤

1波长的选择

分别对不同浓度的Vc与试剂空白溶液在200——400nm范围内扫描,测其最大吸收峰处的波长λ。

2.校准曲线的绘制

准确称取抗坏血酸(维生素C)10mg,用提取剂1%的HCL溶解,并定容到100ml,此时浓度为 100μg/ml。分别吸取0.00 0.10 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20ml标准液,用1%的HCL稀释10倍,浓度分别为0.00 1.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00

12.00μg/ml。以1%HCL为参照,在波长λ处,测其吸光度A,以各浓度Vc液与空白参照吸光度之差△A对抗坏血酸浓度C绘制校准曲线。

3.样品测定

样液制备:将水果样品洗净去皮,称取果肉100g,加入100ml提取剂,迅速搞成匀浆,称取10g浆状物,用提取剂将样品移入并定容到00ml容量瓶中,摇匀。若透明则可直接取样测定,若浑浊,可通过离心来消除。

样液的测定:准确移取澄清透明的0.5ml提取液于试管中,加9.5ml 1%HCL,以HCL为对照,在波长λ处测定其吸光度。

待测碱处理样液的测定:取0.5ml透明提取液,加6滴0.5mol/l的NAOH溶液(约0.3ml),室温下放置40min后,加9.2mlHCL后摇匀,以6滴NAOH跟1%HCL的混合液为对照,测其λ波长下的吸光度。

4.结果计算

由待测样品与待测碱处理样的吸光度之差查校准曲线,即可计算出样品中Vc的含量,也可直接以待测碱处理液位对照,测得待测也的吸光值,查校准曲线,计算Vc含量。

Vc的含量:mg/100g=(200*C)/(m*V)

其中:m-——样品重量g; 200——稀释倍数;C——从校准曲线上查的的Vc含量μg/ml

V——测试时吸取提取液体积ml

三 结果与讨论

1.溶剂对吸光度的影响,

单独测1%HCL在波长λ出的吸光度,可通过扣除其作为对照的吸光值。

2.待测碱处理样的静置时间

每隔5分钟,取少量测其吸光度。

3.吸光度检测范围

对打吸光度值最好不要超过0.8,浓度过高容易造成校准曲线的弯曲

4.方法的精密度 同等条件下平行试验5次,比较其结果。

5.因为Vc溶液容易被氧化,所以操作过程尽可能快。