红墨水染色法快速测定小麦生活力

实验五种子活力的测定（红墨水法）一、实验目的掌握快速测定种子活力的方法二、实验原理种子生命力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。

它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。

活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力，而死的细胞原生质膜丧失这种能力，于是红墨水染料可进入死细胞而使其染色。

活细胞不能吸收红墨水所以不染色。

三、试剂、材料5%红墨水、培养皿、刀片青稞种子四、实验过程1、将随机购买的种子用温水浸泡3-6小时，使其充分吸胀。

2、吸胀后的种子挑选50粒，沿胚中心线纵切为两半。

3、一半至于培养皿中，用红墨水浸泡染色10分钟，染色后倒去红墨水，用清水冲洗至液体无色。

4、另取50粒种子吸胀，沸水煮熟成死种子，重复步骤3，作为空白对照。

五、计算结果未被染色的种子数目种子活力＝*100％总种子数目实验一植物组织水势的测定--小液流法一、实验目的1、掌握植物细胞水势概念及计算公式；2、了解小液流法测定植物组织水势的方法。

二、实验原理1、植物细胞、组织之间以及植物体和环境间的水分间移动方向都由水势差决定；2、当植物细胞或组织放在外界溶液中时：A、ψw＜ψs，则植物组织吸水，C外↑，液滴↓；B、ψw＞ψs，则植物组织失水，C外↓，液滴↑；C、ψw＝ψs，则二者水分保持动态平衡，C外不变，液滴不动。

三、试剂、材料试管、试管架、滴管、打孔器、蔗糖溶液菠菜四、实验过程1、取出8支试管，依次编号1、用1mol/l的蔗糖溶液配制0.10、0.20、0.30、0.40、0.50M、0.60M、0.70M、0.80M一系列不同浓度的蔗糖溶液，取出8支试管用力混匀。

五、实验结果根据公式计算叶片细胞的水势公式：ψw =-RTiC式中：ψw为细胞水势，R为摩尔气体常数，0.083×105（L٠Pa）/（mol٠K）；T为热力学温度，单位K；即273+t ，t为实验温度，单位是℃；i为解离系数，蔗糖为1；C为等渗溶液的质量摩尔浓度，单位是mol/L。

小麦种子活力的测定：
1、加入5%的红墨水没过种子，红墨水需不需要加水稀释？加多少量？
红墨水需要加水稀释到浓度5%。

加水的比例是：一份红墨水加19份自来水。

2、对死种子、活种子分别进行计数，是不是分别数清粒数就行？
小麦种子的胚染为红色的为死种子。

胚没有被染色或为染色很浅的为有活力的种子。

对死种子、活种子分别进行计数，就是数清粒数就行，其目的为了下一步计算种子活力。

3、写出正确的计算公式，这个公式是哪个公式？
种子活力（%）=(不着色或着色很浅的种子粒数÷实验种子的总粒数) ×100%
比如取种子30粒，沿种胚中央准确切开，其中一半置于培养皿中，加入5%红墨水染色后，有5粒被染为红色，其它25粒为白色或染
色很浅，则种子活力（%）=25÷30×100%
4、计算两份样品种子活力的平均值，是如何计算的？
两份样品种子活力的平均值=（样品1种子活力+样品2种子活力）÷2
5、两份样品种子活力之差与平均数之比不应超过5%，是什么意思？是如何计算的？
“两份样品种子活力之差与平均数之比不应超过5%”的意思将“两份样品种子活力之差与平均数之比”的值与5%比较，如果大于5%，说明本次实验就是失败的，需要重做实验；如果小于5%，说明本次实验正确合理，其结果是可靠的。

计算如下:
“两份样品种子活力之差与平均数之比”=∣样品1种子活力—样品2种
子的活力∣÷两份样品种子活力的平均值。

大小麦种子生活力和发芽率快速测试方法夏收期间，有些地区会遭受了梅雨、暴雨和特大暴雨袭击，这给夏熟大小麦选留种带来极大困难。

因此及时做好麦种速测，做到心中有数，尤为重要。

麦种发芽需经过一段休眠期，特别是大麦种子，休眠期长达三个月左右。

这主要是种子内脱落酸含量较高，只有当脱落酸含量降低时，麦种才能解除休眠。

一、红墨水快速测定法：
1、常用红墨水稀释1:500倍液，将需测定的大麦种子用刀片纵切，取带有种胚的一半漫于红墨水液中，浸泡半小时左右，用清水冲洗后逐粒检查，凡是有生活力的种胚处无红色反应，仍呈白色，其它部分都染成红色，而无生活力的种子无论胚或胚乳部分都被染红，依据种胚的着色与否判断麦种有无生活力。

2、在采用红墨水测定的过程中，将麦种预先用清水浸泡12小时，再纵切染色，可提高测定效果，浸泡染色时间仅需10分钟。

同时由于经过了预先浸泡，经红墨水染色测定后，该半粒种子可继续留下保湿培养，观察其发芽情况，3-4天后就可得出发芽率结果；而且这一方法测定发芽率还不易受霉菌污染。

二、赤霉素快速测定法：
用赤霉素打破种子休眠期，直接速测其发芽率。

将市售小包装赤霉素配成20ppm 的溶液(即20毫克赤霉素加水1000 毫升)，将备好的大小麦种子浸人药液内，并置于冰箱，在5°C条件下浸泡24小时后，取出按常规发芽方法，每个培养皿放麦种10粒并保湿，在25°C室温下经1-2天后胚根、胚芽萌动，3-4天内就能迅速确定麦种的发芽率。

一、红墨水染色法快速测定小麦、玉米种子生活力的具体方法如下：选取玉米种子100粒、小麦种子200粒，在30℃~35℃温水中浸泡6小时~8小时，使种子充分吸胀。

取吸胀的种子100粒，用刀片沿胚部中线切为两半，其中一半用于测定。

将准备好的半粒种子置于杯中，加入稀释20倍的红墨水溶液，以浸没种子为好。

染色15~20分钟后捞出，用清水冲洗种子，洗去颜色。

观察冲洗后种子胚部着色情况，胚部不着色或略带浅红色者，即为有生命力的种子。

若胚部染成与胚乳相同的深红色，则为无生命力的种子。

依次计算活种子百分率，即为发芽率。

小麦种子发芽率快速测定法1、浸种将小麦种子用28℃～30℃的温水浸泡3～5小时，让种子充分吸收水分膨胀。

2、切取选择具有代表性的种子，用刀片沿麦粒的腹沟切成两半，留取带有胚部的一半作测定之用。

3、染色先配制好5%的红墨水溶液（即将1份红墨水加入19份清水中，混合均匀即成），然后将切取的麦种半片均匀摊在培养器皿或瓷盘中，将红墨水倒入（用量以浸没种子为宜）。

4、冲洗染色5～10分钟以后，将种子取出，用清水反复冲洗数次，直到冲洗后的水不再见到红色为止。

5、观察种子的胚不着色或仅带有浅红色的，即为具有生命力的种子。

如果胚部呈红色，与胚乳着色的程度不同，即表明该小麦种子已经丧失了生命活力，观察时将其拣出。

6、计算数出具有生命力的种子数目，除以供测试种子的总数，即可得出该小麦种子的发芽率。

如果供测试的种子正好是100粒，那么具有生命活力的种子就是该小麦种的发芽率。

种子发芽率快速测定法——————红墨水染色法宝兴县明礼乡朱范刚舒正蓉科技下乡应深入农户种子发芽率是指在最适宜的条件下，在规定的天数内，发芽的种子占供试种子的百分数，它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接相关。

但是常规发芽（直接发芽）方法测定发芽率所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。

实验五、种子活力的快速测定一、实验目的熟悉种子活力快速测定的方法⏹TTC（氯化三苯基四氮唑）法⏹BTB（溴麝香草酚蓝）法⏹红墨水法⏹纸上荧光法二、实验原理⏹TTC（氯化三苯基四氮唑）法二、实验原理⏹红墨水法⏹活细胞的原生质膜具有选择透性，死亡的种胚细胞原生质膜无选择透性；⏹红墨水中的染色成分大红G不能通过选择透性膜，但能通过非选择透性膜。

三、实验材料、器材及试剂⏹材料：小麦种子⏹仪器及器皿：恒温箱，恒温水浴锅，镊子，刀片，培养皿，小烧杯⏹试剂：⏹0.5% TTC溶液（随配随用，若已变为红色则不能继续使用。

）⏹5%红墨水四、实验步骤⏹1、材料准备：将待测小麦种子用30-35℃温水浸种6~8h。

⏹2、切种子：随机取种子30粒以上,用刀片沿种子胚中心线切成两半。

⏹3、染色处理：取一半的种子放在培养皿中，加入染色溶液（刚好浸没种子），30-35℃恒温箱中保温0.5-1h。

⏹4、对照处理：另一半于沸水中煮死，染色同3。

⏹5、结果观察：倒出染色溶液，TTC处理种子用清水将种子冲洗1-2次，红墨水处理种子则用水冲洗至冲洗液无色为止。

观察种胚着色状况。

⏹6、结果验证：随机取种子30粒以上，25℃保温保湿培养，48h检测发芽率。

五、结果与讨论⏹1、计算两种测定法得到的种子发芽率。

统计分析两种测定方法的结果是否有差异。

⏹讨论两种方法有什么不同？你认为哪一种方法测定的结果较好，为什么？⏹2、统计分析种子活力快速测定结果与实际种子萌发结果的差异性。

⏹讨论可能原因。

比较分析种子活力快速测定与种子直接发芽率测定的优缺点。

注意事项⏹TTC处理染色结束后要立即进行鉴定。

凡种胚全部或大部分被染成红色的即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子。

如果种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不能染色都属于不能正常发芽的种子。

⏹红墨水处理后要冲洗充分后观察。

凡种胚不着色或着色很浅的为活种子，凡种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。

实验三十九种子生活力的快速测定种子发芽率是鉴定种子品质的重要标志，在确定播种量以及种子生理研究方面具有重要的作用，常需加以测定。

但一般测定发芽率的方法所需时间长，尤其是对处在深休眠状态的种子，根本无法应用，所以有必要根据活种子的生理特性建立起一套快速鉴定种子生活力的方法，以克服常规方法的缺点。

本实验介绍剥胚法，染色法和荧光法三类方法，可根据具体情况选用。

Ⅰ、剥胚法一、目的掌握用剥胚法测定种子生活力的原理和方法。

二．原理此法适于测定休眠状态的种子的生活力。

种子深休眠的原因很多，有些是因为果皮或种皮的束缚（如不透水、不透气）造成的；也有的在果皮、种皮、胚乳中存在着萌发抑制剂，这类障碍可以用除去果皮、种皮、胚乳或切去一部分子叶的办法克服。

当阻碍萌发的物理或化学因素被排除以后，胚就很快萌发。

三、材料与设备1. 材料：苹果、柑桔的成熟种子或玉米乳熟期籽粒。

2. 设备：培养皿；滤纸；刀片；镊子。

3. 试剂：0.1﹪升汞。

四、实验步骤1. 种子处理取刚从成熟果实中剥出的新鲜柑桔种子300粒，已晒干的柑桔种子100粒，乳熟期新鲜玉米种子200粒，经晒干的乳熟期玉米种子或贮存三年以上的玉米陈种子各100粒，用0.1％升汞消毒后再用水充分洗净，进行以下处理：1.1柑桔新鲜种子，不加处理，作为对照；1.2 柑桔新鲜种子，用镊子小心剥去种皮，留下完整的胚；1.3柑桔新鲜种子，用刀片把种子横切为二，留下带胚根的一半，注意切除部分应不少于种子全长的一半。

1.4晒干的柑桔种子*，处理同1.2；*柑桔种子经晒干后即失去发芽能力。

1.5新鲜乳熟期玉米粒，不加处理作为对照（新鲜乳熟玉米种子粒因胚乳中存在着萌发抑制剂，不能萌发）。

1.6新鲜乳熟期玉米子粒，用镊子小心地将胚剥出。

1.7 晒干的乳熟期玉米子粒，不加处理。

1.8 贮存三年以上的玉米陈子粒，不加处理。

2. 观察测定以上处理完毕，随即将种子或胚整齐地摆在铺有适当大小滤纸的培养皿里，用蒸馏水湿润滤纸，加盖后置30℃左右的温箱中培养，并注意随时补充水分（但不可加水过多，否则易因缺氧而霉烂），从第二天起每天统计发芽种子数，记入下表，连续观察二星期。