植物激素的检测方法

植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。

由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。

目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。

植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式（见下图），一种是在固相载体上直接包被抗体（直接法，先包被二抗，再加一抗），另一种是包被抗原（间接法）。

直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。

间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。

间接法的原理可用下式表示：Ab+H+HP=AbH+AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。

根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H 量的多少。

材料、试剂及设备1 材料各种新鲜植物材料2 仪器设备研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。

3 试剂(1) 包被缓冲液：称取１.５g Na2CO3, 2.93g NaHCO3, 0.2g NaN3（可不加）, 用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为9.6.(2) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4 , 2.96g Na2HPO4 ·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。

植物激素的测定方法植物激素是一类由植物自身合成并参与生长发育调控的活性物质，对植物的生长发育起着重要作用。

因此，准确测定植物激素的含量对于研究植物生长发育调控机制具有重要意义。

本文将介绍几种常用的植物激素测定方法。

一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前应用最广泛的植物激素测定方法之一。

该方法基于植物激素在高效液相色谱柱上的保留时间和峰面积，通过与已知浓度的标准品比较，可以计算出待测样品中植物激素的含量。

高效液相色谱法具有分离效果好、分析速度快、准确度高的优点，但需要专用的仪器设备，操作较为复杂。

二、气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的植物激素测定方法。

该方法通过将待测样品中的植物激素转化为易挥发的衍生物，然后在气相色谱柱上进行分离和定量分析。

气相色谱法具有测定灵敏度高、分离效果好的特点，但需要对样品进行预处理，并且对仪器的稳定性要求较高。

三、酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法是一种常用的免疫学测定方法，也可以用于测定植物激素的含量。

该方法通过将植物激素与特异性抗体结合，然后再用酶标记的二抗进行检测，最后通过比色反应或发光反应来测定植物激素的含量。

酶联免疫吸附法具有操作简便、成本较低的优点，但需要特异性较好的抗体。

四、放射免疫测定法（RIA）放射免疫测定法是一种使用放射性同位素标记的植物激素进行测定的方法。

该方法通过将放射性同位素标记的植物激素与待测样品中的植物激素结合，然后通过放射性计数来测定植物激素的含量。

放射免疫测定法具有灵敏度高、测定范围广的特点，但需要使用放射性同位素，存在辐射危险。

五、质谱法（MS）质谱法是一种高灵敏度的分析方法，可以用于测定微量的植物激素。

该方法通过将待测样品中的植物激素通过质谱仪进行分子质量分析，从而测定植物激素的含量。

质谱法具有高灵敏度、高分辨率的特点，但需要专用的仪器设备和较高的技术水平。

植物激素测定方法有高效液相色谱法、气相色谱法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法和质谱法等。

植物激素检测方法一、什么是植物激素？植物激素是植物体内合成的一系列痕量有机化合物，它在植物的某一部位产生，运输到另一个或一些部位，在极低的浓度下便可引发生理反应，几乎参与了调控植物从种子休眠、萌发、营养、生长和分化到生殖、成熟和衰老的每个生命过程，既可调控植物自身的生长发育，又通过与植物所生存的外部环境互相作用调节其对环境的适应。

通过调控如细胞分裂素、油菜素内酯和生长素等植物激素的代谢可显著地改良作物的株型结构和产量构成，从而大幅度提高作物产量和品质。

植物激素主要包括生长素(auxin)、赤霉素(gibberellin，GA)、细胞分裂素(cytokinin，CTK)、脱落酸(abscisic acid，ABA)、油菜素甾醇类(brassinosteroids，BRs)、茉莉酸(jasmonic acid，JA)及其甲酯(MeJA)、水杨酸类(salicylic acids，SA)、乙烯(ethylene)和多肽激素(peptide hormones)等。

二、检测方法科标生物检测中心可以提供各种植物样品检测服务，中心是通过权威认证的第三方机构，检测后出具权威检测报告。

三、主要分析技术1、生物鉴定法是一类经典的植物激素检测方法，它利用激素作用于植物的组织或器官时产生的特异性反应对植物激素进行测定。

2、免疫检测技术是测定植物激素的常用方法。

该方法是基于抗原和抗体的特异性结合，因此有较好的专一性。

采用放射性元素标记的方法，即放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA)，其检测灵敏度高，重复性好，但对实验条件的要求较高。

3、气相色谱火焰离子化检测法(GC-FID)和气相色谱质谱法(GC-MS)能够对所分析样品进行准确、高灵敏度测量，但由于气相色谱对样品的特殊要求，使得待测组分需具有一定挥发性，因此在植物激素样品的前处理过程中需对样品进行衍生化。

4、高效液相色谱紫外检测法(HPLC-UV)、高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FL)和高效液相色谱质谱检测法(HPLC-MS)也大量用于植物激素的纯化及定量分析，其中MS因为具有良好的选择性和灵敏度，并且能够给出化合物的结构信息，在实际检测中得到了更普遍的运用。

植物激素的hplc测定标准曲线的制作
制作植物激素的HPLC测定标准曲线主要包括以下步骤：
1. 准备工作
- 购买合适纯品植物激素标准品，例如植物生长素（IAA）、生长素酸（IAA）、脱落酸（ABA）等。

- 找到合适的溶剂用于制备标准品的浓度梯度溶液。

一般情
况下，可以选择高纯度的有机溶剂，如甲醇、乙酸乙酯等。

2. 制备标准品溶液
- 使用分析天平称量适量的纯品植物激素到不同容量的瓶中。

- 使用溶剂逐一溶解不同容量瓶中的植物激素，制备出一系
列浓度梯度的标准品溶液。

3. 准备HPLC流动相
- 根据HPLC仪器说明书的要求，配置合适的流动相。

一般
情况下，可以选择有机溶剂和缓冲溶液的混合物作为流动相。

4. 进行HPLC分析
- 调整HPLC仪器的参数，如流速、柱温、检测波长等。

- 依次注入不同浓度的标准品溶液到HPLC仪器中，记录各
自的保留时间和峰面积。

5. 绘制标准曲线
- 将标准品溶液的浓度与相应的峰面积进行线性回归分析。

- 通过线性回归方程计算植物激素在样品中的浓度。

需要特别注意的是，在制作植物激素的HPLC测定标准曲线时，应保证各个工序的操作的高度准确和可重复性。

同时，应注意选择适用的HPLC仪器和柱以及合适的检测波长。

不同的植物激素可能需要不同的分析条件，所以在制作标准曲线之前最好先进行一些预实验以确定最佳的分析条件。

酶联免疫法（ELISA）测定植物激素含量姓名：李希东专业：植物学学号：200808201 日期：09.5.10 成绩：一、实验目的：掌握间接法测定植物激素的原理和方法；了解逆境对玉米根系ABA和IAA含量的影响。

二、实验原理：酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbert assay，简称ELISA)是在免疫酶技术(immuno enzymite technique)的基础上发展起来免疫测定技术。

其建立在两个重要的生物化学反应基础之上的，即①抗原抗体反应的高度专一性和敏感性；②酶的高效催化特性。

ELISA把这二者有机地结合在一起，即被分析物先与其相应的抗体或抗原反应，然后再检测抗体或抗原上酶标记物的活性，从而达到定性或定量测定的目的。

间接法是将过量的与蛋白质连接的待测植物激素(实验前将该激素与牛血清白蛋白等蛋白质连接成[激素一蛋白质复合物])吸附在固相支持物上，然后加入待测植物激素和相应抗体，使抗体与待测植物激素及激素蛋白质复合物结合，再加入酶标抗体(标记酶与非特异第二抗体的复合物)，就形成〔蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物〕，加入底物后就生成有色产物，测定其吸光率，可计算待测抗原的量。

如果抗体、激素一蛋白质复合物和酶标抗体的量一定，并且[激素·蛋白质复合物]和待测激素的总量超过抗体的量，那么生成的[蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物]的量就受待测激素含量的限制，因此待测抗原的量将与吸光率成反比。

图A表示间接酶联免疫方法的基本原理：A.间接酶联免疫原理示意图示反应板（固相载体）示激素特异抗体（一抗）示激素（抗原）示非特异二抗示蛋白质·激素复合物示标记酶本实验所采取的方法，则是利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体的竞争性结合反应，它的原理可用下式表示:Ab十H十HP=AbH十AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素一蛋白质复合物。

植物激素类检测植物激素是由植物自身代谢产生的一类有机物质，会从产生部位移动到作用部位，在极低浓度下就有明显生理效应的微量物质，也称为植物天然激素或植物内源激素。

它是植物细胞接受特定环境信号诱导产生的、低浓度时可调节植物生理反应的活性物质。

在细胞分裂与伸长、组织与器官分化、开花与结实、成熟与衰老、休眠与萌发以及离体组织培养等方面，分别或相互协调地调控植物的生长发育与分化。

常见的植物激素有五类，生长素类、赤霉素类(GAs)、细胞分裂素类(CTKs)、乙烯(ETH)和脱落酸(ABA)。

前三类都是促进生长发育的物质，脱落酸是一种抑制生长发育的物质，而乙烯则主要是一种促进器官成熟的物质。

植物激素的离子色谱图植物激素的二级全扫描质谱图迪信泰检测平台采用液质联用(HPLC-MS或LC-MS/MS)的方法，常用Thermo Scientific的U3000快速液相色谱对样品进行分离，随后采用Thermo Scientific™ Q Exactive™对样品进行鉴定，可以高效、精准的检测植物激素的含量变化。

目前可检测的植物激素包括吲哚乙酸(IAA)、玉米素（ZR）、赤霉素（GA3)、脱落酸（ABA)等。

对于常见激素或以上激素的同类物质，可结合标样进行检测，对于稀有的激素分子，如提供标准样品，迪信泰检测平台可提供定制检测。

此外，我们还提供HPLC测定植物激素的服务，以及植物激素系列检测试剂盒产品，以满足您的不同需求。

植物激素类检测项目玉米素（ZA）检测赤霉素（GA）检测吲哚乙酸（IAA）检测脱落酸（ABA）检测水杨酸（SA）检测茉莉酸（JA）检测生长素（Auxin）/植物生长激素检测细胞分裂素（CTK）检测玉米素核苷（ZR）/反式玉米素核苷（TZR）检测吲哚丁酸（IBA）/吲哚-3-丁酸检测6-苄氨基腺嘌呤/6-苄氨基嘌呤（6-BA）检测激动素（KT）检测萘乙酸（NAA）检测异戊烯基腺嘌呤（IP/2ip）检测异戊烯基腺嘌呤核苷（IPA/2ipr）检测结合吲哚乙酸检测结合脱落酸检测水杨酸甲酯（MESA）检测茉莉酸甲酯（MeJA）检测油菜素内酯/芸苔素/油菜素甾醇（BR/BL）检测独角金内酯（SLs）检测褪黑素(MT)/褪黑激素/褪黑色素检测样品制备激素提取方法（此部分涉及到公司的核心工艺，以下提供常规的提取工艺）1）称量约0.5 g的新鲜植物样品；2）液氮研磨至粉碎；3）加入5 mL异丙醇/盐酸缓冲液，4℃震荡30 min；4）加入10 mL二氯甲烷，4℃震荡30 min；5）4℃，13000 rpm离心5 min，取下层有机相；6）避光，氮气吹干有机相，用250 μL-500 μL甲醇(0.1%甲酸)溶解；7）0.45 μm的微孔滤膜过滤，用HPLC-MS/MS检测。

高效液相色谱法快速分析植物内源性激素植物内源性激素在植物生长和发育过程中起着重要的调节作用。

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种先进的分析技术，被广泛地用于植物内源性激素的定量分析和研究。

通过快速、准确地分析植物内源性激素，我们可以深入了解植物的生长和发育调控机制，为农业生产和植物育种提供重要的理论指导和实践应用。

一、植物内源性激素的概述植物内源性激素是一类在植物体内合成和调节生长发育的化合物，包括生长素、赤霉素、脱落酸、激素酮、保护素和亚硫酸氨基酸等。

它们在调节植物生长和发育过程中发挥着不可或缺的作用，如控制细胞分裂和伸长、调节根系和茎的形态发育、调控开花和果实发育等。

了解植物内源性激素的合成、分布和调控机制对于揭示植物的生长发育规律具有重要意义。

二、高效液相色谱法在植物内源性激素分析中的优势高效液相色谱法是一种在液相中进行分离和测定的分析技术，具有分离能力强、选择性好、分析速度快以及样品处理简单等优点，因此被广泛应用于植物内源性激素的定量分析中。

与传统的色谱方法相比，高效液相色谱法具有以下几个优势：1.分离能力强：高效液相色谱法能够有效地将混合样品中的激素物质分离出来，得到高纯度的化合物。

这一点对于复杂的植物组织和生理液体样品分析尤为重要。

2.选择性好：高效液相色谱法能够通过调整色谱柱、流动相和检测器等条件，实现对不同内源性激素的选择性分离和测定，从而提高了分析的准确性和可靠性。

3.分析速度快：高效液相色谱法具有快速分析的特点，一般可以在几分钟到几十分钟内完成一次分析，提高了实验效率。

4.样品处理简单：高效液相色谱法在样品处理时通常只需简单的提取和净化步骤，可以大大简化实验过程，提高了实验效率。

三、高效液相色谱法快速分析植物内源性激素的方法高效液相色谱法快速分析植物内源性激素的方法主要包括激素提取、净化和检测。

根据不同植物内源性激素的特性和含量，可以选择不同的样品处理方法和色谱条件。