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一种低温_淀粉酶的酶学性质研究_闫祥洲

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日粮中添加低温淀粉酶对仔猪生长性能的影响

日粮中添加低温淀粉酶对仔猪生长性能的影响

日粮中添加低温淀粉酶对仔猪生长性能的影响闫祥洲;高研;吴勃;刘金爱;孔祥凯【期刊名称】《饲料工业》【年(卷),期】2015(0)S2【摘要】试验旨在研究一种新型的低温淀粉酶对仔猪生长性能的影响。

选用28日龄胎次、体重接近的健康仔猪200头(公母各半),采用随机分组方式分成试验组和对照组,每组4个重复,每个重复25头仔猪,试验期20 d。

试验期间,试验组日粮在对照组日粮基础上添加低温淀粉酶500 g/t。

结果表明,试验组仔猪平均净增重比对照组高590 g,提高了9.91%(P>0.05);平均日增重比对照组高30 g,提高了10.07%(P>0.05);料肉比比对照组降低0.14,降低了8.75%。

经济效益分析表明,日粮中添加低温淀粉酶饲养20 d试验组比对照组多盈利7.83元/头。

【总页数】3页(P31-33)【关键词】低温淀粉酶;仔猪;生产性能【作者】闫祥洲;高研;吴勃;刘金爱;孔祥凯【作者单位】河南省农业科学院;杭州保安康生物技术有限公司;江苏盐城温氏畜牧有限公司【正文语种】中文【中图分类】S828.5【相关文献】1.日粮中添加微生态制剂对断奶仔猪生长性能、肠道健康和由F18+大肠杆菌引起的仔猪腹泻的影响 [J], 李亚雄;仇正兴2.日粮中添加低温淀粉酶对蛋鸡生产性能的影响 [J], 晏桂芳3.日粮中添加过氧化氢酶对断奶仔猪生长性能、肠道形态及抗氧化性能的影响 [J], 方锐;左建军;凌宝明;夏旻灏;叶慧;曹庆云;刘志国;张志东;冯定远4.日粮中钙磷水平、植酸酶的添加对断奶仔猪生长性能、骨的性状、营养物质表观消化率及矿物质、氮的利用率和生长肥育阶段骨性状的影响 [J],5.日粮中添加胍基乙酸对断乳仔猪生长性能及抗氧化性能的影响 [J], 闻爱友;胡洪;吴学壮;白晰;孙宜新因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一种低温α-淀粉酶的酶学性质研究

一种低温α-淀粉酶的酶学性质研究

一种低温α-淀粉酶的酶学性质研究
闫祥洲;刘金爱;吴勃;杜晓阳;陈敏杰;何俊佳
【期刊名称】《饲料工业》
【年(卷),期】2014(35)6
【摘要】经分离纯化及诱变育种得到1株低温α-淀粉酶高产菌株。

研究结果表明,该菌株产生的酶是一种内切型淀粉酶,最适作用温度为50℃,最适作用pH值为5.2。

该酶具有较好的耐热性和耐酸性,经85℃高温制粒,酶活存留率达88.1%;用pH值4.0的乙酸-乙酸钠缓冲液处理4 h后,酶活存留率达90%以上。

体外模拟耐胃蛋白酶试验,证明胃蛋白酶对该低温α-淀粉酶无影响。

对酶解产物进行分析,分子量集中在5 000以下,比例达到70.26%。

【总页数】3页(P15-17)
【关键词】低温α-淀粉酶;酶学性质;酶解产物
【作者】闫祥洲;刘金爱;吴勃;杜晓阳;陈敏杰;何俊佳
【作者单位】河南省农业科学院;杭州保安康生物技术有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】Q55
【相关文献】
1.海洋低温淀粉酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究 [J], 周新尚;逄飞;窦少华;乔慧;迟乃玉
2.低温淀粉酶菌株C2的分离鉴定及其产低温淀粉酶的酶学性质 [J], 冯旭明;迟乃
玉;张庆芳
3.产低温淀粉酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质初步研究 [J], 王继莲;李明源;宋保健;古丽巴哈尔·萨吾提
4.南极磷虾产低温淀粉酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究 [J], 王文娟; 刘志东; 宁喜斌
5.低温淀粉酶菌株分离及其酶学性质研究 [J], 王翔;沈盼盼;周玉玲;张桂敏
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一种来自真菌的低温α-淀粉酶及其编码基因与应用[发明专利]

一种来自真菌的低温α-淀粉酶及其编码基因与应用[发明专利]

专利名称：一种来自真菌的低温α-淀粉酶及其编码基因与应用专利类型：发明专利
发明人：高蓓,魏东芝,毛佑志
申请号：CN201410261362.6
申请日：20140612
公开号：CN104178471A
公开日：
20141203
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供的来自真菌的低温α-淀粉酶是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由SEQ ID NO.19所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将SEQ ID NO.19的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有α-淀粉酶功能的由(a)衍生的蛋白质。

本发明提供的编码基因是如下(1)或(2)的脱氧核糖核苷酸：(1)具有SEQ ID NO.17的所示核苷酸序列；(2)具有SEQ ID NO.18所示核苷酸序列。

本发明提供的重组宿主细胞包括具有上述编码基因的重组表达载体。

根据本发明的α-淀粉酶最适温度为40℃，比常温淀粉酶低10℃左右，且低温适应性好，在0～30℃仍保持最高活力20％以上，在洗涤剂和纺织退浆中有巨大的应用前景。

申请人：华东理工大学
地址：200237 上海市徐汇区梅陇路130号
国籍：CN
代理机构：上海智信专利代理有限公司
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Bacillus subtilis UN13产α-淀粉酶酶学性质研究

Bacillus subtilis UN13产α-淀粉酶酶学性质研究

Bacillus subtilis UN13产α-淀粉酶酶学性质研究温拥军;游玟娟;冯刚利;李拥军【期刊名称】《中国调味品》【年(卷),期】2009(034)012【摘要】对Bacillus subtilis UN13所产生的α-淀粉酶酶学性质进行初步研究.结果表明:该酶是一种中温酸性α-淀粉酶;其最适温度为50 ℃,在40～60 ℃范围内稳定性较好;最适pH为5.5,在pH值为5.0～7.5范围内较稳定;Ca2+和Mn2+对该酶有激活作用, Cu2+,Zn2+,K+和EDTA 则抑制该酶的活性;动力学研究表明该酶的Km值为1.7039 mg/mL,Vmax值为3.1615 mg/min·mL.【总页数】4页(P64-66,69)【作者】温拥军;游玟娟;冯刚利;李拥军【作者单位】湖南化工职业技术学院,湖南,株洲,412004;湖南化工职业技术学院,湖南,株洲,412004;湖南中医药高等专科学校,湖南,株洲,412000;中山市农产品质量监督检验检测中心,广东,中山,528403【正文语种】中文【中图分类】TS201.25【相关文献】1.Bacillus subtilis LC-9产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质与催化特性研究 [J], 刘娟娟;吴斌;何冰芳2.枯草杆菌(Bacillus subtilis)产果胶酶的研究Ⅰ.菌种选育、鉴定及其酶学特征分析[J], 章银梅;李心治;黄凡;张宇;范树田3.重组Bacillus subtilis产麦芽四糖淀粉酶的发酵优化及麦芽四糖制备 [J], 杨亚楠;宿玲恰;吴敬4.Bacillus siamensis和Bacillus subtilis中2个β-D-葡萄糖苷酶编码基因克隆、表达及酶学研究 [J], 陈永敢; 谷风林; 蔡莹莹; 徐飞; 朱科学5.Bacillus sphaericus DS11蛋白酶基因osp在Bacillus subtilis的异源表达及酶学性质研究 [J], 柴金龙; 胡晟源; 陈丽; 王淑军; 焦豫良; 杨杰; 刘姝; 房耀维因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

低温淀粉酶

低温淀粉酶

低温淀粉酶低温淀粉酶是一种在低温条件下活性较高的酶类。

它在生物学和工业领域中具有广泛的应用价值。

本文将介绍低温淀粉酶的特点、应用以及相关研究进展。

低温淀粉酶是一类能够在较低温度下催化淀粉水解反应的酶。

与常规淀粉酶相比，低温淀粉酶在低温条件下具有更高的催化活性和稳定性。

这使得低温淀粉酶在食品加工、酿造业、纺织业等领域中得到广泛应用。

在食品加工中，低温淀粉酶可以用于制备低温糊化淀粉。

低温糊化淀粉具有较好的稳定性和增稠性，可用于制作各种食品，如果冻、酱料和乳制品。

此外，低温淀粉酶还可以用于制备低温糖化麦芽，用于啤酒酿造过程中，可以提高麦芽的糖化效率和酒液的发酵速度。

在纺织业中，低温淀粉酶可以用于纺织品的脱胶处理。

传统的脱胶方法需要高温和强酸碱条件，而低温淀粉酶可以在较低的温度下有效去除纺织品上的淀粉胶粘物，减少对环境的污染。

低温淀粉酶还在环境保护和生物能源领域中发挥着重要作用。

研究人员发现，低温淀粉酶可以在低温条件下降解植物纤维素，从而提高生物质能源的利用效率。

这对于解决能源短缺和减少化石燃料的使用具有重要意义。

近年来，关于低温淀粉酶的研究也取得了一些进展。

研究人员通过对低温淀粉酶的结构和功能进行深入研究，揭示了其在低温条件下高活性的机制。

此外，还有研究表明，通过基因工程技术可以改造低温淀粉酶的催化性能，进一步提高其在工业生产中的应用效果。

低温淀粉酶作为一种在低温条件下活性较高的酶类，在食品加工、纺织业、环境保护和生物能源等领域中具有广泛的应用前景。

随着对低温淀粉酶研究的深入，相信它将在未来发挥更大的作用，为人类的生活和工业生产带来更多的便利和效益。

低温淀粉酶最适温度

低温淀粉酶最适温度

低温淀粉酶最适温度
低温淀粉酶是一种在低温下活性较高的酶类，其最适温度一般在20℃左右。

这种酶类在生物学、食品工业、医药等领域都有着广泛的应用。

低温淀粉酶最适温度的研究是为了更好地利用这种酶类的特性。

在生物学领域，低温淀粉酶的研究可以帮助我们更好地了解生物体内酶类的活性和适应性。

在食品工业中，低温淀粉酶可以用于制作低温发酵面包、酸奶等产品，这些产品不仅口感好，而且更加健康。

在医药领域，低温淀粉酶可以用于制备药物，如肝素、抗生素等。

低温淀粉酶最适温度的研究需要考虑多个因素，如酶的来源、酶的结构、酶的催化机理等。

在实验中，可以通过测定酶的活性来确定最适温度。

一般来说，酶的活性随着温度的升高而增加，但是当温度过高时，酶的活性会受到破坏，因此需要确定最适温度，以保证酶的活性和稳定性。

低温淀粉酶最适温度的研究对于酶类的应用和开发具有重要意义。

通过研究酶的最适温度，可以更好地利用酶的特性，提高酶的活性和稳定性，从而实现更好的应用效果。

同时，这也为酶类的研究提供了新的思路和方法，有助于推动酶类研究的发展。

低温淀粉酶最适温度的研究是一个重要的课题，对于酶类的应用和开发具有重要意义。

我们需要进一步深入研究酶的结构和催化机理，
探索更好的应用方法和开发途径，为酶类的应用和研究做出更大的贡献。

淀粉酶酶学性质的研究

淀粉酶酶学性质的研究摘要淀粉酶可将淀粉水解为麦芽糖和少量葡萄糖，它们遇碘呈现不同的颜色，根据这个性质对淀粉酶进行不同条件下的研究。

通过在不同条件下对酶的性质进行研究发现萌发小麦种子中淀粉酶的最适温度在40℃，随着温度的升高或降低都会对酶活性产生影响；萌发的小麦种子的淀粉酶最适pH在5.6左右，低于或高于最适pH酶的活性逐渐降低；研究还发现Cl¯是淀粉酶的激活剂而Cu²+则对淀粉酶有抑制作用。

关键词：淀粉酶 .不同条件性质淀粉是植物最主要的储藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。

淀粉经淀粉酶水解后生成葡萄糖和麦芽糖等小分子物质而被机体利用。

通过对小麦种子中淀粉酶酶学性质的研究可以用于农业研究用于食品¸工业原料等，还可以提高小麦的应用范围和利用率。

⒈材料与方法⒈⒈实验材料萌发的小麦种子⒈⒉实验设计称取2g萌发3天的小麦种子，置于研钵中，加入少量2ml蒸馏水，研磨匀浆。

将匀浆倒入刻度试管中，定容至25ml。

提取液在室温下放置提取15-20min，每隔数分钟搅动一次，使其充分提取。

然后在4000r/min转速下离心10min，将上清液倒入一个干净的试管中，即为淀粉酶粗酶液。

⒈⒊实验方法与结果⒈⒊⒈温度对淀粉酶活性的影响取8支试管，编号，按下表操作，并记录观察到的颜色。

管号 A a B b C c D d缓冲液（pH5.6）/ml 1.0 — 1.0 — 1.0 — 1.0 —淀粉溶液/ml 2.5 — 2.5 — 2.5 — 2.5 —淀粉酶提取液/ml — 1.0 — 1.0 — 1.0 — 1.0预保温/10min 4℃室温40℃沸水浴混合A→a B→b C→c D→d酶促反应（10min）4℃室温40℃沸水浴碘液各加3滴（滴管应先冷却至室温）显色浅蓝色无色无色蓝色低温时酶的活性低，但没有失活，随着温度升高，酶的活性越来越高，后来又降低当温度到达很高时酶失活。

低温α-淀粉酶

低温α-淀粉酶
低温α-淀粉酶（Low-temperature α-amylase）是一种能在较低温度下活性的α-淀粉酶。

这类酶通常能够在相对较低的温度范围内（一般在10°C到40°C之间）保持其催化活性，因此对于一些需要在低温条件下进行生产或处理的工业应用具有重要意义。

以下是低温α-淀粉酶的一些特点和应用领域：
1.活性温度：低温α-淀粉酶的活性温度一般在较低的范围内，
适合在低温环境下进行工业生产。

2.来源：这类酶可以从一些适应低温环境的微生物中提取，例如
一些生活在寒冷环境的细菌或真菌。

3.食品工业：低温α-淀粉酶在食品工业中有一些应用，例如在
低温条件下制备一些涉及到淀粉降解的食品制品，如糖浆和面粉的加工。

4.酿酒工业：在啤酒酿造等过程中，低温α-淀粉酶可以用于麦
芽中淀粉的降解，有助于发酵过程的进行。

5.生物燃料生产：在生物质降解和生物燃料生产的过程中，低温
α-淀粉酶的活性温度范围可能更适合在低温条件下操作。

6.洗涤剂生产：低温α-淀粉酶也可能用于洗涤剂的生产，尤其
是那些需要在低温下进行的洗涤工艺。

这些特性使得低温α-淀粉酶在一些需要低温工艺的工业领域中具有潜在的应用前景。

不同的酶可能有不同的特性，因此在具体应用中需要选择适合特定条件的酶。

低温淀粉酶

[14]Mario Carrasco, Jennifer Alcaíno, Víctor Cifuentes, et al. BaezPurification and characterization of a novel cold adapted fungal glucoamylase[J].Microb Cell Fact,2017,(16): 75.
目前国内已筛选到多种产低温淀粉酶的菌种，张刚等（2002）自黄、东海分离到野生青霉菌Penicillumsp. FS010441，其分泌的淀粉酶最适反应温度为40℃。范红霞等（2009）自南极土壤分离到的微球菌（Micrococcus antarcti⁃cus）所产α-淀粉酶最适作用温度为30℃。孙子羽等（2010）自渤海湾海泥中分离得到一株产低温生淀粉糖化酶能力较强的气单胞菌属菌株，所产低温生淀粉糖化酶最适反应温度为30℃[20]。师永生等(2011)克隆了蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）GXBC-1的低温淀粉酶基因，重组蛋白最适反应温度为35℃[12]。齐兴娥等（2013）自天山1号冰川底部沉积层分离到产低温淀粉酶菌株Hymenobactersp.。从江布拉克冰川冻土中筛选到的高产低温淀粉酶菌株Pseudomonassp. D5-2，酶的最适作用温度为25℃。楚敏等（2014）获得低温菌株气单胞菌属LA77的低温淀粉酶基因及其生物学信息[21]。公颖卓等（2015）从秦皇岛海蟹样本获得一株高产低温α-淀粉酶的菌株，经鉴定为许旺酵母（Schwanniomyces），该酶的最适作用温度为35℃[2]。河北学者李青杨等人在东北地区也筛选到了能产低温淀粉酶的丁酸梭菌，该菌株所产的低温淀粉酶最适反应温度为35℃左右，属典型的低温淀粉酶。习彦花等（2016）前期筛选得到1株耐低温兼性厌氧淀粉酶产生菌Y89[22]。窦少华等（2017）从大连黄海海泥中分离出一株低温淀粉酶高产菌苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis），发酵粗酶液最适作用温度为20℃，属于低温酶[23]。周新尚等（2017）从大连黄海海泥和海水中分离到菌株荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）ZXS-5，其所产淀粉酶的最适反应温度为25℃[24]。

腊样芽孢杆菌低温淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究

腊样芽孢杆菌低温淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究师永生;谢建华;吴磊;杜丽琴;黄日波;韦宇拓【期刊名称】《工业微生物》【年(卷),期】2011(41)2【摘要】A cold-adapted amylase-generated bacterium GXBC-1 was isolated from starch-pile by dilution method , which was preliminarily identified as Bacillus cereus . CXBC-1 . Amylase gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR) . Nucleotide sequence analysis showed that the amyGXBC-1 gene was composed of 1764 bp (588 amino acid residues with Mw of 64 kD) . The characteristics of the cold-adapted amylase were also discussed .The optimum temperature for the amylase was 35℃ and the optimum pH was 7.0. Even at 20℃, the enzyrue still showed 53％enzyme activity .But the amylase was not stable above 50℃. Its Km was 0.72 mg/mL . The results of HPLC of products from starch demonstrated that this enzyme, without the activity of incision enzyme , should be classified as (β-arnylase .%从废弃的淀粉堆中筛选到一株产低温淀粉酶的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)GXBC-1,通过同源保守序列比对,从中克隆到一个淀粉酶基因.该基因全长为1764bp,编码588个氨基酸,分子量约为64kD.将基因克隆到大肠杆菌进行表达及酶学性质研究,该重组酶最适温度为35℃,在20℃仍具有53%的活力;最适pH值为7.0,Km值为0.72 mg/mL.产物经HPLC分析,该酶没有内切酶活性,具有典型的β-淀粉酶特性.【总页数】5页(P32-36)【作者】师永生;谢建华;吴磊;杜丽琴;黄日波;韦宇拓【作者单位】广西大学,广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,广西南宁,530005;广西大学,广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,广西南宁,530005;广西大学,广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,广西南宁,530005;广西大学,广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,广西南宁,530005;广西大学,广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,广西南宁,530005;广西大学,广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,广西南宁,530005【正文语种】中文【相关文献】1.温泉来源地芽孢杆菌耐热α-淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究 [J], 林云;林娟;王国增;林梦丹;叶秀云2.深海细菌太平洋火色杆菌中α-淀粉酶基因 amy608的克隆表达及其酶学性质研究 [J], 商谢谢;蔡亚萍;金敏;曾润颖3.深海细菌太平洋火色杆菌中α-淀粉酶基因amy608的克隆表达及其酶学性质研究 [J], 商谢谢;蔡亚萍;金敏;曾润颖;4.碱性α-淀粉酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达及酶学性质研究 [J], 金辉;廖思明;王青艳;刘筱梦;黄日波5.来源于Laceyella sp.的α-淀粉酶基因克隆、重组表达及酶学性质研究 [J], 赵海燕;宋晨斌;刘正亚;马兴荣;尚会会;李安华;关现军;王建设因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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2.2.6 HPLC 对酶解产物的分析
取一定量 5%的淀粉溶液，预热保温 40 ℃，加入
一定量的低温淀粉酶，控制反应时间为 30 min，然后
沸水浴 5 min 使酶失活，微孔膜过滤后，利用 HPLC 分
析样品中各物质的分子量分布，图谱峰见图 6。
淀粉是单胃动物能量的主要来源，其供能占总能 量需求的 60%～80%。幼龄动物消化系统发育不成 熟，淀粉酶分泌不足，限制了淀粉的消化吸收。随着 动物日粮配方的富营养化、饲养条件应激和环境污染 问题越来越突出，成年健康动物添加“外源性营养消 化酶”的作用也越来越明显，意义也越来越大。通过 添加外源性淀粉酶来提高饲料淀粉的消化吸收，对于 提高动物生产性能、节约饲料资源意义重大。
作者简介：闫祥洲，副研究员，研究方向为动物营养。 通讯作者：吴勃。 收稿日期：2014-02-03
度比中温淀粉酶要低 20~30 ℃，因此，研究开发低温 淀粉酶对饲料用酶而言具有重要意义。
饲用淀粉酶应具备以下几个条件：在动物体温 （37~42 ℃）的温度条件下能发挥高的活性；最适 pH 值与消化道内食糜的 pH 相一致；对淀粉有高的酶解 效率（内切酶）；具有良好的稳定性（在饲料高温制粒 过程中的稳定性、保存过程中的稳定性以及在动物消 化道中对胃酸、胃蛋白酶、胰蛋白酶、金属离子等的耐 受性）[7]。本研究根据饲用α-淀粉酶的所需条件，对 低温α-淀粉酶的酶学性质进行了研究，为饲料专用淀 粉酶的开发提供参考。 1 材料和方法 1.1 菌种
从采集到的样品中分离纯化并经诱变育种得到。 1.2 培养基
固体发酵培养基组成：麸皮 50%、大豆粉 25%、玉 米粉 15%、玉米芯 7%、葡萄糖 2%、酵母膏 0.35%、Mg⁃ SO4 0.04%、KH2PO4 0.1%、CaCl2 0.01%、NH4Cl 0.5%。 1.3 药品和试剂
15
酶制剂
物进行分析，分子量集中在 5 000 以下，比例达到 70.26%。
关键词：低温α-淀粉酶；酶学性质；酶解产物
doi:10.13302/ki.fi.2014.06.004
中图分类号：Q55
文献标识码：A
文章编号：1001-991X（2014）06-0015-03
Screening and identification of cold-active α- amylase and its amylase characterization
将制得的酶液分别用 pH 值 3.5、4.0、4.5 的乙酸乙酸钠缓冲液处理 0、1、2、3、4 h，测定淀粉酶活力，结 果如图 4 所示。
酶活百分比(%)
120
100
80
60
40
pH 值 3.5 pH 值 4.0
20
pH 值 4.5
0
1
2
3
4
时间(h)
图 4 低温淀粉酶的耐酸性
用 pH 值 3.5 的乙酸-乙酸钠缓冲液处理 4 h 后，淀 粉酶活力存留 80%以上，经 pH 值 4.0 的乙酸-乙酸钠 缓冲液处理 4 h 后，淀粉酶活力存留 90%以上，说明该 淀粉酶耐酸性良好。 2.2.5 体外模拟耐胃蛋白酶试验
的酶是一种内切型淀粉酶，最适作用温度为 50 ℃，最适作用 pH 值为 5.2。该酶具有较好的耐热性和
耐酸性，经 85 ℃高温制粒，酶活存留率达 88.1%；用 pH 值 4.0 的乙酸-乙酸钠缓冲液处理 4 h 后，酶活
存留率达 90%以上。体外模拟耐胃蛋白酶试验，证明胃蛋白酶对该低温α-淀粉酶影响。对酶解产
16
2014 年第 35 卷第 6 期 总第 459 期
SILIAO GONGYE
酶活百分比(%)
100
80
60
40
20
0
2
3
4
5
6
7
8
pH 值
图 2 pH 值对酶活的影响
酶活百分比(%)
120 100 80 60 40 20
0
1
2
3
4
5
时间(h)
图 5 耐胃蛋白酶试验
酶活(U/g)
700
600
500
was 88.1%;Using buffer solution of cetic acid and sodium acetate with pH 4.0, the livability of the en⁃
zyme was more than 90%.The test of pepsin resistance proved that the pepsin has no effect to α-amy⁃
2014 年第 35 卷第 6 期 总第 459 期
1.3.1 0.05 mol 硫代硫酸钠 将 13 g Na2S2O3·5H2O 和 0.1 g 无水碳酸钠溶解
定容至 1 000 ml。 1.3.2 费林试剂
铜溶液：硫酸铜34.66 g 溶解在水中，定容至500 ml。 酒石酸钾钠碱溶液：酒石酸钾钠 173 g 和氢氧化 钠 50 g 溶解在水中，定容至 500 ml。 使用前，精确地取等体积的铜溶液和碱液充分混合。 1.3.3 1 mol/l 乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH 值 5.0） 1 mol/l 乙酸钠溶液：三水合乙酸钠溶解在水中， 定容至 250 ml；1 mol/l 乙酸溶液：冰乙酸 15 ml 溶解在 水中，定容至 250 ml；将 1 mol/l 乙酸钠溶液加入到 1 mol/l 的乙酸溶液中，调 pH 值至 5.0。 1.3.4 30%碘化钾溶液 将碘化钾 150 g 溶解于 350 ml 水中，保存在褐色 试剂瓶中，避免阳光直射。 1.3.5 25%硫酸溶液 硫酸 125 g 溶于 373 ml 水中。 1.3.6 可溶性淀粉溶液（pH 值 5.0） 将可溶性淀粉（试剂级）在 105 ℃干燥 4 h 后称量 计算含水量。然后，根据可溶性淀粉的含水量称取 0.5 g（折干）的可溶性淀粉，缓慢加入到 50 ml 水中，煮 沸 5 min，用自来水冷却后，加入 1 mol/l 乙酸-乙酸钠 缓冲溶液（pH 值 5.0）5 ml，用水定容至 100 ml。 1.4 低温淀粉酶活力的测定方法 将可溶性淀粉溶液加到 100 ml Erlenmyer 三角瓶 中，置于（40±0.5）℃恒温水浴中。预热10~15 min,加入样 品稀释酶液，准确加热 30 min 后。加入费林试剂使酶 失活。将三角烧瓶直接在煤气喷灯（或电炉）上加热 2 min 后，立即放在自来水中冷却。随后，加入 30%碘 化钾溶液和 25%硫酸溶液，用 0.05 mol/l 硫代硫酸钠溶 液滴定游离出的碘，以蓝色消失作为滴定终点 T3（0 ml）。 空白对照试验：以水取代酶液。在另一个三角烧 瓶中用上述同样的操作步骤测定空白对照值 T0，临近 终点时，加入 1%可溶性淀粉溶液 1~2 滴，以蓝色消失 作为滴定终点。 酶活力单位定义为：1 g 固体酶粉（或 1 ml 液体 酶），于 40 ℃、pH 值 5.0 条件下，反应 30 min，反应液中 产生相当于 10 mg 葡萄糖的还原糖所需的酶量为 1 个 酶活力单位。 淀粉酶活力（U/ml）=（T0-T30）×f×1.62×1/10×n 式中：T30——酶反应液滴定消耗硫代硫酸钠标准溶液
的体积(ml)；
酶活百分比(%)
T0——空白溶液滴定消耗硫代硫酸钠标准溶液 的体积(ml)；
f——0.05 mol硫代硫酸钠溶液浓度的校正系数； 1.62——换算系数； 1/10——该分析方法的常数（相当于 10 mg 葡萄
糖的还原糖）； n——样品的稀释倍数。 2 试验结果 2.1 产酶菌株的发酵培养与活力检测 在固体发酵培养基中添加不同的碳、氮源及微量 的无机盐，将经过筛选和育种得到的菌株接入固体发 酵培养基中，30 ℃培养 50 h。烘干、粉碎后测定低温 淀粉酶活力，发现固体发酵培养基为麸皮 50%、大豆 粉 25%、玉米粉 15%、玉米芯 7%、葡萄糖 2%、酵母膏 0.35% 、MgSO4 0.04% 、KH2PO4 0.1% 、CaCl2 0.01% 、 NH4Cl 0.5%时，酶活高达 3 820 U/g。 2.2 酶学性质的研究 2.2.1 低温α-淀粉酶作用温度的研究 在 pH 值 5.0 的酶活测定反应体系中，分别在 25、 30、35、40、45、50、55、60 ℃温度下测定酶活，温度对 酶活的影响如图 1。
由图 2 可知，该低温淀粉酶最适作用 pH 值为 5.2， 在 pH 值 4.0～6.0 之间均有较高的酶活。 2.2.3 低温α-淀粉酶的热稳定性
为了准确评估低温淀粉酶经饲料高温制粒后的实 际存留率，本试验在饲料中添加 20%的低温α-淀粉酶， 然后进行 85 ℃高温制粒后进行评估，试验结果见图 3。
line separation. Enzymatic properties of the strain will be determined. The enzyme has good heat resis⁃
tance and acid resistance, to granulate through 85 ℃ high temperature, the livability of the enzyme
Yan Xiangzhou, Liu Jin'ai, Wu Bo, Du Xiaoyang, Chen Minjie, He Junjia
Abstract：Strain producing cold-active α-amylase want to be isolated through spread platemethod and
目前饲料专用淀粉酶的研究开发较少，一般均采 用食品加工、化纤、印染等工业用酶。中温α-淀粉酶 是饲料工业中应用最多的淀粉酶，其最适作用温度为 70~80 ℃，pH 值 5.0 以下失活严重。动物生理环境温 度一般为 37~42 ℃，胃内 pH 值较低，中温淀粉酶在动 物消化道内发挥作用甚微。低温淀粉酶最适作用温