DNA的提取及含量测定实验
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植物dna提取实验报告
植物dna提取实验报告植物基因组研究已经成为生物学的一个重要分支，特别是在农业生产和生态环境保护方面。
在这个研究领域中，植物DNA提取是基础且必不可少的一步。
本文将详细介绍植物DNA提取实验的过程、步骤和注意事项。
一、实验材料和仪器本实验所需材料和仪器如下：植物样品、溶解缓冲液、提取缓冲液、酒精、异丙醇、洗涤盐溶液、碱性蛋白酶、液氮、离心机、温水浴、电泳仪、比色皿等。
二、实验步骤1. 样品准备首先，选取新鲜植物样品，清洗并研磨成粉末。
为了提高DNA的纯度，应尽量避免样品中的杂质和污染。
2. DNA提取将研磨后的样品加入提取缓冲液中，并加入适量的洗涤盐和碱性蛋白酶，混匀后加入异丙醇，离心分离DNA。
将得到的上清液加入溶解缓冲液中，使用离心机将DNA沉淀至底部。
上清液中的DNA可以通过多次酒精沉淀提高回收率。
3. DNA纯化将得到的DNA溶于TE缓冲液中，使用电泳方法确定DNA含量和质量。
DNA的含量和质量可以通过紫外线吸收光谱测定和琼脂糖凝胶电泳检测。
4. DNA保存DNA保存有两种方式：一种是在-80℃低温下保存，这种方式比较适合需要长期保存的植物DNA；另一种是将DNA溶液保存在干燥的、无污染的环境中，这种方式比较适合短期保存的植物DNA。
三、注意事项1. 在样品制备和提取过程中，应尽量避免污染和杂质的混入，否则会影响DNA的纯度和质量。
2. 在DNA提取和纯化的过程中，应注意洗涤缓冲液、异丙醇等试剂的使用时间和浓度，以免影响DNA的回收率和纯度。
3. 在电泳检测中，应根据植物物种的不同选择适合的电泳参数，以确保DNA检测的准确性和可靠性。
四、结语DNA提取是植物基因组研究的基础，它是了解植物遗传信息和探究植物繁殖机制的必要步骤。
本实验详细介绍了植物DNA提取的方法和注意事项，希望可以为植物基因组研究者提供帮助。
生化实验报告--DNA定量测定(二苯胺法)
DNA的定量测定-二苯胺法一、实验目的1.学习和掌握用浓盐法从动物肝脏中提取DNA的原理和方法；2.学习和掌握用二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。
二、实验原理1．DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮基戊醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595nm）。
2．在DNA浓度为20-200μg/ml的范围内，吸光度与DNA浓度成正比，可用比色法测定。
三、实验仪器试管移液管7220分光光度计四、实验试剂1、DNA标准液（200ug/ml）：称取10mgDNA钠盐溶于5mol/l氢氧化钠溶液并稀释至100ml。
2、二苯胺试剂：A液：称取纯二苯胺1.50g，溶于100ml冰乙酸，再加浓硫酸1.5ml。
贮于棕色瓶中。
B液：称取1.6ml乙醛溶于100ml蒸馏水中，临用时配制临用时，将20mlA液和0.1mlB液混合即可五、实验验步骤1.标准曲线的绘制加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，以吸光度对DNA浓度作标准曲线。
2.样品测定吸取DNA样液1.0ml，加入蒸馏水1.0ml，混匀。
然后加入二苯胺溶液4.0ml, 加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。
根据实验数据制得标准曲线如下：由上表可知样液的吸光度y=0.115，则由标准曲线得出DNA样液的浓度x=18.49μg/ml。
故样品中DNA的质量=18.49×6÷1.0=110.94μg七、实验分析1. 测定DNA含量的方法还有哪些原理?荧光法，用Pico Green荧光染料，测定DNA浓度比较灵敏，并且适合测量低浓度和微量DNA，并且受其它杂质的影响不大，缺点要有专门的荧光检测仪器，试剂比较昂贵。
2. 实验中加入乙醛的目的?甲醛引起DNA的断裂损伤,DNA在酸性条件下加热，在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度.。
生化实验课件-动物肝脏中DNA的提取和测定
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
一. 实ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ目的 掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法 二. 实验器材 坐标纸 试管 吸管 722型分光光度计 恒温水浴锅
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
三.实验耗材 1. DNA标准溶液（取DNA钠盐用5mmol/L的NaOH 配成200ug/L的溶液） 2. 二苯胺溶剂（纯二苯胺1g溶于100ml冰醋酸 （A.R.）再加入10ml过氯酸（A.R.浓度>60%） 混匀待用。临用前加入1ml 1.6%乙醇溶液） 3. DNA样液（将实验1提取的DNA粗品用蒸馏水 溶解，定容至25ml，控制其DNA含量在100ug/ml 左右）
实验2 DNA的定量测定（二苯胺法）
四. 实验操作 1.标准曲线的绘制 按表1加入各种试剂，混匀，于60°C恒温水浴45min，冷却后， 在595nm波长下于分光光度计比色测定，以吸光度对DNA浓度作 图，制作标准曲线。 2.样品的测定 取DNA样液1.0ml，加入蒸馏水1.0ml，混匀。然后准确加入二苯 胺试剂4.0ml，混匀，于60°C恒温水浴45min，冷却后，595nm 波长下于分光光度计比色测定，根据所测的吸光度对照标准曲线 求得DNA的质量（ug）。
实验1 动物肝脏中DNA的提取
2. 在沉淀中加入20ml柠檬酸钠缓冲液、10.5ml氯仿-异 戊醇混合液、2ml SDS使其最终浓度为0.41%，振荡 30min，然后缓慢加入固体NaCl（约1.8g），使其最 终浓度为1mol/L。将其在3500r/min离心20min，取 上清水相。 3. 在上述水相溶液中加入等体积冷乙醇，边加边用 玻棒慢慢搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶 状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA 粗品。用蒸馏水溶解并定容至25ml。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸DNA,为英文Deoxyribonucleic acid的缩写,又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也是组成基因的材料;有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性状的传播;DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色;DNA对紫外线260nm有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定;当核酸变性时,吸光度升高,称为增色效应；当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平;较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋;在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称为染色体组;对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体;染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA 合成后期;对于真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内;染色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录;脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平;DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸dAMP脱氧腺苷、胸腺嘧啶脱氧核苷酸dTMP 脱氧胸苷、胞嘧啶脱氧核苷酸dCMP 脱氧胞苷、鸟嘌呤脱氧核苷酸dGMP 脱氧鸟苷;而脱氧核糖五碳糖与磷酸分子借由酯键相连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基排列在内侧;每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成;读取密码的过程称为转录,是以DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称为mRNA信使RNA的核酸分子;DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3’, 5’-磷酸二酯键相连构成的长链;大多数DNA含有两条这样的长链,也有的DNA为单链,如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等;DNA有环形DNA和链状DNA之分;在某些类型的DNA中,5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶,其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富;在某些噬菌体中,5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶;40年代后期,查加夫发现不同物种DNA的碱基组成不同,但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数A=T,鸟嘌呤数等于胞嘧啶数G=C,因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和,一般用几个层次描绘DNA的结构;浓盐法从动物组织中提取DNA核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白DNP/RNP的形式存在,其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液,但在 M的盐溶液中溶解度很低,而RNP则可溶于低盐溶液,因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来;将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质,用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清,加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出;肝脏细胞肝脏是由肝细胞组成,肝细胞极小,肉眼看不到,必须通过显微镜才能看到;人肝约有25亿个肝细胞,5000个肝细胞组成一个肝小叶,因此人肝的肝小叶总数约有50万个;肝细胞为多角形,直径约为20-30/加微米,有6-8个面,不同的生理条件下大小有差异,如饥饿时肝细胞体积变大;每个肝细胞表面可分为窦状隙面、肝细胞面和胆小管面三种;肝细胞里面含有许许多多复杂的细微结构:如肝细胞核、肝细胞质、线粒体、内质网、溶酶体、高尔基氏体、微粒体及饮液泡等组成;二、实验目的1.掌握浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术三、实验原理核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白DNP/RNP的形式存在,其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液,但在 M的盐溶液中溶解度很低,而RNP则可溶于低盐溶液,因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来;将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质,用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清,加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出;四、实验器材和材料试剂实验器材：①匀浆器②量筒③离心机④离心管⑤试管⑥吸管⑦恒温水浴锅实验材料：①猪肝实验试剂：①L L 柠檬酸钠溶液②95%乙醇.③NaCl固体.④5%SDS溶液5g SDS 定容至100ml⑤V氯仿：V异戊醇20：1的混合液五、实验操作1.称量①称取一定质量的猪肝,加入2倍肝重的L L柠檬酸钠缓冲液并用匀浆器磨碎已完成;2.提取DNA①量取肝糜4 ml 于10毫升离心管,在4000r/min下离心10min ,沉淀中再加入8 ml缓冲液于4000r/min离心5 min；②弃上清,取沉淀；③将沉淀用10 ml柠檬酸钠缓冲液完全洗入干净的小烧杯、加入5 ml 氯仿-异戊醇混合液、1 ml SDS,振荡30min保鲜膜封口；④缓慢加入固体NaCl约,使其最终浓度为1mol/L；⑤将溶液分装到2个10毫升离心管中,在4000r/min离心5 min,取上清水相；⑥在上述水相溶液中分别加等体积冷95%乙醇,边加边用玻棒慢慢朝一个方向搅动,将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇,即得DNA粗品；⑦用8ml蒸馏水溶解DNA粗品于10ml离心管中;3.标准曲线的绘制按下表加入各种试剂,混匀,于60℃恒温水浴锅45min,冷却后,在595nm波长下于分光光度计比色测定,以吸光度对DNA浓度作图,制作标准曲线;4.样品的测定将DNA粗品定容至25ml容量瓶,再取DNA样液,加入蒸馏水,混匀;然后准确加入二苯胺试剂,混匀,于60℃恒温水浴锅45min,冷却后,595nm波长下于分光光度计比色测定,根据所测的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量ug;5.计算100g猪肝中DNA含量w=m1/m2×100%w：DNA的质量分数%m1：样液中测得的DNA的质量ugm2：样液中所含样品的质量ug六、实验数据处理1.标准曲线2.实验结果处理猪肝质量为DNA提取液体积为根据公式w=m1/m2×100%得：w=％则100g猪肝中DNA含量为：w×100=七、思考题1.实验中的乙醇、SDS、氯仿-异戊醇、NaCl、柠檬酸钠分别有什么作用答：①柠檬酸的钠盐在实验中既充当DNA酶的抑制剂,也是pH缓冲溶液；②SDS是表面活性剂,可以让蛋白质与DNA分开；③氯仿是有机溶剂,可以使蛋白质聚集沉淀,便于分离出去；④异戊醇是消泡剂,可以减少泡沫的发生；⑤氯仿-异戊醇的作用是使蛋白质变性、膜溶解；⑥NaCl固体溶解使得试液成为高浓度的盐溶液,在这样的环境中DNA核蛋白能溶解,RNA核蛋白则溶解度很低,可以利用这一性质分离两种核酸;八、实验注意事项主要集中在细胞核中,因此,通常选用细胞核含量比例大的生活组织作为提取制备DNA的材料,小牛胸腺组织中细胞核比例较大,因而DNA含量丰富,同时其脱氧核苷酸酶活性较低,制备过程中DNA被降解的可能性相对较低,所以是制备DNA的良好材料,但其来源较困难,脾脏或肝脏易获得,也是实验室制备DNA常用的材料,本实验用新鲜肝脏作为实验材料;2.为了防止大分子核酸在提取过程中被降解,须采取以下措施：整个过程必须在低温下进行,可加入某些物质抑制核酸酶的活性,如柠檬酸钠、EDTA、SDS等,EDTA是抑制核酸酶的活性最好的抑制剂;3.从核蛋白中脱去蛋白质的方法很多,经常采用的有：氯仿-异丙醇法、苯酚法、去垢剂法等,他们均能使蛋白质变性和核蛋白解聚,并释放出核酸;4.使用离心机时,对称放置的离心管必须用天平调平衡;5.避免剧烈振荡,如研磨过程、搅拌过程等;九、实验结果误差分析及讨论经过对本次实验结果进行分析,得出100g猪肝中DNA含量大约为的结论,在上网查阅相关资料后发现：猪肝中DNA含量与本次试验实际操作测量得出的结果大致相互吻合;由此可知,本次试验结果是相对比较成功的,较为粗略地测量出猪肝中DNA的含量,并且较为熟练地掌握了浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术,基本达到了本次实验的目的;但是本次实验结果只是粗略测量,并未达到精确测量猪肝中DNA的含量,且实验数据较理论值偏低,这是由于某些误差导致,在实验过程中些许因素可能会导致实验结果数据有偏差,经分析得出以下几点：①在称取猪肝后加入柠檬酸钠缓冲液进行研磨的过程中,由于猪肝组织表面较滑不易磨碎,且研磨至最后依旧有小部分猪肝组织块残留,因此可能导致猪肝中DNA 提取不充分,致使实验数据较理论值偏低；②研磨过程中,可能由于操作不当,导致部分液体溅出,因此可能使得提取液中部分DNA损失,导致实验数据偏低；③在粗提取DNA操作中,频繁地将DNA提取液转移至各个仪器内,可能有极小部分DNA提取液未倒净,残留在仪器壁上损耗掉,导致实验误差；④在使用移液枪的过程中,可能因为操作不当或移液枪经常错误使用,出现仪器误差,导致吸取的DNA样液不精确,出现实验误差；⑤在水相中加入乙醇析出DNA时,不是所有DNA均析出,有小部分依旧融在溶液,导致提取出的DNA含量偏低；⑥标准曲线制作过程中出现些许误差；总的来讲,本次试验结果是相对比较成功的,较为粗略地测量出猪肝中DNA的含量,并且较为熟练地掌握了浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术,基本达到了本次实验的目的;在今后的实验中会着重注意实验操作的严谨性,严格按照实验前拟定完全的实验步骤进行,保证将实验操作过程中可能出现的误差概率降到最低,尽可能达到预期的实验效果,完成自我的学习及锻炼过程;。
DNA的提取及含量测定实验
DNA的提取及含量测定
[实验目的及要求]
1.学习和掌握用浓盐法从动物肝脏中提取DNA 的原理和方法； 2.学习和掌握用二苯胺法测定DNA含量的原理 和方法。
[实验原理]
Hale Waihona Puke 1．DAN的提取 核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形式存在，其中DNA主要存 在于细胞核中，RNA主要存在于核仁及细胞质中。动植物的 DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液，但在0.14mol/l的盐溶液 中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/l盐溶液，可利用不 同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中 分别抽提出来。 2 DAN的含量测定 DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮基戊 醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595nm）。在 DNA浓度为20-200μg/ml的范围内，吸光度与DNA浓度成正比， 可用比色法测定。
5 2.0
蒸馏水 /ml 二苯胺试 剂/ml
A595nm
2.0 4.0
1.6 4.0
1.2 4.0
0.8 4.0
0.4 4.0
0 4.0
样品的测定 吸取样品1.0mL，加入蒸馏水1.0ml，混匀。 然后准确加入二苯胺试剂4.0ml，混匀，于 60℃恒温水浴保温45min，冷却后，选595nm 波长，于722型分光光度计上比色测定，根据 测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。
[实验仪器及用品]
实验器材：猪肝、722型分光光度计、匀浆器、 离心机、恒温水浴锅。 实验试剂：0.1mol/l NaCL-0.05mol/l柠檬酸钠 溶液、0.015mol/L NaCL-0.0015mol/L柠檬酸 三钠溶液、95%乙醇、NaCl固体、5%SDS、 氯仿、DNA标准液、二苯胺试剂。
[实验目的及要求]
1.学习和掌握用浓盐法从动物肝脏中提取DNA 的原理和方法； 2.学习和掌握用二苯胺法测定DNA含量的原理 和方法。
[实验原理]
Hale Waihona Puke 1．DAN的提取 核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形式存在，其中DNA主要存 在于细胞核中，RNA主要存在于核仁及细胞质中。动植物的 DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液，但在0.14mol/l的盐溶液 中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/l盐溶液，可利用不 同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中 分别抽提出来。 2 DAN的含量测定 DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮基戊 醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595nm）。在 DNA浓度为20-200μg/ml的范围内，吸光度与DNA浓度成正比， 可用比色法测定。
5 2.0
蒸馏水 /ml 二苯胺试 剂/ml
A595nm
2.0 4.0
1.6 4.0
1.2 4.0
0.8 4.0
0.4 4.0
0 4.0
样品的测定 吸取样品1.0mL，加入蒸馏水1.0ml，混匀。 然后准确加入二苯胺试剂4.0ml，混匀，于 60℃恒温水浴保温45min，冷却后，选595nm 波长，于722型分光光度计上比色测定，根据 测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。
[实验仪器及用品]
实验器材：猪肝、722型分光光度计、匀浆器、 离心机、恒温水浴锅。 实验试剂：0.1mol/l NaCL-0.05mol/l柠檬酸钠 溶液、0.015mol/L NaCL-0.0015mol/L柠檬酸 三钠溶液、95%乙醇、NaCl固体、5%SDS、 氯仿、DNA标准液、二苯胺试剂。
实验三、小鼠肝DNA提取及鉴定
操作步骤
（三）DNA的含量测定 的含量测定
取0.5ml DNA样品加 TE缓冲液至 样品加 缓冲液 4ml，用4ml 0mlTE缓冲液调零，用紫外 ， 缓冲液调零， 分光光度计测A260值和 值和A280值。 分光光度计测 值和 值
（四）计算DNA浓度并判断样品组成 计算 浓度并判断样品组成
操作步骤
3．小心取上清液约0.4-0.5ml ，加入 ml ．小心取上清液约 加入0.5 氯仿:异戊醇 异戊醇(24:1)，混匀，室温放 氯仿 异戊醇 ，混匀，室温放5min， ， 12000rpm离心 离心5min。 离心 。 4．取上清液0.2 ml ，加入 体积（即60µl) ．取上清液 加入0.3体积 体积（ 体积（ 的NH4Ac，2.5体积（即0.5ml)的无水乙醇 ， 体积 的无水乙醇 充分混匀， 离心5min，小心倒去 充分混匀，12000rpm离心 离心 ， 溶液，吸干。 沉淀加入1.0mlTE缓冲 溶液，吸干。DNA沉淀加入 沉淀加入 缓冲 液溶解。 液溶解。
操作步骤
(一）肝匀浆的制备 （二）提取DNA 提取 1．取0.5ml匀浆液加入 ． 匀浆液加入1.5ml离心管中，加 离心管中， 匀浆液加入 离心管中 溶液0.1ml，颠倒混匀后，室温 入 10％SDS溶液 ％ 溶液 ，颠倒混匀后， 5min； ； 2．在上述溶液中加入饱和酚0.25ml，氯仿 ．在上述溶液中加入饱和酚 ，氯仿: 异戊醇(24:1) 0.25ml，充分混匀，室温放 异戊醇 ，充分混匀， 5min，12000rpm离心 离心5min; ， 离心
A260的应用
1. DNA或RNA的定量 或 的定量 A260=1.0相当于 相当于 50μg/ml双链 μ 双链DNA 双链 40µg/ml单链 单链DNA（或RNA） 单链 （ ） 20µg/ml寡核苷酸 寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 判断核酸样品的纯度 DNA纯品 A260/A280 = 1.8 纯品: 纯品 RNA纯品 A260/A280 = 2.0 纯品: 纯品
04 实验四 植物DNA的提取和鉴定(十六烷基三甲基溴化铵,CTAB)
用紫外分光光度计测定A260和A280；
计算DNA的含量； 鉴定DNA的纯度。
试 剂
CTAB提取液
2.0% CTAB （十六烷基三甲基溴化铵）
1.4 mol/L NaCl 20 mmol/L EDTA 100 mmol/L Tris-HCl（pH8.0） 0.2% 巯基乙醇
CTAB
CTAB是阳离子去污剂，能使蛋白质变性， 还能与核酸形成特异的核酸-CTAB复合物。
提取DNA的量：0.75-2.5 mg；
质量鉴定：A260/A280比值1.80-2.00，合格。
用塑料滴管将上清用塑料滴管将上清吸入另一支另一支50ml50ml离心管中加离心管中加入等体积的异丙醇轻柔充分混匀静置入等体积的异丙醇轻柔充分混匀静置5min用玻棒将絮状絮状dnadna沉淀搅起置于沉淀搅起置于10ml7010ml70乙醇中浸泡醇中浸泡5minmin
实验四
植物DNA的提取与鉴定
实验原理
去除蛋白质的方法
①氯仿-异戊醇使蛋白质变性，离心除去变
性蛋白；
②十二烷基硫酸钠（SDS）使蛋白质变性，
与核酸分离，从材料中提取出DNA； ③苯酚使蛋白变性，离心分层，后者停留 在酚层内。
破坏DNA完整结构的因素
①化学因素：pH4.0-11.0稳定，否则变性
降解； ②物理因素：DNA是长链线状分子，机械 剪切作用会使分子断裂； ③酶的作用：DNA酶降解DNA分子。
真核生物的DNA与组蛋白结合，以DNA核
蛋白的形式存在于细胞核内。
在提取DNA时，通过研磨破坏细胞壁和细 胞膜，释放出DNA核蛋白。
实验原理
在1.4 mol/L NaCl中，DNA核蛋白的溶
小鼠肝组织DNA的提取及其含量测定
小鼠肝组织DNA的提取及其含量测定1.2 掌握DNA提取和鉴定的方法。
实验原理：本实验所用的是DNA酚抽提法。
可用于多种来源标本的高分子量DNA样品的制备，包括单层培养细胞、悬浮生长细胞、新鲜组织以及血液标本等。
提取DNA的基本思路，DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中。
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
它是以含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶的裂解缓冲液裂解细胞，经蛋白酶K处理后，用pH8.0的Tris饱和酚进行抽提，离心分层后，蛋白质因变性位于有机相与水相的界面，而DNA进入水相，再用酚、酚/氯仿抽提除去蛋白质，接着用氯仿抽提以除去 DNA 溶液中微量酚的污染。
重复抽提DNA至一定纯度后，根据不同需要进行透析或沉淀处理，获得所需大小范围的高分子量DNA样品。
沉淀处理常以乙酸铵为沉淀用盐，用无水乙醇沉淀。
其中EDTA为二价金属离子螯合剂，可以抑制DNA酶的活性，同时降低细胞膜的稳定性。
SDS为生物阴离子去垢剂，SDS 可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与 DNA 分子分离，并能与脂质和蛋白质结合使他们沉淀，同时还有降解DNA酶的作用。
无DNA酶的RNA酶可以有效水解RNA，而避免DNA的消化。
蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在SDS 和EDTA 存在下保持很高的活性。
将蛋白质降解成小肽或氨基酸，可以消化DNA酶、DNA上的蛋白质，使 DNA 分子完整地分离出来也有裂解细胞的作用。
酚可以使蛋白质变性沉淀，也抑制DNA酶的活性。
氯仿可除去微量酚。
实验材料：小鼠器材：解剖盘、解剖剪、镊子、匀浆器、微量加样枪、烧杯、试管架、EP管、低温高速离心机、紫外分光光度计试剂：生理盐水、10%的SDS溶液、饱和酚、氯仿:异戊醇(24:1)、无水乙醇、10mmol/L的乙酸铵溶液、1×TE(pH8.0)缓冲液（注：1×TE(pH8.0)缓冲液由10mmol/L(pH=8.0)的Tris-HCl和1mmol/L（pH=8.0）的EDTA 配制而成）。
浙大生化实验报告DNA的提取
实验报告课程名称： 生化实验甲 指导老师： 成绩：__________________ 实验名称：植物基因组DNA 的提取 实验类型： 生化定性实验 同组学生姓名： 及纯度与含量的测定 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、学习并掌握植物基因组DNA 的提取原理和方法； 2、了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作； 3、学习并掌握对电泳检测基因组DNA 结果的初步分析； 4、学习紫外吸收法测定核酸基本原理和方法； 5、学习并掌握紫外吸收法测定基因组DNA 纯度与含量的方法。
二、实验基本原理 植物基因组DNA 的提取方法就其提取原理主要有二种：十六烷基三乙基溴化铵（CTAB)法、十二烷基硫酸钠 (SDS)法。
十六烷基三甲基溴化铵和十二烷基硫酸钠等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA 得以游离出来。
再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA 、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
上清液中加入无水乙醇使DNA 沉淀，沉淀DNA 溶于TE 溶液中，即得植物基因组 DNA 溶液。
由于植物中的次生代谢产物——多酚类化合物可介导DNA 降解，而多糖的污染也是影响植物核酸纯度最常见的问题，这些多糖能抑制限制酶、连接酶及DNA 聚合酶等分子生物学酶类的生物活性。
传统的CTAB-DNA 提取法步骤多，较烦琐，DNA 产率低，而且由于酚很难完全去除，容易影响以后的酶切等工作的效率。
SDS 法操作简单，温和,也可提取到较高分子量DNA ，但所得产物含糖类杂质较多,这将直接影响DNA 的限制性核酸内切酶酶切效果。
由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA 的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。
dna提取及含量测定实验小结
dna提取及含量测定实验小结
本实验旨在学习DNA的提取和测定含量的方法，为进一步研究DNA 的应用奠定基础。
实验过程中，我们首先用细胞裂解液将细胞壁和细胞膜打破，使DNA释放到裂解液中。
接着，利用氢氧化钠和盐酸分别进行碱解和酸沉淀，得到纯粹的DNA。
最后，使用紫外分光光度计测得DNA的吸收值，根据标准曲线计算DNA的浓度。
在实验中，我们需要注意一些技巧性操作。
如细胞裂解液的选择
应根据被分析样品的类型而定；碱解液与沉淀液的PH值也应准确掌控；测定吸光度时，应避免有机溶剂和染色质等杂质干扰结果。
此外，本实验的应用领域广泛，不仅可为生物学、医学提供技术
支持，还可应用于环境监测和食品安全等领域。
其中，DNA提取技术已成为研究生命科学和基因工程的基础操作之一。
在今后的学习和实践中，我们应不断开拓创新，发掘DNA在各个
领域的潜力，为推动人类科学技术进步作出自己的贡献。
DNA的提取及鉴定
六、实验操作
1）粗提 1．称取猪肝 8g于100ml的小烧杯中，用剪刀剪碎，加 入2倍重的0.1mol/LNaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠缓冲液 （16ml），高速匀浆。
2．将匀浆液（ ~25ml）转移到 100ml 离心管中，在 4000r/min下离心10min，弃去上清液。沉淀中继续加 入25ml缓冲液，搅拌均匀后于 4000r/min离心20min， 取沉淀。
2）分离DNP、除蛋白 3．将上述沉淀转移至 250ml烧杯中，加入 40ml0.1mol/LNaCl-0.05mol/L 柠檬酸钠缓冲液、 21ml氯 仿/异戊醇、4ml5%SDS，用保鲜膜封口，振摇 30min。
4．缓慢加入 3.6gNaCl （事先在研钵中研成粉末）使体 系终浓度为1mol/L。将混合液转移至离心管中于 3500r/min离心20min，取上清水相（用滴管吸取并量 体积）。
DNA鉴定或定量（二苯胺法）： 颜色反应可先完成标准曲线的制作，
或配置一个标准管。
(二)二苯胺法测定DNA含量
二、原理 核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法和
分别针对DNA和RNA的颜色反应方法
本实验采用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。在 酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该 物质在595nm有最大吸收，在40～400mg/mL范围内其 峰值与DNA含量成正比
DNA的提取及鉴定
一、动物肝脏中DNA的提取
一 . 实验目的
学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取 DNA的原理和技术
了解分离提取DNA的一般原理
DNA的主要来源
1.动物组织及器官：脾、肝胚芽等 3.微生物：细菌、酵母菌等
核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形 式存在，其中DNA主要存在于细胞核中，RNA 主要存在于核仁及细胞质中。
真核生物基因组DNA的提取和含量测定
实验报告课程名称： 生物化学实验 实验名称： 真核生物基因组DNA 的提取和含量测定 指导老师： 同组学生姓名： 廖杰 成绩：__________________真核生物基因组DNA 的提取和含量测定【实验原理】 制备具有生物活性的大分子核酸，必需采取温和的制备条件，避免过酸、过碱的反应环境和剧烈的搅拌，防止核酸酶的作用，并要求在低温下进行操作 。
一、 真核生物基因组DNA 的提取本实验选用小鼠肝脏细胞作为实验材料，采用匀浆法破碎组织细胞。
DNP 在L NaCl 中不溶解,而RNP 可溶解。
用无菌水溶解沉淀，加入蛋白酶消化液（含有蛋白酶K 和SDS ）。
１温和方法的破碎细胞而不产生机械剪切以致破坏DNA 的完整性， ２可以变性Dnase ，３还可以去除部分的蛋白。
４使核蛋白体从DNA 上解离。
然后加RNase 以去除RNA ，再用苯酚:氯仿抽提法反复抽提提取DNA 苯酚:氯仿抽提法：酚、氯仿是有机溶剂，能有效地使蛋白质变性。
纯酚在与水混合时处于下层。
然而有机相和水相会难于分开。
专业： 药学 姓名： 阿卜杜合力力 学号： 56 日期： 地点： 生化实验室 装订 线若使用酚：氯仿混合物抽提，由于氯仿的比重较大，可在很大程度上解决这个问题，促进两相的分离。
异戊醇则可减少操作过程中产生的气泡。
变性蛋白一般集中在两相之间的界面层，而脂类则有效地分配在有机相中，核酸则被留于上层水相。
该法其具有操作条件比较温和，能迅速使蛋白质变性并同时抑制核酸酶的活性，可得到具有生物活性的高聚合度的核酸等优点。
但其操作步骤较为繁琐，去除蛋白质需要反复进行多次。
砷盐、氟化物、柠檬酸、EDTA等可抑制DNase的活性；皂土等可抑制RNase 的活性。
收集上清液后用乙醇沉淀DNA，最后用TE缓冲液溶解DNA，并用紫外吸收法测定DNA的含量及纯度。
二、紫外吸收法测定基因组DNA的含量及纯度1．紫外分光光度法测定核酸含量：由于DNA在260nm处有最大的吸收峰，因此，可以用260nm波长进行分光测定DNA浓度，吸光度A值为1相当于大约50μg /ml双链DNA。
DNA的提取及含量测定
[实验内容及步骤]
一、动物肝脏中DNA的提取 1．取猪肝8g，用匀浆器磨碎，加入相当2倍肝重的0.1mol/L
NaCL-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液，研磨三次，然后倒出匀浆物， 匀浆物在4000r/min下离心10min；沉淀中再加入25ml缓冲液， 于4000r/min离心20min；取沉淀。 2．在上述沉淀中加入40ml0.1mol/L NaCL-0.05mol/L柠檬酸钠缓 冲液、20mlCHCl3-异戊醇混合液、4mL5%SDS使其浓度为 0.41%，振摇30min，然后缓慢加固体NaCl，使其终浓度为 1mol/L。将上述混合液在3500r/min离心20min，取上清水相。 3．在上述水相溶液中加入等体积冷95%乙醇，边加边用玻璃棒 慢慢搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇， 即得DNA粗制品。用蒸馏水溶解并定溶至50ml，用二苯胺法测 定DNA含量。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
二、DNA的定量测定（二苯胺法）
1．标准曲线的绘制
按下表加入各种试剂，混匀，于60℃恒温水浴中保温45min，冷却 后，在595nm波长下，于722型分光光度计上比色测定，以吸光度 对DNA浓度作图，绘制标准曲线。
0
1
2
3
4
5
标准DNA 0.0
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0
溶液/ml
蒸馏水 2.0
[实验仪器及用品]
实验器材：猪肝、722型分光光度计、匀浆器、 离心机、恒温水浴锅。
实验试剂：0.1mol/l NaCL-0.05mol/l柠檬酸钠 溶液、0.015mol/L NaCL-0.0015mol/L柠檬酸 三钠溶液、95%乙醇、NaCl固体、5%SDS、 氯仿、DNA标准液、二苯胺试剂。
动物肝脏DNA提取和鉴定-实验技术
变性蛋白质层易散，吸取上清液时应仔细，不要将蛋 白质及下层的氯仿吸入。
实验结束后将变性的蛋白质（肝糜）小心取出置于专 用的废物袋中，氯仿倒入回收瓶内。
THANK YOU
以吸光度A595nm对DNA含量（ug）作图， 绘制标准曲线。
从标准曲线上查出样品的DNA含量。 计算100g猪肝中DNA的含量：
待测样品中DNA的质量×25(稀释倍数)
=
称取猪肝的质量
注意事项
匀浆（破碎细胞）要充分，需剪成小块。
固体NaCl应磨碎，加入应分批缓慢加入，边加边摇， 避免局部浓度过大或者未及溶解而沉入氯仿层。
核酸在真核细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在， 用DNP和RNP表示。
DNA-Pro（DNP）溶于高盐溶液（1mol/L）,
细胞核
微溶于低盐溶液（0.14mol/L）
RNA-Pro(RNP) 溶于低盐溶液（0.14mol/L）
核仁及细胞质
微溶于高盐溶液（1mol/L）
核酸含量的测定方法：紫外吸收法、定磷法和分别针 对DNA和RNA的颜色反应方法。
DNA标准液200ug/ml:DNA钠 盐用5mmol/L的NaOH配制。
95%冷 乙醇、 NaCl固 体
0.14mol／L NaCl－0.05mol／L 柠檬酸钠缓冲液(PH=6.8)
二苯胺： 称取纯 二苯胺 1g溶于 100ml冰
组织捣碎ห้องสมุดไป่ตู้浆机
猪肝8g 16ml的0.14mol／L NaCl－
脱氧核糖核酸中的脱氧核糖在酸性环境中变成ω-羟基γ-酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物，在 595nm处有最大的吸收 。
DNA20~400微克范围内，光密度与DNA的浓度成正比， 在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。
实验结束后将变性的蛋白质（肝糜）小心取出置于专 用的废物袋中，氯仿倒入回收瓶内。
THANK YOU
以吸光度A595nm对DNA含量（ug）作图， 绘制标准曲线。
从标准曲线上查出样品的DNA含量。 计算100g猪肝中DNA的含量：
待测样品中DNA的质量×25(稀释倍数)
=
称取猪肝的质量
注意事项
匀浆（破碎细胞）要充分，需剪成小块。
固体NaCl应磨碎，加入应分批缓慢加入，边加边摇， 避免局部浓度过大或者未及溶解而沉入氯仿层。
核酸在真核细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在， 用DNP和RNP表示。
DNA-Pro（DNP）溶于高盐溶液（1mol/L）,
细胞核
微溶于低盐溶液（0.14mol/L）
RNA-Pro(RNP) 溶于低盐溶液（0.14mol/L）
核仁及细胞质
微溶于高盐溶液（1mol/L）
核酸含量的测定方法：紫外吸收法、定磷法和分别针 对DNA和RNA的颜色反应方法。
DNA标准液200ug/ml:DNA钠 盐用5mmol/L的NaOH配制。
95%冷 乙醇、 NaCl固 体
0.14mol／L NaCl－0.05mol／L 柠檬酸钠缓冲液(PH=6.8)
二苯胺： 称取纯 二苯胺 1g溶于 100ml冰
组织捣碎ห้องสมุดไป่ตู้浆机
猪肝8g 16ml的0.14mol／L NaCl－
脱氧核糖核酸中的脱氧核糖在酸性环境中变成ω-羟基γ-酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物，在 595nm处有最大的吸收 。
DNA20~400微克范围内，光密度与DNA的浓度成正比， 在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。
实验一 真核生物基因组DNA的提取和分析
（七）加热、用电，使用剧毒腐蚀试剂应注意安全 操作，避免事故。
（八）废弃液体除指定有专门容器收集者外，应倒 入水池，并放水冲走，固体废物倒入废物缸内。 动物尸体应放入指定的容器中。
（九）实验过程中自己不能解决或决定的问题，切 勿盲目处理，应及时向指导教师反映取得帮助。
（十）实验完毕，须将试剂排列整齐，整理好公用 物品，将仪器洗净收起。檫净实验台，请指导教 师检查，允许后方可离开。
1) 破碎细胞 2) 去除蛋白质，糖类等等生物大分子；由于真核细胞 基因组较大，在纯化出的DNA的操作中应注意动作轻 柔，且在低温下进行，以最大限度地减少机械和化学 作用对DNA的剪切，从而获得相对完整的DNA 3) 沉淀核酸
DNA提取和分析步骤图解
SDS裂解 蛋白酶K消化
酚氯仿抽提
二苯胺法
紫外分光光度法分析
答辩ppt内容： 实验目的，意义，原理，实验方法选择，预计结果及数据表现形式， 实验难点及可能出现问题，可能出现的实验结果偏差及解释
答辩安排： 最后一周答辩，每组时间控制为20分钟演讲，10分钟提问。
设计性实验题
1 免疫球蛋白IgG的分离纯化与鉴定。 2 人血清白蛋白的提取纯化及分子量的测定。 3 蛋清中溶菌酶的分离鉴定。 4 小鼠肝脏过氧化氢酶的分离纯化及酶动力学研究。 5 如何从动物心肌细胞中提取乳酸脱氢酶同工酶？ 6 如何提取真核细胞中的线粒体基因组DNA？ 7 请设计实验从基因及蛋白表达角度讨论老年痴呆症模型小鼠与人类老年痴 呆症的可比较性 （即小鼠模型建立的可靠性） 8 请设计实验从基因及蛋白表达角度追踪老年痴呆模型小鼠发病期典型变化， 及给药治疗后效果评价 9 蛋白质的表达具有一定的组织特异性，请以实验小鼠胰腺和肝脏为材料设 计实验检测羧肽酶A1酶原(procarboxypeptidase A1)和白蛋白(Albumin) 并计算这两种蛋白质在胰腺和肝脏中的表达量。 10 细胞色素氧化酶（Cytochrome oxidase）在肝脏中有三种亚型，即细 胞色素氧化酶1，2和3，请以实验小鼠肝脏为材料设计实验检测这三种酶的 表达并计算它们的表达量。
（八）废弃液体除指定有专门容器收集者外，应倒 入水池，并放水冲走，固体废物倒入废物缸内。 动物尸体应放入指定的容器中。
（九）实验过程中自己不能解决或决定的问题，切 勿盲目处理，应及时向指导教师反映取得帮助。
（十）实验完毕，须将试剂排列整齐，整理好公用 物品，将仪器洗净收起。檫净实验台，请指导教 师检查，允许后方可离开。
1) 破碎细胞 2) 去除蛋白质，糖类等等生物大分子；由于真核细胞 基因组较大，在纯化出的DNA的操作中应注意动作轻 柔，且在低温下进行，以最大限度地减少机械和化学 作用对DNA的剪切，从而获得相对完整的DNA 3) 沉淀核酸
DNA提取和分析步骤图解
SDS裂解 蛋白酶K消化
酚氯仿抽提
二苯胺法
紫外分光光度法分析
答辩ppt内容： 实验目的，意义，原理，实验方法选择，预计结果及数据表现形式， 实验难点及可能出现问题，可能出现的实验结果偏差及解释
答辩安排： 最后一周答辩，每组时间控制为20分钟演讲，10分钟提问。
设计性实验题
1 免疫球蛋白IgG的分离纯化与鉴定。 2 人血清白蛋白的提取纯化及分子量的测定。 3 蛋清中溶菌酶的分离鉴定。 4 小鼠肝脏过氧化氢酶的分离纯化及酶动力学研究。 5 如何从动物心肌细胞中提取乳酸脱氢酶同工酶？ 6 如何提取真核细胞中的线粒体基因组DNA？ 7 请设计实验从基因及蛋白表达角度讨论老年痴呆症模型小鼠与人类老年痴 呆症的可比较性 （即小鼠模型建立的可靠性） 8 请设计实验从基因及蛋白表达角度追踪老年痴呆模型小鼠发病期典型变化， 及给药治疗后效果评价 9 蛋白质的表达具有一定的组织特异性，请以实验小鼠胰腺和肝脏为材料设 计实验检测羧肽酶A1酶原(procarboxypeptidase A1)和白蛋白(Albumin) 并计算这两种蛋白质在胰腺和肝脏中的表达量。 10 细胞色素氧化酶（Cytochrome oxidase）在肝脏中有三种亚型，即细 胞色素氧化酶1，2和3，请以实验小鼠肝脏为材料设计实验检测这三种酶的 表达并计算它们的表达量。
实验一质粒DNA的提取及浓度测定
8. Carefully insert the syringe plunger and gently push the slurry into the minicolumn.
9. Detach the syringe from the Minicolumn and remove the plunger from the syringe barrel. Reattach the syringe barrel to the Minicolumn.
质粒类型：
• 严谨型：这些质粒的复制是在寄主细胞严格控 制之下的，与寄主细胞的复制偶联同步。所以， 往往在一个细胞中只有一份或几份拷贝；
• 松驰型：这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛 控制之下的，每个细胞中含有10-200份拷贝， 如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成 还会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒 pBR322即属于松弛型质粒，要经过氯霉素处理 才能达到更高拷贝数。
0.2M NaOH 1% SDS
• Neutralization Solution
1.32M potassium acetate (pH 4.8)
• Column Wash Solution
80mM potassium acetate 8.3mM Tris-HCl (pH 7.5) 40µM EDTA 55% ethanol
4. Add 200µl of Neutralization Solution (Solution III)and mix by inverting the tube 4 times.
5. Centrifuge the lysate at 10,000 × g in a microcentrifuge for 10minutes.
9. Detach the syringe from the Minicolumn and remove the plunger from the syringe barrel. Reattach the syringe barrel to the Minicolumn.
质粒类型：
• 严谨型：这些质粒的复制是在寄主细胞严格控 制之下的，与寄主细胞的复制偶联同步。所以， 往往在一个细胞中只有一份或几份拷贝；
• 松驰型：这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛 控制之下的，每个细胞中含有10-200份拷贝， 如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成 还会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒 pBR322即属于松弛型质粒，要经过氯霉素处理 才能达到更高拷贝数。
0.2M NaOH 1% SDS
• Neutralization Solution
1.32M potassium acetate (pH 4.8)
• Column Wash Solution
80mM potassium acetate 8.3mM Tris-HCl (pH 7.5) 40µM EDTA 55% ethanol
4. Add 200µl of Neutralization Solution (Solution III)and mix by inverting the tube 4 times.
5. Centrifuge the lysate at 10,000 × g in a microcentrifuge for 10minutes.
初中生物实验dna提取
初中生物实验dna提取
标题: 初中生物实验:DNA提取
DNA是生物遗传信息的载体,存在于所有生物细胞的细胞核中。
在初中生物课程中,通过简单的实验步骤,学生们可以从日常食物中提取出DNA,亲眼看到DNA的存在,加深对分子生物学基础知识的理解。
以下是一个典型的DNA提取实验步骤:
材料准备:
- 新鲜或冷冻的水果/蔬菜(如香蕉、西红柿等)
- 食用盐
- 清洁剂(洗涤剂)
- 无水乙醇或异丙醇
- 研钵和研杵
- 滤纸或滤网
- 小试管或塑料杯
实验步骤:
1. 准备样品。
将水果或蔬菜切成小块,放入研钵中,用研杵将其充分研磨成糊状。
2. 提取DNA。
将研磨后的样品放入小试管或塑料杯中,加入适量的盐和清洁剂溶液。
轻轻混合均匀。
盐有助于将DNA从细胞核中释放出来,而清洁剂则破坏细胞膜和核膜,使DNA暴露于溶液中。
3. 沉淀DNA。
将试管或塑料杯中的混合物倾入另一个容器中,小心地将无水乙醇缓缓倾入混合物表面。
此时,DNA就会凝聚成白色絮状物或细丝,浮现在两种液体的界面处。
4. 观察DNA。
用牙签或滤纸小心地将凝聚的DNA捞起,可以清晰地看到其纤维状结构。
5. 进一步观察(可选)。
将提取的DNA放在载玻片上,在显微镜下观察其结构。
通过这个简单有趣的实验,学生们可以亲自操作并观察到DNA的存在形式,增强对分子生物学知识的理解和兴趣。
教师还可以结合实验,讲解DNA的结构、功能及其在生物科学中的重要作用。
猪脾中DNA的提取及含量测定
外，还有质粒DNA 等。
对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较容易， 多数病毒DNA 分子量较小，提取时易保持其结 构完整性。
核酸提取的主要步骤：
1）破碎细胞； 2）去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂 类等生物大分子； 3）去除其它不需要的核酸分子； 4）沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质。
RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较 小，在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此， 在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。
从不同材料中提取DNA的方法不同，分离
提取的难易程度也不同。
从高等动植物及细菌中提取DNA难度大一
些。由于其DNA 分子量较大。因此易被 机械张力剪断。
细菌DNA，除核DNA
所得混合液倒入磨口塞的锥形瓶中，加入同体 积氯仿—异戊醇，激烈振荡10分钟，8000r离 心10分钟，上层水相取出后倒入烧杯，以同 积氯仿—异戊醇重复去蛋白2次。
取出水相于烧杯中，逐渐加入2倍 体积95%乙醇，玻棒搅动，DNA纤维绕 于璃玻棒上后挤干，用70%乙醇洗DNA 纤维2次，用95%乙醇洗一次，再用乙 醚洗一次，取出并挤干。
（3）试剂： ① 20×SSC：175.2gNaCL，88.2g柠檬酸 钠•2H2O，PH=7.0加水至1000ml； ② 1×SSC，0.1×SSC由①作相应的稀释 得来； ③ NaCL-Na2EDTA 液 ： 8 . 7 7 gNaCL，3.72g Na2EDTA溶于800ml蒸馏水中，用固体NaOH调 PH=8后定容至1000； ④ 5%SDS（W/V）：6gSDS溶于100ml45%乙 醇中； ⑤ 氯仿-异戊醇=24：1（体积比） ⑥ 其他:95%乙醇，盐，冰.
猪脾中提取DNA
【2024版】[课件]实验七-植物DNA的提取与纯度鉴定PPT
![【2024版】[课件]实验七-植物DNA的提取与纯度鉴定PPT](https://img.taocdn.com/s1/m/ec44a4e28662caaedd3383c4bb4cf7ec4bfeb660.png)
背景知识 3
提醒 不同种类或同一种类的不同组织因其细
胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差 异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照 文献和经验建立相应的提取方法，以获得可 用的DNA大分子，尤其是组织中的多糖和酚 类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的 抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取 基因组DNA时，应考虑除去多糖和酚类物质。
CTAB法实验原理
• 离子型表面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵 (hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为 CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate， 简称SDS)等可以有效裂解植物细胞壁，且与DNA 形成可溶于高盐溶液的复合物，当降低盐浓度时 DNA又可沉淀析出，从而与蛋白质及多糖等分离。
实验步骤（2）
• 3、 最后一次加液氮磨样后，立即加入预热的CTAB抽提 液，每克叶片加入8 mL CTAB抽提液，再加入160 L 2－ 巯基乙醇（2-Me）（终浓度2％（v/v））。继续研磨待 CTAB抽提液溶化后，将研磨液转入50 mL离心管；
• 4、 65℃水浴锅温浴0.5-1小时，每10-20分钟摇动一次离心 管；同时65℃预热CTAB/NaCl； 注意：离心管盖子应轻轻搭在管口，千万不能盖紧， 以防加热使盖子冲出，最好离心管壁和盖子同时做好标记。
实验试剂及其配置
4 CTAB/NaCl (10% CTAB, 0.7 M NaCl) （要求配50mL）
•
CTAB
•
NaCl
20 g 8.2 g
• 加入160 mL ddH2O，加热至65℃溶解，补dd H2O定容至200 mL，高压灭菌。
• 注意：此溶液很粘稠，使用时需加热至65℃。
提醒 不同种类或同一种类的不同组织因其细
胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差 异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照 文献和经验建立相应的提取方法，以获得可 用的DNA大分子，尤其是组织中的多糖和酚 类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的 抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取 基因组DNA时，应考虑除去多糖和酚类物质。
CTAB法实验原理
• 离子型表面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵 (hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为 CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate， 简称SDS)等可以有效裂解植物细胞壁，且与DNA 形成可溶于高盐溶液的复合物，当降低盐浓度时 DNA又可沉淀析出，从而与蛋白质及多糖等分离。
实验步骤（2）
• 3、 最后一次加液氮磨样后，立即加入预热的CTAB抽提 液，每克叶片加入8 mL CTAB抽提液，再加入160 L 2－ 巯基乙醇（2-Me）（终浓度2％（v/v））。继续研磨待 CTAB抽提液溶化后，将研磨液转入50 mL离心管；
• 4、 65℃水浴锅温浴0.5-1小时，每10-20分钟摇动一次离心 管；同时65℃预热CTAB/NaCl； 注意：离心管盖子应轻轻搭在管口，千万不能盖紧， 以防加热使盖子冲出，最好离心管壁和盖子同时做好标记。
实验试剂及其配置
4 CTAB/NaCl (10% CTAB, 0.7 M NaCl) （要求配50mL）
•
CTAB
•
NaCl
20 g 8.2 g
• 加入160 mL ddH2O，加热至65℃溶解，补dd H2O定容至200 mL，高压灭菌。
• 注意：此溶液很粘稠，使用时需加热至65℃。
植物总DNA的提取及含量、纯度测定
四、注意事项
1）选取新鲜材料，研磨迅速彻底，以降低DNA的降解，研磨好的材料应与 CTAB 抽提液充分混匀，CTAB要预热，以抑制DNA酶，并加速蛋白变 性，促进DNA溶解； 2）取上清时，不要贪多，以防非核酸类成分造成干扰；
3）若提取产物有颜色，可能是材料中含有较多的酚类物质，添加巯基乙醇
（2－5％），并尽可能选取幼嫩的材料； 4）异丙醇要预冷，以减少DNA的降解；
细胞破碎
①机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法；
②化学试剂法：用SDS处理细胞；
③酶解法： 加入溶菌酶或蜗牛酶，破坏细胞壁。
DNA提取
CTAB法：阳离子去污剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）
可以溶解细胞膜与脂膜，并能与核酸形成复合物，通过离心 就可将复合物与蛋白以及多糖类物质分开。最后通过异丙醇
或乙醇沉淀DNA，使之形成纤维状絮团，CTAB溶于乙醇或
异丙醇而除去，离心沉淀收集得到DNA。
DNA纯化（去杂质）
蛋白质 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1） 或氯仿：异戊醇（24：1）抽提。 RNA 常选用RNase消化 ，或是用LiCl来消除大 分子的RNA。 酚类物质 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩 的材料。
三、操作步骤
1．取三支干净的离心管，其中一支加入10ml CTAB，于60 ℃水浴中预热； 2．取 1.0 g 植物叶片于预冷的研钵中，加 入液氮，迅速研磨； 3．将叶片粉转入预热CTAB的离心管中，混匀，于60 ℃水浴中保温30min， 期间颠倒混匀2－3次；破碎细胞 4. 加入等体积氯仿:异戊醇（24:1）混合液，充分颠倒混匀2min或者80次，室 温4000r/min离心 8min，上清转入另一支干净离心管中；有机溶剂抽提去 蛋白 5．在上清中加入2/3体积预冷的异丙醇，轻轻颠倒混匀，可见 DNA 絮状沉淀； 沉淀DNA 6．弃去上清，保留沉淀，加入20ml洗涤液轻轻颠倒清洗5min，倒掉上清液， 将离心管倒置，室温干燥至离心管无明显水珠； 7．将沉淀用10ml TE 缓冲液溶解，用紫外分光光度法检测A260nm和A280nm 的吸收值，计算DNA浓度、总量及纯度。
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[实验内容及步骤]
一、动物肝脏中DNA的提取 1．取猪肝8g，用匀浆器磨碎，加入相当2倍肝重的0.1mol/L NaCL-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液，研磨三次，然后倒出匀浆物， 匀浆物在4000r/min下离心10min；沉淀中再加入25ml缓冲液， 于4000r/min离心20min；取沉淀。 2．在上述沉淀中加入40ml0.1mol/L NaCL-0.05mol/L柠檬酸钠缓 冲液、20mlCHCl3-异戊醇混合液、4mL5%SDS使其浓度为 0.41%，振摇30min，然后缓慢加固体NaCl，使其终浓度为 1mol/L。将上述混合液在3500r/min离心20min，取上清水相。 3．在上述水相溶液中加入等体积冷95%乙醇，边加边用玻璃棒 慢慢搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇， 即得DNA粗制品。用蒸馏水溶解并定溶至50ml，用二苯胺法测 定DNA含量。
3．计算100g猪肝中DNA含量 ω= m1/m2 式中 ω：DNA的质量分数； m1：样液中测得的DNA的质量； m2：样液中所含样品质量。
三、实验现象及数据处理 仔细观察所得到的DNA，记录其形状、颜色。 在含量的测定时，绘制出标准曲线，查出其浓 度，并换算成质量，然后代入公式中计算出 DNA的含量。
[实验仪器及用品]
实验器材：猪肝、722型分光光度计、匀浆器、 离心机、恒温水浴锅。 实验试剂：0.1mol/l NaCL-0.05mol/l柠檬酸钠 溶液、0.015mol/L NaCL-0.0015mol/L柠檬酸 三钠溶液、95%乙醇、NaCl固体、5%SDS、 氯仿、DNA标准液、二苯胺试剂。
5 2.0
蒸馏水 /ml 二苯胺试 剂/ml
A595nm
2.0 4.0
1.6 4.0
1.2 4.0
0.8 4.0
0.4 4.0
0 4.0
样品的测定 吸取样品1.0mL，加入蒸馏水1.0ml，混匀。 然后准确加入二苯胺试剂4.0ml，混匀，于 60℃恒温水浴保温45min，冷却后，选595nm 波长，于722型分光光度计上比色测定，根据 测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。
二、DNA的定量测定（二苯胺法） 1．标准曲线的绘制 按下表加入各种试剂，混匀，于60℃恒温水浴中保温45min，冷却 后，在595nm波长下，于722型分光光度计上比色测定，以吸光度 对DNA浓度作图，绘制标准曲线。
0 标准DNA 溶液/ml 0.0
1 0.4
2 0.8
3 1.2
4 1.6
DNA的提取及含量测定
[实中提取DNA 的原理和方法； 2.学习和掌握用二苯胺法测定DNA含量的原理 和方法。
[实验原理]
1．DAN的提取 核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形式存在，其中DNA主要存 在于细胞核中，RNA主要存在于核仁及细胞质中。动植物的 DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液，但在0.14mol/l的盐溶液 中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/l盐溶液，可利用不 同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中 分别抽提出来。 2 DAN的含量测定 DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮基戊 醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595nm）。在 DNA浓度为20-200μg/ml的范围内，吸光度与DNA浓度成正比， 可用比色法测定。