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人牙龈成纤维细胞原代培养
人牙龈成纤维细胞原代培养是指从人牙龈组织中分离出的成纤维细胞在体外的培养过程。
具体步骤如下：
1. 采集人牙龈组织样本，通常通过牙龈刮片或手术切取进行采集。
2. 将采集到的组织样本放入含有抗生素和抗真菌药物的培养基中，以避免污染。
3. 组织样本经过消化酶的处理，将细胞从组织中分离出来。
4. 将分离出的细胞转移到含有营养物质和生长因子的培养基中。
5. 在适当的温度、湿度和二氧化碳条件下，将细胞培养在细胞培养箱中。
6. 观察和检测细胞的生长状态，通常通过显微镜观察细胞形态、细胞数量和细胞活力等指标。
7. 经过一段时间的培养，当细胞达到足够数量时，可以进行细胞传代，即将细胞从原培养瓶中转移到新的培养瓶中，以保证细胞的正常生长和建立永久细胞库。
人牙龈成纤维细胞原代培养可以用于研究人牙龈组织的生理和病理过程，以及在临床牙周疾病和牙体牙髓疾病的治疗中的应用。
人牙周膜成纤维细胞培养与鉴定沈慧娟;李琳娟;康娜【摘要】目的:培养人牙周膜成纤维细胞,并对其来源进行鉴定,为后期实验提供细胞来源.方法:选择20颗有正畸需求需拔牙矫治的年轻患者所拔的第一或第二前磨牙,采用组织块法分离并培养牙周膜成纤维细胞,通过形态学及免疫细胞化学SP法(对细胞进行波丝蛋白、角蛋白染色)进行鉴定.绘制生长曲线,观察细胞生长并计算细胞群体倍增时间.结果:细胞培养成功,表现为漩涡形或放射形生长,形态为长梭形.波丝蛋白染色呈阳性,抗角蛋白阴性,表明细胞来源中胚层.结论:成功从人牙周膜组织中分离培养出入牙周膜成纤维细胞.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2015(032)006【总页数】4页(P872-875)【关键词】人牙周膜成纤维细胞;细胞培养;免疫化学【作者】沈慧娟;李琳娟;康娜【作者单位】广西医科大学附属口腔医院正畸科南宁 530021;广西医科大学附属口腔医院正畸科南宁 530021;广西医科大学附属口腔医院正畸科南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R-33牙周膜成纤维细胞是牙周膜组织中数量最多、功能上最重要的细胞。
它能不断合成与降解胶原，维持牙周膜中胶原的更新与重建，以及通过分泌多种细胞活性因子刺激成骨细胞和破骨细胞完成牙周组织的修复与再生[1]。
利用人牙周膜成纤维细胞建立体外细胞系已成为国内外学者研究正畸牙移动的重要手段。
本实验采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞并进行鉴定，为下一步的正畸研究提供细胞来源，奠定了实验基础。
1.1 实验对象：人牙周膜均取自于2015年6月广西医科大学附属口腔医院口腔外科门诊就诊的11～16岁青少年因正畸需要而拔除的20颗健康前磨牙，均经自愿者知情同意，经过伦理委员会同意。
所选牙齿均为健康的第一或第二前磨牙，无龋坏、根尖周炎、牙周炎等，且该前磨牙无正畸治疗史。
1.2 试验材料及主要仪器设备：维森特培养基(DMEM)培养液；维森特胎牛血清(澳洲血源)；维森特胰蛋白酶(0.25%+0.1%EDTA)；维森特磷酸盐缓冲液(PBS)；四甲基偶氨唑盐(MTT，诺维赞)；抗波丝蛋白抗体、抗角蛋白抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)、多聚甲醛、sp试剂盒、辣根素、DAB溶液(二氨基联苯胺)、苏木精；25 mL塑料培养瓶、6孔板，96孔板。
人牙龈成纤维细胞原代培养及冻存和复苏惠敏;倪莹;郑静;刘健;王帅;张晓明【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2012(000)046【摘要】10.3969/j.issn.2095-4344.2012.46.014% 背景：牙龈成纤维细胞是牙龈固有结缔组织层中主要的细胞，在许多生理和病理过程中起着重要作用.目的：对人牙龈成纤维细胞进行原代培养、鉴定、冻存及复苏.方法：采用组织块培养法培养人牙龈成纤维细胞，并进行形态学和免疫学鉴定.对人牙龈成纤维细胞进行冻存与复苏，倒置显微镜下观察细胞形态变化.结果与结论：人牙龈成纤维细胞原代培养成功率为86.7%，细胞呈梭形或纺锤形.免疫组织化学鉴定抗波性蛋白抗体染色阳性，抗角蛋白抗体染色阴性，为中胚层来源的成纤维细胞.牙龈成纤维细胞冻存与复苏成功，细胞经2次传代后生物学性状与原代相似.提示采用组织块培养法培养原代人牙龈成纤维细胞及冻存与复苏方法可行.【总页数】5页(P8620-8624)【作者】惠敏;倪莹;郑静;刘健;王帅;张晓明【作者单位】滨州医学院附属医院口腔内科山东省滨州市 256600;滨州医学院口腔学院山东省滨州市 256603;滨州医学院临床试验中心山东省滨州市 256603;日照市中医院口腔正畸科山东省日照市 276800;滨州医学院附属医院放射科山东省滨州市 256600;滨州医学院附属医院口腔修复与正畸科山东省滨州市 256600【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.乳鼠海马神经细胞的原代培养以及冻存复苏方法 [J], 张雅丽;高维娟2.原代人视网膜色素上皮细胞的冻存和复苏培养 [J], 刘少山;惠延年;张鹏;马吉献;苏静波3.人视网膜色素上皮细胞原代培养冻存和复苏方法改进 [J], 林少芬;毛羽翔;郑健樑;梁胡洁;唐仕波4.人牙龈成纤维细胞原代培养及冻存和复苏 [J], 惠敏;倪莹;郑静;刘健;王帅;张晓明;5.人牙龈成纤维细胞原代培养方法比较 [J], 刘鹏;徐全臣;许晓燕;杨建军;徐敏华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人牙龈成纤维细胞的体外培养及生长曲线测定作者：王文瑜闫福华姚丽艳陈小玲来源：《海峡科学》2007年第08期【摘要】目的：体外培养正常人牙龈成纤维细胞并测定其生长曲线，初步了解该细胞生物学特性。
方法：用改良组织块法培养人牙龈成纤维细胞，通过MTT比色法研究细胞的生长曲线。
结果：改良组织块法原代培养细胞成活率达80％，培养细胞呈梭形，从第3天呈对数生长，第4－5天进入平台期。
结论：改良组织块法能简便快速地获得人牙龈成纤维细胞，初步了解其生物学特性。
【关键词】人牙龈成纤维细胞组织培养生长曲线人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts, HGFs）是牙龈固有层结缔组织的主要组成细胞，不仅具有活跃的自身更新能力，而且具有合成和降解胶原、弹力纤维、糖蛋白等细胞外基质的功能[1]。
本实验采用改良组织块培养法进行人GFs的原代培养，研究其生物学特性，为进一步研究做好准备。
1 材料和方法1.1主要试剂和仪器DMEM培养液(Gibco，美国)，胰蛋白酶(Gibco，美国)，胎牛血清FBS(天津灏洋生物公司)，超净工作台(上海力申科学仪器有限公司)，CO2孵箱( Heraeus，德国)，倒置相差显微镜(广州光学仪器厂)，MTT (Sigma,美国)，酶联免疫检测仪(Human 德国)1.2方法1.2.1 原代培养选取本院需行阻生牙拔除的患者，在征得患者同意后在术中切取小块牙龈组织。
要求患者没有牙龈增生、炎症及使用过导致牙龈增生的药物。
术前将拔牙器械及术区周围消毒灭菌，无菌条件下获取小块牙龈组织（约3mm×3mm）[2]，立即放入装有无血清DMEM培养液的小瓶中，在超净工作台内用含有抗生素(青霉素100u/ml，链霉素100μg/ml)的PBS反复冲洗，用锐利小剪刀尽量去除牙龈上皮，在玻璃皿上剪成1mm3左右的碎块，均匀铺于六孔培养板底面，其上覆盖20×20mm盖玻片。
沿盖玻片边缘缓慢加入含10％FBS的DMEM培养液4m1，在饱和湿度、5%CO2、37℃标准环境下孵育。
人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征徐燕;李颂;程继光;胡勇;王明丽【期刊名称】《口腔医学研究》【年(卷),期】2002(18)6【摘要】目的 :探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。
方法 :分别采用消化培养法和组织块培养法培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。
通过倒置显微镜活体观察 ,以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。
结果 :消化培养法成功率低于组织块培养法。
光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。
免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。
生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短 ,而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。
结论 :组织块培养法适用于此二种细胞的培养。
细胞生物学特征方面有许多相似形。
【总页数】3页(P375-377)【关键词】人牙龈成纤维细胞;牙周膜成纤维细胞;培养;生物学特征【作者】徐燕;李颂;程继光;胡勇;王明丽【作者单位】安徽医科大学口腔医学院;安徽医科大学基础医学院【正文语种】中文【中图分类】R78;R329.2【相关文献】1.人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞生物学特性的研究进展 [J], 徐杰;税艳青;2.体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响 [J], 刘晓花;商文芝;杜毅;姜欢;王荣林3.人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞生物学活性的研究 [J], 王琨;许彦枝;朱曚曚4.人牙周膜成纤维细胞与牙龈成纤维细胞差异表达基因的批量克隆及其特征分析[J], 郭希民;吴补领;肖明振;蒲勤;赵忠良5.人牙周膜成纤维细胞的体外培养及其生物学性状 [J], 司晓辉;刘正因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人成纤维细胞的原代培养方法及步骤
材料准备
成纤维细胞
人成纤维细胞完全培养基
实验步骤
水浴锅37℃预热。
完全培养基温浴到37℃。
在15mL离心管中加入5mL以上完全培养基备用。
从-80℃冰箱中取出细胞，放入37℃水浴锅中，快速晃动，使冻存液迅速融化。
注意融化过程必须晃动冻存管，保证冻存液融化迅速、均匀；且晃动时应避免水没过管盖造成污染；管内冻存液融化至只剩一个约2mm直径的冰晶时，即停止水浴。
继续晃动冻存管，至冰晶融化。
用75%医用酒精擦拭冻存管外表面。
在超净台中打开冻存管，用巴氏吸管或移液枪吸取细胞冻存悬液，转移至先前准备的离心管中。
用1mL完全培养基洗涤冻存管1次，收集残留细胞，减少损失。
细胞悬液以250×g，离心4min。
离心后去除上清。
加入2mL完全培养基，轻柔吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。
将细胞接种到1个T25培养瓶或底面积相当的培养容器中。
加入足量完全培养基，1个T25培养瓶中培养基总量不少于5 mL。
摇匀细胞，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中。
注意接种2h内不可移动、观察细胞。
这会严重影响细胞贴壁，造成状态不佳、细胞聚团、贴壁不均匀等情况。
复苏次日，观察细胞状态，并更换新鲜的完全培养基或传代。
之后，每2天更换一次完全培养基，直到细胞生长至90%汇合，即需传代。
通常用人成纤维细胞传代比例为1:3，72h内生长至可传代汇合度。
请根据细胞实际生长情况调整传代比例。
人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞的研究的开题报告一、选题背景近年来，牙周炎、牙周病等口腔疾病的发病率呈不断上升趋势，已成为全球公共卫生领域的一大难题。
在口腔疾病中，牙龈成纤维细胞的作用被越来越重视。
牙龈成纤维细胞是牙龈组织中最常见的细胞，具有多种生物学功能，可促进伤口愈合、抑制炎症反应和促进牙周再生等。
然而，随着人们对牙龈成纤维细胞的研究深入，发现它们还具有间充质干细胞的潜能，可分化为多种细胞类型。
血管内皮细胞是血管组织中的主要细胞类型，具有维持血管功能、维持微循环血流、维持免疫平衡等重要职能。
因此，将牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞，对于口腔组织工程以及心脑血管疾病的治疗等领域具有广阔的应用前景。
二、研究目的本研究旨在通过细胞培养技术，探索人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞的可行性及其生物学特性，为口腔组织工程及心脑血管疾病治疗等领域提供技术支持。
三、研究内容和方法1. 实验材料：本研究将采用人牙龈成纤维细胞作为实验材料，细胞系由国内知名生物公司提供。
2. 实验方法（1）牙龈成纤维细胞的培养及验证通过贴壁法将人牙龈成纤维细胞子培养瓶扩增至一定的细胞数目，并从形态学、酶标测定（ALP、COL-I、OST），Flow cytometry等角度验证细胞的纯度及生物学特性。
（2）诱导分化采用NGF、VEGF、EGF等因子对牙龈成纤维细胞进行诱导分化，定期采用形态学、实时荧光定量PCR及免疫荧光等技术对细胞分化特征进行验证和分析，从而得出最佳诱导方案。
（3）生物学特性分析通过细胞增殖、迁移、管腔形成、化学刺激等体外实验及小鼠皮下移植体静止及活物成像免疫组化等研究动物实验，验证诱导分化产物的生物学特性。
四、预期成果通过本研究，预期得出人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞的可行性及其生物学特性。
同时，本研究还有望探索该细胞在口腔组织工程及心脑血管疾病治疗等领域的应用潜力，并为相关领域的研究提供参考依据。
人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定作者：崔娟,孙克勤,李霞,张华屏来源：《中国医药导报》2010年第03期[摘要] 目的:分离培养人牙龈成纤维细胞,为进一步研究细胞因子对牙龈成纤维细胞的调控作用提供实验条件。
方法:用组织块法培养人牙龈成纤维细胞,并进行形态学和免疫学鉴定。
结果:牙龈成纤维细胞原代培养成功并稳定传代,细胞呈长梭形或星形,免疫学鉴定抗波形丝蛋白抗体阳性,抗角蛋白抗体阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。
结论:组织块法培养的细胞符合牙龈成纤维细胞的形态学和免疫学特征,可作为体外细胞模型,为研究细胞因子对其功能的调控作用奠定基础。
[关键词] 牙龈成纤维细胞;细胞培养;鉴定[中图分类号] R329.2+8[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)01(c)-026-02The primary culture and identification of human gingival fibroblastsCUI Juan1, SUN Keqin1, LI Xia1, ZHANG Huaping2(1.Oral Medicine Department of Oral Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China; 2.Central Laboratory of Oral Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)[Abstract] Objective: To isolate and culture human gingival fibroblasts (HGFs) in vitro, and provide the experimental condition for further research on the HGFs regulation by cytokines. Methods: HGFs were primary cultured by tissue explant culture technique and identified by morphological analysis and immunocytochemical analysis. Results: The HGFs were cultured and passaged successfully. The cells showed long spindle or star appearance. By immunocytochemical analysis, these cells tested positive to anti-vimentin antibody and negative to anti-keratin antibody, indicating the cells were mesoderm derived fibroblasts. Conclusion: The cells cultured by tissue explant culture technique are consistent with typical HGFs' characteristics of morphology and immunocytochemical observation. The HGFs are used as cell model in vitro for future research on HGFs regulation by cytokines.[Key words] Gingival fibroblasts; Cell culture; Identification人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)是牙龈结缔组织中的主体细胞,在牙周组织的保护和修复中起重要作用[1]。
人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定-最新文档
人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定
The primary culture and identification of human gingival fibroblasts
CUI Juan1, SUN Keqin1, LI Xia1, ZHANG Huaping2
(1.Oral Medicine Department of Oral Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China; 2.Central Laboratory of Oral Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)
[] Objective: T o isolate and culture human gingival fibroblasts (HGFs) in vitro, and provide the experimental condition for further research on the HGFs regulation by cytokines. Methods: HGFs were primary cultured by tissue explant culture technique and identified by morphological analysis and immunocytochemical analysis. Results: The HGFs were cultured and passaged successfully. The cells showed long spindle or star appearance. By immunocytochemical analysis, these cells tested positive to anti-vimentin antibody and negative to anti-keratin antibody, indicating the cells were mesoderm derived fibroblasts. Conclusion: The cells cultured by tissue explant culture technique are consistent with typical
HGFs' characteristics of morphology and immunocytochemical observation. The HGFs are used as cell model in vitro for future research on HGFs regulation by cytokines.
人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)是牙龈结缔组织中的主体细胞,在牙周组织的保护和修复中起重要作用[1]。
许多学者利用牙龈成纤维细胞体外培养模型,在牙周组织发病机制及治疗方面进行了有益的探索[2]。
原代培养是获取牙龈成纤维细胞的主要手段,
目前有酶消化法和组织块培养法[3]。
本实验采用组织块法培养人牙龈成纤维细胞,为进一步研究细胞因子对牙龈成纤维细胞的调控作用提供实验条件。
1 材料与方法
1.1 主要试剂和仪器
DMEM培养液(Gibco,美国);胎牛血清(四季青,杭州);胰蛋白酶(Sigma,美国);抗波形丝蛋白抗体、抗角蛋白抗体、免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒(中杉金桥,北京);25 ml塑料培养瓶、六孔板(Orange scientific,比利时);RCO3000-7 CO2培养箱(REVCO,美国);GB-Ⅱ超净工作台(北京市新技术应用研究所);倒置显微镜(重庆光学仪器厂)。
1.2 实验方法
1.2.1 组织来源
牙龈组织取材于山西医科大学口腔医院口外科门诊因正畸
需拔牙或者因手术需切除牙龈且牙龈无炎症的患者,征得其同意后切取牙龈组织,患者年龄12～26岁。
1.2.2 组织块法培养及传代
新鲜切取的牙龈组织立即投入预冷含双抗的DMEM培养液中(含青霉素100 U/ml,链霉素100 μg/ml),在超净工作台中用5倍抗生素溶液浸泡消毒,在无菌培养皿中用眼科剪将牙龈组织剪成1 mm3大小(剪切时在组织块上滴加DMEM培养液,且尽量去除上皮组织),用牙科探针将组织块以均匀间距分散接种于25 ml培养瓶壁上,倒置培养瓶在CO2培养箱中(5% CO2,95%空气,100%湿度,37℃恒温)孵育4 h后翻瓶,加入DMEM培养液。
当细胞长至培养瓶底80%左右时,用0.25%胰酶消化,以1∶2或1∶3传代。
1.2.3 细胞的鉴定
1.2.3.1 形态学鉴定倒置显微镜下观察细胞由组织块边缘
游出的情况,观察细胞形态及传代后细胞生长状况。
1.2.3.2 免疫学鉴定细胞传至4代,制成1×105/cm2的细胞悬液,制备细胞爬片,按免疫组化试剂盒说明书及DAB显色步骤,分别进行抗波形丝蛋白抗体、抗角蛋白抗体染色,以磷酸盐缓冲液(PBS)代替抗体作为
阴性对照组,光镜下观察染色结果。
1.2.4 细胞生长曲线
取4代生长状态良好的牙龈成纤维细胞,0.25%胰酶消化后,加入DMEM培养液离心,将细胞稀释为1×104~2×104/cm2,接种于96孔板中,200 μl/孔,每24小时测定一板,每孔加入20 μl
MTT培养4 h。
吸出上清加入150 μl/孔DMSO,室温下振荡10 min;490 nm处测定吸光度,绘制细胞生长曲线。
2 结果
2.1 细胞原代培养成功率
本实验共接种10例牙龈组织,其中8例组织块周围有细胞游出,游出时间为10~15 d,接种的10例组织无一例污染,6例在细胞游出30 d 左右长满瓶底并传代成功,其他2例未在30 d内长满瓶底且细胞有老化趋势,被淘汰,细胞培养成功率为60%。
2.2 细胞传代
细胞单层长满瓶底80%可进行传代,用0.25%胰蛋白酶消化,不同形态的细胞对胰酶敏感性不同,成纤维样细胞几分钟内即被胰酶从瓶壁上消化下来,以此可分离成纤维细胞和上皮源性细胞,传代后贴壁良好,形态不发生改变,生长速度加快,细胞长满单层,呈漩涡状、栅栏状、放射状排列。
2.3 细胞鉴定
2.3.1 形态学鉴定
倒置显微镜下,原代及传代生长的细胞呈长梭形或星形,核
呈圆形或椭圆形,有数目不等、长短不同的胞质突,核仁清晰可见,呈典型的成纤维样细胞形态。
原代培养的细胞以组织块为中心呈放射状生长,传代后的细胞呈放射状或漩涡状走行,排列紧密,有极性。
2.3.2 免疫学鉴定
光镜下对细胞进行免疫组化染色观察,显示细胞抗波形丝蛋白染色阳性,胞质内阳性颗粒均匀分布,胞核清晰、无染色;抗角蛋白染色阴性,证明细胞为中胚层来源,且无上皮源性细胞混杂。
阴性对照组均未见阳性染色结果。
2.4 细胞生长曲线
见图1。
图1HGFs的生长曲线
3 讨论
牙周病是发生在牙齿支持组织(包括牙龈、牙周膜、牙槽骨和牙骨质)的慢性非特异性感染性疾病,是导致成年人失牙的主要原因[4]。
随着老龄化社会的到来,牙周病尤其牙周炎更将成为突出的保健问题,是学者研究的热点和难点。
广义上牙周病包括牙龈炎和牙周炎。
牙龈炎是牙周炎的前驱和首要症状,防治牙龈炎可有效防止牙周炎的发生及发展。
牙龈成纤维细胞是牙龈结缔组织中的主体细胞,不仅具有活跃的自身更新能力,而且可合成胶原纤维、弹性纤维及基质[5]。
已有报道牙龈成纤维细胞具有一定的潜在成骨能力,使牙龈成纤维细胞有望成为牙周组织工程的种子细胞[6-7]。
此外,牙龈成纤维细胞的体外培养成活率高于牙周膜成纤维细胞,取材方便,创伤较小。
因此,体外建立牙龈成纤维细胞模型有利于今后对牙周组织炎症机制和防治措施的进一步研究。
细胞原代培养目前有酶消化法和组织块培养法,本实验利用
组织块法,操作简便,污染率低,创伤小,成活率较高,进一步证实组织块法是培养牙龈成纤维细胞的经典方法。
通过形态学和免疫学鉴定,细胞呈长梭形或星形,抗波形丝蛋白抗体阳性,抗角蛋白抗体阴性,证明是中胚层非上皮来源细胞,结合组织取材部位,证实本实验培养的是人牙龈成纤维细胞。
在传代培养过程中,由于操作和条件的限制,有时不能完全去除上皮组织而混有上皮源性细胞,但两种细胞对胰酶的敏感性不同,消化时间长短不同,因此可通过传代纯化成纤维细胞[3]。
细胞培养是进行多种实验研究的基础,组织中分离的原代细胞与体内细胞性状相似,较好地保存了细胞的遗传特征和生物学特性[8],又避免了体内研究所受的多因素干扰,使实验结果更为可靠。
但是体外培养的细胞反复传代性状有可能发生改变。
因此,体外培养的细胞要在稳定的状态下方可进行实验。
本实验通过对细胞的形态学观察及对绘制的细胞生长曲线进行分析显示,3~6代牙龈成纤维细胞形态结构稳定,生长状态良好,适于进行实验研究;8代以后细胞生长时间延长,细胞形态改变,有
融合老化趋势,不再适合进行实验研究。
细胞培养的成功与否受到很多因素的影响,①新鲜组织的消毒:尽量避免组织过多在外暴露及与其他有菌物品接触,实验中应用一定浓度的抗生素既防止污染又不影响细胞的生长;②减少影响接种时细胞贴壁的不利因素:接种4 h内应尽量不移动培养瓶,而且接种时组织块的湿润程度要适中;③培养液胎牛血清的
浓度:细胞从组织块游出过程中,培养液中胎牛血清的浓度高,更利于细胞生长;④无菌观念:操作的全部过程都要谨慎保持无菌观念,使细胞生长良好。
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