细胞工程
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细胞工程的名词解释是什么细胞工程,是一门通过应用生物技术和工程原理研究和利用细胞的学科。
它将工程学和生物学相结合,旨在改变细胞的特征、功能或行为,以满足各种实际需求。
细胞工程在医学、农业、食品工业等领域具有广泛的应用前景。
一、细胞工程的基本原理细胞工程的核心在于对细胞的改造和设计。
研究人员通过基因工程技术、细胞培养和细胞分化等手段,对细胞进行修饰和改变,使其具备特定的功能和特性。
这种方式在基因治疗、组织工程和器官移植等领域具有重大意义。
基因工程技术是细胞工程的重要工具之一。
通过插入、删除或修改细胞的基因序列,研究人员可以改变细胞的生理特征和功能。
基因治疗便是细胞工程的一个应用领域,通过提供、修复或替换功能缺失的基因,治疗一些遗传性疾病。
细胞培养是细胞工程的另一个主要手段。
研究人员将细胞在实验室中繁殖和培养,以满足大规模生产和应用的需要。
细胞培养技术广泛应用于药物研发、生物制造和组织工程等领域,为人类健康和生产提供了重要的支持。
细胞分化是细胞工程的重要环节。
通过控制和引导细胞的分化方向,研究人员能够使其发展成为特定类型的细胞或组织。
这对于再生医学和组织工程等领域来说非常关键,为细胞材料的修复和替代提供了可能。
二、细胞工程的应用领域细胞工程在医学领域具有巨大的潜力。
通过细胞工程技术,研究人员可以设计和构建人工器官,替代或辅助受损的组织和器官,为病患提供重要的帮助。
此外,细胞工程还可以用于研发新型药物和治疗方法,提高疗效和降低副作用。
农业领域也是细胞工程的重要应用领域之一。
通过改造作物细胞的基因,在作物中增加耐虫性、抗病性或提高产量等特征,可以有效提高农作物的质量和产量,减少对化学农药的依赖,实现可持续农业的发展。
此外,细胞工程还在食品工业中起到重要的作用。
研究人员通过细胞工程技术,培育高营养价值和功能性的食品材料。
这不仅可以满足人们对于健康食品的需求,还有助于解决全球食品供应和营养不足的问题。
三、细胞工程面临的挑战与展望尽管细胞工程在多个领域已经取得了显著的进展,但仍然面临着许多挑战。
细胞工程名词解释细胞工程是一门跨学科的科学,涉及生物学、工程学和医学等领域。
它利用细胞和细胞内部的分子机制来改变或控制细胞的行为和功能,旨在开发新的治疗方法、生产新的药物和材料,甚至重新构建组织和器官。
细胞工程中涉及的名词有很多,下面将逐个进行详细解释。
1. 细胞:细胞是生物体的基本单位。
它由细胞膜、细胞质和细胞核组成。
不同类型的细胞具有不同的结构和功能,包括神经细胞、肌肉细胞、免疫细胞等。
2. 细胞培养:细胞培养是指将细胞从生物体中分离出来,并在人工培养基中提供适宜的环境条件以维持其生长和繁殖。
细胞培养是细胞工程研究的基础,也是生产细胞和组织相关产品的必要过程。
3. 细胞系:细胞系是指从同一来源的细胞分离出的并能无限传代的细胞群。
细胞系的建立对于细胞研究和应用非常重要,可以提供大量相同的细胞用于实验和生产。
4. 基因工程:基因工程是指通过改变细胞或生物体中的基因来获得新的性状或功能。
在细胞工程中,基因工程被广泛应用于构建基因表达系统、改良细胞的代谢途径或增强细胞分泌功能等。
5. 组织工程:组织工程是利用细胞和支架材料构建人工组织或器官。
通过将细胞种植到支架材料上,并提供适宜的生长条件,可以使细胞自组织形成功能性的组织结构。
6. 干细胞:干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜力的细胞。
干细胞可以分化为各种不同类型的细胞,包括神经细胞、心肌细胞等。
在细胞工程中,干细胞被广泛研究和应用于再生医学和组织工程。
7. 基因治疗:基因治疗是一种通过引入或修复患者体内的遗传物质来治疗疾病的方法。
在细胞工程中,基因治疗被用于修复或增强细胞的功能,以实现治疗效果。
8. 生物反应器:生物反应器是用于在控制条件下培养细胞的设备或系统。
生物反应器的设计和优化对于细胞工程研究和应用至关重要,可以提高细胞的产量和质量。
9. 细胞活力评估:细胞活力评估是用于确定细胞的生存状态和活力水平的方法。
通过测量细胞的代谢活性、细胞膜完整性、细胞数量等指标,可以评估细胞的健康状态和响应。
细胞工程的真题和答案解析细胞工程是一门集合生物学、工程学和医学的交叉学科,已经在医疗领域取得了突破性的进展。
它涉及对细胞的研究、修改和应用,旨在解决人类健康问题。
本文将从细胞工程的定义、应用领域及未来发展等几个方面进行探讨和解析。
一、什么是细胞工程细胞工程是一种使用先进的技术手段,研究和改变细胞的结构和功能,以实现对人类身体的治疗和修复的学科。
通过对细胞进行操作、培养和修饰,细胞工程师可以改变细胞的基因表达、分化状态和生理功能,从而达到治疗疾病或修复受损组织的目的。
二、细胞工程的应用领域1. 细胞治疗:细胞工程在治疗各种疾病方面发挥着重要作用。
例如,通过改变造血干细胞的基因表达,可以治疗一些遗传性疾病;通过培养和扩增患者自身的干细胞,可以替代受损的组织或器官;通过修复受伤的神经细胞,可以帮助患者康复等。
2. 细胞外基质工程:细胞外基质是细胞周围的一个复杂环境,它对细胞生长、分化和功能发挥起着重要影响。
细胞外基质工程就是在体外人工合成或修复这种复杂环境,促进细胞的正常生理活动。
这项技术可以用于修复受损的组织、促进细胞生长,甚至帮助组织再生。
3. 细胞材料工程:细胞工程可以将细胞与材料结合,形成一种新的材料体系,具有比传统材料更好的生物相容性和生物活性。
这种材料可以用于替代骨骼、关节等受损组织,并在治疗过程中促进组织的修复和再生。
三、细胞工程的未来发展细胞工程作为一门新兴学科,仍然面临许多挑战和机遇。
1. 基因编辑技术的发展:CRISPR-Cas9技术的出现,加速了基因编辑领域的发展。
细胞工程师可以利用这种技术,精确地改变细胞的基因序列,以实现对细胞功能和特性的精确控制。
2. 人工智能的应用:人工智能在医学领域的应用日益广泛,它可以用于对细胞图像、细胞活动和基因表达的分析,发现规律和模式。
这将有助于细胞工程师更好地理解细胞的生物学行为和物理特性。
3. 微纳技术的突破:随着微纳技术的发展,对细胞的操作和控制越来越精确。
细胞工程名词解释细胞工程(Cell Engineering):是指按照一定的设计方案,通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作,获得重构的细胞、组织、器官以及个体,创造优良品种和产品的综合性生物工程。
MTT比色法:线粒体脱氢酶能将染料MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中,经酸性异丙醇溶解后测定其OD值,可反映活细胞的代谢水平活体染色:是利用某些无毒或毒性很小的染料来显示细胞内某些天然结构,而不影响细胞的生命活动或产生任何物理、化学变化引起细胞的死亡。
接触抑制定义:由于细胞接触而抑制细胞运动的现象。
由于接触抑制,正常细胞不互相重叠于其上生长,而是呈单层细胞生长。
密度抑制:细胞接触汇合成片后,虽发生接触抑制,但只要营养充分,细胞仍然能够增殖分裂,数量仍在增多,但当细胞密度进一步增大,培养液中的营养成分减少,代谢产物增多时,细胞因营养的枯竭和代谢物的影响,则发生密度抑制,导致细胞分裂停止。
细胞周期:是指一个母细胞分裂结束后形成的细胞至下一次再分裂结束形成两个子细胞的时期,可分为G1期、S期、G2期和M期。
细胞系:由原代培养经初步纯化,获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。
细胞株:从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。
抗原:一类能激发机体产生免疫应答,并能与相应的免疫应答产物(抗体或致敏淋巴细胞)发生特异性结合的物质,包括蛋白质、多糖、核酸、病毒、细菌等。
抗体:抗原刺激机体,产生免疫学反应,由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白,即抗体。
单克隆抗体:当机体受抗原刺激时,抗原上的多个决定簇分别激活不同的B细胞。
其中,每一个B细胞分裂增殖形成的浆细胞群就是一个纯系,即单克隆,只针对某一特定抗原决定簇起作用。
(由单克隆产生的只针对一个抗原决定簇的抗体叫做单克隆抗体(McAb),简称单抗。
)多克隆抗体:在体液免疫反应中,由于一个抗原分子上有多个决定簇,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,简称多抗。
细胞工程知识点填空一、细胞工程的概念细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法,通过()水平或()水平上的操作,按照人们的意愿来改变细胞内的()或获得细胞产品的一门综合科学技术。
二、细胞工程的分类1、植物细胞工程植物组织培养原理:()。
过程:外植体经过()形成愈伤组织,愈伤组织经过()形成胚状体或丛芽,进而发育成完整植株。
应用:快速繁殖、培育()、获得细胞产品等。
植物体细胞杂交原理:()和()。
过程:去除细胞壁获得(),诱导原生质体融合形成(),再经过()培养形成杂种植株。
意义:克服()障碍,培育作物新品种。
2、动物细胞工程动物细胞培养原理:细胞增殖。
过程:取动物组织块,用()处理分散成单个细胞,制成细胞悬液,放入培养瓶中进行原代培养和传代培养。
条件:无菌、无毒的环境,营养,(),温度和 pH 等。
应用:生产生物制品、检测有毒物质、培养医学研究用的细胞等。
动物体细胞核移植原理:()。
过程:将供体细胞的细胞核移入去核的()中,使其重组并发育成新个体。
应用:加速家畜()进程,保护濒危物种等。
动物细胞融合原理:()。
方法:物理法()、化学法()、生物法()。
应用:制备单克隆抗体。
三、植物细胞工程的应用1、微型繁殖优点:保持优良品种的()。
实例:兰花、生菜等的快速繁殖。
2、作物脱毒选材部位:()。
优点:提高作物的()和()。
3、人工种子组成:()、人工胚乳和人工种皮。
优点:不受()和()限制,便于贮藏和运输。
4、细胞产物的工厂化生产细胞产物:()、蛋白质、脂肪、糖类等。
实例:人参细胞培养生产人参皂苷。
四、动物细胞工程的应用1、单克隆抗体制备过程:将()与骨髓瘤细胞融合,经过多次筛选获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞,再进行体内或体外培养获得单克隆抗体。
优点:()强、()高、可大量制备。
应用:诊断疾病、治疗疾病、运载药物等。
2、动物细胞融合与细胞杂交应用:制备()、生产生物制品等。
3、胚胎移植过程:将雌性动物体内的早期胚胎,或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎,移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内,使之继续发育为新个体。
简述生物技术涉及的五大工程及其研究内容一、基因工程基因工程,又称为遗传工程,是利用分子生物学技术,对生物体的遗传物质进行操作和改造,以达到定向改变生物性状和性能的目的。
基因工程的研究内容包括基因克隆与表达、基因突变与功能研究、基因组编辑等。
基因工程在农业、医药、工业等领域有着广泛的应用,如转基因作物、基因治疗、生物制药等。
二、细胞工程细胞工程是指利用细胞生物学和分子生物学技术,对细胞进行培养、改造和繁殖,以获得具有特定性状的细胞或组织。
细胞工程的研究内容包括细胞培养与繁殖、细胞分化与发育、细胞融合与基因转移等。
细胞工程在农业、医学、环保等领域有广泛的应用,如组织工程、干细胞治疗、胚胎工程等。
三、酶工程酶工程是利用酶学和生物化学技术,对酶进行分离、纯化、改造和大规模生产,以获得具有特定催化性能的酶。
酶工程的研究内容包括酶的分离与纯化、酶的改造与定向进化、酶的生产与应用等。
酶工程在工业、医药、环保等领域有广泛的应用,如生物传感器、生物催化、环保治理等。
四、发酵工程发酵工程是指利用微生物的代谢特点和反应机制,通过大规模培养和控制发酵条件,生产出具有特定性能的代谢产物。
发酵工程的研究内容包括微生物的代谢调控、发酵过程优化、发酵产物分离纯化等。
发酵工程在食品、饮料、化工、医药等领域有广泛的应用,如酒精制造、抗生素生产等。
五、蛋白质工程蛋白质工程是指利用分子生物学技术,对蛋白质进行设计和改造,以达到改变蛋白质的性状和性能的目的。
蛋白质工程的研究内容包括蛋白质结构与功能分析、蛋白质设计与合成、蛋白质修饰与改造等。
蛋白质工程在医药、农业、工业等领域有广泛的应用,如抗体药物研发、酶制剂生产等。
总结:生物技术涉及的五大工程各有其独特的研究内容和应用领域,但它们之间也存在相互联系和交叉。
基因工程和细胞工程是其他三大工程的基础,酶工程和发酵工程则分别涉及到生物催化和大规模培养技术,而蛋白质工程则更侧重于蛋白质的设计和改造。
细胞工程第1章细胞培养的设施与基本条件1、什么是细胞培养?细胞培养是最值培养的一种形式,所谓组织培养(tissue culture)习惯上泛指所有的体外培养,即器官培养、组织培养和细胞培养的总称。
其本意是指从活的机体中提取出组织或细胞,模拟机体内生理条件,在体外建立无菌、适温和一定营养条件等,使之生长和生存,并维持其结构和功能的技术称为组织培养。
2、细胞培养:将组织块用机械方法或酶解法分离为单个细胞,做成细胞悬液,再培养于固体基质上,成单细胞层生长,或在培养液呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。
3、细胞工程实验室与其他一般实验室的主要区别:严格保持无菌环境,避免微生物及其他有害因素的影响。
4、细胞工程实验室设计•原则防止微生物污染和有害因素影响•要求工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘划分不同功能区或用铝合金隔板隔开无菌操作区应在室内较少走动的内侧•清洗和消毒安置在另室5、细胞工程实验室核心部分:准备室、缓冲间、培养室6、细胞培养设备•CO2培养箱:CO2培养箱设定的条件为37 ℃,5%CO2 。
•使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题:①用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶盖微松,以保证通气。
②保持培养箱内空气干净。
定期消毒(90 ℃,14 h)。
③箱内灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度,避免培养液蒸发。
7、生物安全防护水平(BSL)由一级防护屏障(安全设备)和二级防护屏障(实验室设施)组合构成四级生物安全水平。
一级生物安全防护水平(BSL-1):适合于非常熟悉的病源,不会经常引发健康成人疾病,对实验人员和环境潜在危险小。
一般也不使用特殊的遏制设备和设施。
二级生物安全防护水平(BSL-2):适合于对人和环境有中度潜在危险的病源,应在生物安全柜中或其它物理遏制设备中进行。
三级生物安全防护水平(BSL-3):该会引发严重的、可能致死的疾病的病源。
在生物安全柜或其他物理遏制装置中进行,或由穿戴合适防护服及设施的实验人员进行。
实验室经过特殊设计和施工。
四级生物安全防护水平(BSL-4):处理特别危险的传染源8、细胞培养的基本条件无菌条件:净化工作室,高效过滤器,生物安全柜,超净工作台,紫外灯,电热干燥箱,滤器,高压灭菌器,抗生素细胞生长条件:纯水蒸馏器,纯水仪,培养板,培养瓶,CO2培养箱,培养基,血清细胞检测条件:倒置显微镜,高速离心机,移液器细胞保存条件:液氮罐实验室安全:生物实验室安全,P1,P2,P3,P4实验室安第2章清洗与消毒1、清洗目的:清除影响细胞生长的杂质和微生物。
要求:清洗后的器皿要干净、透明、无油迹,且无任何残留物质。
清洗完毕后的器皿在消毒前必须进行严密包装,以便消毒及储存,防止落入灰尘及消毒后再次被污染。
2.、玻璃器皿的清洗清洗后玻璃器皿的要求:干净、透明、无油迹、无残留物质玻璃器皿清洗的四个步骤:1.浸泡:新器皿→水完全浸泡过夜→刷洗→2-5%盐酸浸泡过夜/煮沸30min;用后器皿→完全浸入水中过夜,避免内部气体遗留。
2.刷洗:优质洗衣粉/清洗剂→软刷洗涤→净水彻底冲去洗液。
注意事项—保护表面光洁度;不留死角3.浸酸:清洁液酸缸浸泡,≥6小时或过夜。
清洁液变绿应重新配制4.冲洗:洗涤装置或手工流水冲洗10min以上→蒸馏水清洗3~5次,备用。
晾干/烘干→包装→高压(15磅20min)/干热(160℃,2h)3、胶塞的清洗细胞培养中所用的橡胶制品主要是瓶塞。
新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质,应先用自来水冲洗,再做常规处理胶塞的常规清洗方法:用后胶塞→水中浸泡→2%NaOH/洗衣粉煮沸10~20min (除蛋白质)→自来水冲洗→1%(2-5%盐酸)稀盐酸浸泡30min(15min)→自来水冲洗5次→蒸馏水冲洗5次→煮沸10-20min→晾干备用。
新胶塞(带滑石粉)→自来水冲洗→常规清洗方法4、塑料制品的清洗一次性物品:多无毒、已无菌处理,开包即用。
可重复使用制品:使用次数不宜过多。
清洗过程:残留附着物→脱脂棉清拭→流水冲洗→晾干→2%NaOH浸泡过夜→自来水冲洗→2-5%盐酸浸泡30min→自来水和蒸馏水冲洗→晾干→75%酒精浸泡/紫外线照射30min,备用。
不宜用毛刷刷洗,防止划痕。
用后应立即浸入水中,防附着物干结。
5、包装严密包装的目的:便于消毒及储存,防止再次被污染。
包装材料:用皱纹包装纸、硫酸纸、牛皮纸、棉布、铝饭盒、特制玻璃消毒筒、较大培养皿、锡箔等。
局部包装:培养瓶、滤器、盐水瓶、吸管(脱脂棉堵塞管接口端)、消毒筒管(筒底垫棉花)的口→先密封→再牛皮纸包起来备用。
全包装:较小培养皿、加样器吸头等。
铝饭盒包装:注射器、金属器械等。
包装注意事项:注意期限;标明品名等。
6、消毒:目的:严防培养物细菌、真菌和病毒等污染物理灭菌法化学消毒法抗生素消毒7、消毒与灭菌1消毒:杀死物体上病原微生物的方法;并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物2灭菌:杀死物体上所有微生物的方法3防腐:防止或抑制微生物生长繁殖的方法。
4.无菌:不存在活的微生物。
5.无菌操作:防止微生物进入机体或局部环境的操作技术。
8、影响消毒灭菌效果的因素1.影响因素:(1)消毒剂的性质、浓度与作用时间(2)微生物的污染程度(3)微生物的种类和生活状态(4)环境中有机物(5)温度、湿度、酸碱度(6)化学拮抗物2.注意事项①严格掌握所用消毒剂的浓度、消毒时间与使用方法。
②使用新鲜配制的消毒剂。
③消毒剂应置于消毒过的清洁容器内贮放备用。
④待消毒物品须洗刷干净,去除油污及血、脓等有机物方可消毒。
⑤挥发性消毒液应贮放在有盖容器内,并定期测量比重。
9、思考题:1.配制清洁液时应注意哪些问题?如何判断清洁液已经失效?2.细胞培养室常见的消毒方法有哪些?3.胶塞如何清洗?为什么?4.干热消毒和湿热消毒的区别有哪些?5.常用的化学消毒方法有哪些?第3章细胞工程的技术基础Ⅰ、无菌操作技术:细胞在体外培养过程中最怕被污染,因此,防止污染是决定细胞培养成败的关键。
无菌概念和无菌操作必须贯穿整个培养过程的始终。
1、实验器具和材料的准备在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。
有关数据的计算要事先做好。
根据实验要求,准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内,然后开始消毒。
这可以避免开始实验后,因物品不全往返拿取而增加污染机会。
2、洗手和着装:原则上和外科手术相同。
3、无菌培养操作进行培养时,动作要准确敏捷,不能用手触及已消毒器皿,如已接触,要用火焰烧灼消毒或取备品更换。
Ⅱ、培养细胞的观察1、肉眼观察培养物颜色及混浊度2、倒置显微镜观察细胞生长状态1、细胞计数法细胞计数法是用血细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数目,用以测定细胞增殖和调整细胞浓度的一种方法。
细胞计数的原则:”S”型计数,遵循数上不数下数左不数右的原则。
注意:镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团占10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。
计算细胞数量:细胞数/ml=4大格细胞总数/4×1042、细胞生长曲线细胞生长曲线是观察细胞在一代生存期内的增生过程的重要指标,以培养时间(d)为横坐标、细胞密度为纵坐标所做出的曲线。
常用的方法为:在同一规格的培养瓶中,接种同等量的同一代细胞,经培养后每隔24小时取出几瓶细胞进行计数,以培养时间为横座标,不同时刻的细胞数的对数为纵座标,标出各点并连成线,即为该细胞的生长曲线,可反应出细胞生长的动态。
3、细胞分裂指数细胞分裂指数是指分裂期细胞在全部细胞中所占的百分率,用以表示细胞的增殖旺盛程度。
一般计数1000个细胞中的细胞分裂指数。
公式4、细胞贴壁率细胞贴壁率又称接种存活率,用于观察贴壁附着生长细胞,主要反映细胞的生存能力,和部分底物材料的相容性。
5、细胞周期细胞周期是指一个母细胞分裂结束后形成的细胞至下一次再分裂结束形成两个子细胞的时间,仅指一个细胞的分裂生长周期时间。
6、细胞活力测定方法MTT比色法:活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物(formazan),并沉淀在细胞中,而死细胞没有这种功能。
二甲亚砜(DMSO)能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物,溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。
再用酶标仪测定OD值。
CCK-8 法(Cell Counting Kit-8):试剂中含有WST-8【2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体【1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲脂】(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒染料(Fromazan dye)。
甲瓒染料的数量与活细胞数量成正比,因此可以根据测定吸光度值来测定增值细胞和活细胞数。
Ⅲ、细胞培养中常用的染色方法1、活体染色体外活体染色就是在体外条件下用某种染色剂(即活体染料)对活的细胞或组织进行染色,而不影响活细胞的生命活动的一种方法。
利用这种方法,可以对培养物进行染色观察,经染色的培养物还可以继续进行培养。
活体染料:1)碱性活体染料:a、噻嗪类(次甲基蓝、甲苯胶蓝)b、哑喷类(量焦油蓝、量焦油紫)c、吖嗪类(中性红、詹纳斯绿)d、三酚苯甲烷类(甲基紫、维克多利亚蓝)2)酸性活性染料:(台盼蓝、刚果红、吡咯蓝)体外活体染色一般用碱性活体染料。
酸性活体染料只用于体内活体染色,体外活细胞难以着色。
体内活体染色时,注射的染料浓度可高达1%~2%。
体外活体染色以1‰~0.3 ‰浓度较为合适可以用平衡盐溶液、PBS或生理盐水配制2、活体染色的方法(1)台盼蓝染色1)用Hank’s液配制0.1%台盼蓝溶液;2)用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液消化培养的贴壁细胞;3)加入适量的Hank’s液制成细胞悬液;4)每毫升细胞悬液加入10μl 0.1%台盼蓝溶液,混匀;5)用毛细吸管吸少许混合液置细胞计数板,并在显微镜下计数;6)计数1000个细胞中的活细胞(不着色)和死细胞(染上蓝色)数目。
计算活细胞百分比。
(2)吖啶橙荧光染色:吖啶橙是一种常用荧光染料,用于直接观察活细胞或固定染色观察细胞。
它可与细胞内的DNA、RNA结合,但发出的荧光颜色也不一样,DNA呈亮绿色,RNA呈橘红色至火红色。
3、染料排除检测法由于死细胞的细胞膜通透性发生改变,某些染料可大量进入却不被排除,因而细胞显示一定的颜色。
而活细胞由于能排除进入细胞内的染料,故不易着色。
1、台盼蓝排除检测法2、溴化乙锭和碘化丙锭排除检测法:溴化乙锭(EB)和碘化丙锭(PI)均为荧光染料,可与DNA特异结合。
1)染液配制:取EB或PI 5mg、枸橼酸钠0.1g、NP-40 0.3ml,共溶于100ml蒸馏水中,避光保存。