组胺含量的测定5
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一、实验目的1. 学习组胺的提取和分离方法。
2. 掌握紫外分光光度法测定组胺含量的原理和方法。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理组胺(histamine)是一种广泛存在于动物组织中的生物胺,具有多种生物学功能。
组胺的测定对于研究其生物学作用、病理变化以及药物疗效等具有重要意义。
本实验采用紫外分光光度法测定组胺含量,其原理是组胺在特定波长下具有特征吸收,通过测定其吸光度,可以计算出组胺的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:组胺标准品、样品、乙腈、磷酸盐缓冲溶液、氯化钠等。
2. 仪器:紫外分光光度计、电子天平、离心机、恒温水浴锅等。
四、实验方法1. 标准曲线的绘制(1)准确称取一定量的组胺标准品,用乙腈溶解并定容至一定体积,配制成一系列不同浓度的组胺标准溶液。
(2)在紫外分光光度计上,以磷酸盐缓冲溶液为空白,于特定波长下测定各浓度组胺标准溶液的吸光度。
(3)以组胺浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
2. 样品中组胺含量的测定(1)准确称取一定量的样品,用乙腈溶解并定容至一定体积。
(2)离心分离,取上清液。
(3)在紫外分光光度计上,以磷酸盐缓冲溶液为空白,于特定波长下测定样品溶液的吸光度。
(4)根据标准曲线,计算样品中组胺的含量。
五、实验结果与讨论1. 标准曲线的绘制根据实验数据,绘制组胺标准曲线,其线性范围为0.1~10.0 μg/mL。
相关系数R²=0.9987,表明标准曲线线性良好。
2. 样品中组胺含量的测定根据标准曲线,计算样品中组胺的含量。
结果如下:样品1:组胺含量为2.5 μg/mL样品2:组胺含量为3.8 μg/mL样品3:组胺含量为1.2 μg/mL3. 讨论本实验采用紫外分光光度法测定组胺含量,操作简便、准确度高、重复性好。
实验结果表明,该方法适用于样品中组胺含量的测定。
在实验过程中,需要注意以下几点:(1)样品处理过程中,应尽量避免组胺的损失。
组胺的检测组胺是自体活性物质之一,在体内由组氨酸脱羧基而成,组织中的组胺是以无活性的结合型存在于肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中,以皮肤、支气管粘膜、肠粘膜和神经系统中含量较多。
当机体受到理化刺激或发生过敏反应时,可引起这些细胞脱颗粒,导致组胺释放,与组胺受体结合而产生生物效应。
抗组胺是拮抗组胺对人体的生物效应,即应用抗组胺药物。
抗组胺受体就是拮抗组胺的H1和H2受体。
由于此两种受体在人体内分布不同而产生不同的效应,它是抗组胺药应用治疗疾病的生理药理基础。
毒理药物中毒组胺主要用于胃分泌功能检查,作最大酸分泌(MAO)测定。
但目前已被五肽胃泌素取代。
组胺通过激活体内组胺H1受体和H2受体,收缩多种平滑肌如气管、支气管和胃肠道平滑肌;但同时松弛小血管平滑肌,增加毛细血管通透性;还能强烈刺激胃酸分泌,减慢房室传导,增加心肌收缩力等。
误用大剂量或静脉给药可引起中毒。
食物中毒大量检测表明,海产鱼中的青皮红肉鱼类含组胺较高,当鱼不新鲜或腐败时,鱼体中游离的组胺酸经脱羧酶作用产生组胺. 组胺中毒潜伏期一般为0.5~1小时,最短可为5min,最长达4h.检测方法1.分光光度法1 主要仪器和试剂721型分光光度计组胺标准溶液:取经95℃干燥2.5小时的磷酸组织胺分析纯试剂配制成含20ug·ml 的组胺标准溶液。
0.2 对氨基苯磺酸溶液(简称甲液)1oNNaNO 溶液(简祢乙液),现配现用。
所用水均为二次蒸馏水。
2 组胺测定方法及条件试验2.1 测定方法:在25ml容量瓶中,移入一定量的组胺标准溶液,依次加入0-2 甲液、0.4%HCI、10%乙液和2.0%NaCO 溶液,用水稀释至刻度,摇匀。
于25℃室温下放置20分钟,用试剂空白为参比,测其吸光度值。
2.2 吸收光谱:取2.0ml组胺标准溶液,按上述方法显色,以水为参比,分别测定显色化合物和试剂空白的吸收光谱。
图1表明显色化合物在506nm 处有一最大吸收,本实验取506nm 作为吸收波长。
偶氮比色法测定鱼类组胺含量实验报告
偶氮比色法测定鱼类组胺含量实验报告
本实验旨在使用偶氮比色法测定鱼类中组胺的含量。
组胺是一种
常见的生物胺,其含量高会对人体健康造成危害。
因此,对食品中组
胺含量的检测十分必要,本实验将使用偶氮比色法对鱼类中组胺含量
进行测定。
实验材料:鱼类样品、无水乙醇、氯化钠、三氯乙酸、偶氮二甲苯、去离子水、标准组胺溶液等。
实验步骤:
1.取适量鱼类样品,用无水乙醇将其浸泡3小时,摇匀后离心10分钟。
取上清液置入容量瓶中,加去离子水至刻度线。
2.取5ml上清液放入离心管中,加入氯化钠和三氯乙酸,离心10分钟,取上清液备用。
3.取出0.5ml上清液置于试管中,加入偶氮二甲苯溶液和氯化钠
溶液,摇匀,静置10分钟。
4.加入去离子水至刻度线,摇匀后立即测定吸光度。
5.将标准组胺按照上述方法进行操作,测定吸光度,并以标准曲
线计算出样品中组胺的含量。
实验结果:
本实验使用偶氮比色法对鱼类样品进行测定,得出样品中组胺的
含量为50mg/kg。
实验结论:
本次实验使用偶氮比色法成功测定了鱼类样品中组胺的含量。
通
过实验结果可以看出,该样品中组胺含量较高,需要加以注意。
同时,该方法简单易操作,可用于食品中组胺含量的检测。
总结:
本次实验使用的偶氮比色法是一种常见的检测组胺含量的方法,
操作简单,结果可靠。
通过该方法可以快速准确地测定食品中的组胺
含量,对于保障人们的健康非常重要。
同时,在实验中还需要加强对化学试剂的储存和使用,避免误操作造成危险。
/现代食品XIANDAISHIPIN102LC 测定水产品中组胺含量Determination of Histamine in Aquatic Products by LC◎ 马烨晶(浙江华才检测技术有限公司,浙江 诸暨 311800)Ma Yejing((Zhejiang Huacai Testing Technology Co., Ltd., Zhuji 311800, China)摘 要:高效液相色谱具有检测灵敏度高、定性准确、检出限低、定量分析准确的特点,是目前水产品中生物胺含量分析测定的主要手段。
组胺的测定需经衍生,丹酰氯是液相色谱常用柱前衍生试剂,其操作简单、衍生物稳定性好、可定量完成磺酰化反应,有较强的荧光和紫外吸收、灵敏度高、基体干扰不明显等优点,是高效液相色谱检测生物胺中应用最多的柱前衍生试剂。
关键词:高效液相色谱;水产品;组胺;丹酰氯Abstract :High performance liquid chromatography has the characteristics of high sensitivity, accurate, low detection limit and accurate quantitative analysis. Determination of histamine by derivatization with dansyl chloride reagent is commonly used in liquid chromatography with pre-column derivatization has the advantages of simple operation, good stability, can complete the quantitative derivatives sulfonylation, have strong f luorescence and UV absorption, high sensitivity, matrix interference is not obvious advantages, is the detection of biogenic amines in HPLC application most of the derivatization reagent.Key words :High performance liquid chromatography; Aquatic products; Histamine; Dansyl chloride 中图分类号:TS254.7生物胺是一类具有生物活性含氮的低分子量有机化合物的总称,其中组胺对人类健康的影响最大。
用可见-紫外分光光度法测定水产品中组胺的含量江生;汪敏;白亚敏;韩燕【摘要】To establish a UV method for the determination of histamine in the aquatic products. With positive amyl al-cohol extraction, encounter azo reagent orange. The detection wavelength was set at 480 nm. Histamine linear range was: 0.407 81μg/mL~4.078 1μg/mL (R2=0.999 7) .The average recovery was 94.8%, and all RSD less than 1.1%(n=9) . This method is sensitive, accurate and reproducible and can be used to control the quality of the cosmetic.%建立了水产品中组胺含量的测定方法。
采用正戊醇提取,偶氮试剂显色,可见-紫外分光光度计检测,测定波长为480 nm。
试验结果表明,当组胺的质量浓度在0.40781μg/mL~4.0781μg/mL范围内,质量浓度与吸光度呈良好线性关系(R2=0.9997)。
平均回收率为94.8%, RSD为1.1%(n=9)。
本法简单,易操作,测定结果准确。
【期刊名称】《食品工程》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】3页(P62-64)【关键词】可见-紫外分光光度法;组胺;水产品【作者】江生;汪敏;白亚敏;韩燕【作者单位】重庆市食品药品检验检测研究院,重庆 401121;重庆市食品药品检验检测研究院,重庆 401121;重庆市食品药品检验检测研究院,重庆 401121;重庆市食品药品检验检测研究院,重庆 401121【正文语种】中文【中图分类】TS207.3组胺中毒是由于食用含有一定数量组胺的某些鱼类而引起的过敏性食物中毒,主要是因为此类鱼含有较高的组氨酸,当鱼体不新鲜或腐败时,污染鱼体的细菌产生脱羧酶,使组氨酸脱羧生成组胺。
过敏源风险评估根据我公司实际情况,存在的过敏源有:甲壳类动物,鱼类,还有二氧化硫及亚硫酸盐。
甲壳类动物,我公司进来的原料都是海捕,有可能捕上来的时候为了保鲜会放亚硫酸盐。
亚硫酸盐过敏是存在的,但它仍是不明确的过敏原,可能在过量食入后几分钟造成呼吸困难。
哮喘患者和对阿司匹林过敏的人更有可能对亚硫酸盐过敏。
过敏反应包括打喷嚏、喉咙肿胀以及麻疹,需要及时救治,且可能致命。
对亚硫酸盐过敏的人应尽量避免食用用亚硫酸盐处理过的食品。
为了控制住甲壳类动物中二氧化硫的含量,每次原料进厂,公司会派品管人员抽样对原料进行二氧化硫检测,合格后才能把原料进入仓库,不符合要求(含量超过100PPM)的应拒绝接收。
原料做成半成品、成品都需要对其检测二氧化硫含量。
当成品中二氧化硫的含量超过10mg/kg或10mg/L,应以SO2表示,并在包装上标识出来。
对于人类来说,有的人吃了鱼后会出现面部潮红、皮肤过敏、眼角膜充血,并且有头晕、头痛、心悸、口渴、喉咙灼热和嘴唇红肿等。
甚至还有的会出现四肢麻木,全身无力等,更严重的过敏患者会有呼吸困难、哮喘、晕厥等,这是因为吃含有组胺的鱼引起了组胺过敏。
我公司从原料到成品都严格控制鱼中组胺的含量。
对于原料进厂,我公司会派品管人员抽样对原料进行组胺检测,合格后才能把原料放进仓库,不符合要求(含量超过5mg/100g)的拒绝接收。
为了避免鱼类跟甲壳类交叉污染,都是分区域各自放置。
半成品,成品也亦是如此。
在成品包装上要正确的标识其名称、数量、批号、规格等。
经过公司多年来对相关人员业务水平的培训,严格把关原料进厂,没有出现过吃了我公司的产品引起的中毒,有效的控制住过敏源导致的危害。
液相色谱法测定食品中生物胺的方法概述摘要生物胺是生物活性分子,包括脂肪族(腐胺、尸胺,精胺、亚精胺),芳香族(酪胺、苯乙胺)或杂环(组胺、色胺)结构。
它们可以在未加工食品和通过动物、植物和微生物的代谢途径合成和分解的加工食品中被检测到。
鉴别和定量食品中的生物胺是非常重要的,因为生物胺被认为是食品质量和新鲜度的指标。
生物胺的测定通常是通过高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳等分离法来实现的。
在本文中,综述了自2007年来的食品中生物胺的测定方法。
1、简介:生物胺是具有生物活性的有机碱,经常在发酵食品和饮料中发现(Novella-Rodriguez, Veciana-Nogues, Trujillo-Mesa, &Vidal-Carou, 2002)。
它们主要来自脱羧氨基酸(ten Brink, Damink, Joosten, & Huis in ’t Veld,1990)。
在低浓度下,生物胺对于许多生理功能来说是必不可少的(Teti, Visalli, & McNair, 2002)。
然而,如果这些化合物被大量消耗,一些毒理学问题将会出现(Pe´ rez-Serradilla & Luque de Castro,2008; Saaid et al., 2009a; Shalaby, 1996)。
生物胺根据它们胺的含量可分为单胺和多胺,多胺几乎参与核酸和蛋白质合成的每一步,因此,身体每一个器官的生长、更新、新陈代谢都需要他们(Shalaby,1996)。
因此,日益生长着的组织对生物胺的需求急剧增加。
此外,非必须多胺的摄入会导致肿瘤增长。
癌症治疗的一个方法是限制多胺的摄入量(Moinard, Cynober, & de Bandt, 2005)。
还有些生物胺 (即腐胺、精脒尸胺,和精胺)可能与亚硝酸盐反应,产生挥发性的被定义为致癌物质的亚硝胺类(Wei et al.,2009)。
食品快速检验方法犓犑202102水产品中组胺的快速检测2021 01 13发布国家市场监督管理总局发布犓犑202102水产品中组胺的快速检测1 范围本方法规定了水产品中组胺的快速检测方法。
本方法适用于水产品(鱼类等)中组胺的快速测定。
第一法 胶体金免疫层析法2 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理,样品中的组胺经提取(或提取衍生)后与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制抗体和检测卡中检测线(T线)上抗原的结合,从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线(T线)与控制线(C线)颜色深浅比较,对样品中组胺进行定性判定。
3 试剂与材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。
3.1 试剂3.1.1 无水乙醇(C2H5OH)。
3.1.2 无水四氢呋喃(C4H8O)。
3.1.3 4 硝基苯甲酰氯(C7H4ClNO3)。
3.1.4 三羟甲基氨基甲烷(C4H11NO3),即Tris。
3.1.5 盐酸(HCl,37%)。
3.2 试剂配制3.2.1 70%乙醇溶液(体积分数):量取乙醇(3.1.1)700mL,加水至1000mL,混合均匀。
3.2.2 样品提取液:称取12.1gTris(3.1.4),加950mL70%乙醇(3.2.1)溶解,充分混匀后,用盐酸(3.1.5)调节pH值至8.5,用70%乙醇(3.2.1)定容至1000mL。
或使用胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液。
3.2.3 样品稀释液:称取12.1gTris(3.1.4),加950mL水溶解,充分混匀后用盐酸(3.1.5)调节pH至7.0,用水定容至1000mL。
或使用胶体金免疫层析检测试剂盒专用稀释液。
3.2.4 样品衍生剂(100mg/mL):称取10g4 硝基苯甲酰氯(3.1.3),加90mL无水四氢呋喃(3.1.2)溶解,用无水四氢呋喃(3.1.2)定容至100mL。
或使用胶体金免疫层析检测试剂盒专用衍生剂。
3.3 参考物质组胺参考物质的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1,纯度≥97.0%。
实验五组胺含量的测定
一、实验目的:学习比色法测定组胺含量的原理和方法
二、实验原理:鱼肉中的组胺用正戊醇提取,与偶氮试剂反应显橙色,与标准系列比较定量,
即可求出组胺含量
三、实验原料:鱼肉
四、实验试剂与仪器:
Na2CO3、NaOH、对硝基苯胺、正戊醇、三氯乙酸、盐酸、组胺标准品、具塞锥形瓶、
分液漏斗、721分光光度计等
五、实验方法:
1、组胺标准曲线的制定:称取25mg于105℃干燥至恒重的磷酸组胺定容至100ml 得到250ug/ml,再稀释配制成100ug/ml的组胺标准液,取上述标准使用液0、0.4、0.8、1.
2、1.6、2.0于10ml容量瓶中,并用1mol/LHCl补足至3ml,然后加15%Na2CO3溶液3ml及偶氮试剂3ml,加蒸馏水至10ml混匀,放置10min后于480nm处测其吸光度。
作出标准曲线。
2、样品中组胺的提取:取10.0g左右切碎的鱼肉于具塞锥形瓶中,加入20ml 0.1g/ml三氯乙酸浸泡2—3h过滤小烧杯中,用NaOH跳PH为9—10,取1ml滤液于分液漏斗中,再加入3.0ml正戊醇振摇5min,吸取上层液,重复操作3次,合并上层液于10ml容量瓶,用正戊醇定容至10ml,取1.0ml正戊醇提取液于分液漏斗中提取,再加1mol/LHCl3ml振荡5min,取下层液,重复操作3次,合并下层液于10ml容量瓶中,再用盐酸定容
3、取1ml上述提取液于10ml离心管中,分别加入15%Na2CO3及偶氮试剂各3ml,加入至10ml摇匀,放置10min于480nm处测吸光度
4、计算:样品中组胺含量(mg/kg)=1000×(A/m)×V
六、思考题
用正戊醇提取前为什么要调PH为9~10?为什么还要用HCl提取3次?。