高效液相色谱仪使用说明

WATERS 600高效液相色谱仪使用说明书（用前必读）青岛科技大学化工测试中心2009-07-17安全指南遵守安全指南可以防止对系统或设备造成损害。

注意：不要将设备置于阳光直射的地方或靠近空调通风口。

注意：在不确定的情况下，不要删除工作站中的任何文件。

注意：为了避免损坏检测器的流动池，不要触摸流动池窗口。

小心：为避免被灼伤，在拆下灯泡进行更换或调整前，请至少提前30 分钟关闭灯泡。

小心：为避免电击事故和人身伤害，请务必在执行维护工作前关闭高压泵、检测器并拔下电源下电源线。

小心：为避免化学或电气危险，在操作系统时，请务必遵守实验室的安全规定。

目录第一章WATERS 600 简介 (1)第二章基本操作要领 (2)2.1 操作规程 (2)2.2 运行分析样品 (2)第三章数据的处理 (15)3.1 创建方法组定量分析 (15)外标法：单点校正 (15)未知样结果计算 (26)外标法：多点校正 (29)内标法校正 (32)3.2 定性结果 (39)3.3 打印报告 (42)第四章文件管理 (46)第五章Millennium 32 4.02版本（中文版）安装要点及有关事项 (47)第一章WATERS 600 简介该高效液相色谱系统是由Waters600高压泵及控制器、氦气脱气系统、Waters 2996二极管阵列检测器和Millennium324.02版本（中文版）工作站构成。

该系统所有的控制指令和数据处理都可以通过计算计完成。

该系统是分析实验室不可缺少的仪器设备，是有机物定量分析的最佳手段之一，另外的突出优点是可以对色谱峰的纯度进行判断。

建立色谱库后可以实现定性分析。

第二章基本操作要领2.1 操作规程2.1.1 制备标样和样品：配置合适浓度的标样；制备的样品进样前要过滤。

2.1.2使用HPLC级流动相，必要时自行制备；水为实验室2级水。

用前均需过0.45µm 滤膜。

2.1.3 流动相脱气：打开氦气(99.999%)钢瓶，调节减压阀输出压力0.3~0.6MPa。

第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。

2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。

3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。

第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。

2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。

第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。

具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。

2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。

3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。

4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。

5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。

第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。

2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。

3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。

第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。

2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。

3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。

通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。

第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。

这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。

高效液相色谱仪使用说明书序言高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography, HPLC）是一种常用的分离技术，广泛应用于药物分析、食品安全监测、环境检测等领域。

本说明书旨在提供关于高效液相色谱仪的基本操作原理、使用方法和注意事项等信息，以帮助用户正确、高效地使用该仪器。

一、仪器概述高效液相色谱仪主要包括进样系统、色谱柱、泵液系统、检测器和数据处理系统等基本组成部分。

1. 进样系统进样系统用于将待测样品引入色谱柱中进行分离。

常见的进样方式包括自动进样器、手动进样器和微量注射器等。

2. 色谱柱色谱柱是分离相和固定相组成的圆柱体，是进行样品分离的关键组件。

用户应根据待测样品的特性选择适当的色谱柱型号和填充物。

3. 泵液系统泵液系统通过输送流动相将样品送入色谱柱中，并提供足够的压力以保持流速和流动相性质的稳定。

泵液系统可根据实际需求配置恒压、梯度或等压梯度等控制方式。

4. 检测器检测器用于监测和记录样品的化学信号，并将其转化为可读的信号输出。

常见的检测器包括紫外可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等。

5. 数据处理系统数据处理系统用于采集、处理和分析检测到的信号，通常配备有专业的软件。

用户可根据需要选择合适的数据处理系统，并进行适当的参数设置。

二、操作方法1. 仪器准备（1）保证仪器通电正常并处于稳定工作状态。

（2）检查流动相储液瓶中是否有足够的流动相，并确保其配制符合要求。

（3）检查色谱柱的连接情况，确保柱座和柱连接部位严密无泄漏。

（4）开启数据处理系统，确保与色谱仪的连接正常。

2. 样品准备根据实验要求选择合适的样品，并进行必要的前处理工作，如过滤、稀释等。

3. 进样操作（1）将样品溶液通过合适的进样方式加入进样器中。

（2）设置进样体积和进样方式等参数，并进行进样操作。

4. 流动相系统设置（1）根据实验要求选择合适的流动相，注入流动相储液瓶中。

（2）设置流速、梯度等参数，并进行流动相系统的初始化。

高效液相色谱仪使用说明1. 型号：LC-10AT 产地日本岛津。

2. 用途：高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。

与试样预处理技术相配合，HPL C 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。

随着固定相的发展, 有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。

由于HPL C具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用, 流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。

高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。

3. 测定原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

4. 使用方法4.1 系统组成：本系统由1个LC-10ATvp溶剂输送泵、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。

4.2 准备4.2.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声波脱气20min。

4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。

3.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常，特别注意输液管道内是否有气泡。

高效液相色谱仪操作说明书一、引言高效液相色谱仪（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物医药、环境监测等领域的分析仪器。

本操作说明书旨在帮助用户正确有效地操作HPLC仪器，以获得准确可靠的分析结果。

二、仪器概述1. 主要组成：HPLC仪器主要包括进样系统、色谱柱、流动相装置、检测器及数据分析系统等组成部分。

2. 基本原理：HPLC利用流动相在高压下通过色谱柱，样品分离后再由检测器进行检测和信号记录，通过数据分析系统生成分离效果图谱或定量结果。

三、操作步骤1. 准备工作a) 确保仪器电源已接通，并检查各部分连接是否牢固。

b) 打开相关软件并进行系统初始化。

c) 根据待分析样品的特性，选择适宜的色谱柱和流动相。

2. 进样系统操作a) 将待测样品通过合适的方法制备成溶液。

b) 打开进样系统的相关开关，将样品通过进样针注入进样口。

c) 调整进样量和进样速度，确保样品完全被进样器吸取。

3. 色谱柱操作a) 将色谱柱连接到系统中，并确保连接处密封良好。

b) 根据样品性质选择合适的流动相和梯度条件，设置柱温以提高分离效果。

c) 在柱前和柱后设置适当的减压阀，调节流量和压力，确保色谱柱正常运行。

4. 流动相装置操作a) 根据检测要求准备合适的流动相溶液。

b) 将流动相溶液通过流动相装置输送至色谱柱，确保流速和流量稳定。

5. 检测器操作a) 打开检测器并进行相关参数设置，如波长选择、灵敏度调节等。

b) 将流经色谱柱的样品原液通过检测器进行检测，并记录信号。

6. 数据分析与结果生成a) 使用相应的数据分析软件，导入检测到的信号数据。

b) 根据需求进行峰面积积分、峰高浓度定量等相关数据分析。

c) 生成分析图谱或报告，并保存结果。

四、故障排除在操作过程中，可能会遇到一些故障情况，以下列举一些常见故障及其排除方法：1. 柱堵塞：检查柱前和柱后的减压阀是否打开和调整流量。

2. 波峰异常：检查流动相和检测器参数设置是否正确。

3. 信号丢失：检查进样系统是否正常工作，检查柱连接是否存在泄漏。

hplc高效液相色谱仪使用方法HPLC高效液相色谱仪是一种常用的色谱分析仪器，广泛应用于药物、环境、食品、化妆品等领域。

下面将详细介绍HPLC高效液相色谱仪的使用方法。

一、仪器准备：1.检查仪器的状态，确认各个部件是否正常运行，如高压泵、进样器、检测器等。

2.开机预热：打开主机电源，按照仪器操作手册上的指示，进行仪器的预热操作。

一般要求预热时间为30分钟到1小时。

二、工作站设置：1.打开工作站软件，点击新建分析方法。

根据分析需求选择不同的方法类型，如梯度洗脱、等温洗脱等。

2.设置流动相组成：根据分析物的性质和目标，选择合适的流动相，并设置其浓度和比例。

可以通过试错法或者文献参考来确定最佳流动相组成。

3.设置进样器参数：选择合适的进样方式，如全自动进样、微量进样等。

设置进样量和进样速度，根据分析物的浓度、检测器灵敏度等因素进行调整。

4.设置检测器参数：选择合适的检测器类型和波长。

一般情况下，紫外检测器是最常用的检测器，波长选择通常在200-400nm之间。

5.设置柱温：根据分析物的性质和目标，选择合适的柱温。

柱温对分离性能和分析速度有着明显的影响。

三、样品处理：1.样品制备：根据分析目标和方法要求，对样品进行处理，包括固相萃取、溶解、过滤等。

2.进样器设置：将样品注入进样器，确保进样量与方法要求相符。

3.进样：点击工作站软件上的进样按钮，开始进行进样。

进样过程中要确保无气泡进入柱。

四、开展分析：1.开始分析：点击工作站软件上的开始按钮，运行分析方法。

监控色谱图，观察峰的形状和分离度。

根据需要可以对分析方法进行优化，如调整流速、洗脱程序等。

2.数据处理：完成分析后，保存并导出色谱图和数据。

进行数据处理和结果分析。

五、仪器维护：1.使用完毕后，关闭泵和检测器，将柱中流动相完全排空，以免柱内残留物引起污染。

2.保养柱：每次使用后，要清洗柱和重新平衡柱。

柱的清洗和保养要根据具体的柱类型和使用情况进行。

3.保持仪器干燥和清洁：定期清洁仪器，尤其是注射器、透射比色噪声汇丰牌等易受污染的部件，以保证仪器的正常运行。

高效液相色谱仪的操作步骤液相色谱解决方案高效液相色谱仪操作步骤：1）．过滤流动相，依据需要选择不同的滤膜.2）．对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。

3）．打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

4）．进入hplc掌控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

5）．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。

冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。

6）．调整流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000、点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，察看基线的情况。

7）．设计走样方法。

点击file，选取se—lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。

若需建立一个新的方法，点击new method。

选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，依据需要而不同。

选完后，点击protocol。

一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2—5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading—inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

8）．进样和进样后操作。

选定走样方法，点击start。

进样，全部的样品均需过滤。

方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。

全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

9）．关机时，先关计算机，再关液相色谱。

10）．填写登记本，由负责人签字。

注意事项：11）．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。

脱气后的流动相要当心振动尽量不引起气泡。

12）．柱子是特别脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

13）．全部过柱子的液体均需严格的过滤。

14）．压力不能太大，可以不要超过2000 psi。

液相色谱流动相说明流动相相当于液相的血液，可以想象对液相的紧要程度。

高效液相色谱仪的操作流程和注意事项引言：高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。

掌握正确的操作流程和注意事项，对保证分析的准确性和结果的可靠性至关重要。

下面将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。

一、仪器准备在开始操作高效液相色谱仪之前，需要进行一些准备工作。

首先，检查仪器是否正常工作，例如电源是否正常接通，各个模块是否连接牢固等。

其次，确保色谱柱处于良好的工作状态，即没有泄漏和堵塞等问题。

最后，根据需要，选择合适的检测器，并校准相应的参数。

二、样品准备和进样样品的准备是操作高效液相色谱仪的关键一步。

首先，根据样品的性质选择合适的溶剂体系，并将样品完全溶解。

其次，为了提高分析的准确性，通常需要对样品进行预处理，例如磷酸酯酶的样品需要经过脱磷酸处理。

最后，将样品装入进样瓶中，根据仪器的要求设定进样量。

三、流动相的选择和准备流动相是高效液相色谱仪中的关键因素之一。

在选择流动相时，需要考虑样品的性质以及分析的目的。

常见的流动相包括有机溶剂、水以及它们的混合溶液。

在选择后，需要准备流动相，并进行除气处理以去除气泡。

此外，还要注意流动相的质量，例如pH值、浓度等。

四、色谱条件的设置色谱条件是操作高效液相色谱仪的关键之一。

根据分析的目的和样品的性质，需要设置合适的参数，例如流速、温度、梯度等。

在设置前，需要根据样品性质选择合适的色谱柱，并设定相应的温度以优化分离效果。

此外，还需要根据检测器的要求设定相应的参数。

五、数据采集和结果分析在操作高效液相色谱仪时，需要进行数据采集和结果分析。

首先，确保数据采集系统正常工作，并根据仪器的要求进行设定。

其次，启动数据采集并进行监控，及时记录实验过程中的各项指标。

最后，对采集的数据进行处理和分析，例如峰面积的计算、峰形的分析等。

注意事项：1. 严格按照操作流程进行操作，避免任意更改设置。

高效液相色谱仪使用说明1.准备工作-确保仪器处于良好的工作状态，包括液相泵、进样器、检测器等。

-检查液相系统的压力，确保其正常运转，防止发生泄漏。

-配制样品溶液，根据实验要求合理选择溶剂，并进行适当的预处理（如过滤、稀释等）。

2.仪器开机-打开HPLC主机电源，并等待其自检完成。

-检查HPLC控制软件是否正常运行，确保能够与仪器进行连接。

-点击仪器上的电源按钮，启动液相泵和检测器。

3.参数设置-在HPLC控制软件上设置分离柱类型、柱温、流速、梯度时间等参数，根据具体分析需求进行调整。

-设置进样器类型、进样量、进样方式等参数。

对于自动进样器，可以根据需求选择自动取样量和进样模式（如全自动、自动稀释等）。

4.样品进样-将样品注射器浸入样品溶液中，吸取适量的溶液。

-将注射器插入进样器，并按照设定的参数进行进样。

-如果使用自动进样器，将样品放置在样品托盘上，设置好进样量和进样模式，然后启动自动进样程序。

5.进行分离-点击HPLC控制软件上的“运行”按钮，启动色谱分离程序。

-观察检测器的信号和色谱图，确保分离效果良好。

-如有需要，可以对实时结果进行记录，以便后续的数据分析和处理。

6.清洗仪器-在实验结束后，关闭色谱柱，避免柱材料干燥堵塞。

-关闭液相泵和检测器，将废液排空。

-按照要求进行液相系统的清洗和保养，包括冲洗柱子、清洗进样器、检测器等。

7.数据处理-将HPLC分析得到的数据导出到计算机中。

-使用相关的数据处理软件进行数据处理和分析，如峰面积计算、定量分析、质谱图的解释等。

-如有需要，可以生成报告或结果图表，以备后续参考。

注意事项：-严格按照操作规程操作仪器，避免操作失误导致意外事故和数据异常。

-定期维护和保养仪器，确保其长期有效运行。

-注意安全使用有毒、易燃、易爆的溶剂和试剂，如有需要应采取相应的安全措施。

-遵守实验室规章制度，切勿滥用仪器，保证仪器的正常使用和他人使用的权益。

总结起来，高效液相色谱仪的使用说明主要包括准备工作、仪器开机、参数设置、样品进样、分离操作、仪器清洗和数据处理。

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