血球计数板的使用方法

血球计数板

生物实验用具

血球计数板是显微镜上的外挂物件,可用来测量细胞,细菌等一些微小物体的长度,还有就是测量数量,如单位体积细胞的数量.

血球计数板的构造和使用

血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.

计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.

血球计数板的使用

以计数酵母菌为例

(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.

(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.

(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.

(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.

(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.

(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).

(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.

3.计算公式 (1)16格×25格的血球计数板计算公式:

血球计数板的计数方法

血球计数板是一种常见的实验室设备，用于进行血液细胞计数。本文将详细介绍血球计数板的计数方法，包括准备工作、样本处理、装载计数板、显微镜观察和计算结果等方面。

一、准备工作

1.清洁：将血球计数板从存放位置取出，用酒精或去离子水擦拭干净，确保无灰尘和污垢。

2.检查：检查血球计数板是否完好无损，如有破损或变形应及时更换。

3.校准：使用前应进行校准，确保读数准确可靠。

二、样本处理

1.采集样本：从受试者的静脉或指尖采集适量的血液样本，并将其加入到已经预先混合好的抗凝剂中。

2.混匀：轻轻摇动管子使其充分混匀，避免产生气泡。

3.稀释：将适量的稀释液加入到混合好的样本中。通常情况下，白细胞需要进行稀释，而红细胞不需要稀释。具体稀释倍数应根据实际情况而定。

三、装载计数板

1.取出计数板：将血球计数板取出，放在干净的台面上，注意不要碰到玻璃面。

2.装载样本：使用移液器或吸管将稀释好的样本加入到计数板的样本槽中。注意不要加过多，以免溢出。

3.震荡：轻轻震动计数板，使其充分混合。

四、显微镜观察

1.调节显微镜：将显微镜调整到适当的倍率，并调节焦距，以便观察细胞。

2.观察细胞：在计数板上找到一个适当的视野，并开始观察细胞。对于白细胞和红细胞，应分别选择不同的区域进行观察。

3.计数细胞：使用目镜和标尺，在每个小方格内逐一计数细胞。对于白细胞和红细胞，应分别进行计数，并记录下来。

五、计算结果

1.白细胞计算：根据已经记录下来的白细胞数量和稀释倍数，按照公式进行计算得出白细胞计数结果。

2.红细胞计算：根据已经记录下来的红细胞数量和稀释倍数，按照公式进行计算得出红细胞计数结果。

3.血红蛋白计算：根据已经记录下来的红细胞数量和血红蛋白浓度，按照公式进行计算得出血红蛋白计数结果。

4.其他指标计算：根据实验需要，可以进一步计算其他指标，如平均红细胞体积、平均血红蛋白含量等。

六、注意事项

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、目的与要求

了解血球计数板计数的原理，学会测定细胞总数方法。

二、原理

用血球计数板在显微镜下

直接计数是一种常用的微生物计数方法。血球计数板是一块特制的厚载玻

片，其上由四条槽构成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方 格网，每个方格网共分为 9个大方格，中间的大方格即为 计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是 一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成 25个小格（即16x25），另一种是一个大方格分成 25个 中方格，每个中方格又分为 16个小方格（即25X 16），但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的 小方格都是400个，每一个大方格边长为 1 mm则每一个大方格的面积为 1

mm2，盖上盖玻片后，盖玻片

与载玻片之间的高度为 0.1mm,所以计数室的容积为 0.1 mm3

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三、血球计数板的使用方法

（一） 菌悬液的制备 为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含 5〜10个酵母为

宜，可采用10倍系列稀释法。

（二） 加菌悬液样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液 由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液。由盖玻

片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。静置 5-10分钟。

（三） 显微镜计数 在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室 内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。如数上线就不数下线，数 左边线就不数右边线。当芽抱菌体达到母细胞大小的二分之一时，可记作两个细胞。

（四） 计数时若使用刻度为 25X 16 （大格）的计数板，则数四角的 4个大格（即100小格）内的菌 数。如用刻细胞数的测定

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血球计数板16x25公式

血球计数板是临床常见的一种实验用具，主要用于进行血液检查。其尺寸为16x25，板面上通常有两个棱形池，分别为大池和小池，用来盛放血液样本以及进行计数。

在进行血球计数时，需要按照一定的规律来进行计数。具体计数方法为：在显微镜下观察大池和小池中的血细胞，以小池中的九宫格为单位进行计数。记下每个九宫格中红细胞和白细胞的数量，然后利用公式进行计算，最后得出血球计数结果。

下面是血球计数板16x25的计算公式：

1. 红细胞计数

红细胞计数采用的是五格法，公式如下：

每个小方格内红细胞的数量 ÷ 5 × 10^4 = 红细胞计数（/μL）

其中，10^4是因为血球计数板的九宫格面积为1/25mm^2，而10^4是将其转换为1mm^2的常数。

2. 血红蛋白计量

血红蛋白计量的公式为：

血红蛋白浓度（g/dL）= 小池中红细胞总量（个）× 每个红细胞的血红蛋白含量（pg）÷ 10^6

其中每个红细胞的血红蛋白含量为血红蛋白浓度（g/dL） ÷ 红细胞计数（/μL） × 10。

3. 白细胞计数

白细胞计数需要在小方格内计算白细胞的数量，并根据计数结果乘以适当的倍数进行计算。常用的倍数为20或25。因此白细胞计数的公式为：

小池中白细胞计数（/μL）= 当前小方格内白细胞数 ÷ 小方格总数 × 每个立方毫米的血液样本（0.1mm）÷ 20或25

其中0.1mm是指使用血球计数板进行血液检测时，通常使用的显微镜目镜的倍数。

以上是血球计数板16x25所使用的计算公式，按照规定的步骤和方法进行计算，可以得出准确的血球计数结果。但需要注意的是，由于血球分布的不均匀性，计算结果存在误差，所以需要根据实际情况进行调整。同时，在进行计数过程中需要严格遵守操作规程，避免操作中的误差对结果产生影响。