生物学实验操作手册

基础实验技能培训

实验操作手册

2014-08

植物基因组DNA提取

实验材料：

植物样本，植物基因组DNA提取试剂盒，β-巯基乙醇，氯仿，无水乙醇

实验仪器、耗材：移液器、电泳仪、离心机、研钵、研钵棒、剪刀、天平、液氮

实验前准备：

1． Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇，5 ml Buffer GP1加5 μl β-巯基乙醇。加入 β-巯基乙醇的Buffer GP1室温可保存1个月。

2． 预热水浴锅 65度，将加入配制好的巯基乙醇预热。

3． 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。

4． 称取植物样本约100 mg。

5． 在研磨植物材料前，向研钵中倒入酒精，放入剪刀、钥匙高温消毒。

6． 研钵、剪刀、钥匙冷却后，将液氮加入在研钵中以预冷研钵。

实验步骤：

1. 取植物新鲜组织约100 mg，用剪刀将样本剪碎，放入研钵，加入液氮充分研磨至粉末状。将粉末转移到离心管中。

注意：冻存材料直接研磨，绝对不能化冻。而且粉末应在化冻前转移，否则内源性DNase有可能降解基因组DNA。

2. 加入700 μl 65℃预热的Buffer GP1（Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇，5 ml Buffer

GP1加5 μl β-巯基乙醇），迅速颠倒混匀后，将离心管置于65℃水浴20分钟，水浴过程中颠倒离心管混匀样品数次。

3. 加入700 μl 氯仿，充分混匀，12,000 rpm（～13,400×g）离心5分钟。小心将上层水相转入一新的离心管中，加入700 μl Buffer GP2，充分混匀。

4. 将上步所得溶液全部加入到已装入收集管（Collection Tube）的吸附柱（Spin Column DM）中。若一次不能加完溶液，可分多次转入。10,000 rpm（～11,500×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

实验一：观察洋葱鳞片叶内（外）表皮细胞

拿到实验报告后填写学校、班级、姓名。听到开考信号后才开始实验，切记不要乱动实验仪器。

一：临时玻片标本的制作

第一步：擦：取载玻片，一手拿着载玻片的两侧，另一手用纱布擦拭，不能用手直接拿镜面来擦拭。擦好后平放在实验台正前方。再取盖玻片，放在纱布上轻轻擦拭。擦好后搭靠在载玻片的一端。

第二步：滴：用胶头滴管滴一滴清水在载玻片的中央，悬空着滴。

第三步：取：用刀片在洋葱鳞片叶上轻轻划出0.5*0.5cm大小的#字。用镊子从#字的一角处挑起，再夹住慢慢撕取。

第四步：浸：把洋葱表皮浸没在水滴里。同时用镊子轻轻展平。不要有卷曲、重叠。

第五步：盖：用镊子从缝隙处夹起盖玻片，可以用手指从对侧辅助。倾斜45度角，使盖玻片的左侧先接触水滴，再慢慢的放下盖玻片，盖在洋葱表皮上。

第六步：染：在盖玻片的左侧滴一滴碘液，在另一侧用吸水纸吸引，并重复2—3次。 第七步：吸：用吸水纸吸去多余的液体。

二：显微镜观察

1、取镜与安放

一手握住镜臂，另一只手托住镜座。把显微镜轻轻放在实验台在中央略偏左前方，距离实验台边缘10厘米左右处，右边空出便于绘图，镜臂靠近身体方向。

2、对光

双手转动转换器，使低倍物镜对准通光孔。调节遮光器，把最大的光圈对准通光孔。打开光源后，双手转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内，同时左眼注视目镜内，直到看到白亮的视野为止。

3、放置玻片标本

把所要观察的玻片标本从压片夹后部的缝隙处插入，然后双手向前平推，使压片夹夹住玻片标本，且标本要正对通光孔的中央。

4、观察

双手扶住镜筒两侧的粗准焦螺旋并向下转动，眼睛同时看着物镜镜头，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近但不接触玻片标本为止。

左眼注视目镜内，同时双手向上缓缓转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。再用双手略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 （请确保视野中没有气泡和重叠。确认观察到清晰的物像后举手示意监考老师来查看。请近视的同学在对光、观察的过程中不要摘掉眼镜）

生命科学实验室操作手册

生命科学的发展离不开实验室的技术和方法，实验室是生命科学进行研究和探究的重要场所。如何进行实验操作，能够影响实验结果的准确性和可信度，因此实验操作手册对实验过程非常重要，本文将针对生命科学实验室的操作手册进行详细介绍。

一、生物实验室安全管理

1. 办理实验室管理手续，制定实验室安全管理制度

实验室管理是为了保证实验过程的安全性和有效性而采取的管理措施。在进行生物实验前，必须按照帐项规定提交实验室使用申请表，经审批后，方可使用实验室。同时，制定实验室安全管理制度，明确实验室安全管理的职责，确定实验室安全事故应急预案和处理办法，并严格执行安全规定。

2. 实验人员的安全培训

实验人员必须经过安全培训，掌握各种实验器械和设备的使用方法。特别是在进行生物类实验时，必须了解实验生物的特性和安全处理方法，并了解生物实验室的通风、排气等安全环境措施。

3. 生化废物和实验废物的处理

在生物实验过程中会产生大量生化废物和实验废物。生化废物包括生物基底液、琼脂等有机垃圾，实验废物包括滤膜、移液管等实验器材。处理这些废物需要有专门的人员和程序，将生化废物和实验废物分类存放并送到特定的废物处理站点进行处理。

4. 实验室安全设施的检查

生物实验室需要配备安全设施，如洗眼器、化学物品柜、排气管路等，这些设施的安全性需要经常检查和维护，确保其正常工作。

二、实验器材的使用

1. 洗涤器材

实验器材必须定期和规范地洗涤和消毒。在使用后立即洗涤，能够有效地防止残留物污染其他试验样品。

2. 移液器的使用

移液器是常用的实验器材，精确定量液体的常用工具。使用时必须先校准，选用正确的吸液头，同时进行合适的吸液和放液方式，避免样品的污染和误差的产生。

3. 离心机的使用

离心机是实验室中常用的离心分离器，可快速分离样品中的固相和液相杂质。使用离心机时，要注意以下事项：确保管子的放置正确，避免实验品发生震动，按照实验需求确定合适的离心速度和时间。

生物学实验操作手册

1. 实验介绍

在本操作手册中，将为您提供一系列生物学实验的操作指南。这些实验涵盖了从基础的生物学概念到高级的实验技术。通过遵循本手册中的步骤，您将能够掌握各种生物学实验的基本操作和技能。

2. 实验分类

2.1 细胞生物学实验

• 环境对细胞形态的影响：包括温度、pH值、离子浓度等因素对细胞形态和功能的影响。

• 染色体核型分析：使用显微镜观察染色体，并进行核型分析。

• 细胞培养与维护：培养和繁殖不同类型的细胞系。

2.2 分子生物学实验

• 蛋白质表达与纯化：利用细菌或其他表达系统表达目标蛋白，并进行纯化。

• DNA/RNA提取和纯化：从生物样品中提取DNA/RNA，并进行纯化。

• PCR扩增：使用聚合酶链反应（PCR）方法扩增目标DNA片段。

2.3 遗传学实验

• 杂交与基因组分析：通过杂交实验和基因组分析确定遗传物质的传递方式。

• 基因突变分析：利用不同突变体进行基因功能鉴定。

• 遗传连锁和基因定位：通过遗传连锁和基因定位方法确定基因的位置。 3. 实验步骤示例

3.1 细胞生物学实验中的步骤示例

实验名称：观察温度对细胞形态的影响

1. 准备培养细胞所需的培养基及培养器具。

2. 将细胞接种到已经预先消毒并加入培养基的培养皿中。

3. 设立不同温度条件下的实验组，将培养皿置于恒温箱中。

4. 观察细胞在不同温度条件下的形态变化，并记录相应数据。

5. 结束实验后，根据数据结果进行统计和分析。

3.2 分子生物学实验中的步骤示例

实验名称：DNA提取与纯化

1. 准备待提取DNA的生物样本，如血液或植物组织等。

2. 使用特定试剂对样本进行细胞破碎和溶解。

3. 添加相关酶和缓冲液，促使DNA释放并与其他细胞组分分离。

4. 经过离心等步骤，收集纯化后的DNA溶液。

5. 使用吸光光度计或凝胶电泳等方法检测DNA提取纯度和浓度。

3.3 遗传学实验中的步骤示例