线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞模型的研究

实验前准备实验器材：干棉球、酒精棉球、75%酒精、生理盐水、注射器(1ml、2ml)、黑色记号笔、固定大鼠用粗线绳、大鼠板、染色小烧杯、标本瓶手术器械：备皮剪子1、眼科剪1、大直镊 1 只、小弯镊 1 对、(动脉夹2)、止血钳2-3、缝合线、缝合针、持针器麻醉剂：10%水合氯醛( 400mg/kg)保温：60W白炽灯，于37cm高处直接照射能使肛温保持在37C栓线：直径0.24mm,头端光滑圆钝；在栓线18mm的位置用黑色记号笔标记；75%酒精清洁后置1: 2500单位肝素化生理盐水中备用。

体重与栓线直径：直径0.24mm的栓线适用于体重220-280g的SD大鼠。

TTC的配制：用L磷酸缓冲液(PBS)配成2%TTC溶液()，避光保存。

药物配制：无论生理盐水还是受试药物标签均采用代号，给药及评分均采用单盲。

仪器激光多普勒血流仪(Laser Doppler Flowmetry, LDF)系统，包括：PeriFlux 5001 Ma in Unit，PF5010 LDPM Unit (激光多普勒微血流灌注量检测单元) ，LD Probe 407-1 ( Perimed Co., Jarfalla, Sweden ;大鼠脑立体定位仪(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)；牙科手钻(Stron g 90#, Korea);大鼠脑切片模具；荧光正置显微镜(NIKON ECLIPSE 80i, X400)及成像系统( ACT-2U NIKON Imaging System)。

大脑中动脉栓塞( MCAO )模型的制备参照Zea Lon ga等［2］建立的大鼠大脑中动脉内栓线阻断方法，作适当改进。

10 %水合氯醛溶液400mg/kg，腹腔注射麻醉动物。

大鼠仰卧位固定，颈部正中切开皮肤，钝性分离各层组织，暴露右侧颈总动脉(CCA) 。

分离至颈内动脉(internal carotid artery，ICA)、颈外动脉(external carotid artery，ECA)分叉后一段，仔细分离避免损伤迷走神经和气管，置线备用。

一、实验背景脑中风是导致人类死亡和残疾的主要原因之一，严重威胁着人类的健康。

近年来，我国科研人员在脑中风治疗领域取得了显著进展，其中脑机接口技术在治疗脑中风方面具有广阔的应用前景。

本实验旨在通过大鼠中风模型，研究新型植入式水凝胶神经电极在脑中风治疗中的应用效果，为临床治疗提供理论依据。

二、实验材料与方法1. 实验动物：选取健康成年SD大鼠50只，体重200-250g，雌雄不限。

2. 实验分组：将大鼠随机分为5组，每组10只。

对照组、模型组、干预组1、干预组2和干预组3。

3. 模型制作：采用线栓法制备大鼠脑中模型。

将大鼠麻醉后，固定于手术台上，于颈动脉插入线栓，阻塞大脑中动脉，制作脑中模型。

4. 干预方法：（1）对照组：不进行任何干预；（2）模型组：仅给予线栓法制备脑中模型；（3）干预组1：在模型制作后，将新型植入式水凝胶神经电极植入大鼠大脑中动脉梗塞区域，进行脑神经信息监测和调控；（4）干预组2：在干预组1的基础上，联合应用光遗传神经调控技术；（5）干预组3：在干预组2的基础上，联合应用抗血小板聚集药物。

5. 观察指标：（1）脑组织梗死面积：采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法检测脑组织梗死面积；（2）神经功能评分：采用Longa评分法评估大鼠神经功能恢复情况；（3）脑神经信号监测：采用脑电图（EEG）和磁共振成像（MRI）技术监测大鼠脑神经信号变化。

三、实验结果1. 脑组织梗死面积：干预组1、2、3的脑组织梗死面积均明显小于模型组（P<0.05），且干预组3的梗死面积最小。

2. 神经功能评分：干预组1、2、3的神经功能评分均显著高于模型组（P<0.05），且干预组3的评分最高。

3. 脑神经信号监测：（1）EEG分析：干预组1、2、3的EEG波形较模型组更为稳定，表明脑神经活动得到改善；（2）MRI分析：干预组1、2、3的MRI图像显示，脑组织水肿程度减轻，神经纤维损伤减轻。

尼莫地平对MCAO／R模型大鼠不同时间点血流灌注量的影响目的：利用激光散斑血流成像技术观察尼莫地平对大鼠大脑中动脉栓塞模型脑血流灌注量的影响。

方法：成年雄性SD大鼠，采用改良线栓法制备大脑中动脉梗塞/再灌注模型。

利用激光散斑血流成像技术观测造模前，缺血再灌注05、1、2、24h后脑血流灌注量情况，并对选定区域血流进行分析，再灌注24h TTC染色观察脑梗死体积。

结果：造模成功后大鼠右侧脑血流明显减少，灌胃给4mg/kg 尼莫地平后，大鼠局部脑血流渐渐增加，脑梗死面积减少，脑组织含水量减少。

结论：尼莫地平能显著增加MCAO/R模型大鼠血流量。

标签：尼莫地平；脑缺血再灌注损伤；激光散斑血流成像；脑血流量Effect of Nimodipine on MCAO/R Rats Different Time Point Blood PerfusionZHANG Zhixue1，3HUANG Xi1，3LI Yue1，2，3YANG Zhibin1，2，3XIAO Huai1，2，3WU Xiumei1，2，3ZHANG Chenggui1，2，3*1.Yunnan Provincial Key Laboratory of Entomological Biopharmaceutical R&D，Institute of Entomoceutics Research，Dali University，Dali 671000，China；2.Yunnan Provincial 2011 Collaborative Innovation Center for Entomoceutics，Dali University，Dali 671000，China；3.National-Local Joint Engineering Research Center of Entomoceutics，Dali 671000，ChinaAbstract：Objective To study the effect of nimodipine on cerebral blood flow in MCAO/R rats by laser speckle imaging （LSI）. Methods To establish the MCAO/R model in male SD rats by the modified intraluminal filament technique. Measuring the cerebral blood flow before modeling and after ischemia-reperfusion for 05 h，1 h，2 h，24 h by LSI，meanwhile analysing the selected area blood flow，and observing the infarct size after perfusion for 24 h with TTC. Results The cerebral blood flow was decreased in right hemisphere after the models established successfully，and after the intragastric administration of nimodipine with 4 mg/kg，the regional cerebral blood flow of rats gradually increased，the cerebral infarction area reduced，and the brain water content was decreases. Conslusions Nimodipine significantly improve the cerebral blood flow of MCAO/R rats.Keywords：Nimodipine；Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury；Laser Speckle Imaging；Cerebral Blood Flow缺血性腦卒中（Ischemic Stroke，IS）指脑的供血主动脉发生狭窄或阻塞，脑的血液供应出现障碍，导致氧和营养物质的缺乏，从而引起脑的功能异常，脑局部组织坏死[1]。

线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验（MCAO模型）的经验本人现在正在做线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验（MCAO模型），这方面的资料我查了一些，这个实验我也作了一段时间，不敢说很专业了，不过现在基本上我能在15min左右完成手术，而且手术过程中不出一滴血，造模后缺血程度基本一致。

虽然前面有很多前辈发了很多MCAO的很专业的贴子，不过我觉得比较凌乱，现在我把我的心得体会和以前的贴子的精华部分奉献给大家，希望这会对将要做这个实验的朋友有一丝的帮助。

虽然做实验总会有郁闷的时候，不过风雨之后总会见到彩虹的，这可以也是我的心得体会。

衷心祝福大家能把实验做的成功、完美！实验前准备麻醉剂：水合氯醛（应较好的控制大鼠体温）保温：60W白炙灯高度为37cm直接照射能使肛温保持在 37℃栓线的制备：1.取熔点为56℃的固体石蜡一块，在瓷杯中加热熔化。

直径为0.24mm、长5cm的鱼线一端5mm长的一段，垂直在熔化的石蜡中迅速浸入并提起，立即凝固的一薄层石蜡可牢固地粘附在鱼线一端的表面，其直径为0.26mm。

就这样，普通的鱼线即可变成规相一致头端光滑圆钝的栓线。

2.在鱼线18mm的位置用涂改液标记一个白色点。

TTC的配制：用0.2mol/L磷酸缓冲液（PBS）配成2%TTC溶液（pH7.5），避光保存体重与栓线直径：线栓直径0.24mm采用的SD大鼠，体重250-300g。

实验方法：动物用10％水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉。

仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA），在CCA远心端和近心端与ECA处挂线备用。

用微动脉夹暂时夹闭ICA，然后近心端结扎CCA、ECA。

然后在距CCA分叉部4mm处剪一小口，将拴线插入到ICA，这时用绕在CCA远心端的细线轻轻系牢拴线。

（不可过紧，否则进线困难，但松了又会出血。

）用眼科镊轻推拴线，从血管分叉处开始算距离，当插入深度在18 mm时（一定要将血管放松至原来状态, 且保证标记点在分叉处,由于标记的是白色的所以很容易看的），紧紧系牢CCA远心端的细线，此时的关键是动作轻柔，不要使ICA有任何的牵拉，否则栓线会脱出ACA，可能会造成缺血失败。

脑缺血模型分类及制备1.全脑缺血模型一般采用四血管闭塞法制作大鼠全脑缺血模型。

也有人通过结扎双侧颈动脉闭塞配合低氧或放血降压使全脑缺血。

但是全脑缺血模型与人类通常的脑梗死（多为单一血管闭塞）情形不一致, 且不能进行健患侧自身对照所以全脑缺血的动物模型在脑缺血研究中用的较少。

2. 局灶性脑缺血模型2.1.线栓法：大脑中动脉阻塞 (middle cerebral artery occlusion，MCAO) 是目前最常用的局灶性脑缺血模型,MCAO 模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。

从ECA插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。

此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。

线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。

控制好易变因素，可避免实验结果的不稳定性。

1.0实验动物1.2 SPF级SD大鼠，健康，雄性，体重为250g-300g1.3.建模方法1.4 颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，颈内动脉和颈外动脉。

使用6-0丝线在距离颈总动脉分叉4mm处结扎颈外动脉远心端，在颈外动脉穿入另一根6-0丝线，在靠近颈总动脉分叉处打一个活结。

3.使用动脉夹夹闭颈总动脉。

在距离颈总动脉分叉处3mm处的颈外动脉上剪一个小口，将一根头端处理过的0.33mm直径的尼龙线从小口中插入，进入颈内动脉，并向内插入大脑中动脉，尼龙线的插入深度距离颈总动脉分叉处约16±1mm。

4.缺血后90min拔掉线栓，用6-0丝线结扎外动脉近心端，用3-0丝线缝合颈部伤口，活力碘消毒伤口，将大鼠放在加热垫上，待清醒后放入恒温抚养箱饲养。

光化学法与线栓法制作局灶性脑梗死大鼠模型的比较研究娄惠娟;张红石;王宇峰;贾萌;丛德毓【期刊名称】《实验动物与比较医学》【年(卷),期】2022(42)1【摘要】目的本研究探讨光化学法和线栓法两种不同的局灶性脑梗死动物模型制作方法,通过调控不同实验参数,分析不同造模方法所致实验动物梗死体积与行为学之间的相关性。

方法将64只300~330 g雄性SD大鼠随机分为假手术组、光化学组及线栓法致大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)组,术后24h对大鼠进行神经功能评分及行为学测试,然后麻醉处死取脑组织,进行2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazole chloride,TTC)染色,评估大鼠脑梗死体积。

结果光化学组和MCAO组SD大鼠脑组织均有体积不等的梗死灶。

MCAO 模型缺血部位涉及半脑大部分皮质、纹状体、丘脑、海马和脑室下带;神经功能评分及平衡木实验评分与梗死体积有良好的相关性。

光化学法模型梗死灶在大脑皮层;神经行为异常与皮层梗死位置具有良好的相关性,与梗死体积之间的相关性相对较差。

结论线栓法建立MCAO模型后可观察到动物行为学评分与脑梗死体积密切相关;光化学法造模产生特定部位的病变和特定的行为变化,其行为学结果与梗死体积的相关性差。

【总页数】6页(P48-53)【作者】娄惠娟;张红石;王宇峰;贾萌;丛德毓【作者单位】长春中医药大学针灸推拿学院;长春中医药大学护理学院;长春中医药大学附属医院推拿科;长春新产业光电技术有限公司【正文语种】中文【中图分类】R-332;R743.3【相关文献】1.线栓法大鼠局灶性脑缺血模型制作方法的改进及评价2.基于线栓法大鼠大脑中动脉闭塞的局灶性脑缺血模型的比较研究3.栓线长度、直径及大鼠体重与栓线法大鼠局灶性脑缺血模型关系的研究4.线栓法大鼠局灶性脑缺血模型制作要点及进展5.线栓法致大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型的制作及思考因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。