贯叶连翘中金丝桃素提取方法的研究进展_李双

为展开剂对金丝桃素进行分析。被检测组分金丝桃素在紫 外线灯（２５４ ｎｍ）下呈橙红色的荧光斑点。采用紫外线可见 光谱测试，金丝桃素在 ５８９ ｎｍ 处有最大吸收为其特征峰； 当采用双波长分光光度法时，以甲醇为空白溶液，可以用测 定波长 ５８９ ｎｍ，参比波长６４７ ｎｍ 进行组合分析。该方法简单 易行，结果较为准确，可排除大部分干扰，克服目前应用单 波长分光光度法抗干扰能力差的缺点。崔颖等［２４］用乙醚渗 漉法除去叶绿素后，经大孔吸附树脂分离，并通过硅胶柱纯 化得到浸膏，经高效液相色谱法分析、测定，其金丝桃素的 含量为 １．０８％。李前琼等［２５］实验显示金丝桃素的进样量 线性范围为 ０．０１９ ４～０．７７６ ０ μｇ，平均回收率为 １００．２５％， ＲＳＤ＝１．２９％，表明改良明胶沉淀法具有鞣质去除完全、金丝 桃素含量较高、损失较少的优点，且方法简便易行，可应用 于贯叶金丝桃提取物除鞣质的处理方法。 4 结语
金丝桃素（Hypericin）为藤黄科金丝桃属植物贯叶连翘 （Hypericum perforatum Ｌ．）的主要活性成分物质，其结构属 萘骈二蒽酮类化合物。金丝桃素具有较好的抗炎、抗病毒、 抗肿瘤功效，并有光敏活性和光动力作用，也是贯叶连翘抗 抑郁的主要活性成分之一［１ ］。近年来众多学者们对金丝桃 素 进 行 了 大 量 的 相 关 实 验 研 究 ，本 文 仅 对 贯 叶 连 翘 主 要化学成分金丝桃素近 １０ 年的提取方法简要综述如下，以 期对相关研究提供文献参考。
摘 要 临床上金丝桃素常用于抗病毒、抗抑郁、抗肿瘤、抑制中枢神经等治疗。现就近 10 年来学者对金丝桃 素提取方法的研究进行综述，以期对贯叶连翘的进一步研究提供参考。
关键词 金丝桃素；提取法；贯叶连翘 中图分类号：R284. 2 文献标识码：A 文章编号：1004- 6852( 2011) 03- 0076- 03
hi bi t s MMP- 9 s ecr et i on by B- CLL cel l s and mi cr ot ubul e f or mat i on by endot hel i al cel l s［J］. Leukemi a， 2006，20( 1) ：583. ［2］ Di Car l o G，Bor r el l i F，Er ns t E，et al . St J ohn' s wor t ：
面积呈良好线性关系，ＲＳＤ 为 ０．２％（n＝５）。 2 金丝桃素的测定方法 ２．１ 高效液相色谱法（ＨＰＬＣ） 陈美兰等［８ ］应用 ＨＰＬＣ 法 测贯叶金丝桃药材中金丝桃素含量，认为该测定方法使金 丝桃素与杂质分离效果较好，在 ０．０５２ ４～０．２６２ ０ μｇ内， 进样量与峰面积呈线性关系（r＝０．９９９ ８），加样回收率为 ９７．５０％。并认为贯叶金丝桃药材中金丝桃素的含量受基因 型、环境因素、生长期和干燥方法等多种因素的影响。胡君 萍等［９］采用 ＨＰＬＣ 测定金丝桃素含量，结果显示金丝桃素 和其他组分可达基线分离，线性范围为 ０．０１６５～０．０８２５ μｇ （r＝０．９９９ ９），平 均 回 收 率 为 １０１．１％ ，ＲＳＤ＝３．７％ （n＝９）。 樊 秦［１０］采用 ＨＰＬＣ 测定贯叶连翘中金丝桃素的含量，结果显 示金丝桃素线性范围在 ０．０２７ ０４～０．１３５ ２ μｇ 内良好，回收 率为 ９８．３９％（n＝３）。ＲＳＤ 为 ０．７８％。金丝桃素含量为 ０． ０１５％， ＲＳＤ 为 ０．７０％。王晓利等［１１］通过实验建立贯叶连翘药材及 提取物中金丝桃素含量的测定方法，结果显示金丝桃素在 ０．００９ ５～０．２８５ μｇ 范围内呈良好的线性关系（r＝０．９９９ ９）， 平均回收率为 １０１．２％，ＲＳＤ 为 １．１％。许小红等［１２］研究贯叶 连翘提取物中 ４ 种成分的含量，结果显示金丝桃素线性范 围为 ０．０８～０．４ μｇ／ｍＬ（r＝０．９９９ ５），方法回收率均不低于 ９８．００％。 ２．２ 高效液相色谱 － 荧光检测法 李俊等［１３ ］利用高效液 相色谱 － 荧光检测法测定贯叶连翘中金丝桃素的含量。结 果显示该方法的线性范围为 ２．５５～１０２ ｎｇ（r＝０．９９９ ９）。平 均加样回收率为 １０１．１％，ＲＳＤ 为 １．４％（n＝５）。最低检测限为 ８０ ｐｇ。由于金丝桃素为强酸性。ｐＨ 对荧光强度有较大影响， 测定时宜选取 ｐＨ 为 ６．５ 的溶液，此时灵敏度高、峰型好。结 果显示贯叶连翘各部位的金丝桃素含量有较大差异，花、叶 中的金丝桃素含量较根、茎高，花中的含量最高。 ２．３ 薄层色谱扫描法（ＴＬＣ） 杨李等［１４ ］采用薄层色谱扫 描（ＴＬＣ）测定贯叶连翘粗提物中金丝桃素含量，结果显示金 丝桃素点样量在 ０．０～１４．４ μｇ 的范围内与峰面．９８９ ２，回 收率范围为 ９６．４％～１００．１％。并认为本方法操作简便、快速 且准确。
我国有着丰富的金丝桃属植物资源，金丝桃素含量丰 富。通过对金丝桃素的组成、含量和活性进行深入地研究， 可为临床疾病的治疗提供坚实的科学依据，并为进一步开 发利用金丝桃属类植物提供广阔的前景。 参考文献 ［1］ Qui ney C，Bi l l ar d C，Mi r s hahi P，et al . Hyper f or i n i n-
76 1 金丝桃素的含量分析
金丝桃素具有的多种药理作用使其成为当前研究开发 的热点之一。药典要求贯叶连翘提取物中金丝桃素的含 量≥０．３％［２ ］。裴瑾等［３ ］采用分光光度法测定金丝桃属 ４ 组 ７ 种 １ 亚种药用植物中的金丝桃素的含量，结果显示金丝 桃组的金丝梅和川滇金丝桃、地耳草组的地耳草在 ５９０ ｎｍ 处没有金丝桃素成分的特征吸收峰，认为三者几乎不含金 丝 桃 素 类 成 分 ；而 遍 地 金 组 和 贯 叶 连 翘 组 的 几 种 药 用 植 物 均 含 有 金 丝 桃 素 类 成 分 ，以 贯 叶 连 翘 中 含 量 最 高 ，为 ０．０４０ ４１％。曾建国等［４ ］用 ＨＰＬＣ 法测定贯叶连翘根、茎、叶、 花、果中金丝桃素的含量，结果显示金丝桃素在花中含量最 高，叶次之，果实含量低，茎中含量甚微，根中则未检出含有 金丝桃素。不同产地、不同部位的贯叶连翘药材中金丝桃素 含量均不同，甘肃产贯叶连翘花、叶与茎部位金丝桃素含量 最高，四川产含量次之，云南产最低；而同一产地贯叶连翘 中，茎部位金丝桃素含量均低于花、叶部位［５ ］。吕洪飞等［６ ］ 研究金丝桃素含量与分泌细胞团分布密度的关系。结果显 示具有分泌细胞团的器官或部位含有金丝桃素类物质，且 与其分布密度成正相关；而不具分泌细胞团的器官或部位， 则不含金丝桃素类物质。植株的根、茎、果实和叶的中部不 含金丝桃素类物质，叶缘部分含金丝桃素 ０．１４５ ６％，花萼的 含量为 ０．０６５ ３％，花瓣则含 １．２６８ ２％。花萼和花瓣中金丝桃 素 类 的 含 量 高 ，因 此 采 集 贯 叶 金 丝 桃 的 最 佳 时 间 为 盛 花 期。张俊松等［７ ］比较不同产地贯叶连翘中金丝桃素的含 量，测定结果显示西北地区的贯叶连翘含量要优于其他地 区。测得金丝桃素的回归方程为 A＝２ ４８４．５ C－２．７５６ ９， r＝０．９９９９（n＝７）；其含量在 ０．００９ ５～０．２８５μｇ 范围内与峰
2011 年第 24 卷第 3 期 Gansu Journal of TCM,2011 Vol.24 No.3
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·文 献 综 述 ·
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贯叶连翘中金丝桃素提取方法的研究进展
李 双 1，王东强 2，李志军 2△ 1 天津中医药大学，天津 300193；2 天津市第一中心医院中西医结合科
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２．４ 双波长分光光度法 王利宾等［１５ ］利用双波长分光光 度法测定贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量，金丝桃素在 １．３０～２９．７５ μｇ／ｍＬ 范围内线性好（r＝０．９９９ ８）。平均回收率 为 １０２．３２％，ＲＳＤ＝１．０８％（n＝６）。并认为本方法检测结果较为 准确且简单易行。吴畏等［５ ］认为金丝桃素检测浓度在 ０．１４～３．６０ μｇ／ｍＬ 范围内与峰面积积分值呈良好线性关系 （r＝０．９９９ ７）；平均回收率为 １００．７％，ＲＳＤ＝１．９８％（n＝６）。 不同产地贯叶连翘不同部位中金丝桃素的含量在 ０．００５～ ０．５６２ ｍｇ／ｇ 之间。该方法简单易行，结果较为准确，可排除 大部分干扰，克服目前应用单波长分光光度法抗干扰能力 差的缺点。不足之处在于因二阶导数光谱处理后所需信息 量大大减少，使测定的相对误差增大。 ２．５ 紫外可见光谱法 张健等［１６ ］采用紫外可见光谱测试 金丝桃素含量，利用金丝桃素在 ５８９ ｎｍ 处有吸收的特征， 其回归方程为 y＝２１．４１２ x－０．０１４ ３，相关系数 r＝０．９９７ ６。 得到样品的平均加样回收率为 ９９．２７％，精密度及稳定性的 相对标准偏差分别为 ０．１９％及 ０．５５％。认为本法可以作为企 业生产贯叶连翘提取物的质量控制测试方法。 3 金丝桃素的提取 ３．１ 醇类提取法 有研究表明［１７ ］，使用甲醇或乙醇水溶 液作为提取溶剂的超声提取法，在 ３０ 分钟内对总黄酮、金 丝桃素类化合物和贯叶金丝桃素三类有效成分的提取效率 都 将 达 到 最 高 点 ，且 可 有 效 地 减 少 贯 叶 金 丝 桃 素 的 氧 化，是一种有前景的提取工艺。 ３．１．１ 甲醇提取法 王晓利等［１１ ］以甲醇为溶媒，采用回 流提取与超声振荡提取，考察提取率，结果显示以甲醇超声 提取 ３０ 分钟提取率最高。卢群等［１８ ］优化出金丝桃素的最 佳提取工艺为药材 ４ 倍量的甲醇，４０℃浸提 ３ 次，１２ ｈ／ 次。李 宇亮等［１９ ］认为提取贯叶连翘中金丝桃素的最佳条件为将 原料在 ４５℃水浸泡 ２ 小时，以 ７５％的甲醇为提取剂，超 声强化 ２０ 分钟（功率 １ ０００ Ｗ），按料液比 １∶６ 和 １∶４ 各提取 １ 次，３ ｈ／ 次，ＬＳＩ－１０６ 型大孔树脂分离，以甲醇洗脱（洗脱 速度 １～２ ｍＬ／ｍｉｎ），提取率为 ９６．３６％，得率为 ０．５３３ ｍｇ／ｇ，纯 度达到 ９４．７１％，同时测得金丝桃素的稳定性（ＲＳＤ＝０．５８６％）良 好。 ３．１．２ 乙醇提取法 吴迪等［２０ ］优选出的工艺条件为 ８０％ 乙醇、料液比为 １∶１０（ｗ／ｖ），提取功率为 ４００ Ｗ，单次辐射 ３ 秒，每次提取 ２０ 分钟。在最优条件下，金丝桃素提取率为 （９６．０４±０．２５）％，得到浸膏中金丝桃素含量为 ０．３１％。 ３．２ 液相色谱法 吴迎春等［２１ ］采用减压液相色谱分离提 取贯叶连翘中金丝桃素，以硅胶（Ｇ６０）作层析剂，氯仿∶甲醇∶ 水（４∶１∶０．０５）为洗脱剂，分离得到较纯的金丝桃素。陈峰阳 等［２２ ］建立从贯叶连翘中快速分离制备高纯度金丝桃素的 方 法 ，经 聚 酰 胺 树 脂 预 处 理 后 直 接 进 行 高 速 逆 流 色 谱 分 离纯化，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水（３∶５∶３∶５），ＫＵ／Ｌ＝０．８９ 为 溶 剂 系 统 ，流 动 相 为 ０．０２ Ｍ 的 磷 酸 氢 二 钠 缓 冲 液 （ｐＨ＝６．５）和甲醇［５∶９５（ｖ／ｖ）］，流速 １．０ ｍＬ／ｍｉｎ，柱温 ３０℃ 时可取得良好的分离效果。进一步分离从 ３００ ｍｇ 预处理粗 提取物中可得到 １３．６ ｍｇ，纯度为 ９５％的金丝桃素。认为该 方法适合于高纯度金丝桃素的水溶液制备等。 ３．３ 其他方法 白卫兵等［２３］以石油醚∶醋酸乙酯∶甲醇（２∶８∶３）