谷草转氨酶性能验证
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谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)是肝损伤的主要检查指标肝细胞损伤的“金标准”是谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)1.什么是谷丙转氨酶(ALT)?谷丙转氨酶(ALT)存储在肝、肾、胰、脾、肺、心肌、红细胞、血清和骨骼肌中,肝脏存储谷丙转氨酶的量最高,一般存在于肝细胞浆中,肝内含量约为血中的一百倍,如果释放的酶完全保持活力,哪怕只有1%的肝细胞坏死,也可以使血清酶活力增加一倍。
肝细胞内浓度比血清高1000~5000倍,在肝细胞膜通透性增加时,即使无坏死,肝细胞内转氨酶亦可由如此明显的浓度梯度差而泄漏入血中。
因此,ALT是最能反映肝细胞损害的指标。
但是谷丙转氨酶(ALT)会有多种原因能造成肝细胞膜通透性的改变,例如疲劳、饮酒、感冒甚至情绪因素等,这些原因造成的转氨酶升高一般不会高于60个单位,转氨酶值高于80个单位就有诊断价值,就需要到医院就诊了。
2.谷草转氨酶(AST):谷草转氨酶(AST)广泛存在于肝、肾、胰、脾、肺、心肌、红细胞、血清和骨骼肌中,以心肌细胞含量最高,其次是肝脏细胞,血清中含量极少,所以血清中AST 活性升高应排除心肌病变后才考虑肝脏病变。
AST在肝细胞浆内只占20%,其余80%存在于线粒体内,在肝细胞浆内AST/ALT之比为0.6:1,而在整个肝细胞内两者之比为3:1,因此ALT是反映肝病变最敏感的指标之一,而血中AST显著增高时,在排除心肌病变后,应考虑肝线粒体大量破坏、肝细胞坏死。
ALT不高或轻微增高而AST明显增高时注意肝外因素损害,最常见于心肌损害。
但当肝脏损伤发展到一定的严重程度,肝细胞大量坏死导致ALT 枯竭,这时血液中的ALT 反而降低,但是黄疸却持续升高,这种现象即所谓“酶胆分离”。
3.特殊情况更应引起临床工作者的注意。
成人血清AST和ALT比值的正常值约为0.8。
AST/ALT一般有以下几种情况:急性肝炎和慢性肝炎的轻型是以ALT升高为主,AST/ALT的比值<1;重型肝炎和慢性肝炎的中型和重型:ALT和AST均升高,AST/ALT≥1;肝硬化和肝癌:AST升高明显,AST/ALT升高明显,AST/ALT>1,甚至>2;重型肝炎肝功能衰竭:转氨酶的生成、释放少,而血清胆红素显着升高,出现“胆-酶分离”的现象,这种现象则提示病情凶险。
谷草转氨酶(GOT/AST)活性检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4470可见分光光度法规格:50T/24S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体30mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2瓶2-8℃保存试剂二液体8mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体80mL×1瓶2-8℃保存标准液液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制:1、试剂一:临用前每瓶用4mL蒸馏水溶解;现用现配;2、标准液:20μmol/mL丙酮酸钠。
产品说明:谷草转氨酶又叫天门冬氨酸氨基转移酶( 2.6.1.1),广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化可逆转氨基反应,是氨基酸代谢的重要酶。
此外,GOT在心肌细胞中含量最高,临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。
肝脏损害时其血清浓度也可升高。
GOT催化α-酮戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm吸光度的变化,即可计算GOT酶活力。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、细胞或细菌样本的制备:先收集细胞或细菌样本到离心管内,弃上清,按照每500万细胞或细菌加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次)。
3500g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
3500g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
1,谷草转氨酶:又名天门冬氨酸氨基转移酶,是转氨酶中比较重要的一种,分别存在于肝细胞线粒体和细胞胞浆内。
肝功能检查的指标,用来判断肝脏是否受到损害。
2,谷丙转氨酶((GPT、ALT):谷丙转氨酶顾名思义是谷氨酸和丙酮酸之间的氨基转移酶,(蛋白质代谢时的生物化学反应形式之一就是氨基酸分子上氨基发生转移). GPT主要存在于肝细胞浆内,其细胞内浓度高于血清中1000-3000倍。
只要有1%的肝细胞坏死,就可以使血清酶增高一倍。
因此,GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
3,胆红素:红细胞中血红蛋白代谢产物。
体内的胆红素大部分来自衰老红细胞裂解而释放出的血红蛋白。
血红蛋白分子中的血色素会分解成为正铁血红素和血红素。
正铁血红素生成胆绿素,胆绿素再生成胆红素。
经肝脏处理后的胆红素叫直接胆红素,反之叫间接胆红素。
胆红素组成胆汁的重要成分,储存在胆囊,随胆汁排入肠道,最后经大便排出,少部分经肠道再吸收入血经肾脏随尿排出。
间接胆红素与直接胆红素之和就是总胆红素。
上述的任何一个环节出现障碍,均可使总胆红素增高,人就发生黄疸。
如果红细胞破坏过多,产生的间接胆红素过多,肝脏不能完全把它转化为直接胆红素,可以发生溶血性黄疸;当肝细胞发生病变时,或者因胆红素不能正常地转化成胆汁,或者因肝细胞肿胀,使肝内的胆管受压,排泄胆汁受阻,使血中的胆红素升高,这时就发生了肝细胞性黄疸;一旦肝外的胆道系统发生肿瘤或出现结石,将胆道阻塞,胆汁不能顺利排泄,而发生阻塞性黄疸。
肝炎患者的黄疸一般为肝细胞性黄疸,也就是说直接胆红素与间接胆红素均升高,而淤胆型肝炎的患者以直接胆红素升高为主5,总蛋白: 血液(准确称血桨或血清)中蛋白质总量.增高:主要是血清中水分减少,使总蛋白浓度相对增高,如高度脱水所致血液浓缩(腹泻、呕吐、休克、高热、大量出汗)及多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等;慢性肾上腺皮质功能减退时,钠丢失继发水分丢失,进而促使血浆出现浓缩现象。
植物类研究课题案例(高中组)1.标题:地木耳和泥炭藓对入侵植物加拿大一枝黄花种子萌发的影响摘要:加拿大一枝黄花是原产北美,1935年作为观赏花卉引种到我国上海,但2O世纪8O年代迅速扩散蔓延成杂草,最近几年特别在上海一些新的抛荒地疯长,对其所处的生态环境具有很大的影响。
随着全球气候变化,空气污染以及都市化的发展,蓝藻和苔藓植物这些先锋植物也快速远离上海,特别在上海大多数新的抛荒地极其贫乏。
为了探讨加拿大一枝黄花在新的抛荒地泛滥是否与缺乏蓝藻、苔藓这些先锋植物有关,作者选取苔藓植物的泥炭藓与蓝藻的地木耳等为研究材料,通过不同浓度提取液测试对一枝黄花种子萌发的影响。
研究结果表明地木耳对一枝黄花种子萌发具有促进作用,泥炭藓对一枝黄花种子萌发则具有明显的抑制作用。
通过形态学观察和野外调查作者也发现加拿大一枝黄花的种子质量轻且有细丝状冠毛,极易随风飘扬,容易在疏松的新抛荒地表面(因为缺乏苔藓层)着落,并通过雨水植入土中。
除了特殊的土壤条件和加拿大一枝黄花种子特点外,作者认为新抛荒地苔藓植物的贫乏也是导致加拿大一枝黄花在上海新抛荒地疯长的原因之一。
因此,改善生态环境,增加都市苔藓植物多样性是控制加拿大一枝黄花泛滥的有效途径之一。
关键词:地木耳,泥炭藓,加拿大一枝黄花,种子萌发,治理2.标题:能吸收和监测室内甲醛的转基因植物构建摘要:甲醛是室内空气污染的主要成份之一,可与蛋白质及核酸相互作用,引发疾病。
利用观赏植物净化室内甲醛已开展了很多研究,但绝大多数是比较自然状态下不同类型植物净化能力的差异。
在本项研究中,我们尝试运用DNA重组技术构建携带外源甲醛脱氢酶基因(FALDH)的转基因植物,在有较高浓度甲醛存在的情况下,通过该基因的过量表达提高植物对甲醛的吸收和分解能力;与此同时,我们把控制叶片“卷叶”性状的IAMT1基因与甲醛诱导型启动子连接在一起,并用于构建转基因植株,目的是在提高植物对甲醛吸收和分解能力的同时,使植物表现一定的异常形态特征(卷叶),引起人们的警觉,从而起到吸收和监测的双重作用,为开发既具有观赏价值又具有较强的监测和净化甲醛能力的园艺植物提供依据。
贝克曼库尔特AU680与AU5400全自动生化分析仪性能比对分析李妍;杨宁;王晗;毛远丽【摘要】目的:根据IS0 15189实验室能力认可管理评审要求,对贝克曼库尔特AU680与AU5400全自动生化分析仪进行性能比对试验,评价检测结果的一致性.方法:收集20份临床血清样本,分别采用AU680与AU5400全自动生化分析仪检测白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、直接胆红素(DILB)、总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、尿酸(UA)、尿素氮(UREA)、肌酐(CREA)、淀粉酶(AMY)、肌酸激酶(CK)、葡萄糖(GLU)、钾(K+)、钠(Na+)、氯(Cl-)等18项指标,计算精密度、准确度等性能指标,并以AU5400全自动生化分析仪为基准,比较2个仪器的性能差异.结果:2台仪器正常及病理水平质控物批内精密度变异系数均<1/4CLIA'88允许误差,批间精密度变异系数均<1/3CLIA' 88允许误差,质控品检测结果差异无统计学意义(P<0.05);检测结果间偏倚比较,以偏倚<1/2EQA为判定标准,所有检测项目合格率均>80%,2台仪器检测结果间具有较好的一致性.结论:AU680全自动生化分析仪具有较好的精密度和准确度,与AU5400全自动生化分析仪检测结果一致性良好,可用于门急诊检测使用.【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2016(037)005【总页数】4页(P98-100,110)【关键词】全自动生化分析仪;精密度;性能比对【作者】李妍;杨宁;王晗;毛远丽【作者单位】100039北京,解放军302医院临床检验中心,全军感染病临床实验诊断中心;100039北京,解放军302医院临床检验中心,全军感染病临床实验诊断中心;100039北京,解放军302医院临床检验中心,全军感染病临床实验诊断中心;100039北京,解放军302医院临床检验中心,全军感染病临床实验诊断中心【正文语种】中文【中图分类】R318.6;TH776随着就诊患者人数的日益增多,为了更好地满足临床需求,各实验室常需购置不同型号的生化分析仪。
谷草转氨酶(GOT)活性测定试剂盒说明书谷草转氨酶(GOT)活性测定试剂盒说明书微量法100管/48样注意:正式测定前务必取23个预期差异较大的样本做推测定测定意义:GOT(2.6.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培育细胞中,催化可逆转氨基反应,是氨基酸代谢的紧要酶。
此外,GOT在心肌细胞中含量最高,临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅佑襄助检查。
肝脏损害时其血清浓度也可上升。
测定原理:GOT催化α同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与2,4er硝基苯肼反应生成2,4er硝基苯腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm吸光度的变化,即可计算GOT酶活力。
需自备的仪器和用品:可见分光光计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的构成和配制:提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体2.5 mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体2.5 mL×1瓶,4℃保存;试剂三:液体25 mL×1瓶,4℃保存;样品测定的准备:1、细菌、细胞或组织样品的制备:细菌或培育细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;依照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波碎裂细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:依照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定操作表:1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调整波长至505nm,蒸馏水调零。
贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪性能验证卢旭【摘要】目的:为保证临床实验室检验结果的准确和可靠,对贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪进行性能验证.方法:根据ISO 15189要求,参照美国临床实验室标准化委员会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)的仪器性能验证指南及CLIA'88法案评价标准,对该生化分析仪总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿素(BUN)、肌酐(CRE)、尿酸(UA)、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)、磷(P3+)、氯(Cl)16个常规生化检验项目的精密度、正确度、线性范围、参考区间进行性能评价.结果:批内精密度小于1/4CLIA'88要求范围,日间精密度小于1/3CLIA'88要求范围;正确度不超过1/2CLIA'88要求范围;各检测项目引用的线性范围、参考区间合适.结论:贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪符合质量目标要求,可以较好地满足临床需求.【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2016(037)005【总页数】4页(P107-110)【关键词】全自动生化分析仪;性能验证;精密度;正确度;线性范围;参考区间【作者】卢旭【作者单位】101300北京,北京中医医院顺义医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R318.6;TH776为保证临床实验室检验结果的准确和可靠,根据《医学实验室质量和能力认可准则》的要求,我实验室选择精密度、正确度、线性范围、参考区间对非配套检测系统进行评价[1-2]。
现参照美国临床实验室改进法案美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)指南中有关检测系统性能验证文件的要求对贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪进行性能验证,检测项目包括总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿素(BUN)、肌酐(CRE)、尿酸(UA)、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)、磷(P3+)、氯(Cl-)16个项目。
谷草转氨酶同工酶谷草转氨酶同工酶(Glycine transaminase,GOT)是一种重要的酶,它可以参与谷氨酸的代谢,是谷氨酸转氨酶(GPT)的一种。
GOT是一种非常重要的酶,它可以参与谷氨酸的代谢,并可以将谷氨酸转化为丙氨酸。
GOT是一种非常重要的酶,它可以参与谷氨酸的代谢,并可以将谷氨酸转化为丙氨酸。
GOT是一种非常重要的酶,它可以参与谷氨酸的代谢,并可以将谷氨酸转化为丙氨酸。
GOT的活性受到许多因素的影响,包括pH值、温度、酶的活性、酶的稳定性等。
GOT的活性受到许多因素的影响,包括pH值、温度、酶的活性、酶的稳定性等。
GOT的活性受到许多因素的影响,其中最重要的是pH值。
GOT的最佳pH值一般在7.5-9.5之间,当pH值低于7.5时,GOT的活性会明显降低,而当pH值高于9.5时,GOT的活性也会明显降低。
此外,GOT的活性也受到温度的影响,一般情况下,GOT的最佳温度在25-37℃之间,当温度低于25℃时,GOT的活性会明显降低,而当温度高于37℃时,GOT的活性也会明显降低。
GOT的活性还受到酶的活性和稳定性的影响。
GOT的活性受到酶的活性的影响,一般情况下,GOT的活性越高,其转化效率也越高。
此外,GOT的活性也受到酶的稳定性的影响,一般情况下,GOT的稳定性越高,其转化效率也越高。
GOT是一种重要的酶,它可以参与谷氨酸的代谢,并可以将谷氨酸转化为丙氨酸。
GOT的活性受到许多因素的影响,包括pH值、温度、酶的活性、酶的稳定性等。
因此,在使用GOT时,应注意控制pH值、温度、酶的活性和稳定性,以确保GOT的最佳活性。
本试剂盒仅用于科研、实验室 南京建成谷草转氨酶(AST/GOT)测试盒说明书(货号:C010-1 赖氏法)一、实验仪器:分光光度计(505 nm)、微量移液器、漩涡混匀器;二、适用范围:本试剂盒可测各种动物血清(浆)、组织及培养细胞、细胞培养液等样本中GOT活力;三、操作过程:测定管 对照管 待测样本(ml)0.1 基质液(37℃已预温5分钟)(ml) 0.5 0.5混匀后,37℃水浴30分钟2,4—二硝基苯肼液(ml)0.5 0.5 待测样本(ml)0.1 混匀后,37℃水浴20分钟0.4mol/L 氢氧化钠液(ml)55混匀,室温放置5分钟,505nm 波长,双蒸水调零,测各管OD 值,四、计算公式:(/)(U/L)GOT U L =血清中活力通过标准曲线得血清中GOT活力(/)(U/L)(/GOT U gprot )gprot L =÷组织中活力通过标准曲线得待测匀浆液蛋白匀浆液GOT活力浓度五、注意事项:1、严重脂血、黄疸或溶血血清可能会引起测定管吸光度增加,因此,检测此类标本时,应该做血清标本对照管。
2、一般血清标本内源性酮酸很少,血清对照管吸光度值接近试剂空白管。
所以,成批标本测定时,一般不需要每一标本都作本身血清对照管,以试剂空白管代替即可,但对超过正常的血清标本应进行复查,复查时,每份标本应作对照管。
3、当血清标本酶活力超过150卡门氏单位时,应将血清用生理盐水稀释5倍或10倍后测定。
4、加入2,4-二硝基苯肼溶液后,应充分混匀,使反应完全,加氢氧化钠溶液方法要一致,不同方法会导致吸光度读数的差异。
5、比色法中常用的有赖氏(Reitman-Frankel)法及金氏(King)法。
赖氏法标准曲线所定单位数,是用实验方法和卡门氏分光光度法(速率法)作对比测定求得的。
以卡门氏单位报告结果,比较准确。
卡门氏单位定义:1ml血清,反应液总容量3ml,340nm波长,1cm光径,25℃,1min内所生成的丙酮酸,使NADH氧化成NAD +而引起吸光度每下降0.001为一个卡门氏单位。
【操作人员】经批准人授权的同志【部门主管】万斌【质量控制员】曾珍【目的】保证测试结果的准确性。
【适用仪器范围】日立7600 日立7180试剂及样品量根据不同仪器技术参数按比例调整。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:专业主管、质控主管、科主任。
【校准方法】室温:20~25℃。
湿度:<80%。
试剂:所用试剂为仪器适用的产品。
校准品:为仪器适用的产品,并在使用效期内,同时无变质或污染。
仪器:(1)校准前仪器各通道均已清洁。
(2)仪器的重复性符合要求,否则需请维修人员检修。
校准方法:仪器自动校正。
【质量控制】每天做质量控制物,采用常规质控图方法进行判定,分析在控后再进行日常工作。
【应用范围】体外检测血清谷草转氨酶。
【收集要求】空腹抽血,避免溶血。
【方法学原理】谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与MDH催化的反应偶联,使NADH 氧化成NAD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰,其被氧化的速率与血清中的AST 的活性成正比,在340nm处测定NADH下降速率,即可测出AST活性。
【方法局限性】轻度脂血、溶血对结果影响不大。
结果易受氨的影响,要保证有足量的LDH 消除副反应。
【超线性处理】盐水稀释标本后重做。
线性范围:在线性范围内,r2≥0.996。
准确度:测定值偏差在正常及异常质控值血清靶值的±10%范围内。
精密度:CV<4%批间相对极差:<5%【参考范围】0-38U/L【临床意义】天冬氨酸氨基转移酶是催化L-天门冬氨酸氨基的转移。
病毒性肝炎、急性风湿性心肌炎、中毒性肝炎等此酶活性显著增高,AST/ALT比值对鉴别肝脏损害程度和病情变化重大意义。
此外,肌炎、胸膜炎、肺炎也引起血清AST增高。
【参考文献】第二版《全国临床检验操作规程》。
谷丙转氨酶谷草转氨酶概述谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase,GPT 又称ALT)谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,GOT 又称AST)转氨酶是反映肝脏功能的一项指标,在体检时常常要做这项检查。
造成有些人的误解,以为只要是了,就是得了。
转氨酶反映肝脏健康状况转氨酶是人体代谢过程中必不可少的“催化剂”,主要存在于内。
当发生炎症、坏死、中毒等,造成肝细胞受损时,转氨酶便会释放到血液里,使血清转氨酶升高。
通常,体检中主要检查的转氨酶是(ALT)。
1%的肝脏细胞损害,可以使血中ALT 的浓度增加1倍。
因此,ALT水平可以比较敏感地监测到肝脏是否受到损害。
转氨酶水平在0--40之间是正常的。
如果超出正常范围,医生会建议再查一次,排除由于实验室设备故障和操作错误等因素造成误差的可能。
如果转氨酶水平还高,多半是由或其他肝病所致。
但要确定是不是病毒性肝炎,还需要做其他检查,结合病史、症状、体征等全面分析。
即使确认是病毒性肝炎,也不能简单地以ALT升高的程度来判断病情,因为对于,可能由于存活的肝细胞比较少,释放到血液中的转氨酶很少,ALT反而随病情的恶化而降低。
其它相关转氨酶高是肝炎吗ALT的升高只表示肝脏可能受到了损害。
除了肝炎,其他很多疾病都能引起转氨酶增高。
引起转氨酶升高的常见原因有以下几则:1)肝脏本身的疾患,特别是各型病毒型肝炎、、、、肝癌、脂肪肝、等,均可引起不同程度的转氨酶升高。
2)除肝脏外,体内其他脏器组织也都含有此酶,因此当心肌炎、、、、乙型脑炎、、急性败血症、、流脑、、、、流感、、、挤压综合征等,亦均可见血中转氨酶升高。
3)因为转氨酶是从排泄的,因此如果有胆管、胆囊及胰腺疾患,胆管阻塞,也可使转氨酶升高。
4)药源性或中毒性肝损害,以及药物过敏都可引起转氨酶升高,并常伴有淤胆型黄疸和。
例如生病时吃了会损伤肝脏的药物,红霉素、四环素、安眠药、解热镇痛药、避孕药,还有半夏、槟榔、青黛等中药。
谷草转氨酶(AST)是肝、心肌、骨骼肌等组织中的一种重要代谢酶。
它的主要功能是催化谷氨酸和草酰乙酸之间的转氨作用,以促进蛋白质的合成。
然而,当这些组织受损时,AST会释放到血液中,导致血液中的AST水平升高。
因此,AST通常被用作反映肝、心肌等组织损伤或疾病的生物标志物。
下面是一个关于如何制作AST标准曲线的基本步骤:
1. 准备材料: 标准的AST溶液(如从商业试剂盒获得)、AST底物、磷酸缓冲液(PBS)、试管、移液管、分光光度计等。
2. 设置标准浓度:例如,您可能需要设置0 U/L,20 U/L,40 U/L,60 U/L,80 U/L等不同浓度的AST标准品。
3. 制备标准品:将不同浓度的AST标准品分别加入到相应数量的试管中。
4. 加入底物:向每个试管中加入一定量的底物(例如对硝基苯酚)。
5. 孵育:将试管在37℃下孵育15分钟。
6. 终止反应:向每个试管中加入一定量的醋酸缓冲液,以终止反应。
7. 测量吸光度:用分光光度计在405nm处测量每个试管中的吸光度。
8. 绘制标准曲线:将AST浓度作为x轴,吸光度作为y轴,绘
制标准曲线。
注意:具体的操作步骤可能因为不同的AST测定试剂盒或者仪器而有所不同。
请仔细阅读相关试剂盒或仪器的说明书,以确保准确操作。
谷草转氨酶标准谷草转氨酶(GOT)是一种重要的酶类蛋白质,在人体内发挥着关键的生物学功能。
它主要存在于肝脏、心脏、肌肉和其他组织中,参与氨基酸代谢和蛋白质合成等生理过程。
因此,谷草转氨酶的标准测定对于临床诊断和疾病监测具有重要意义。
谷草转氨酶的标准测定方法主要包括酶促动力学法、免疫学方法和分子生物学方法等。
酶促动力学法是最常用的测定方法之一,其原理是利用谷草转氨酶催化丙酮酸和谷氨酸之间的转化反应,通过测定反应产物的生成速率来确定酶活性。
而免疫学方法则是利用特异性抗体与谷草转氨酶结合进行定量分析,具有高灵敏度和特异性。
分子生物学方法则是通过检测谷草转氨酶基因的表达水平和突变情况来进行测定。
在临床实践中,谷草转氨酶的标准测定可以用于诊断肝脏疾病、心肌梗塞、肌肉损伤等疾病。
例如,肝脏疾病患者的血清中谷草转氨酶活性常常升高,可以作为肝功能损伤的指标之一。
而在心肌梗塞的诊断中,谷草转氨酶的活性也会显著增加,可以用于早期诊断和监测疾病进展。
此外,谷草转氨酶的标准测定也被广泛应用于药物毒性评价、运动员兴奋剂检测等领域。
需要注意的是,谷草转氨酶的标准测定结果受到多种因素的影响,包括年龄、性别、肝脏状态、药物使用等。
因此,在进行标准测定时,需要综合考虑患者的临床症状、病史和其他相关检查结果,以准确判断谷草转氨酶活性的意义。
总之,谷草转氨酶的标准测定在临床诊断和疾病监测中具有重要作用,其准确性和可靠性对于患者的治疗和健康至关重要。
随着科学技术的不断发展,谷草转氨酶的标准测定方法也将不断完善,为临床诊断和治疗提供更加精准的支持。
肝纤维化诊断技术的研究进展传统上,肝活检提供了肝纤维化的直接测量方法,然而,其局限性已得到充分描述,故人们研究各种非侵入性方法在肝纤维化诊断中的作用,包括血液的生物标志物、血清学模型以及肝脏相关成像技术等。
本文将对肝纤维化诊断技术的相关进展进行综述,为临床应用提供理论依据。
1 肝活检(LB)LB一直被认为是诊断肝纤维化的“金标准”,但它是一种侵入性的检查方法,可能导致相关的并发症,如疼痛、感染、出血、肝附近器官衰竭,极少数情况下甚至会死亡,且其不适合多次重复的取材以动态观察了解疾病的进展和药物疗效,故多数患者有顾虑而不愿接受。
此外,抽样误差可能会导致对肝脏纤维化程度的低估,活检结果也会受到观察者的主观影响。
2 无创诊断技术2.1 瞬时弹性成像技术(TE)TE是2003年首次应用于评估肝纤维化的无创诊断方法。
不仅能做到客观定量的检测,而且具有安全、无创和动态监测肝纤维化进展程度等优势;此外,TE在预测肝硬化并发症中同样具有价值,如门静脉高压症、食管胃底静脉曲张破裂出血、肝细胞癌等。
但TE通常存在局限性。
首先,怀孕和有可植入装置的患者不能进行TE检查。
其次,低频剪切波不能通过液体传播,腹水会影响TE的测定结果。
另外,在肝纤维化程度相同时,ALT水平也会影响TE值。
急性肝损伤、充血性心力衰竭和肝脏炎症程度及肥胖、年龄、肋间隙狭窄同样会影响肝硬度测量值。
2.2 声辐射力脉冲弹性成像(ARFI)ARFI是依赖于低频的声脉冲诱导肝脏组织压缩,从而通过剪切波的传播速度反应肝纤维化严重程度的一项无创检查。
相较于TE检查而言,ARFI在检测诊断性能上相似但失败率更低。
ARFI可用于肥胖患者和肋间隙狭窄的患者,不用避开较大的血管,能定量分析脂肪变性程度,也能用于腹水患者。
以受试者工作曲线下面积(AUC)表示的ARFI诊断CHB患者显著肝纤维化(≥S2)、严重肝纤维化(≥S3)和肝硬化(S=4)的准确性分别为0.870、0.857和0.882[1],这说明ARFI对于肝纤维化的诊断具有较高性能。
目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与MDH催化的反应偶联,使NADH氧化成NAD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰,其被氧化的速率与血清中的AST的活性成正比,在340nm处测定NADH下降速率,即可测出AST活性。
ASTL-天冬氨酸+α-酮戊二酸----------- 草酰乙酸+ L-谷氨酸MDHNADH + 草酰乙酸+ H+-------------- L-苹果酸+ NAD+2.标本采集与处理2.1 受检者的准备:病人空腹12h,不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血:除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂:血浆使用肝素或EDTANa2(1mg/mL)作为抗凝剂。
2.4 标本处理:血标本室温放置30min~45min后离心分离血清或血浆,在两小时内检测完毕;如两小时内不能检测完毕,将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3.试剂3.1 试剂:本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司AST试剂盒,为液体双试剂,各组分如下:3.2:校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
谷草转氨酶(ast的化学反应概述说明以及解释引言是文章的开端,主要介绍谷草转氨酶的化学反应,并说明本文的结构和目的。
在本部分中,我们将首先概述谷草转氨酶及其化学反应的背景和重要性,然后简要介绍文章的结构安排以及阐明文章撰写的目的。
1. 引言1.1 概述谷草转氨酶是一种重要的酶类蛋白质,广泛存在于生物体内。
它在生理代谢过程中扮演着关键角色,并参与到多种重要生物化学反应中。
谷草转氨酶能够催化谷氨酸与α-酮戊二酸之间的转化反应,将谷氨酸转变为α-酮戊二酸,并同时生成天门冬氨基丙酸。
1.2 文章结构本文主要分为五个部分进行叙述。
除了本引言外,第二部分将介绍谷草转氨酶的化学反应过程,包括功能和作用、反应类型和机理以及影响其活性的因素。
第三部分将对谷草转氨酶进行概述说明,包括其结构特点和分类、在应用领域中的重要性,以及在生物体内的分布和表达调控。
第四部分将对谷草转氨酶进行解释,包括基本原理和定义解析、相关实验方法和技术手段,以及目前研究的进展和未来发展方向。
最后,文章将总结出我们对谷草转氨酶的理解,并提出可能的研究方向。
1.3 目的本文旨在全面系统地介绍谷草转氨酶和其化学反应的基本概念、作用机制以及与之相关的各个方面。
通过深入了解谷草转氨酶及其反应过程,我们可以更好地认识其在生物体内的功能,并为今后关于谷草转氨酶领域的研究提供参考和指导。
同时,通过对谷草转氨酶活性调控因素等内容进行介绍,我们也希望能够促进相关研究领域更深入、更全面地探索。
以上是“1. 引言”部分内容的详细清晰撰写,请确认是否满意并告知后续需要哪些内容。
2. 谷草转氨酶的化学反应2.1 谷草转氨酶的功能和作用谷草转氨酶,也称为天冬酰胺酶,是一种重要的细胞内酶。
它在生物体内起着关键的催化作用,参与了谷氨酸代谢途径中的关键步骤。
具体而言,谷草转氨酶能够将谷氨酸和α-酮戊二酸通过一种特定的化学反应转化成天冬氨酸和丙磺丙二甲基。
该反应发生于线粒体中,并且是可逆的。
谷草转氨酶(AST) 检测方法学性能验证评价报告
验证内容:正确度、重复精密度、中间精密度、线性范围、临床可报告范围及参考区间的确认验证人员:
一检测系统信息
项目:AST
仪器名称: 强生Vitros
仪器型号:V350
试剂及厂商:Ortho-Clinical Diagnostics公司
检测方法:速率法
二厂商提供的相关参数
三验证过程
1 正确度
1.1 目的:评价仪器测试结果与接受参考值之间的一致程度。
通过实验室检测数据的偏倚从而评价和验证实验室检测结果的准确性。
1.2 评价方法:参加卫生部临检中心的室间质评,本组参加室间质评的项目一律用回报结果作为评价标准,最近一次参加卫生部室间质评卫生部质控值。
1.3 结果判断方式:<1/2 CLIA’88
正确度验证试验数据记录表
2 精密度
2.1 重复精密度
2.1.1 目的:考察仪器检测方法的随机误差
2.1.2 原理:在检测系统处于优良的条件下,连续测定20个结果,判断这20个独立结果间的
一致程度
2.1.3 方法:选择新鲜混合血清标本(病人高值、低值)各20份,测量前先定标,再做质控,
质控结果在控制范围内,连续重复测定20次,计算SD,CV,得到重复性精密度。
2.1.4 标本来源:高、低值标本均为混合血清。
2.1.5 结果判断方式:<1/4CLIA’ 88 5%
重复性精密度验证试验数据记录表
2.2 中间精密度:
2.2.1 目的:考察目前实验室检测方法中间精密度。
2.2.2 原理:在检测系统处于优良的条件下,连续测定20天,取得20个结果,判断这20个
独立结果间的一致程度。
2.2.3 方法:取一个月的室内质控值(高值、低值)计算CV、SD,得到批间精密度。
2.2.4 结果判断方式:<1/3 CLIA’ 88 6.67%
中间精密度验证试验数据记录表
3 线性范围(Linearity range, AMR)
3.1 目的:在确定某项目检测上限的同时检测其上下限是否呈线性关系,从而保证该浓度范围
检测结果的准确性。
3.2 标本要求:
高值标本可使用病人混合血清。
一般地样本的高值推荐在AMR上限的90%,低值推荐在AMR下限的10%,但这不是绝对的规则。
最好有5个或以上的系列浓度的实验样品,数据点数不得低于4个,浓度范围遍布整个预期可报告范围。
3.3 方法:
a)以50ul为一个体积单位,将高值标本与低值标本以3:1、2:2、1:3的体积比例混合,
加上高低值标本共5个标本按照由低到高测定,记录结果。
b)线性统计:以直接测定结果计算得出的相应浓度为X,以通过稀释测定结果为Y,回归方法
学统计,得到a、b及r值。
c)结果判断:
①若b在0.97-1.03范围内,r2>0.95,作a与0有无显著性差异的t检验,如果P>0.05,则可直接判断线性范围在实验已涉及浓度。
② 若b 不在0.97-1.03范围内,a 较大,舍去高值或低值组数据,另做回归统计,直至缩小的分析范围其回归方程的a 和b 的判断符合要求,则该范围为线性范围。
线性范围验证试验数据记录表
项目名称/单位 谷草转氨酶(AST )/ U/L 检测设备/编号 强生Vitros350/ DC-VITROS-1 检测试剂/批号 Ortho-Clinical Diagnostics/*** 校准品/批号 Ortho-Clinical Diagnostics/*** 质控品/批号 Ortho-Clinical Diagnostics/*** 检测方法 速率法
厂家声明线性范围:3.0--750U/L ,线性方程:Y=bX+a ,R 2>0.975
样本编号
配制比例
测定值1 测定值2 测定均值 预期值 差值 1 4L 1.82 1.80 1.81 1.81 0 2 3L+1H 288.6 288.8 288.7 279.11 -9.59 3 2L+2H 645.8 645.7 646.0 556.41 -89.59 4 L+3H 872.7 873 872.4 833.7 -38.7 5 4H
1110.9
1110.8
1111
1111
平均斜率b
采用线性回归,以预期值为X ,以按比例稀释的实测均值为Y ,得线性方程:
Y= X+
线性回归散点图:
计算每一稀释度测定均值和预期值的差值。
以预期值为横轴,差值为纵轴,制作线性差异图。
-100
-500
200
400
600
800
1000
1200
线性差异图
残
差
预期值
4 临床可报告范围(Clinical reportable range ,CRR)
4.1 目的: 分析各稀释浓度的线性关系,确定最高稀释倍数,从而确保高值样本报告的准确
性。
4.2 原理:未经过任何处理的病人检验标本,通过检测系统检测得到的可靠结果范围。
4.3 方法:结合本实验室制定的AST的可报告范围(CRR)及该项目的检测范围,从而确定该
项目的最大稀释倍数,予以验证。
临床可报告范围试验数据记录表
4.4 结论:
AST临床可报告范围3.0-750U/L,最大稀释倍数50倍,当结果>750U/L时,用生理盐水或试剂级别的水进行稀释,结果乘以稀释倍数,若 50倍稀释结果仍超出报告>750U/L。
5 灵敏度:
6 干扰物质
干扰物质对本项目的影响大小沿用厂商参数,详细内容见本项目SOP。
7 参考区间(Reference intervals):
7.1 目的:选择20份体检合格的健康人标本,在检测系统上进行测定,对结果进行统计并与仪器说明书提供的参考区间进行比较。
7.2 原理:收集20 例正常健康人血清标本及时检测,要求其年龄,性别等均匀分布,对参考范围进行验证,只允许10%的数据超过所验证的参考范围,否则需建立参考范围。
验证范围:15--46 U/L 女:14—36 U/L 男:17—59 U/L
7.3 标本的要求
1)体检合格健康的筛选者
2)脂血、溶血均勿用
7.4 结果判断方式:R= ≥90%即合格
生物参考区间数据及验证记录表
7.5 结论:
若本实验室所检测的20个标本其检测结果19个均在验证区间15--46 U/L 女:14—36 U/L 男:17—59 U/L内,故本实验室参考区间验证通过。
四总结(Summary)
谷草转氨酶试剂盒在强生V350分析仪检测系统的精密度、正确度、线性范围、可报告范围及生物参考区间通过验证。
通过以上各项性能验证室验的结论,强生V350分析仪检测系统达到检测要求,保证检验结果准确可靠,可以满足临床需求。