下载文档原格式
附录一
植物组织培养流程及相应图片
1、配制培养基并进行高温蒸汽灭菌20min；
2、接种工具以及超净工作台灭菌：接种工具用高温蒸汽灭菌，超
净工作台用紫外灯灭菌30min；
3、外植体消毒：首先用流水冲洗外植体，用酒精灭菌30s，再用
0.1%升汞消毒10min，最后用无菌蒸馏水冲洗4-5次；
4、用75%酒精对手进行灭菌消毒；
5、接种：用剪刀剪取1cm2左右的叶片或者1cm长的茎段，迅速
放入三角瓶中，并立即封口；
6、将接种的三角瓶放入组培室中进行培养，大约2周后（时间根
据培养条件不同而不同）长出愈伤组织，如图1、2；
图1 西瓜茎段愈伤组织图2 烟草叶片愈伤组织7、长出愈伤组织后，即可进行继代和分化培养，具体流程与接种
一致，只是将外植体换成愈伤组织，并注意无菌条件的控制，如图3、4；
图3 西瓜愈伤分化 图4烟草愈伤分化 8、 将继代分化的愈伤组织放入适宜的条件下进行光照培养，诱导
出芽和根，如图5、6
图5 西瓜诱导发芽 图6西瓜诱导发芽生根
9、 将诱导出根和芽的植株进行练苗； 10、 练苗后的植株移栽到自然条件下，让其自然生长繁殖，最终达
到植物组织培养的目的。
植物组织培养简介
在无菌条件下，将离体的植物器官(如根尖、茎尖、叶、花、未成熟的果实、种子等)、组织(如形成层、花药组织、胚乳、皮层等)、细胞(如体细胞、生殖细胞等)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)、原生质体(如脱壁后仍具有生活力的原生质体)，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，长成完整的植株，统称为植物组织培养。
植物组织培养的原理是细胞全能性。
也就是说每个植物细胞里都含有一整套遗传物质，只不过在特定条件下才会表达。
组织培养基于此原理就可以将已处于分化终端或正在分化的植物组织脱分化，诱导形成愈伤组织，再在愈伤组织上形成新的丛生芽。
一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤：
（1）准备阶段
查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制订出切实可行的培养方案。
然后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。
（2）外植体选择与消毒
选择合适的部位作为外植体，采回后经过适当的预处理，然后进行消毒处理。
将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖，挑出花药，接种到初代培养基上。
（3）初代培养
接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。
然后将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。
（4）继代培养
分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的继代培养基经多次切割转接。
当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。
进行脱毒苗培养的需提前进行病毒检测。
（5）生根培养
刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降低细胞分裂素浓度或不加，提高生长素浓度，促进小苗生根，提高其健壮度。
（6）炼苗移栽
选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗，待苗适应外部环境后，再移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫，防止病虫危害。
当组培苗完全成活并生长一定大小后，即可移向大田用于生产。
如：茎尖→表面消毒→接种诱导培养基→茎尖生长→病毒检测鉴定→培养无根小植株→培养生根→完整小植株→炼苗20-25天→移栽成活。
常规情况下详细的生产流程图如下：。
