叶绿素A的测定

叶绿素-a的测定方法原理（荧光分光光度法）用丙酮溶液提取浮游植物色素进行荧光测定，根据提取液酸化前后的荧光值，可分别计算叶绿素-a及脱镁色素的含量。

试剂及其配置1、丙酮溶液（9+1）：量取900ml丙酮与100ml水混合，保存在棕色试剂瓶中。

2、碳酸镁悬浮液（10g/L）:称取1g碳酸镁，加水至100ml，搅匀，盛试剂瓶中待用，用时需要再摇匀。

3、盐酸：=1.18g/ml4、盐酸溶液（5+95）：在搅拌下，将5ml盐酸缓慢的加到95ml水中，混匀，保存于滴定瓶中。

5、硅胶仪器及设备1、荧光计2、冰箱3、离心机4、电动吸引器5、过滤装置6、玻璃纤维滤膜：直径为25mm的WhatmanGF/C或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜7、具塞离心管：容量10ml8、干燥器9、棕色试剂瓶：容量100ml，1000ml10、量筒：容量100ml、200ml、1000ml11、定量加液器：容量10ml12、镊子一般实验室常用设备分析步骤1、样品制备量取一定体积海水（通常大洋水250ml-500ml，近岸或港湾水50-100ml），加2ml 碳酸镁悬浮液，混匀，用玻璃纤维滤膜或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜过滤，过滤负压不得2超过50KPa.2、样品提取将过滤了的样品的滤膜放入具塞离心管，加入10ml丙酮溶液，摇荡，放置冰箱冷藏室14-24h，提取叶绿素-a。

若虑得的样品不能及时提取，应该将滤膜抽干、对折，再套上一张滤纸置于含硅胶的干燥器内，贮存在低于1摄氏度的冰箱中。

3、样品离心离心速度：（3000-4000）r/min离心时间:10min4、样品测定荧光计激发波长为436nm,发射波长670nm零点调节：用丙酮溶液调节，使荧光计指针指零。

将提取的上层提取液注入测定池。

选择相应量程，测定样品的荧光值R b。

加2滴盐酸溶液至测定池，摇匀，经30s后再测其荧光值Ra。

5、仪器校正用标准叶绿素-a校正。

用分光光度计校正：取一定体积正处于指数增长期的单细胞藻类培养液，依上述方法提取其叶绿素-a，用分光光度法测定，计算该提取液的叶绿素-a浓度。

叶绿素a测定实验报告（一）实验目的及意义水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。

（二）水样的采集与保存1.确定具体采样点的位置2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号6.用GPS同步定位采样点的位置（三）仪器及试剂仪器：1.分光光度计2.比色池：10mm3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）4.研钵5.常用实验设备试剂：1.碳酸镁悬浮液：1%。

称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。

每次使用时要充分摇匀2.乙醇溶液（四）实验原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。

将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。

（五）实验步骤1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。

2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。

3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。

将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。

此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。

4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。

浅析地表水叶绿素a的测定地表水叶绿素a（Chlorophyll-a）是一种重要的水生生物指示剂。

它是绿色植物和蓝藻中光合作用的关键分子，同时也是水生生物的重要营养来源。

因此，地表水叶绿素a的浓度变化对生态系统健康和水体污染等问题具有重要的指示作用。

本文将从测定方法和测定误差两个方面入手，对地表水叶绿素a的测定进行浅析。

一、测定方法1. 常规分光光度法常规分光光度法是目前应用最广泛、最常见的测定方法。

该方法是基于叶绿素a的吸光特性进行测量，通过测量地表水样品中的吸光值，计算出叶绿素a的浓度。

这种方法的优点是简单、易操作，同时能够得到较为准确的结果。

2. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种比分光光度法更加精确、敏感的测定方法。

该方法通过对水样中的叶绿素a进行提取和分离，然后对其进行色谱分析，计算出叶绿素a的浓度。

这种方法的优点是精确度高，可以检测出较低浓度的叶绿素a，但缺点是操作复杂且设备成本较高。

3. 激光诱导荧光分析法二、测定误差无论采用哪种测定方法，地表水叶绿素a的测定都存在一定的误差。

主要来源包括以下几个方面：1. 提取方法的不同叶绿素a的提取方法对测定结果具有重要影响。

不同的提取方法可能导致不同的提取率和提取效率，从而影响叶绿素a的测定结果。

2. 标准曲线的制备标准曲线的制备对测定结果具有决定性影响，因此需要制备准确可靠的标准曲线。

制备标准曲线时应注意使用合适的标准物质，遵循标准曲线的制备规范操作，以获得准确可靠的测定结果。

3. 仪器的精度和故障测定仪器的精度和故障也会对测定结果造成影响。

仪器出现故障或者精度较低时，会导致测定结果的误差增大。

4. 消解时间和温度的控制叶绿素a样品在消解过程中需要遵循一定的时间和温度条件。

如果消解时间过长或温度过高，会导致叶绿素a分解，从而导致测定结果不准确。

综上所述，地表水叶绿素a的测定方法和误差控制都需要重视。

通过合适的测定方法、准确可靠的标准曲线、精密的仪器以及严格的操作控制，可以获得较为准确可靠的测定结果。

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❖2.水样处理；往水样中加入1%碳酸镁 悬浊液1ml，以预防酸化引起色素溶解。 水样应在低温弱光旳环境下保存。
❖3样品浓缩；采用抽滤方式对水样进行 抽滤，在抽滤器中装好乙酸纤维滤膜， 抽完水样再抽1-2min以降低滤膜上旳 水分, 但抽滤时绝不能抽至真空。
❖4.滤膜干燥；将滤膜放置于冰箱中干 燥3-4h,为样品提取做准备。
❖ 叶绿素不属于芳香族化合物，不溶于 水，但溶于有机溶剂（一般采用丙 酮），叶绿素A呈蓝绿色，叶绿素B呈 黄绿色，两者同步被提取出来。在可 见光旳范围，两者分别在663nm和 645nm处波长有最大吸收。
叶绿素A旳测定措施
❖利用分光光度法，将所得旳上清液在 分光光度计上，用1cm光程旳比色皿， 分别读取在 750nm,663nm,645nm,630n m波优点旳吸光度，并以90%旳丙 酮作空白吸光度测定，对样品吸光度 进行校正。
❖将所测旳相应波长旳吸光度，代入如 下公式计算：
❖ 叶绿素A=（1/V*L）*(11.64*（D663-
D750)-2.16*(D645-D750）+0.10*（D630D750)*V1
❖式中:D为所测旳吸光度
❖ V为水样体积
❖ V1为提取液定容后旳体积
❖ L为比色皿光程
叶绿素A旳测定环节
❖1.采集水样；必须要具有代表性。
叶绿素A旳测定
目录
1
叶绿素A旳测定原理
2
叶绿素A旳测定措施
3
叶绿素A旳测定环节
4
叶绿素A旳测定影响
叶绿素A旳测定原理
❖有机溶剂直接提取浮游生物浓缩样中 旳叶绿素，用分光光度计测定其吸光 度，根据叶绿素旳特定波长.吸收，用 有关公式计算其含量。