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中国食物与营养 2024，30（2）：42-51Food and Nutrition in China不同类型燕窝营养检测现状及营养成分分析宋咏烨1，林咏惟1，张娜1，2（1北京大学公共卫生学院营养与食品卫生学系，北京100191；2食品安全毒理学研究与评价北京市重点实验室，北京100191）摘要：目的：旨在总结不同类型燕窝中营养成分的检测现状，并分析其营养成分组成和差异，便于进一步开展燕窝营养相关科学研究。
方法：在PubMed、Embase、Web of Science、中国知网、万方数据库、维普检索自建库至2022年8月国内外公开发表的相关研究文献。
纳入测定燕窝中营养成分组成与含量的定性与定量研究，包括一手研究数据、综述、系统综述等非一手研究数据，语言限定为中英文；排除与主题无关、重复、数据不完整、无法获得全文的文章。
结果：共检索出文献1 237篇，本文共纳入8篇文献作为本次综述的主要证据。
研究显示，燕窝中蛋白质含量范围为56.34%~69.5%，脂肪含量范围为0.03%~1.28%，碳水化合物含量范围为17.12%~31.68%，水分含量范围为12%～24.3%，唾液酸含量范围为7.64%~12.52%，不同类型燕窝中营养成分的种类及含量可能存在差异。
结论：燕窝中蛋白质含量高，氨基酸种类丰富且必需氨基酸比例较大，脂肪含量极低，富含矿物质且含有多种必需微量元素，维生素与唾液酸含量均较高。
不同类型燕窝中营养成分的种类及含量存在一定差异，不同类型燕窝中碳水化合物含量差异较大。
关键词：燕窝；营养成分；检测燕窝是雨燕科金丝燕属的多种燕类在繁殖季节分泌的唾液和绒羽筑成的巢窝，燕窝商品则为去掉羽毛及其他杂质的燕窝［1］。
燕窝的营养成分含量由高到低依次为蛋白质、碳水化合物、灰分、脂肪，其中燕窝的特征成分是唾液酸糖蛋白［2-5］。
目前针对燕窝健康效应的研究多集中于促进大脑发育［6］、提高智力和记忆力［7-8］、免疫调节［9］、抗氧化［10］、抗病毒［11］、抗衰老［12］、促进细胞分裂［10］、调节肠道菌群［13］功能等方面，多为动物性基础研究，人群实验尚少。
早在1957年，Blix就从颌下腺粘蛋白中分离出唾液酸（Sialic acid），并建立了唾液酸的命名规则[1]，但在很长时期内人们对其生理功能了解甚少，其化学结构在1960年才被确切地测定出来。
随着现代物理学、化学和生命科学技术的飞速发展，唾液酸的生理活性已逐渐被认识，并可能在不久的将来得到应用。
本文就近年来唾液酸的生物活性及其应用方面的研究进展进行了较全面的综述。
1 唾液酸的来源唾液酸（Sialic acid，SA）是九碳糖神经氨酸酰化物的总称。
唾液酸在自然界分布很广，已经发现许多生物体内存在唾液酸，它通常位于细胞膜最外层的糖类部分和分泌的糖复合物（糖脂、糖蛋白和脂多糖）的关键位置，是糖复合物结构和功能多样化的重要物质基础[2,3]。
随着生物进化程度的升高，唾液酸在生物体内的含量不断增加，进化程度较低的生物，如原生动物、环节动物、节肢动物等均极少有唾液酸的存在。
在脊椎动物和哺乳动物体内普遍存在唾液酸，人体中脑的唾液酸含量最高，人脑灰质中的唾液酸含量是肝、肺等内脏器官的15倍[4]。
唾液酸的主要食物来源是母乳，在牛奶、鸡蛋和奶酪中也存在唾液酸。
至今自然界中被报道的唾液酸有30多种[5]，最常见的是N-乙酰基神经氨酸（N-acetylneuraminic acid , NANA），其结构如附图所示。
2 唾液酸的测定方法唾液酸的物理分析方法很多，有分光光度法、薄层层析法[6]、高效液相色谱法[7]、核磁共振法[8]和高效液相色谱质谱联用技术等[9]。
这些技术可用于生物样品的分离和测定，还能区分不同类型的唾液酸，为唾液酸在生物学方面的研究提供了更好的手段。
2.1 分光光度法唾液酸与一些试剂反应能产生颜色，可用于直接定性检测和定量测定。
这些试剂包括硫代巴比妥酸、R-试剂和间苯二酚-过碘酸/盐酸等。
游离唾液酸被过碘酸氧化生成β-甲酰丙酮酸，后者与2-硫代巴比妥酸反应生成有色物质，在549nm处有最大吸收峰[10]。
超高效液相色谱串联质谱法测定餐饮具中烷基苯磺酸钠类阴离子表面活性剂残留量的研究王清燕（泉州市产品质量检验所，福建泉州 362000）摘 要：目的：采用超高效液相色谱串联三重四极杆质谱技术建立餐（饮）具中烷基苯磺酸钠类阴离子表面活性剂残留量的分析方法。
方法：对色谱质谱条件进行优化后，通过加标回收实验、实际样品的测定等方式验证方法的精密度和准确度。
结果：烷基苯磺酸钠阴离子表面活性剂在20～1 000 μg·L-1呈良好的线性关系（r＞0.999），检出限为2.1 μg·L-1。
结论：加标回收率与实验室内变异系数均满足检测要求。
关键词：烷基苯磺酸钠；阴离子表面活性剂；高效液相色谱串联质谱法；餐（饮）具Study on Determination of Sodium Alkyl Benzene Sulfonate Anionic Surfactant Residue in Tableware by Ultra-HighPerformance Liquid Chromatography-Tandem MassSpectrometryWANG Qingyan(Quanzhou Product Quality Inspection Institute, Quanzhou 362000, China) Abstract: Objective: To establish a method for the determination of sodium alkyl benzene sulfonate anionic surfactants in food and beverage by ultra high performance liquid chromatography with triple quadrupole mass spectrometry. Method: After the conditions of chromatographic mass spectrometry were optimized, the precision and accuracy of the method were verified by standard recovery experiment and actual sample determination. Result: The anionic surfactants of sodium alkyl benzene sulfonate showed a good linear relationship (r＞0.999) in the range of 20～1 000 μg·L-1, and the detection limit was 2.1 μg·L-1. Conclusion: The recovery rate of added standard and the coefficient of variation in laboratory can meet the detection requirements.Keywords: sodium alkyl benzene sulfonate; anionic surfactant; ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; tableware烷基苯磺酸钠是常见的一种阴离子表面活性剂，是洗涤剂、乳化剂和起泡剂的基本原料，广泛应用于各种各类日化用品，如餐（饮）具洗涤剂、洗衣粉的生产过程。
UPLC-MS/MS法同时快速测定保健食品中7种非法添加药物吴芳海，许琨琨，卢文斌，王晓峰，蔡振世*（泉州市食品药品检验所，福建泉州 362000）摘 要：目的：建立同时快速测定保健食品中阿伐那非、米罗那非、乌地那非、西地那非、他达拉非、沙格列汀和西布曲明等7种非法添加药物的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。
方法：试样前处理采用乙腈为提取溶剂，经超声处理，Waters ACQUITY UPLC®BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）色谱柱分离，以水（含0.1%甲酸）-乙腈（含0.1%甲酸）为流动相梯度洗脱，流速0.3 mL·min-1，柱温30 ℃，进样量2 μL。
质谱采用电喷雾离子源，以正离子多反应监测模式进行定性和定量分析。
结果：7种非法添加药物在本方法色谱和质谱条件下8 min内能得到快速分离，在10～500 ng·mL-1线性关系良好，相关系数R为0.997 1～0.999 2，检出限为0.002 5 mg·kg-1。
结论：本方法前处理过程简单快速，选择性强，灵敏度高，能够快速、准确地同时对保健食品中非法添加的阿伐那非、米罗那非、乌地那非、西地那非、他达拉非、沙格列汀和西布曲明进行定性及定量测定。
关键词：超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）；保健食品；非法添加Simultaneous and Rapid Determination of 7 Kinds of Drugs Illegally Added in Health Food by HPLC-MS/MSWU Fanghai, XU Kunkun, LU Wenbin, WANG Xiaofeng, CAI Zhenshi*(Quanzhou Institute for Food and Drug Control, Quanzhou 362000, China) Abstract: Objective: To establish an UPLC-MS/MS method for simultaneous determination of avanafil, mirodenafil, udenafil, sildenafil, tadalafil, saxagliptin and sibutramine in health food. Method: Samples was extracted with acetonitrile and handled by ultrasound, used Waters ACQUITY UPLC®BEH column C18(100 mm×2.1 mm，1.7 μm) with mobile phase of water (contain 0.1% formic acid) and acetonitrile (contain 0.1% formic acid) by gradient elution ; the flow rate was 0.3 mL·min-1, the column temperature was 30 ℃, and the sample volume was 2 μL. ESI (electro spray ion source) was used for mass spectrometry, and positive ion multiple reaction monitoring mode was used for qualitative and quantitative analysis. Result: Seven illegally added drugs can be separated rapidly in 8 minutes under the conditions of this method, each component has a good linear relationship within the range of 10～500 ng·mL-1, the correlation coefficient R was between 0.997 1 and 0.999 2, the detection limit was 0.002 5 mg·kg-1. Conclusion: The pretreatment process of this method is simple and rapid, high selectivity, high sensitivity, it can be used as a rapid and simultaneous determination method for the illegally addition of avanafil, mirodenafil, udenafil, sildenafil, tadalafil, saxagliptin and sibutramine in health food.Keywords: ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS); health food; illegally added近年来，随着生活水平的提高，消费者对保健食品的需求也越来越强烈，其中补肾壮阳、降糖、减肥等热门功效的保健食品尤其受到消费者的追捧，虽然目前与保健食品相关的法律法规越来越完善，基金项目：福建省市场监督管理局科技项目（FJMS2021034）。
QuEChERS－超高效液相色谱－串联质谱法测定蜂蜜中１９种喹诺酮类抗生素倪杨 杨军军 石磊 张莹莹 熊融（北京市农林科学院林业果树研究所，北京市落叶果树工程技术研究中心，农业农村部果品及苗木质量监督检验测试中心（北京），北京 100093）摘要：建立超高效液相色谱-串联质谱法（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS）同时测定蜂蜜中19种喹诺酮类药物含量的分析方法。
实验对样品前处理过程及色谱质谱仪器条件进行优化。
蜂蜜样品与超纯水1∶1混合后涡旋振荡溶解，经乙腈溶液超声提取，再加入氯化钠盐析分层，离心后上清液采用C18吸附剂进行净化处理，以ACQUITY BEH C18色谱柱分离。
在电喷雾离子（electrospray ionization, ESI）源正离子扫描模式下，采用多反应监测（multiple reaction monitoring, MRM）模式进行检测，外标法进行定量。
结果表明，19种喹诺酮类药物在3 min内完成色谱分离分析，在0.2~50 μg/L质量浓度范围内呈现良好线性关系，相关系数（R2）均大于0.995，检出限（limit of detection, LOD）为0.25~0.50 μg/kg，定量限（limit of quantification, LOQ）为0.80~1.50 μg/kg。
在低、中、高3个添加浓度水平下，蜂蜜中19种喹诺酮类药物的加标回收率为78.9%~96.5%，相对标准偏差（relative standard deviations, RSDs）为1.8%~4.9%（n=6）。
该方法稳定、准确、灵敏、快速，适用于蜂蜜中喹诺酮类抗生素的快速检测和分析确证。
关键词：QuEChERS；超高效液相色谱-串联质谱；喹诺酮类抗生素；蜂蜜Simultaneous determination of 19 quinolone antibiotics in honey byQuEChERS-UPLC-MS/MSNi Y ang, Y ang Junjun, Shi Lei, Zhang Yingying, Xiong Rong(Institute of Forestry and Pomology, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Beijing Engineering Research Center for Deciduous Fruit Trees, Inspection and Testing Laboratory of Fruits and Nursery Stocks (Beijing) Ministry ofAgriculture and Rural Affairs, Beijing 100093, China)Abstract: To establish a method for simultaneous determination of 19 quinolone antibiotics in honey by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) combined with QuEChERS extraction. The pretreatment process and instrument conditions were optimized. Samples were mixed with ultrapure water at a ratio of 1:1, ultrasonic extracted with acetonitrile solution and salted out by adding NaCl. After centrifugation, the supernatant was cleaned up by C18 sorbent and separated on an ACQUITY BEH C18 column. In the electrospray ionization (ESI) positive ion scanning mode, the samples were analyzed by multiple reaction monitoring (MRM) and quantifi ed by external standard method. Result showed that all the 19 quinolone antibiotics were well separated in 3 min and the calibration curves in the range of 0.2-50 μg/L for all compounds were linear with correlation coeffi cients(R2)were more than 0.995. The limits of detection (LODs) and limits of quantifi cation (LOQs) in honey were 0.25-0.50 μg/kg and 0.80-1.50 μg/kg, respectively. The average recoveries of 19 quinolone antibiotics in different matrices at low, medium and high spiked levels were ranged from 78.9%-96.5%, with relative standard deviations (RSDs) in the range of 1.8%-4.9% (n=6). The method is proved to be stable, accurate, sensitive and rapid, and can meet requirements for the rapid and accurate determination of quinolone antibiotics in honey sample.Key words: QuEChERS; UPLC-MS/MS; quinolone antibiotics; honey基金项目：北京市科技计划项目（Z201100008920007），北京市农林科学院科技创新能力建设专项（KJCX20200302）作者简介：倪杨（1985-），女，博士，高级农艺师，研究方向农产品质量安全，E-mail:***************通信作者：熊融（1977-），女，硕士，高级工程师，研究方向植物资源评价与检测技术研究，E-mail:**********************中国蜂业APICULTURE OF CHINA和除杂富集效果有待提高，因其操作复杂、过柱时间长且成本较高，不适合大批量快速检测。
超高效液相色谱-串联质谱法同时测定白酒中氨基甲酸乙酯和8种甜味剂柯润辉;王丽娟;安红梅;黄新望;尹建军;宋全厚【摘要】建立了超高效液相色谱-串联质谱仪(ultra performance liguid chromatograph-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)同时测定白酒中氨基甲酸乙酯和8种甜味剂(安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、纽甜、阿力甜和甜菊糖苷)含量的新方法.样品经超纯水稀释2倍,微孔滤膜过滤后直接进样,用液相色谱-串联质谱(liguid chromatograph-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行定量分析.Waters HSS T3色谱柱为分析柱,甲醇-0.1％乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾电离源正负离子切换多反应监测模式检测.结果表明:氨基甲酸乙酯和8种甜味剂在3～500 μg/L的范围内线性关系良好(相关系数r＞0.998),方法检出限在1 ～3 μg/L,基质加标回收率在89％～106％,相对标准偏差≤9％,完全满足日常检测的要求.该方法前处理简单,测定快速、准确、灵敏度高,非常适合白酒中氨基甲酸乙酯和多种甜味剂的快速筛查和定量分析.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2016(042)004【总页数】5页(P174-178)【关键词】超高效液相色谱-串联质谱仪;白酒;氨基甲酸乙酯;甜味剂【作者】柯润辉;王丽娟;安红梅;黄新望;尹建军;宋全厚【作者单位】中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015;中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015;中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015;中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015;中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015;中国食品发酵工业研究院,北京,100015;国家食品质量监督检验中心,北京,100015【正文语种】中文氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate，EC)是发酵食品在发酵和贮存过程中天然产生的化学污染物[1]。
燕窝及冰糖燕窝的鉴别
陈哲妮;黄婉锋
【期刊名称】《现代中药研究与实践》
【年(卷),期】2011(025)002
【摘要】目的建立燕窝及冰糖燕窝的鉴别方法,为制定其质量标准提供依据.方法采用现代显微技术,时目前市场流通领域的燕窝及冰糖燕窝进行显微等鉴别;薄层色谱以五种氨基酸为对照品,以正丁醇-冰醋酸-水(4:1:1)为展开剂,喷以茚三酮试液,在105℃加热检视.结果燕窝及冰糖燕窝在显微特征上基本相同;燕窝及冰糖燕窝在对照品相同位置上有相同颜色的斑点.结论本研究结果可以作为燕窝及冰糖燕窝真伪鉴别的依据.
【总页数】2页(P22-23)
【作者】陈哲妮;黄婉锋
【作者单位】广东省佛山市药品检验所,广东,佛山,528000;广东省佛山市药品检验所,广东,佛山,528000
【正文语种】中文
【中图分类】R282.74
【相关文献】
1.液相色谱-串联质谱法测定冰糖燕窝中的唾液酸 [J], 赖源发;胡佳;王鋆萍;吴振洁;张启国
2.分光光度法鉴别燕窝真伪及半定量测定燕窝的百分含量 [J], 黄雪珍
3.杏仁冰糖燕窝 [J],
4.“红楼梦”里的药膳方冰糖燕窝粥 [J], 刘鑫源
5.『红楼梦』里的药膳方冰糖燕窝粥 [J], 刘鑫源
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第42 卷第 11 期2023 年11 月Vol.42 No.111469~1478分析测试学报FENXI CESHI XUEBAO（Journal of Instrumental Analysis）超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中15种N-亚硝胺化合物汪毅1，梁文耀1，何国山1，陈张好2，周智明2，吴谦1，席绍峰1，谭建华1*（1．广州质量监督检测研究院，国家化妆品质量检验检测中心（广州），广东广州511447；2．广东省药品检验所，广东广州510663）摘要：采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）建立了化妆品中15种痕量N-亚硝胺化合物的分析方法。
水剂样品以水或乙腈分组超声提取，膏霜乳液样品采用亚铁氰化钾-乙酸锌溶液沉淀大分子或者饱和氯化钠-乙腈盐析分组处理后，以Agilent Poroshell 120 SB-Aq（100 mm×3.0 mm，2.7 μm）色谱柱分离，经大气压化学电离源（APCI）电离，多反应监测模式检测，以同位素内标法定量。
结果表明，15种N-亚硝胺化合物在相应质量浓度范围内线性关系良好（r2＞0.995），检出限和定量下限分别为5~15 ng/g和15~45 ng/g。
水、乳、膏霜3种化妆品基质在25、50、100 ng/g加标水平下的平均回收率为88.0%~111%，相对标准偏差（RSD，n=6）为1.4%~9.8%。
该方法用于市售化妆品检测，发现13批次样品检出N-亚硝基二乙醇胺（NDELA），其中1批次超限量值。
方法的专属性强，灵敏度高，精密度好，解决了N-亚硝胺化合物稳定性差、易被干扰等问题，适用于化妆品中15种N-亚硝胺化合物的痕量测定。
关键词：N-亚硝胺化合物；化妆品；超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）；大气压化学电离源中图分类号：O657.63；O623.732文献标识码：A 文章编号：1004-4957（2023）11-1469-10 Determination of Fifteen N-nitrosamine Compounds in Cosmetics by Ultra Performance Liquid Chromatography-TandemMass SpectrometryWANG Yi1，LIANG Wen-yao1，HE Guo-shan1，CHEN Zhang-hao2，ZHOU Zhi-ming2，WU Qian1，XI Shao-feng1，TAN Jian-hua1*（1．Guangzhou Quality Supervision and Testing Institute，National Quality Supervision and Testing Center for Cosmetics（Guangzhou），Guangzhou 511447，China；2．Guangdong Institute for Drug Control，Guangzhou 510663）Abstract：An ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric（UPLC-MS/MS）method was established for detecting 15 trace N-nitrosamine compounds in cosmetics. The final estab⁃lished method involved ultrasonic extraction of cosmetics using water or acetonitrile for different com⁃pounds. The samples were treated with potassium ferrocyanide-zinc acetate solution for precipitating macromolecules or saturated sodium chloride-acetonitrile for salting out.An Agilent Poroshell 120 SB-Aq（100 mm × 3.0 mm，2.7 μm） chromatography column was used for separation，followed by atmospheric pressure chemical ionization（APCI） source and multiple reaction monitoring mode detec⁃tion in the isotope internal standard method for quantification. The result showed good linearity（r2> 0.995） for the 15 N-nitrosamine compounds in their respective concentration ranges，with detection and quantitation limits of 5-15 ng/g and 15-45 ng/g，respectively.The average recoveries for the three cosmetic matrices（aqueous，emulsion，cream） at spiked levels of 25，50，100 ng/g were be⁃tween 88.0% and 111%，with relative standard deviations（RSD，n=6） of 1.4%-9.8%. The method was applied to the detection of commercial cosmetics and N-nitrosodiethanolamine（NDELA） was de⁃tected in 13 batches，with one batch exceeding the limit. The strong specificity，high sensitivity，and good precision made the method could solve the problems of poor stability and easy interference ofdoi：10.19969/j.fxcsxb.23051602收稿日期：2023－05－16；修回日期：2023－06－10基金项目：广东省药品监督管理局化妆品风险评估重点实验室专项（2021ZDZ03）；广东省市场监督管理局科技项目（2022CZ06）∗通讯作者：谭建华，博士，正高级工程师，研究方向：色谱－质谱检测技术研究，E-mail：tanjianhua0734@第 42 卷分析测试学报N-nitrosamine compounds，and was suitable for the trace determination of 15 N-nitrosamine com⁃pounds in cosmetics.Key words：N-nitrosamine compounds；cosmetics；ultra performance liquid chromatography-tan⁃dem mass spectrometry（UPLC-MS/MS）；atmospheric pressure chemical ionization（APCI） sourceN-亚硝胺化合物是一类具有N-亚硝基结构的化合物，因取代基的不同，形成了种类繁多的同系物，目前已发现超过300种［1］。
燕窝唾液酸含量标准
唾液酸在燕窝中的含量在3%-15%左右。
唾液酸也叫燕窝酸，化学名称为N—乙酰神经氨酸。
燕窝中的唾液酸的确比较多，从目前的一些检测数据来看，可达到燕窝干物质重量的3%~15%。
燕窝的主要营养是唾液酸，所有已知的食物中，同等质量下燕窝中唾液酸的含量是最高的。
燕窝酸进入人体后能加快人体内胶原蛋白合成，而胶原蛋白又是构成人体皮肤组织细胞的重要存在，所以平时可以适量补充一些燕窝酸，能滋养细嫩肌肤，提高皮肤弹延缓皮肤衰老。
燕窝酸还能抑制人体内色素生成，它能让人类皮肤表面的色斑慢慢淡化，其美白功效也很出色。
超高效液相色谱-串联质谱法测定燕窝中唾液酸的含量侯向昶1，朱丽萍1，刘春生1，王斌1，王莉1，韩婉清1，赖富饶2，柯振华1(1.广州市质量监督检测研究院，广东广州 510110)(2.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640)摘要：本研究建立了燕窝中唾液酸含量的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）测定方法。
经磷酸水解后，燕窝中的唾液酸从与唾液酸糖蛋白的结合状态中游离出来，吸取上清液过Oasis HLB柱，用水淋洗固相萃取柱并弃去全部流出液，用真空泵在40～60 kPa负压下抽干Oasis HLB固相萃取柱，再用甲醇洗脱被测物，洗脱液40 ℃水浴中氮气吹干，用流动相溶液定容，采用负离子模式和多反应监测模式超高效液相色谱-串联质谱法检测。
方法的线性范围在0.1~50 mg/L之间，相关系数0.999，检出限为0.02 mg/kg，定量限为0.1 mg/kg，样品平均加标回收率为93.5%，相对标准偏差1.52%。
该方法前处理简单、重复性好、灵敏度高，可应用于燕窝中唾液酸含量的测定。
关键词：燕窝；唾液酸(N-乙酰神经氨酸)；超高效液相色谱-串联质谱；测定文章篇号：1673-9078(2013)7-1706-1709Determination of Sialic Acid in Edible Bird’s Nest Using UPLC-MS/MSHOU Xiang-Chang1, ZHU Li-Ping1, LIU Chun-Sheng1, W ANG Bin1, W ANG Li1, HAN Wan-Qing1, LAI Fu-Rao2,KE Zhen-Hua1(1.Guangzhou Quality Supervision and Testing Institute, Guangzhou Guangdong 510110, China)(2.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China)Abstract:A simple and sensitive UPLC-MS/MS method was developed and validated for the quantification of sialic acid (N-Acetylneuraminic acid) in edible bird’s nest. After acid hydrolysis, sialic acid in edible bird’s nest was released from the combination state of glycoprotein sialic acid. The supernate was further cleaned up using Oasis HLB SPE, followed by washed with water. The Oasis HLB SPE was drained by vacuum pump at 40~60 kPa prior to be eluted by methanol. The eluate was concentrated by nitrogen at 40 ℃ water bath, and then settled to permit by mobile phase. UPLC-MS/MS in negative-ion and multiple reaction monitor mode was used to detect the sialic acid. V alidation results indicated that the limit of detection was 0.02 mg/kg and the limit of quantificat ion was 0.1 mg/kg. The assay showed a linear range of 0.1-50 mg/L and gave a correlation coefficient (r) of 0.999. The average recovery was 93.5% with relative standard deviations (RSD) of 1.52% (n=6). The method showed good reproducibility and high sensitivity, suitable for analysis of sialic acid in edible bird’s nest.Key words: e dible bird’s nest; sialic acid (N-Acetyl neuraminic acid); UPLC-MS/MS; determination燕窝是雨燕科动物金丝燕及同属多种金丝燕用唾液和少量羽毛混合黏结所筑成的巢窝，含有丰富的蛋白质、糖类和矿物质，其特征成份是唾液酸糖蛋白[1]。
燕窝价格昂贵，一些不法商人利用掺假燕窝及其制品牟取暴利。
目前燕窝品质的鉴别研究多采用经验鉴别、显微鉴别及理化鉴别方法。
随着市场上燕窝商品来源的日趋复杂以及燕窝深加工产品的出现，仅凭物理特征已难以达到鉴别目的，为了保护消费者利益，维护市场秩序，需要开发更为科学有效的方法鉴别燕窝品收稿日期：2013-06-27基金项目：广州市科研条件建设项目（[2011]233-34）；广州市科技计划项目（11C13190775）；广州市质量技术监督局科技计划项目（2012kj05）作者简介：侯向昶（1971-），男，高级工程师，从事产品质量检验工作质。
唾液酸（sialic acid，SA，见图1）是一族神经氨酸（neuraminic acid）的衍生物，是构成细胞膜上糖蛋白和糖脂的重要成分，广泛存在于脊椎动物、哺乳动物及多种植物组织中。
由于在大部分哺乳动物组织中发现的唾液酸主要是N-乙酰神经氨酸，所以通常将N-乙酰神经氨酸称为唾液酸[2]。
研究表明，唾液酸是一种天然的大脑营养素，它能增强婴儿的记忆力和促进智力的发育[3]。
现有研究结果综合表明[2,4]，不同来源的燕窝中唾液酸含量范围基本一致，可将唾液酸含量7.0~11.0%作为燕窝初级产品质量初步鉴别的指标。
猪皮、银耳、动物骨胶、琼脂、淀粉、海洋藻类植物成分及鱼鳔等物质常用于燕窝掺假，或在劣质燕窝表面17061707涂上胶粉、面粉、鸡蛋、树胶、浆糊等。
因掺假成分不含唾液酸或唾液酸含量很低，假冒燕窝的唾液酸含量难以达到正常燕窝初级产品的水平[5]。
因此，唾液酸的测定可以作为鉴别燕窝真伪的重要指标之一。
目前，测定唾液酸的方法主要有化学比色法[6]、高效液相色谱法[7~12]、气相色谱法[13~14]、胶束电动色谱法[15]、毛细管区带电泳法[16]等。
比色法操作相对简便，但方法较费时且灵敏度欠佳；高效液相色谱一般需要内使用。
燕窝为马来西亚白燕盏、血燕盏。
1.2 色谱-质谱条件色谱柱：Waters Acquity UPLC HSS T3柱（2.1 mm×100 mm, 1.8 μm ）；柱温：30 ℃；流动相：0.1%甲酸水溶液:乙腈=90:10（V/V ），等度洗脱；流速：0.4 mL/min ；进样量2 µL 。
采用负离子模式，离子源温度150 ℃，电离电压3 kV ，脱溶剂气温度500 ℃，雾化气流速800 L/h ，采用多反应监测模式(MRM)，监测离子对308.02>86.86、308.02>170.12，定量离子对308.02>86.86。
锥孔电压20 V ，碰撞电压15 V ，滞留时间0.022s 。
唾液酸标准品溶液的多反应监测(MRM)色谱图见图2。
5 m 法。
本实验采用酸解法，利用酸水解断开连接、去乙酰基、去碳酸基，唾液酸释放较为彻底，而且适应性好，无特异性。
合适的水解条件是决定唾液酸是否释放完全的关键，因此本实验重点对磷酸溶液浓度、水解时间、水解温度进行了优化试验。
按三因素三水平L 9(34)设计正交试验，方案见表1，结果见表2，以唾液酸的含量为指标进行比较。
唾液酸的含量测定，以峰1708面积按外标法计算。
表2 正交试验表 Table 2 Orthogonal test table试验 编号 水平因子 唾液酸 含量/% A B C 1 1 1 1 6.36 2 1 2 2 6.05 3 1 3 3 6.86A 2结果存在着较大的干扰。
本方法最终采用的是液相色谱-串联质谱法，最大优点是无需衍生，可以获得较好的重现性与准确性，避免了衍生化试剂的干扰。
唾液酸的亲水能力较强，试验比较了唾液酸在Acquity UPLC BEH C 18色谱柱和Acquity UPLC HSS T3色谱柱上的分离效果。
发现唾液酸在BEH C 18色谱柱上保留较弱，而在HSS T3色谱柱上的分离效果良好，因此选用HSS T3色谱柱。
由于唾液酸可以和固定相中的硅羟基等相互作用，导致峰型拖尾。
为改善峰型，抑制唾液酸中羧基质子的电离，将流动相中的水调节为弱酸性。
在流动相的选择方面，经比较，发现以0.1%甲酸水溶液+乙腈（90+10）为流动相可达到良好的分离效果。
2.3 线性关系考察在上述仪器条件下测定，精密吸取系列对照品溶6.597.3313.5695.1称取已测定含量的燕窝（唾液酸含量为6.59%）样品6份，每份均为100.0 mg ，加入一定量的唾液酸对照品溶液，按本方法测定。
用外标法计算含量，回收率结果见表3。
2.8 样品测试取5份不同种类的燕窝样品，测定其中的唾液酸含量。
测得唾液酸含量分别为6.59%、7.09%、8.11%、6.98%、7.25%。
结果显示，5份燕窝样品中的唾液酸含量在6.0~8.5%之间，其中一份燕窝样品的MRM色谱图如图3所示。
王慧[2]等采用HPLC-UV法检测官燕、血燕、毛燕共9个样品的唾液酸，含量在7.1~10.4%之间。
姜水红[4]等采用HPLC检测了马来西亚白燕盏、印尼血燕盏等10个样品的唾液酸，含量在7.09~10.79%之间。
以上文献报导结果与本文测试数据基本接近，相关差异可能源于燕窝品种及来源的不同。
图3 燕窝样品的多反应监测(MRM)色谱图Fig.3 Multiple reaction monitoring (MRM) chromatogramsof edi ble bird’s nest3 结论本研究建立了应用超高效液相色谱-串联质谱法测定燕窝中唾液酸含量的方法。
