革兰氏染色和抗酸染色法优秀课件
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《革兰氏染色法》课件
快速鉴定
可以快速鉴定临床样本中细菌 的种类，帮助医生开出正确的 用药方案。
菌落鉴定
对于未知菌落的鉴定，革兰氏 染色法是最常用的分类方法之 一。
监测传染病
在监测传染病方面，革兰氏染 色法可以定位不同类型的病原 细菌，并帮助实现区域或全球 性疫情监测。
革兰氏染色法的优缺点
优点
快速1、简单方便2、准确性高3
《革兰氏染色法》PPT课 件
本课程将深入介绍革兰氏染色法，并探讨其在现代细菌学中的应用。您将会 了解到该技术的历史、原理以及与其他检测方法的比较。
革兰氏染色蒂安·革兰于1884年 发明。
2 改进
3 应用
后来，该方法被不断改进， 特别是发展了一种逆转染 色的方法，可以检测兼性 杆菌等细菌。
缺点
一次只能染色一种菌2、对某些细菌检测效果差 3、需要显微镜等专业处理设备1
革兰氏染色法与其他细菌检测方法的比 较
1
PCR法
可以检测DNA序列比革兰氏染色法更具特异性1，但需要高昂的设备和消耗品，以及专 业的操作技能3。
2
荧光显微镜观察法
可用于活菌的鉴定3，但不能谈及细胞壁结构，也较为耗时2。
3
革兰氏染色法成为一项必 备技术，并促进了细菌检 测、临床诊断和医学研究 的发展。
革兰氏染色法的原理和步骤
原理 步骤
基于细胞壁的结构差异，将菌落分为革兰阳性和 革兰阴性两类。
准备细菌涂片，使用紫色染料固定，用酒精漂洗 去除过量染料，再用红色染料染色。经过显微镜 观察，可以分辨细菌类型。
革兰氏染色法在细菌检测中的应用
ELISA法
对于临床诊断中需要检测抗原和抗体的病种2，效果较好。但由于存在假阳性和假阴性 结果，不能作为最终的诊断依据1。
《革兰氏染色法》课件
将脱色后的涂片用番红染液复染，时间约为1-2分钟。番红是 一种酸性染料，可以和蛋白质结合，使菌体或细胞呈现红色 。
番红复染的作用是使菌体或细胞呈现红色，使其更加明显， 有助于观察和鉴别。同时，番红还可以与结晶紫形成鲜明的 对比，使观察更加准确。
冲洗与干燥
• 将染色完成的涂片用清水冲洗干净，然后晾干或用吸水纸吸干 水分。冲洗的目的是去除染色过程中残留的染料和媒染剂等物 质，以免对观察造成干扰。干燥的目的是使涂片固定，以便于 保存和观察。
背景
革兰氏染色法的发明对于细菌学的发展起到了重要的推动作 用，为后续的细菌分类、疾病诊断和治疗提供了有力支持。
染色原理
原理
革兰氏染色法的染色原理主要是通过 一系列的脱色处理和复染，使细菌着 色，从而根据颜色差异将细菌分为革 兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
操作流程
革兰氏染色法通常包括涂片、脱色、 媒染、染色和复染等步骤，通过这些 步骤的组合和调整，可以实现对不同 类型细菌的准确鉴别。
革兰氏染色法的结
03
果与意义
革兰氏阳性菌与阴性菌的染色特性
革兰氏阳性菌
被染成紫色或蓝紫色，不易被酒 精脱色，有厚重的革兰氏染色反 应。
革兰氏阴性菌
被染成红色或淡红色，易被酒精 脱色，有较弱的革兰氏染色反应 。
染色结果的分析与解读
根据染色结果判断细菌的种类和特性，有助于临床诊断和 治疗。
通过观察染色后细菌的形态和排列，可以初步判断细菌的 致病性。
重要性
革兰氏染色法对于临床医学、生物技术和食品工业等领域具有重要意义，能够 帮助科学家和医生快速准确地鉴别不同类型的细菌，从而采取相应的治疗和预 防措施。
发展历程与背景
发展历程
革兰氏染色法由丹麦细菌学家汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884 年发明，至今已有百余年历史。随着科学技术的不断进步， 该方法在操作流程和染料选择等方面不断得到优化和改进。
革兰氏染色和抗酸染色法PPT课件
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▪ 3.结核杆菌易发生变异，在陈旧培养基或临 床治疗后标本材料中，结核杆菌往往菌体断 裂，或形成非抗酸性革兰氏阳性的短杆状、 球状颗粒，亦称Much颗粒。
▪ 4.标本经高压灭菌处理，不影响染色结果， 也保证操作者的安全。
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红色。
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四、注意事项
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1、注意涂片不宜过于浓厚。 2、火焰固定温度要适宜。 3、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色 过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如 脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳 性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多 少等因素的影响，难以严格规定。 4、染色过程中应吸去玻片上的残水，以免染色 液被稀释而影响染色效果。 5、选择幼龄的细菌。G+菌培养12-16h， E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶 常使G+菌转呈阴性反应。
4
一、实验原理
（一）基本步骤：
1、初染：草酸胺结晶紫染色 2、媒染：碘液媒染 3、脱色：乙醇脱色 4、复染：石炭酸复红复染
5
（二）原理：
▪ 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它 们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
▪ 初染后，所有细菌都被染成初染剂的蓝 紫色。
▪ 碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结 晶紫—碘的复合物，增强染料与细菌的 结合力。
14
五、革兰染色的临床意义
▪ 1.对细菌的鉴别有重要意义 ▪ 2.指导临床选择用药 ▪ 3.研究细菌与致病性的关系
15
思考题： 当你对一株未知菌进行革兰染色时，
怎样能确证你的染色技术操作正确， 结果可靠？
16
抗酸染色法
▪ 3.结核杆菌易发生变异，在陈旧培养基或临 床治疗后标本材料中，结核杆菌往往菌体断 裂，或形成非抗酸性革兰氏阳性的短杆状、 球状颗粒，亦称Much颗粒。
▪ 4.标本经高压灭菌处理，不影响染色结果， 也保证操作者的安全。
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红色。
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四、注意事项
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1、注意涂片不宜过于浓厚。 2、火焰固定温度要适宜。 3、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色 过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如 脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳 性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多 少等因素的影响，难以严格规定。 4、染色过程中应吸去玻片上的残水，以免染色 液被稀释而影响染色效果。 5、选择幼龄的细菌。G+菌培养12-16h， E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶 常使G+菌转呈阴性反应。
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一、实验原理
（一）基本步骤：
1、初染：草酸胺结晶紫染色 2、媒染：碘液媒染 3、脱色：乙醇脱色 4、复染：石炭酸复红复染
5
（二）原理：
▪ 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它 们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
▪ 初染后，所有细菌都被染成初染剂的蓝 紫色。
▪ 碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结 晶紫—碘的复合物，增强染料与细菌的 结合力。
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五、革兰染色的临床意义
▪ 1.对细菌的鉴别有重要意义 ▪ 2.指导临床选择用药 ▪ 3.研究细菌与致病性的关系
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思考题： 当你对一株未知菌进行革兰染色时，
怎样能确证你的染色技术操作正确， 结果可靠？
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抗酸染色法
实验一 革兰染色法PPT课件
葡萄球菌属主要是釐黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌等链球菌属肺炎链球菌草绿色链球菌肠球菌等白喉杆菌炭疽杆菌破伤风杆菌蜡样芽孢杆菌等其中釐黄色葡萄球菌肠球菌等为临床重要等病原菌革兰氏阳性菌通常对青霉素类第一或第二代头孢菌素等高度敏感青霉素可为化脓性细菌感染可首选药物
微生物实验课注意事项
• 禁止不穿白大衣进入实验室； • 禁止在实验室内吃东西、吸烟；不得高声喧哗，随
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P3
9
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注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。 2. 染色过程中勿使染色液稀释。用水冲洗后，应吸去玻片上的
2.镜检后的染色玻片直接扔到专装废弃玻片的盒子。
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染色结果
金黄色葡萄球菌(10×100)
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大肠杆菌(10×100)
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染色结果
螺形菌Spiral bacterium
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革兰染色意义
★鉴别细菌 ★选择抗菌药物 ★研究细菌的致病性
2020/3/26
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15
15
选择抗菌药物
• 常见的革兰氏阴性菌：沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾 杆菌等）、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆 菌等）、霍乱弧菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细 菌感染中占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐 药
• 革兰氏阴性菌对第三代头孢、氨基糖苷类、抗假单胞菌 属的青霉素类、多粘菌素等高度敏感，对头霉素类和第 二代头孢菌素也较敏感。例如氟哌酸对革兰染色阴性杆 菌有效，如肠道病、腹泻为常用药 。
微生物实验课注意事项
• 禁止不穿白大衣进入实验室； • 禁止在实验室内吃东西、吸烟；不得高声喧哗，随
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P3
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注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌。 如果脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响， 难以严格界定。 2. 染色过程中勿使染色液稀释。用水冲洗后，应吸去玻片上的
2.镜检后的染色玻片直接扔到专装废弃玻片的盒子。
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染色结果
金黄色葡萄球菌(10×100)
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大肠杆菌(10×100)
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染色结果
螺形菌Spiral bacterium
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革兰染色意义
★鉴别细菌 ★选择抗菌药物 ★研究细菌的致病性
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选择抗菌药物
• 常见的革兰氏阴性菌：沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾 杆菌等）、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆 菌等）、霍乱弧菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细 菌感染中占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐 药
• 革兰氏阴性菌对第三代头孢、氨基糖苷类、抗假单胞菌 属的青霉素类、多粘菌素等高度敏感，对头霉素类和第 二代头孢菌素也较敏感。例如氟哌酸对革兰染色阴性杆 菌有效，如肠道病、腹泻为常用药 。
革兰氏染色课件PPT
复染
复染：将脱色后的涂片用复染液进行复染处理，以便更好地观察菌体或组织的形态和结构。
复染时应注意控制复染时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
冲洗和干燥
冲洗
将染色和脱色处理后的涂片用清 水冲洗干净，以便观察菌体或组 织的染色效果。
干燥
将冲洗干净的涂片放在干净的纸 巾上自然干燥，以便后续观察。
Part
固定时应注意控制火焰温度，避免过高或过低，以免影响 染色效果。
染色
染色：将涂片浸入革兰氏染色液中， 染色一定时间后取出晾干。
染色时应注意控制染色时间，避免过 长或过短，以免影响染色效果。
脱色
脱色：将染色后的涂片用脱色液进行脱色处理，以去除菌体或组织表面的色素。
脱色时应注意控制脱色时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
复染与初次染色要匹配
复染的颜色要与初次染色相匹配，以 便更好地观察染色效果。
其他注意事项
染色液要新鲜
染色液使用前要确保新鲜，过期 或变质的染色液会影响染色效果
。
避免交叉污染
在染色过程中要避免不同染色液之 间的交叉污染，以免影响染色结果 。
注意安全
染色过程中要注意安全，避免染色 液溅到皮肤或眼睛上，如不慎溅到 应立即用大量清水冲洗并及时就医 。
革兰氏染色还可以用于研究细菌的生 物学特性和分类学研究，有助于深入 了解细菌的生态学和进化关系。
Part
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片：将待染色的菌体或组织薄而均匀地涂在洁净的玻片上，然后晾干或烘干， 以便后续染色。
涂片时应注意避免涂层过厚，以免影响染色效果。
固定
固定：将涂片在火焰上快速通过两次，使菌体或组织固定 在玻片上，以便后续染色。
实验二细菌革兰氏染色ppt课件
兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 （3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 （4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。
五、思考题
1、讲述革兰氏染色的原理并指出E.C和B.S分别属于革兰 氏阳性或阴性？
2、观察细菌为什么要染色？为什么细菌染色多采用碱性 染料？
3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？革兰氏染色 成败的关键一步是什么？
crystal violet stain
wash with water
Counterstain wi在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱 色
时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足， 革
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等
Heat fixing
Staining
实验二 细菌革兰氏染色
一、实验目的
学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态
二、实验原理
C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
革兰氏染色
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
4、当对未知菌进行革兰氏染色时，怎样能证明你的染色 技术和结果的正确性？
五、思考题
1、讲述革兰氏染色的原理并指出E.C和B.S分别属于革兰 氏阳性或阴性？
2、观察细菌为什么要染色？为什么细菌染色多采用碱性 染料？
3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？革兰氏染色 成败的关键一步是什么？
crystal violet stain
wash with water
Counterstain wi在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱 色
时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足， 革
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等
Heat fixing
Staining
实验二 细菌革兰氏染色
一、实验目的
学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态
二、实验原理
C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
革兰氏染色
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
4、当对未知菌进行革兰氏染色时，怎样能证明你的染色 技术和结果的正确性？
细菌革兰氏染色PPT课件
细菌革兰氏染色ppt课件
目录
• 引言 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的应用和限制 • 结论
01 引言
目的和背景
目的
介绍革兰氏染色的原理、方法及应用，帮助学习者更好地了解和掌握这一基本 染色技术。
背景
革兰氏染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法之一，通过对细菌的染色， 可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于临床诊断和治疗具有 重要的指导意义。
结合其他技术
将革兰氏染色与其他技术如分子生 物学、免疫学等相结合，实现更精 确的细菌分类和鉴别。06Βιβλιοθήκη 结论总结革兰氏染色的重要性
临床诊断的关键工具
革兰氏染色是临床微生物实验室的基 本技术，用于快速识别细菌种类，对 准确诊断感染和选择合适的治疗方案 至关重要。
指导抗生素选择
科研的基础
在科研领域，革兰氏染色是研究细菌 种群结构、进化、生态和致病性的重 要手段。
染色
染色
用革兰氏染色液对固定后的涂片进行 染色，分别使用结晶紫、碘液和脱色 液进行初染、媒染和脱色处理。
染色注意事项
染色时应按照规定的步骤进行，避免 染色过度或不足，同时要确保染色液 的新鲜度和浓度适宜。
脱色
脱色
用脱色液对染色后的涂片进行脱色处理，以 去除菌体表面的结晶紫和碘液。
脱色注意事项
脱色时应控制脱色时间和脱色液的用量，避 免脱色过度或不足，影响染色效果。
革兰氏染色的工作原理
革兰氏染色利用了细菌细胞壁的成分 和结构对染料亲和性的差异，通过结 晶紫初染和碘液媒染后，由于细胞壁 组成成分对革兰氏染料的吸附能力不 同，酒精脱色时，细胞壁对染料的吸 附能力不同，从而导致被脱色的程度 不同，最终影响了复染后细菌的着色。
目录
• 引言 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的应用和限制 • 结论
01 引言
目的和背景
目的
介绍革兰氏染色的原理、方法及应用，帮助学习者更好地了解和掌握这一基本 染色技术。
背景
革兰氏染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法之一，通过对细菌的染色， 可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于临床诊断和治疗具有 重要的指导意义。
结合其他技术
将革兰氏染色与其他技术如分子生 物学、免疫学等相结合，实现更精 确的细菌分类和鉴别。06Βιβλιοθήκη 结论总结革兰氏染色的重要性
临床诊断的关键工具
革兰氏染色是临床微生物实验室的基 本技术，用于快速识别细菌种类，对 准确诊断感染和选择合适的治疗方案 至关重要。
指导抗生素选择
科研的基础
在科研领域，革兰氏染色是研究细菌 种群结构、进化、生态和致病性的重 要手段。
染色
染色
用革兰氏染色液对固定后的涂片进行 染色，分别使用结晶紫、碘液和脱色 液进行初染、媒染和脱色处理。
染色注意事项
染色时应按照规定的步骤进行，避免 染色过度或不足，同时要确保染色液 的新鲜度和浓度适宜。
脱色
脱色
用脱色液对染色后的涂片进行脱色处理，以 去除菌体表面的结晶紫和碘液。
脱色注意事项
脱色时应控制脱色时间和脱色液的用量，避 免脱色过度或不足，影响染色效果。
革兰氏染色的工作原理
革兰氏染色利用了细菌细胞壁的成分 和结构对染料亲和性的差异，通过结 晶紫初染和碘液媒染后，由于细胞壁 组成成分对革兰氏染料的吸附能力不 同，酒精脱色时，细胞壁对染料的吸 附能力不同，从而导致被脱色的程度 不同，最终影响了复染后细菌的着色。
细菌染色技术ppt课件
.
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五、临床意义
➢ 鉴别细菌：
•
用革兰氏染色法可将所有细菌分为阳性与阴性两类，可初步识别细菌，
以利进一步鉴定。
➢ 选择药物：
•
可根据革兰氏染色性的不同，供临床初步选择用药方向。
➢ 与致病性相关：
•
大多数革兰氏阳性菌的致病物质为外毒素，而大多数革兰氏阴性菌的致
病物质为内毒素。由此，可采取有针对性的治疗方案。
➢ 基本形态
球菌 杆菌 弧菌
➢ 特殊结构
芽孢：枯草杆菌、破伤风梭菌 荚膜：肺炎链球菌 鞭毛：变形杆菌
.
7
标本处理
➢痰液：用无菌棉签挑取干酪样或脓性痰部分0.05-0.1ml，
涂于载物玻片右2/3 处，均匀涂抹成卵圆形痰膜（约2cm长),
每张玻片只涂一份标本。
➢脓液： 同痰涂片法。
➢病灶组织或干酪块等：先用组织研磨器磨碎后再
行涂片。大小、厚度同痰涂片。
➢体液标本：取标本10ml，3000rpm,离心30min，取沉
渣涂片。大小、厚度同痰涂片。
➢脑脊液：将脑脊液离心或甩片集菌后涂片备用。
.
8
标本处理注意事项
➢标本应以打圈的方式反复涂抹均匀，避 免标本涂布不均影响结果判读，或使染 色不均造成阴阳不定。
➢标本涂布不能过厚，影响染色效果。
于结核病、麻风病等
• 荧光染色：敏感性强、效率高、易观察；
用于结核分枝杆菌等
• 其它：鞭毛染色鞭毛有无、位置、数量；
•
异染颗粒染色白喉棒状杆菌；
• 荚膜染色
.
3
常用燃料
• 碱性染料 带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。常用的染
料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。
革兰氏染色 ppt课件
许多g细菌对高等生物有致病性是由lps的成分决定的它的毒性组分常称为内毒素细菌外毒素与内毒素的区别外毒素exotoxin内毒素endotoxin产生菌多数革兰氏阳性菌少数革兰氏阴性菌多数革兰氏阴性菌少数革兰氏阳性如苏云金芽孢杆菌存在部位多数活菌分泌出少数菌裂解后释出细胞壁组分菌裂解后释出化学成份蛋白质脂多糖稳定性60半小时被破坏16024小时被破坏毒性作用强较弱毒性反应对组织细胞有选择性毒害效应引起特殊临床表现各菌的毒性效应相似引起发热白细胞增多微循环障碍休克等免疫原性强刺激宿主产生抗毒素弱甲醛液处理脱毒成类毒素不形成类毒素27实验原理
ppt课件 11
2.5固定的目的 ① 杀死微生物，固定其细胞结 构； ② 保证菌体能牢固地粘附在载 玻片上，以免水洗时被水冲掉； ③ 改变菌体对染料的通透性， 一般死细胞原生质容易着色。
ppt课件
12
2.6实验现象：
染色后菌体呈蓝紫色的，称为“革兰阳 性菌”；菌体是伊红色，称“革兰阴性 菌”。无论阳性菌还是阴性菌，都有杆 菌和球菌。葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿 假单胞菌是临床最为常见的病原菌。葡 萄球菌属于革兰阳性菌，大肠杆菌属于 革兰阴性菌。除大肠杆菌以外，临床较 常见的肠杆菌科细菌还有变形杆菌属， 沙门菌属、克霉白菌属；铜绿假单胞菌 是临床常见的较耐药革兰阴性杆菌。
ppt课件 16
细菌结构模式图
ppt课件
17
2.7实验原理：
① G+细菌的细胞壁
G+细菌细胞壁具有较厚（20-80nm）而致密的肽聚糖层， 多达20层，占细胞壁成分的60%～90%，它同细胞膜的外层 紧密相连 ；有的G+细菌细胞壁中含有磷壁酸。细胞生长中 有自溶素（酶类）起作用，磷壁酸对自溶素有调节功能， 阻止胞壁过度降解和壁溶。如果细胞壁的肽聚糖层被消溶， G+细胞成为原生质体（protoplasts），细胞壁不复存在， 而只存留细胞膜。除链球菌外，大多数G+细菌细胞壁中含 极少蛋白质。
ppt课件 11
2.5固定的目的 ① 杀死微生物，固定其细胞结 构； ② 保证菌体能牢固地粘附在载 玻片上，以免水洗时被水冲掉； ③ 改变菌体对染料的通透性， 一般死细胞原生质容易着色。
ppt课件
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2.6实验现象：
染色后菌体呈蓝紫色的，称为“革兰阳 性菌”；菌体是伊红色，称“革兰阴性 菌”。无论阳性菌还是阴性菌，都有杆 菌和球菌。葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿 假单胞菌是临床最为常见的病原菌。葡 萄球菌属于革兰阳性菌，大肠杆菌属于 革兰阴性菌。除大肠杆菌以外，临床较 常见的肠杆菌科细菌还有变形杆菌属， 沙门菌属、克霉白菌属；铜绿假单胞菌 是临床常见的较耐药革兰阴性杆菌。
ppt课件 16
细菌结构模式图
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2.7实验原理：
① G+细菌的细胞壁
G+细菌细胞壁具有较厚（20-80nm）而致密的肽聚糖层， 多达20层，占细胞壁成分的60%～90%，它同细胞膜的外层 紧密相连 ；有的G+细菌细胞壁中含有磷壁酸。细胞生长中 有自溶素（酶类）起作用，磷壁酸对自溶素有调节功能， 阻止胞壁过度降解和壁溶。如果细胞壁的肽聚糖层被消溶， G+细胞成为原生质体（protoplasts），细胞壁不复存在， 而只存留细胞膜。除链球菌外，大多数G+细菌细胞壁中含 极少蛋白质。
《革兰氏染色》课件
脱色剂酒精处理
用脱色剂酒精洗涤，洗去多余的洗脱剂 碘。
苏木精染色
滴加苏木精染色，使革兰氏阳性菌呈紫 色，革兰氏阴性菌呈红色定细菌感染、指导抗生素治疗。
3 环境检测
用于监测环境中的细菌种类和数量。
2 食品安全
可检测食品中的细菌污染程度，保障食品卫 生。
4 研究领域
革兰氏阳性菌会形成革兰碘复合物。
3
洗脱剂碘处理
4
再滴加洗脱剂碘，使革兰氏阳性菌染色
固定，保持紫色。
5
染色剂洗脱剂处理
6
滴加染色剂洗脱剂，洗去细菌的颜色，
革兰氏阴性细菌变为红色。
7
热固定菌涂片
将培养物涂在载玻片上，用火焰热固定， 使细菌附着在玻片上。
洗脱剂酒精处理
用洗脱剂酒精洗涤，去除细菌细胞的多 余染色，革兰氏阴性细菌会变为红色。
《革兰氏染色》PPT课件
本课程将介绍《革兰氏染色》的原理、步骤和应用。革兰氏染色是一种常用 的细菌分类和鉴定方法，具有重要的实际应用价值。
什么是革兰氏染色
细菌鉴定方法
革兰氏染色是一种细菌分类 和鉴定方法，可以将细菌分 成革兰氏阳性和革兰氏阴性 两类。
染色技术
通过染色剂革兰碘复合物和 洗脱剂酒精的作用，使细菌 在显微镜下呈现不同的染色 性质。
帮助科学家研究细菌的特征和鉴定新的细菌 种类。
革兰氏染色的局限性
革兰氏染色无法鉴定革兰氏阳性细菌的种属和鉴别菌株的具体种类，某些细 菌也可能出现不典型的染色结果。
总结和展望
革兰氏染色是一种简单、快速且常用的细菌分类和鉴定方法。未来的研究将进一步完善该技术，提高准确性和 应用范围。
显微镜下的革兰氏染色
实验室操作
科学研究
用脱色剂酒精洗涤，洗去多余的洗脱剂 碘。
苏木精染色
滴加苏木精染色，使革兰氏阳性菌呈紫 色，革兰氏阴性菌呈红色定细菌感染、指导抗生素治疗。
3 环境检测
用于监测环境中的细菌种类和数量。
2 食品安全
可检测食品中的细菌污染程度，保障食品卫 生。
4 研究领域
革兰氏阳性菌会形成革兰碘复合物。
3
洗脱剂碘处理
4
再滴加洗脱剂碘，使革兰氏阳性菌染色
固定，保持紫色。
5
染色剂洗脱剂处理
6
滴加染色剂洗脱剂，洗去细菌的颜色，
革兰氏阴性细菌变为红色。
7
热固定菌涂片
将培养物涂在载玻片上，用火焰热固定， 使细菌附着在玻片上。
洗脱剂酒精处理
用洗脱剂酒精洗涤，去除细菌细胞的多 余染色，革兰氏阴性细菌会变为红色。
《革兰氏染色》PPT课件
本课程将介绍《革兰氏染色》的原理、步骤和应用。革兰氏染色是一种常用 的细菌分类和鉴定方法，具有重要的实际应用价值。
什么是革兰氏染色
细菌鉴定方法
革兰氏染色是一种细菌分类 和鉴定方法，可以将细菌分 成革兰氏阳性和革兰氏阴性 两类。
染色技术
通过染色剂革兰碘复合物和 洗脱剂酒精的作用，使细菌 在显微镜下呈现不同的染色 性质。
帮助科学家研究细菌的特征和鉴定新的细菌 种类。
革兰氏染色的局限性
革兰氏染色无法鉴定革兰氏阳性细菌的种属和鉴别菌株的具体种类，某些细 菌也可能出现不典型的染色结果。
总结和展望
革兰氏染色是一种简单、快速且常用的细菌分类和鉴定方法。未来的研究将进一步完善该技术，提高准确性和 应用范围。
显微镜下的革兰氏染色
实验室操作
科学研究
常用微生物染色方法ppt课件
二 等电点学说 三 化学学说
革兰氏阳性菌细胞壁结构比较 致密，肽聚糖层很厚，脂类含量 较少，酒精不易渗入，而且95％ 酒精可使细胞壁脱水，间隙变小， 通透性降低，阻碍结晶紫-碘复合 物渗出；
革兰氏阴性菌细胞壁结构比较 疏松，肽聚糖层很薄，外膜、脂 蛋白、脂多糖均含有大量脂质， 易被酒精溶解，致使细胞壁通透 性增高，细胞内的结晶紫-碘复合 物被酒精溶解洗出而脱色。
注意事项
1．染液方面： 1）试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。 2）脱色液用完后，可用丙酮作为代用脱色液， 脱色时间可稍短。 3）试剂效期过后，请不要使用。试剂盒储存 时，尽量避免高、低温环境及阳光直射。
-
2019
12
2．涂片染色技术方面： 1）涂片不能太厚，太厚时常不易完全脱色， 使阴性菌呈紫色。 2）涂片后最好自然干燥，若用火焰干燥或固 定不能太靠近火焰，以免破坏菌体 或炭化。 3）脱色时注意勿脱过头，使阳性变成阴性， 尤其是链球菌很容易脱过头变成阴性。 4）染色时间要掌握好。
-
2019
9
注意点
⒈取菌量不可太多，涂片应均匀，否则影响染色结果 ⒉干燥时切忌高热，以免细菌变形 ⒊固定时温度不可过高时间不可长，以防涂抹面 烧焦及玻片烧裂
固定的目的
杀死细菌，使菌体蛋白凝固，染料易于着色 改变细菌通透性，以利于染料进入细胞内 使菌体与玻片粘附牢固，在染色时不致被染 料和水冲掉
-
2019
13
3. 观察细菌形态或染色性不能用幼龄菌或衰 老菌，一般采用培养16-18小时的菌落或菌液 涂片染色。
-
2019
14
革兰染色意义
鉴别细菌
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌
革兰氏阳性菌细胞壁结构比较 致密，肽聚糖层很厚，脂类含量 较少，酒精不易渗入，而且95％ 酒精可使细胞壁脱水，间隙变小， 通透性降低，阻碍结晶紫-碘复合 物渗出；
革兰氏阴性菌细胞壁结构比较 疏松，肽聚糖层很薄，外膜、脂 蛋白、脂多糖均含有大量脂质， 易被酒精溶解，致使细胞壁通透 性增高，细胞内的结晶紫-碘复合 物被酒精溶解洗出而脱色。
注意事项
1．染液方面： 1）试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。 2）脱色液用完后，可用丙酮作为代用脱色液， 脱色时间可稍短。 3）试剂效期过后，请不要使用。试剂盒储存 时，尽量避免高、低温环境及阳光直射。
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2019
12
2．涂片染色技术方面： 1）涂片不能太厚，太厚时常不易完全脱色， 使阴性菌呈紫色。 2）涂片后最好自然干燥，若用火焰干燥或固 定不能太靠近火焰，以免破坏菌体 或炭化。 3）脱色时注意勿脱过头，使阳性变成阴性， 尤其是链球菌很容易脱过头变成阴性。 4）染色时间要掌握好。
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注意点
⒈取菌量不可太多，涂片应均匀，否则影响染色结果 ⒉干燥时切忌高热，以免细菌变形 ⒊固定时温度不可过高时间不可长，以防涂抹面 烧焦及玻片烧裂
固定的目的
杀死细菌，使菌体蛋白凝固，染料易于着色 改变细菌通透性，以利于染料进入细胞内 使菌体与玻片粘附牢固，在染色时不致被染 料和水冲掉
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3. 观察细菌形态或染色性不能用幼龄菌或衰 老菌，一般采用培养16-18小时的菌落或菌液 涂片染色。
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革兰染色意义
鉴别细菌
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌
细菌的染色方法
细菌的染色方法细菌的染色方法主要有革兰氏染色,抗酸色法和特别染色法(包括英膜染色法,芽抱染色法,鞭毛染色法)1.革兰氏染色法：1)器材:金黄色葡萄球菌，大肠杆菌,结晶紫染液，革兰氏碘液，0.4 %复红乙醇液,接种环，泗精灯，载玻片等。
2)方法:先制片，接着染色。
(1 )结晶紫染液染色1分钟，水冲洗；(2 )革兰氏碘液色1分钟；水冲洗；(3 ) 0.4 %复红乙醇液染色3秒钟,水冲洗，吸纸吸干后镜检。
2.抗酸染色法：1)器材:卡介苗与大肠杆菌和葡萄球菌的混合菌液，石炭酸复红,3 %的盐酸酒精，碱性美兰染液，接种环,酒精灯，载玻片等。
2)先制片一，接着染色。
(1 )石炭酸复红染液先沸水浴1 0分钟，滴加2 一3滴掩盖菌膜染色5分钟，水冲洗；(2 ) 3 %的盐酸酒精脱色3 0秒钟，水冲洗；(3 )碱性美兰复染3。
秒钟，水冲洗，吸水纸吸干后镜检.3.芽抱染色法：1)器材:破伤风杆菌厌氧培育物,5 %孔雀绿水溶液,0.5 %沙黄水溶液,载玻片，酒精灯等。
2)先制片，接着染色。
(1 )加孔雀绿染液2 — 3滴于小试管中，并使其与菌液混合匀称，然后将试竹放厂沸水浴的烧杯中，加热染色15分钟：(2 )涂片、固定：(3 )水冲洗，至到流出的水无绿色为止；(4)用0.5 %沙黄液复染2分钟，弃去多余的染液，吸水纸吸干镜检(此步骤不用水冲洗)。
4荚膜染色法：1)器材:肺炎球菌(小鼠腹腔液)，石炭酸复红,9 5 %的乙醇,2 0 %鞅酸水溶液,0.8 %孔雀绿水溶液。
2)方法:(1 )石炭酸复红染色1分钟，水冲洗：(2)95 %乙醇短暂脱色(几秒钟为宜)，水冲洗(3 ) 2 0 %糅酸溶液染色1 0分钟,水冲洗；(4 ) 0.8 %孔雀绿溶液染色1分钟，水冲洗，吸水纸吸干后镜检。
5.鞭毛染色法(镀银染色法)1)器材:变形杆菌新奇菌液，镀银染色法1液(糅酸5克，5 0%氯化铁2. 0ml, 1.5 %甲醛2. 0 ml, 1 %氢氧化钠1. 0 ml,蒸储水100 nd),糅银染色法2液(2 %硝酸银溶液,少量氨水)2)方法：(1 )糅银染色1液染色5分钟，水冲洗；(2 )糅银染色法2液染色1分钟，水冲洗，吸纸吸干后镜检。
实验4细菌革兰氏染色法 ppt课件
10 Central Laboratory of Biology
【方法步骤】
4）复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色 2min，水洗，吸去残水晾干（图4-1）。 3.镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准，革兰 氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 4.混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察。菌 龄和脱色程度对染色结果影响较大。
2020/12/12 College of Life Sciences, Hubei Normal University
6 Central Laboratory of Biology
【基本原理】
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低， 肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩 而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。 而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且 脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先 滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为 无色，用复染剂（如番红）染色后又变为复染剂颜色（红）。
用。
2020/12/12 College of Life Sciences, Hubei Normal University
5 Central Laboratory of Biology
【基本原理】
2. 革兰氏染色 革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性 （G-）两种类型，细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们 细胞壁的成分和结构不同而造成的。 首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝 紫色。然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶 紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。 之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果 不同。
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钟，水洗 （2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一
分钟，水洗 （3）脱色：将水甩净，并衬以白背景，用
95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，约20—30秒，立 即用水冲净乙醇
（4）复染：用番红液染1--2分钟，水洗 3、镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细 菌颜色为准，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性 菌呈红色。
▪ 【材料】 ▪ ①结核病人的咳痰液：采取清晨第一口粘
痰，或浓缩集落菌法处理过的痰标本。
▪ ②石炭酸复红染色液，3%盐酸酒精，碱性 美蓝染液
▪ ③生理盐水 ▪ ④载物玻片，滤纸片、接种环、玻片夹、
酒精灯、蜡笔等
▪ 【方法】 ▪ 1．涂膜
痰的涂片：用灭菌的接种环采取痰中干酪 坏死的小块或带血的痰液，在载玻片上涂 成薄而均匀的膜（在烧接种环时为防止痰 中的细菌溅出，可先将接种环在内焰烧干， 然后再于外焰中灭菌）。五、革兰染色的临床意义
▪ 1.对细菌的鉴别有重要意义 ▪ 2.指导临床选择用药 ▪ 3.研究细菌与致病性的关系
思考题： 当你对一株未知菌进行革兰染色时，
怎样能确证你的染色技术操作正确， 结果可靠？
抗酸染色法
▪ 【原理】
▪ 结核杆菌对苯胺染料不易着色，若加温或 延长染色时间使其着色后，再用3%盐酸酒 精处理也不易脱色，再经美兰复染，结核 杆菌及其它分枝杆菌仍呈红色，而非抗酸 菌和细胞杂质等呈蓝色。
细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为G+菌； 细胞中初染剂被脱色剂洗脱而染上复染剂的颜色 （红色）的细菌为G-菌。
G+
G-
二、实验器材
大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，革 兰氏染色液，生理盐水，载玻片，接 种环，显微镜等。
三、操作步骤
1、涂片：将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别 涂片、干燥、固定。
2、染色： （1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分
四、注意事项
1、注意涂片不宜过于浓厚。 2、火焰固定温度要适宜。 3、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色 过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如 脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳 性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多 少等因素的影响，难以严格规定。 4、染色过程中应吸去玻片上的残水，以免染色 液被稀释而影响染色效果。 5、选择幼龄的细菌。G+菌培养12-16h，E.coli 培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使 G+菌转呈阴性反应。
革兰氏染色和抗酸染色法优秀 课件
革兰染色法
革兰氏染色法是1884年由丹麦病 理学家汉斯·克里斯蒂安·革兰 （Hans Christain Gran ）创立的。
实验目的和要求
▪ 1. 掌握革兰氏染色方法的操作步骤及 注意事项。
▪ 2. 了解革兰氏染色的临床意义。
▪ 一、实验原理 ▪ 二、实验器材 ▪ 三、操作步骤 ▪ 四、注意事项 ▪ 五、革兰染色的临床意义
▪ 当用脱色剂处理时，G+菌的细胞壁主要由肽聚 糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低， 用乙醇脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结 构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫—碘的复 合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染 后仍保留初染剂的蓝紫色。
▪ G-菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂 质含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇溶 解，细胞壁透性增大，使结晶紫—碘的复合物比 较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染 上复染剂的红色。
▪ 【结果观察】
▪ 1.结核杆菌染成红色，细长，直的或为微 弯曲，有的可表现出分枝特征，偶而有着 色不匀，成颗粒状者。亦可以见到有纵行 条索状排列。标本的其余部分及非抗酸性 细菌染成蓝色。必须逐一观察各个视野， 直待全部涂片找不到结核杆菌时，才可报 告阴性。
▪ 2.涂片染色能查到结核杆菌者，一般需要 每ml痰液内含菌量至少应有500个以上， 甚至需达到5万以上。故材料多进行浓缩集 菌处理，以提高检出阳性率，也造成在染 色标本片观察中，不一定每个视野都能看 到结核杆菌。
一、实验原理
（一）基本步骤：
1、初染：草酸胺结晶紫染色 2、媒染：碘液媒染 3、脱色：乙醇脱色 4、复染：石炭酸复红复染
（二）原理：
▪ 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它 们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
▪ 初染后，所有细菌都被染成初染剂的蓝 紫色。
▪ 碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结 晶紫—碘的复合物，增强染料与细菌的 结合力。
▪ 2．染色 ▪ （1）在已固定好的涂片上放置滤纸片（滤纸的作用是
滤去染液中的沉渣，使标本清晰），滴加石炭酸变红染色 液于滤纸片上（应滴满滤纸片）。 ▪ （2）将加有染液的涂片加温，在火焰上保持一定的高 度，直到出现蒸汽（不得沸腾）如此反复2—3次（约5分 钟）。在加温过程中防止将染液烘干（应及时添加染液）。 ▪ （3）去掉滤纸片，使涂片冷却，水洗。 ▪ （4）用3%盐酸酒精脱色，直到流下的脱色剂无色为 止，水洗。 ▪ （5）用碱性美蓝染液复染30秒，水洗、干燥、镜检。
分钟，水洗 （3）脱色：将水甩净，并衬以白背景，用
95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，约20—30秒，立 即用水冲净乙醇
（4）复染：用番红液染1--2分钟，水洗 3、镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细 菌颜色为准，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性 菌呈红色。
▪ 【材料】 ▪ ①结核病人的咳痰液：采取清晨第一口粘
痰，或浓缩集落菌法处理过的痰标本。
▪ ②石炭酸复红染色液，3%盐酸酒精，碱性 美蓝染液
▪ ③生理盐水 ▪ ④载物玻片，滤纸片、接种环、玻片夹、
酒精灯、蜡笔等
▪ 【方法】 ▪ 1．涂膜
痰的涂片：用灭菌的接种环采取痰中干酪 坏死的小块或带血的痰液，在载玻片上涂 成薄而均匀的膜（在烧接种环时为防止痰 中的细菌溅出，可先将接种环在内焰烧干， 然后再于外焰中灭菌）。五、革兰染色的临床意义
▪ 1.对细菌的鉴别有重要意义 ▪ 2.指导临床选择用药 ▪ 3.研究细菌与致病性的关系
思考题： 当你对一株未知菌进行革兰染色时，
怎样能确证你的染色技术操作正确， 结果可靠？
抗酸染色法
▪ 【原理】
▪ 结核杆菌对苯胺染料不易着色，若加温或 延长染色时间使其着色后，再用3%盐酸酒 精处理也不易脱色，再经美兰复染，结核 杆菌及其它分枝杆菌仍呈红色，而非抗酸 菌和细胞杂质等呈蓝色。
细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为G+菌； 细胞中初染剂被脱色剂洗脱而染上复染剂的颜色 （红色）的细菌为G-菌。
G+
G-
二、实验器材
大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，革 兰氏染色液，生理盐水，载玻片，接 种环，显微镜等。
三、操作步骤
1、涂片：将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别 涂片、干燥、固定。
2、染色： （1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分
四、注意事项
1、注意涂片不宜过于浓厚。 2、火焰固定温度要适宜。 3、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色 过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如 脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳 性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多 少等因素的影响，难以严格规定。 4、染色过程中应吸去玻片上的残水，以免染色 液被稀释而影响染色效果。 5、选择幼龄的细菌。G+菌培养12-16h，E.coli 培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使 G+菌转呈阴性反应。
革兰氏染色和抗酸染色法优秀 课件
革兰染色法
革兰氏染色法是1884年由丹麦病 理学家汉斯·克里斯蒂安·革兰 （Hans Christain Gran ）创立的。
实验目的和要求
▪ 1. 掌握革兰氏染色方法的操作步骤及 注意事项。
▪ 2. 了解革兰氏染色的临床意义。
▪ 一、实验原理 ▪ 二、实验器材 ▪ 三、操作步骤 ▪ 四、注意事项 ▪ 五、革兰染色的临床意义
▪ 当用脱色剂处理时，G+菌的细胞壁主要由肽聚 糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低， 用乙醇脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结 构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫—碘的复 合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染 后仍保留初染剂的蓝紫色。
▪ G-菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂 质含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇溶 解，细胞壁透性增大，使结晶紫—碘的复合物比 较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染 上复染剂的红色。
▪ 【结果观察】
▪ 1.结核杆菌染成红色，细长，直的或为微 弯曲，有的可表现出分枝特征，偶而有着 色不匀，成颗粒状者。亦可以见到有纵行 条索状排列。标本的其余部分及非抗酸性 细菌染成蓝色。必须逐一观察各个视野， 直待全部涂片找不到结核杆菌时，才可报 告阴性。
▪ 2.涂片染色能查到结核杆菌者，一般需要 每ml痰液内含菌量至少应有500个以上， 甚至需达到5万以上。故材料多进行浓缩集 菌处理，以提高检出阳性率，也造成在染 色标本片观察中，不一定每个视野都能看 到结核杆菌。
一、实验原理
（一）基本步骤：
1、初染：草酸胺结晶紫染色 2、媒染：碘液媒染 3、脱色：乙醇脱色 4、复染：石炭酸复红复染
（二）原理：
▪ 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它 们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
▪ 初染后，所有细菌都被染成初染剂的蓝 紫色。
▪ 碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结 晶紫—碘的复合物，增强染料与细菌的 结合力。
▪ 2．染色 ▪ （1）在已固定好的涂片上放置滤纸片（滤纸的作用是
滤去染液中的沉渣，使标本清晰），滴加石炭酸变红染色 液于滤纸片上（应滴满滤纸片）。 ▪ （2）将加有染液的涂片加温，在火焰上保持一定的高 度，直到出现蒸汽（不得沸腾）如此反复2—3次（约5分 钟）。在加温过程中防止将染液烘干（应及时添加染液）。 ▪ （3）去掉滤纸片，使涂片冷却，水洗。 ▪ （4）用3%盐酸酒精脱色，直到流下的脱色剂无色为 止，水洗。 ▪ （5）用碱性美蓝染液复染30秒，水洗、干燥、镜检。