实验三 对乙酰氨基酚片的含量测定方法学研究

对乙酰氨基酚的鉴定结构确证与含量测定对乙酰氨基酚的鉴定结构确证与含量测定一、实验目的（1）掌握对乙酰氨基酚的鉴定的方法（2）了解对乙酰氨基酚结构确证的过程（3）运用仪器分析手段对对乙酰氨基酚进行含量测定二、实验原理（1）对乙酰氨基酚（298NO H C ）为白色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。

在热水或乙醇中易溶，在丙酮中溶解，在水中微溶。

熔点168-172℃。

对乙酰氨基酚是临床常用的解热镇痛药物，且毒副作用小，较适合儿科患者使用。

已成为全世界应用最广泛的的药物之一，是国际医药市场上头号解热镇痛药。

（2）以一定浓度的对乙酰氨基酚溶液充分水解全部生成对氨基酚溶液，对氨基酚溶液在碱性条件下与亚硝基铁氢化钠试剂作用，生成蓝色配位化合物。

利用721 －分光光度计测定其波长确定最大吸收，并通过分光光度计进行条件优化，依据比尔定律绘制标准曲线。

通过标准曲线法求得对乙酰氨基酚的浓度，从而求得对乙酰氨基酚的含量。

（3)取对乙酰氨基酚溶解于流动相后于200 ~ 400波长范围扫描, 结果在250的波长处有最大吸收, 故选择此波长作为测定波长。

对乙酰氨基酚易溶于热水中, 用温水浴溶解15分钟以上时对乙酰氨基酚已全部溶解。

以甲醇- 水- 磷酸( 22 - 78- 0. 1) 为流动相, 能使对乙酰氨基酚得到很好的分离。

采用外标法，用对乙酰氨基酚标准溶液作为对照品，求得样品对乙酰氨基酚的浓度，从而求得对乙酰氨基酚的含量。

三、实验过程（1）鉴定①本品的水溶液加三氯化铁试液，即显蓝紫色。

②取本品约0.1g ，加稀盐酸5ml ，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5ml ，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml 稀释后，加碱性β-萘酚试液2ml ，振摇，即显红色。

③本品的红外吸收图谱应于对照的光谱一致。

（2）结构确证①红外光谱图②核磁共振氢谱（3）含量测定①紫外分光光度法3.1.1溶液的制备Na2CO3溶液的制备准确称取Na2CO3 5.3035 g，置于1000mL 容量瓶中，加纯水标定至刻度，摇匀。

对乙酰氨基酚片的测定本品含对乙酰氨基酚（C8H9NO2）应为标示量的95.0%～105.0%。

性状：本品为白色片、薄膜衣或明胶包衣片，除去包衣后显白色。

鉴别：仪器及试液一般实验仪器和红外分光光度仪三氯化铁试液：取三氯化铁9g ，加水使溶解成100ml，即得。

稀盐酸：取盐酸234ml，加水稀释至1000ml，即得。

本液含HCL应为9.5%～10.5%。

亚硝酸钠试液：取亚硝酸钠1g，加水使溶解成100ml，即得。

碱性β-奈酚试液：取β-奈酚0.25g，加氢氧化钠溶液(1→10)10ml使溶解，即得本液应临用新制。

分析步骤取本品10片于研钵中研细精密称量（约相当于对乙酰基酚0.5g）粉末于研钵中用25ml量筒量取乙醇20ml分次研磨使对乙酰氨基酚溶解。

滤过，合并滤液，蒸干残渣备用。

（1）取上述残渣少许于试管中加水2滴，三氯化铁试液1滴，即显蓝紫色。

（2）取上述残渣约0.1g置试管中用5ml移液管加稀盐酸5ml，置水浴中加热40分钟，放冷。

取0.5ml置小试管中滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用移液管加水3ml稀释后，加碱性β-奈酚试液2ml，振摇即显红色。

取本品细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚100mg），加丙酮10ml，研磨溶解，滤过，滤液水浴蒸干，残渣经减压干燥，用红外分光光度仪检测，采用压片法，取残渣约1～1.5mg，置玛瑙研钵中，加入干燥的溴化钾或氯化钾细粉月200～300mg（与供试品的比约为200:1）作为分散剂，充分研磨混匀，置于直径为13mm的药片模具中，使铺展均匀，抽真空约2min，加至（0.8×106）kPa（约8～10T/㎝2），保持压力2min，撤去压力并放弃后取出制成的供试片，目视检测，片子应呈透明状，其中样品分布应均匀，并无明显的颗粒状样品。

亦可采用其他直径的压膜制片，样品与分散剂的用量需相应调整以制得浓度适合的片子测定。

溶出度的测定1、掌握片剂中溶出度检查的操作方法。

实验六紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚片的含量的方法学研究一、目的要求1.掌握确证分析方法的效能指标内容和要求。

2.熟悉建立分析方法的基本思路。

3.掌握紫外分光光度法的原理及操作。

二、实验原理对乙酰氨基酚结构中含有苯环共轭系统，在0.4%氢氧化钠溶液中，于257nm波长处有最大吸收，其吸收系数为E1cm715。

C8H9NO2151.16三、仪器与试剂对乙酰氨基酚片，对乙酰氨基酚对照品，氢氧化钠，容量瓶，量筒，紫外分光光度计，研钵。

四、实验步骤1.线性与浓度范围取对乙酰胺基酚对照品约40mg，精密称定，置250mL量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50mL溶解后，加水稀释至刻度，摇匀。

分别精密量取2，4，6，8，10，12mL，置100mL量瓶中，加入0.4%氢氧化钠溶液10mL，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm的波长处测定吸收度。

将浓度C对吸收度A回归，得线性回归方程：A=a+bC(r= ,n=6)。

线性浓度范围0.0032～0.0192mg/mL.2.供试品测定法取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg），置250ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml及水50ml，振摇15分钟，加水至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm的波长处测定吸收度，1%E1按C8H9NO2的吸收系数（cm）为715计算，即得。

1%3.回收率试验取本品10片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg），共6份，置250ml量瓶中，按1：1比例，分别向其中加入对乙酰氨基酚对照品，其余照“供试品测定法”项下的方法操作，按标准曲线法或百分吸收系数法计算回收率。

4.精密度试验照“供试品测定”项下的方法操作，计算片剂含量相当于标示量的百分数，6份测定结果的相对标准偏差（RSD）即为精密度试验结果。

验证性试验实验十七 对乙酰氨基酚片的含量测定一、目的要求1.掌握对乙酰氨基酚片的含量测定的原理。

2.掌握紫外可见分光光度法测定药物含量的方法及计算。

二、仪器与试药1.仪器Mettler AL204电子天平 752型紫外可见分光光度仪刻度移液管 规格：5mL 、10mL 定量滤纸（直径10cm ）容量瓶 规格：100mL 500mL 研钵HHS 型电热恒温水浴锅2.试药对乙酰氨基酚片 规格0.3g 氢氧化钠 三氯化铁试液 蒸馏水三、实验原理利用对乙酰氨基酚结构中有共轭结构，在紫外区有吸收，最大吸收波长为257nm ，测定其最大吸收波长处的吸收度即可计算其含量。

四、实验内容本品含对乙酰氨基酚（C 8H 9NO 2）应为标示量的95.0%～105.0%。

【鉴别】本品的水溶液加三氯化铁试液，即显蓝紫色。

【含量测定】取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚40mg ），置250mL 量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50mL 与水50mL ，振摇15分钟，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL,置100mL 量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液，加水至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在257nm 的波长处测定吸光度，按C 8H 9NO 2的吸收系数（%11cm E ）为715计算，即得。

计算：对乙酰氨基酚片标示量%＝A ：供试品在257nm 的波长处测得的吸收度；D ：供试品的稀释倍数； %11cmE :吸收系数; W ：对乙酰氨基酚片片的平均片重； W ：称取对乙酰氨基酚片粉的量。

五、注意事项1.移液管、容量瓶的使用方法。

2.振摇充分，使样品溶解完全。

%100100D 1%1⨯⨯⨯⨯⨯⨯标示量W E W A cm3.紫外分光光度法的操作。

六、思考题1. 对乙酰氨基酚片还有什么测定方法，试举两例？2.常用各种容量仪器在使用时应注意哪些问题？七、参考文献《中国药典》2010年版二部，207，化学工业出版社。

按上述色谱条件进样，计算回收率及回收率平均值和相对标准偏差。

结果要求：平均回收率在95.0%-102.0%，RSD≦1.0%。

（五）样品含量测定
取对乙酰氨基酚供试品适量，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下制备供试品溶液和“对照品溶液的制备”项下制备对照品溶液，按“色谱条件”项下的条件进行进样测定，记录色谱图，按外标法计算含量。

根据《中国药典》二部规定，按干燥品计算，含对乙酰氨基酚应为98.0%-102%。

四、设计小结
高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚的含量，在检测的过程中方法简单便于操作，且测定方准确度高，稳定性较好。

本设计方案运用高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚的含量，HPLC 法专属性强，重现性较好、稳定性较好，准确度和回收率较高，可以作为对乙酰氨基酚片的质量控制方法，用来提高对乙酰氨基酚的质量标准。

利用甲醇-水溶液的配比作为流动相进行检测，再利用试液进样前应用0.22μm微孔滤膜过滤，以除去流动相中的微小杂质，这样可以较大提升试验的准确性。

五、附件材料
图1高效液相色谱仪图2 分析天平
六、参考资料。

实验三 复方对乙酰氨基酚片的含量测定一、目的要求1、掌握复方片剂中各成分含量测定的基本原理和操作方法。

2、掌握复方片剂的分析特点。

二、基本原理复方对乙酰氨基酚片中含有对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸和咖啡因三种主成分。

各成分之间性质差异大。

乙酰水杨酸为芳酸类药物，具酸性，K a ＝3.27×10-4，可用酸量法测定；对乙酰氨基酚为芳酰胺类药物，具酰胺基，呈中性，但具潜在芳伯氨基，可将其在酸性条件下水解后用重氮化法测定；咖啡因为黄嘌呤类生物碱，碱性极弱，K b ＝0.7×10-14，不能采用一般生物碱的含量测定方法，但可将其与碘发生定量沉淀以后，剩余的碘用硫代硫酸钠滴定从而求得咖啡因的含量。

反应式表示如下：1、乙酰水杨酸的测定原理 COOH O C OCH 3+NaOH COONa O C O CH 3+H 2O等当点时，由于生成物水杨酸钠的水解，溶液呈微碱性，所以选用碱性区域变色的指示剂--酚酞。

2、对乙酰氨基酚的测定原理3、咖啡因的测定原理 N NO O H 3C3N N ＋2I+KI+H 2SO 4N N O O H 3C 3N CH 3N HI I 4+KHSO 4CH 3I 2(剩余)+2Na 2S 2O 32NaI+Na 2S 4O 6三、实验方法取本品20片，精密称定，研细备用。

（一）乙酰水杨酸的含量测定药典规定每片检品中含乙酰水杨酸应为0.219 g ～0.242 g 。

精密称取上述细粉适量（约相当于乙酰水杨酸0.4g ），置分液漏斗中，加水15ml ，摇匀，用氯仿振摇提取4次（20 ml ，10 ml ，10 ml ，10ml ），提取氯仿液用同一分水10ml 洗涤，合并氯仿洗液，置水浴上蒸干，残渣加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml 溶解后，加酚酞指示液3滴，用0.1mol/L 氢氧化钠液滴定，即得。

每1ml 0.1mol/L 氢氧化钠液相当于18.02mg 的C 9H 8O 4。

实验三 复方对乙酰氨基酚片的含量测定一、目的要求1、掌握复方片剂中各成分含量测定的基本原理和操作方法。

2、掌握复方片剂的分析特点。

二、基本原理复方对乙酰氨基酚片中含有对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸和咖啡因三种主成分。

各成分之间性质差异大。

乙酰水杨酸为芳酸类药物，具酸性，K a ＝3.27×10-4，可用酸量法测定；对乙酰氨基酚为芳酰胺类药物，具酰胺基，呈中性，但具潜在芳伯氨基，可将其在酸性条件下水解后用重氮化法测定；咖啡因为黄嘌呤类生物碱，碱性极弱，K b ＝0.7×10-14，不能采用一般生物碱的含量测定方法，但可将其与碘发生定量沉淀以后，剩余的碘用硫代硫酸钠滴定从而求得咖啡因的含量。

反应式表示如下：1、乙酰水杨酸的测定原理 COOH O C OCH 3+NaOH COONa O C O CH 3+H 2O等当点时，由于生成物水杨酸钠的水解，溶液呈微碱性，所以选用碱性区域变色的指示剂--酚酞。

2、对乙酰氨基酚的测定原理3、咖啡因的测定原理NNOOH3CCH3NN＋2I+KI+H2SO4NNOOH3CCH3NCH3NHI I4+KHSO4CH3I2(剩余)+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6三、实验方法取本品20片，精密称定，研细备用。

（一）乙酰水杨酸的含量测定药典规定每片检品中含乙酰水杨酸应为0.219 g～0.242 g。

精密称取上述细粉适量（约相当于乙酰水杨酸0.4g），置分液漏斗中，加水15ml，摇匀，用氯仿振摇提取4次（20 ml，10 ml，10 ml，10ml），提取氯仿液用同一分水10ml洗涤，合并氯仿洗液，置水浴上蒸干，残渣加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用0.1mol/L氢氧化钠液滴定，即得。

每1ml 0.1mol/L氢氧化钠液相当于18.02mg的C9H8O4。

按下式计算每片含乙酰水杨酸的克数平均片重称样量片＝WT/⨯⋅⋅WfVg其中：T－为滴定度；V－消耗滴定液体积；f-为滴定液浓度校正因子（二）对乙酰氨基酚的含量测定药典规定每片检品中含对乙酰氨基酚应为0.120 g ～0.132 g 。

基于HPLC法的对乙酰氨基酚片中有关物质含量的测定发表时间：2020-10-14T15:33:10.580Z 来源：《科学与技术》2020年第17期作者：杨世娟[导读] 本文采用高效液相色谱法（HPLC）测定了对乙酰氨基酚片中有关物质的含量。

结果表明杨世娟连云港康乐药业有限公司，江苏连云港 222100摘要：本文采用高效液相色谱法（HPLC）测定了对乙酰氨基酚片中有关物质的含量。

结果表明，采用HPLC法测定对乙酰氨基酚片中的主要药物:对乙酰氨基酚、6种已知杂质（对氯苯乙酰胺、对氨基酚和a、N-苯乙酰胺、对丙乙酰胺、对硝基酚）以及3种特殊辅料（羟苯乙酯、羟苯甲酯和杂质），羟苯丙酯和1种未知杂质的分离度均大于1.5。

高效液相色谱法准确度高，专属性强，可用于对乙酰氨基酚片中有关物质的测定。

关键词：HPLC法；对乙酰氨基酚片；物质；含量0.引言对乙酰氨基酚片是乙酰苯胺类解热镇痛药，主要用于缓解轻中度疼痛，可以将膝盖疼痛减轻到最小程度。

是治疗轻度骨关节炎的首选短期镇痛药。

对乙酰氨基酚片作为常用的解热镇痛药，在治疗剂量范围内是安全可靠的。

但剂量过大，可能导致急性肝功能衰竭，也可能引起血压升高、哮喘、肝毒性、胃肠道反应等不良反应。

因此，应严格遵循对乙酰氨基酚片的使用原则。

《国家药品安全十二五规划》中明确指出对乙酰氨基酚片是一种一致性评价品种。

参考处方资料，原研药由对乙酰氨基酚、预胶化淀粉、二氧化硅、海藻酸、聚维酮K30、羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯组成。

这是一种有标记的胶囊片剂。

产品中可能存在的主要杂质是对氨基苯酚、对氯苯乙酰胺和杂质a、b、d和f。

这些杂质中大多数含有潜在的遗传毒性。

然而，除了对氨基苯酚外，2015年版《中国药典公约》（第二部分）并未控制上述其他杂质。

此外，为了避免生产经营中频繁清洗设备造成的污染，在处方中加入了羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯，所有这些都可以在分析中检测到。

以上三种成分作为制剂的具体辅料，在计算杂质含量时应扣除。

实验三复方对乙酰氨基酚片的含量测定一、目的要求1、掌握复方片剂中各成分含量测定的基本原理和操作方法。

2、掌握复方片剂的分析特点。

二、基本原理复方对乙酰氨基酚片中含有对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸和咖啡因三种主成分。

各成分之间性质差异大。

乙酰水杨酸为芳酸类药物，具酸性，K a ＝3.27×10-4，可用酸量法测定；对乙酰氨基酚为芳酰胺类药物，具酰胺基，呈中性，但具潜在芳伯氨基，可将其在酸性条件下水解后用重氮化法测定；咖啡因为黄嘌呤类生物碱，碱性极弱，K b ＝0.7×10-14，不能采用一般生物碱的含量测定方法，但可将其与碘发生定量沉淀以后，剩余的碘用硫代硫酸钠滴定从而求得咖啡因的含量。

反应式表示如下： 1、乙酰水杨酸的测定原理COOHO COCH 3+NaOHCOONaO COCH 3+H 2O等当点时，由于生成物水杨酸钠的水解，溶液呈微碱性，所以选用碱性区域变色的指示剂--酚酞。

2、对乙酰氨基酚的测定原理3、咖啡因的测定原理NN OO H 3C 3NN＋2I+KI+H 2SO 4NN OO H 3C 3NCH 3NHI I 4+KHSO 4CH 3I 2(剩余)+2Na 2S 2O 32NaI+Na 2S 4O 6三、实验方法取本品20片，精密称定，研细备用。

（一）乙酰水杨酸的含量测定药典规定每片检品中含乙酰水杨酸应为0.219g ～0.242g 。

精密称取上述细粉适量（约相当于乙酰水杨酸0.4g ），置分液漏斗中，加水15ml ，摇匀，用氯仿振摇提取4次（20ml ，10ml ，10ml ，10ml ），提取氯仿液用同一分水10ml 洗涤，合并氯仿洗液，置水浴上蒸干，残渣加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml 溶解后，加酚酞指示液3滴，用0.1mol/L 氢氧化钠液滴定，即得。

每1ml0.1mol/L 氢氧化钠液相当于18.02mg 的C 9H 8O 4。

按下式计算每片含乙酰水杨酸的克数平均片重称样量片＝W T /⨯⋅⋅W fV g其中：T －为滴定度；V －消耗滴定液体积；f-为滴定液浓度校正因子（二）对乙酰氨基酚的含量测定药典规定每片检品中含对乙酰氨基酚应为0.120g ～0.132g 。