实验五 离体蛙心灌流实验
一 实验目的
1、了解蟾蜍离体心脏的灌流的方法。
2、观察细胞外液钾离子、钙离子浓度变化对心脏活动的影响。
二 实验原理
心脏离体后，如用人工灌流的方法，保持其新陈代谢的顺利进行，则心脏仍能有节律的自动收缩和舒张，并可维持较长的时间。离体心脏所需的条件应与动物内环境的理化性质基本相近，因此改变灌流液的理化因素，则可引起心脏活动的变化。
1、任氏液：正常对照
含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、 Na2HPO4
和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。
2、0.65%NaCl灌流：
3、2%CaCl2灌流
4、 1%KCl灌流
5、1:10000 E 灌流
6、1:10000 Ach灌流
7、心得安
β1受体阻断剂，抑制肾上腺素与β1受体结合，使E不能发挥作用。
8.、阿托品
M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力。
三 实验器材
微机生物信号处理系统， physiology系统，学校服务器系统，蟾蜍离体蛙心，任氏液，1%KCl，3%CaCl2，65%NaCl，1/10000 E，心得安+1/10000,1/10000
Ach，阿托品+1/10000 Ach。
四 实验步骤
1、标本制备（观看视频）
2、仪器及标本的连接
3、具体软件操作：
1）离子试剂：任氏液→0.65%NaCl溶液→任氏液清洗→1%KCl溶液→任氏液清洗→2%CaCl2溶液→任氏液清洗
2）药物试剂：肾上腺素（E）→任氏液清洗→心得安→任氏液清洗→Ach，任氏液清洗→阿托品→任氏液清洗。
五 实验结果
图1 离体蛙心灌流
表1 离体蛙心灌流数据记录
实验项目 收缩强度 心率
处理前 处理后 处理前 处理后
任氏液 2.45 2.45 34
0.65% NaCl 2.45 1,65 34 34
2% CaCl2 1.27 3.43 34 38
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人挪活树挪死实验五离体蛙心灌流实验一实验目的1、了解蟾蜍离体心脏的灌流的方法。2、观察细胞外液钾离子、钙离子浓度变化对心脏活动的影响。二实验原理心脏离体后，如用人工灌流的方法，保持其新陈代谢的顺利进行，则心脏仍能有节律的自动收缩和舒张，并可维持较长的时间。离体心脏所需的条件应与动物内环境的理化性质基本相近，因此改变灌流液的理化因素，则可引起心脏活动的变化。1、任氏液：正常对照含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、 Na2HPO4 和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。2、0.65%NaCl灌流：
3、2%CaCl2灌流4、 1%KCl灌流
生理实验
B4组(周五下午) 同组成员：
第 1 页 共 9 页 实验八 蛙心灌流
一、 实验目的
1、学习斯氏离体蛙心灌流法
2、了解心肌的生理特性。
3、观察、、及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（ACh）对离体心脏活动的影响。
二、 实验原理
维持心脏正常收缩的节律和强度，需要有一个适当的理化环境（离子的浓度、比例、溶液的酸碱度、环境温度等），这种环境条件稍有改变，便可影响心脏的正常活动。
心脏的正常节律性活动必须在适宜的理化环境里才能维持，一旦适宜的理化环境被干扰或破坏，心脏活动就会受到影响。心脏受植物性神经的双重支配，交感神经兴奋时，其未梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导增快，心率加快；而迷走神经兴奋时，其未梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心率减慢。
把离体蟾蜍心脏，即失去了神经支配的蟾蜍心脏保持在适宜的环境中，在一定时间内其仍能产生节律性兴奋和收缩活动。这是由于蟾蜍的静脉窦能够自动按照一定的节律产生兴奋，并传导到其他心肌细胞，从而引起整个心脏有节律地兴奋和收缩。
离体心脏灌流，是在有控制的条件下研究体液因素以及药物对心肌作用机制的重要实验方法。两栖类动物心脏无冠状循环，心肌的血液供应直接来自心室腔，故灌流时套管插入心室腔内，但灌流哺乳动物心脏时则须通过冠状血管。
本实验是将蛙心离体后，用人工配制理化特性近似蛙血浆的任氏溶液灌流，在一定时间内，可保持节律性收缩和舒张，如改变任氏液的组成成分或浓度，心脏活动的强度和频率将受到影响。
三、 动物与器材
实验动物：蟾蜍4只/组。
实验器材： 蟾蜍解剖器械、生物/桥式前置、刺激/记录电极、蛙心插管、万向轮、蛙心夹、线、滴管、培养皿、支架、木夹、蛙针。
实验试剂：任氏液（含肝素）、0.65%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1∶5000去甲肾上腺素溶液、1∶10000乙酰胆碱溶液、**品溶液、1％乳酸、2.5％NaHCO3。
离体蛙心灌流实验原理
veronica
心脏正常的节律性活动必须在适宜的理化环境中进行,一旦适宜的环境被破坏,例如酸碱度及离子浓度的急剧改变等,心脏的活动就会受到影响.在整体内,心脏的活动受自主神经的双重支配,交感神经兴奋时,其末梢释放去甲肾上腺素,使心肌收缩力量增强,心率加快;而迷走神经兴奋时,其末梢释放乙酰胆碱,使心肌收缩力量减弱,心率减慢.强心甙类药物能够增强心肌收缩能力,减慢心率.
蟾蜍心脏离体后,用理化特性近似于血浆的Ringer氏液灌流,在一定时间内,可保持其比较稳定的节律性收缩和舒张.改变Ringer氏液的组成成分,如改变Na+、K+、Ca2+ 的浓度及酸、碱度等,心脏跳动的频率和幅度就会发生相应的改变.
K+对心脏活动的影响:
总体看来心脏对细胞外K+浓度变化比较敏感;但不同部位心肌的敏感性不同,心房肌最敏感,房室束-浦肯野纤维系统次之,窦房结敏感性较低.
细胞外[K+]↑时,对兴奋性的影响与其浓度升高的程度有关.当[K+]轻度或中度升高时,细胞内外[K+]梯度减小,K+外流力量减小,静息电位(RP)的绝对值减小,和阈电位(TP)的差值减小,细胞的兴奋性升高;当[K+]大幅度升高时, RP的绝对值减小到-55mv时,钠通道的开放效率降低,钠通道逐渐失活,细胞的兴奋性降低或丧失,严重时,可导致心肌停搏于舒张状态.此时,仅由Ca2+来构成动作电位,故上升支小而缓慢,使兴奋传导性降低.
当细胞外[K+]↑时,细胞膜对钾的通透性升高,心室肌细胞复极过程加速,平台期缩短,不应期也缩短.
高钾对心肌收缩功能有抑制作用.因为细胞外的钾和钙在细胞膜上有竞争性抑制,因此当膜外[K+]↑时,平台期内流的Ca2+减少,心肌细胞内的Ca2+浓度难于升高,减小了Ca2+的兴奋-收缩偶联作用,从而减低了心肌的收缩能力.
4期自动除极速度减慢,导致窦房结自律性降低,心律减慢.
Ca2+对心脏活动的影响:
