色谱基础
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色谱基础知识1.名词狭义:色谱—1903俄国科学家茨维特提出,色谱就是色带。
广义:色谱系统—采用固定相和流动相分离混合物的系统。
载气-气体流动相carrier gas担体-色谱柱中的固定相,可以是颗粒物质,毛细管的管壁也可以起到担体的作用。
支持固定液or分离作用。
DEGS,硅藻土、固定液-涂布在担体表面的高沸点有机物。
OV225并不是每个色谱柱都需要担体和(或)固定液。
柱容量:色谱柱能一次有效分离的物质最大量。
决定了进入色谱柱的样品量。
内因由物质的种类决定,外因主要由色谱柱横断面上分离作用组分的量决定。
脉冲式进样器:分流装置:保留时间:(Rt reserve time)物质在色谱柱中的停留时间。
影响因素:一是固定液或者担体与被分析的物质之间作用力;二是色谱条件,包括使用的温度、载气种类及流速、升温方式(程序升温或者恒温条件);Porapak Q2m,N2,30ml/min,110℃,140℃。
2.色谱分类固定相:纸色谱,薄层色谱,柱色谱,流动相:液相色谱liquid chromatograph(离子色谱),气相色谱gas chromatograph,电色谱,磁色谱,超临界流体色谱气固色谱-气体流动相和固定相(担体)组成的色谱系统gas solid chromatograph,GSC,担体的极性决定色谱柱的极性。
吸附色谱气液色谱-气体流动相、(担体和)固定液组成的色谱系统gas liquid chromatograph,GLC,固定液的极性决定色谱柱的极性。
分配色谱超临界流体色谱-介于气相色谱和液相色谱之间的一种色谱。
电色谱-毛细管电泳,凝胶电泳磁色谱-有待开发3.几种色谱柱径流效应:分离度:两种物质被分离开的程度。
分子结构相似度(内因),色谱条件(外因):柱种类,温度,气体,柱长毛细管色谱柱-内径很小的色谱柱(一般在0.20mm,0.25mm,0.32mm,0.52mm左右),对上样操作要求比较高;把固定液直接涂布在色谱柱的(内)管壁上,固定液(se30)厚度一般在微米(0.25µm)数量级。
1色谱基本参数§1 保留值(1) 保留时间tr保留时间t r 和死时间t 0示意图(2) 保留体积V R(ml) = t r(min) * F c(ml/min)V R= V m+KV sK--平衡分配系数, Vs--固定相体积, Vm=流动相所占体积溶质在固定相中的浓度(n s/Vs) n s VmK=----------------------------------= ----* ----溶质在流动相中的浓度(n m/Vm) n m Vsn s, n m 溶质在固定相和流动相中的量23(4) 容量因子(k’)固定相中容质的量(n s)k´=------------------------流动相中容质的量(n m)K = k´(Vm/ Vs)V R = Vm +KVs = Vm + k´(Vm/ Vs) Vs = Vm + k´Vm= Vm (1+ k´)tr = to (1+ k´) k´= t r / to -1k´与固定相,流动相性质及柱温有关;与流速,柱尺寸无关.(3) 调整保留时间t r ´= t r -t oV = V R -V m(5) 死体积(V m) 和死时间(t o)1) 采用比流动相溶剂少一个-CH2-基团的同系物(己烷—戊烷)2)甲醇/水------甲醇3)正相--------四氯乙烯,反相---苯甲酸或硝酸4)计算法空柱管体积(Vc) * 总孔隙度(εT)t o=流动相体积流速(F c)= π/4 *d²c*L * εT/F c4计算孔隙度§2 选择性指标(α´)和相对保留值(α)α´= t r(2)/ t r(1) =(1+ k´(2)/(1+ k´(1))α= t r '(2)/ tr' (1)= k´(2)/ k´(1)α´作为选择性指标比α直观与柱温固定相种类流动相组成有关5§3 -1 流动相线速(u)流动相线速u: 通常指平均线速度u = L / t。