实验室消毒灭菌 (2)

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一、基本概念
有效氯（available chlorine）
有效氯是衡量含氯消毒剂氧化能力的标志， 是指与含氯消毒剂氧化能力相当的氯量(非指 消毒剂所含氯量)，其含量用mg/L或%浓度表示。
有效碘、有效溴
定义和表示法与有效氯对应。
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消毒剂的分类
高效（水平）消毒剂：杀灭所有微生物，除了 大量细菌芽孢。
单位焚烧处理。
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HEPA滤膜
•可抛型固体薄层滤膜 •成褶皱状以增加表面积 •按吸附0.3UM颗粒的效率划分 等级，滤膜效率为99.97% •吸附颗粒
4、含氯消毒剂
常用含氯消毒剂：次氯酸钠、二氯、三氯等 常用剂型：粉剂、片剂、液体 杀菌能力：高水平消毒；1000-5000mg/L浓度。 适用范围：饮用水、餐饮具、果蔬、环境、
加热熏蒸：福尔马林25ml/m3作用12h。
化学熏蒸：福尔马林40ml/m3加高锰酸钾30g/m3
作用12h。
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三、实验室消毒和灭菌制度
每次实验前：先开启送风和通风设备以及紫外线 灯---30分钟后关闭紫外线灯---人员进入。
环境、物体与设备等表面消毒： —每一实验步骤完成后：均应清理消毒台面； —每次实验结束：对环境、物体与设备表面消毒； —检测过程中发生污染：立即消毒---遇细胞、培 养液、体液或血液等有机物污染，立即用有效氯 含量为5000mg/L的消毒溶液处理，作用60分钟后 立即用清水与干净的抹布擦净。
消毒剂量 * 受结核分支杆菌、亲水性病毒与芽孢污染的 环境与表面以及操作不同的病原微生物前的消 毒，选用消毒剂量范围中的高浓度与长时间。 * 受细胞、培养液、体液或血液等有机物污染， 有效氯含量加大至5000mg/L。
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四、实验室消毒和灭菌原则
消毒灭菌方法---符合《消毒技术规范》 * 所有培养物、废弃物、防护用品等在出实验 室之前必须经压力蒸汽处理。 * 实验设备在运出修理或维护前需消毒。
防护用品：工作服、口罩明显污染或手套破损--随时更换并消毒；呼吸道传染病实验室工作 人员，每次连续戴口罩时间不得超过4小时。
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三、实验室消毒和灭菌制度
手的清洗消毒：接触微生物或含有微生物的物 品后、脱掉手套后、离开实验室前。
污染物品消毒：出实验室前必须进行。 -首选压力蒸汽法,不行者密封包装后外送有资质
消毒和灭菌的基本常识对于实验室生物安全是 至关重要的。
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消毒和灭菌的基本原则
及时,彻底,有效,预清洁,避免二次污染,减少对 人/物品/环境的损害
清除污染的特殊要求，应根据实验工作类型以 及所操作的感染性物质的特性来决定。
本章所提供的一般性资料，可用于各个病原微 生物实验室建立标准和操作程序，以处理特定 实验室中所涉及的生物危害。
2%，灭菌须10h，消毒30-45min。 注意事项：碳钢消毒加0.5%亚硝酸钠防锈；
温度20℃以下杀菌作用显著降低； 使用中戊二醛浓度检测以及时更换； 对皮肤粘膜有刺激性，个人防护，充分去残留。
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10、甲醛
具有强烈的刺激性，常见消毒剂为福尔马林 （即含36-40%甲醛的水溶液）与白色粉末状的 多聚甲醛。 杀菌能力：高水平消毒 适用范围：室内空气以及对湿热敏感、易腐蚀 物体表面与物品等的消毒。 使用方法：温度18℃以上，相对湿度70-90%。
高效 + +
+
+ +/-
过氧 0.001 高效 +
+
+
+
+
乙酸 -0.2
戊二醛
2
灭菌/ 高消毒
+
+
+
+
+
甲醛 3 - 8 高效 +
+
+
+ +/-
/中效
酒精 60 - 中效 +
+
-
+
-
95
季胺盐 0.4 ～ 低效 +
+
-
-
-
1.6
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常用化学消毒灭菌剂的安全性
杀菌剂
含氯 过氧乙酸
戊二醛 甲醛 酒精
季胺 盐
③低臭氧紫外线灯；④高臭氧紫外线消毒灯。 注意事项：安装数量、强度监测、防护措施等。
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3、高效过滤除菌
高效过滤除菌技术，对空气中≤0.3μm颗粒 与微生物的阻留率能达到99.97 %以上。 适用范围：主要用于生物安全柜与生物安全实验 室的空气净化除菌。 注意事项： * 必须定期更换高效过滤器（HEPA）， * 更换前应先用甲醛或过氧乙酸进行熏蒸消毒， * 更换时严格做好工作人员防护； * 换下的过滤装置装入密封袋内由具有资质的
应考虑经济、库存控制以及限制环境污染等因 素，尽可能减少化学消毒剂的使用量。
化学消毒剂的作用时间因品种和厂商而异，应 按产品说明书配制和使用。
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二、常用消毒和灭菌方法
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常用化学消毒灭菌剂的性能比较
杀菌剂 使用
浓度 （％）
消毒 水平
杀灭
特点
细菌 亲脂病毒 亲水病毒 分枝杆菌 细菌芽孢
含氯
亲脂类病毒或中等大小的病毒 （如：HSV,CMV,RSV,HIV,HBV）
蒸汽灭菌
气体灭菌 消毒剂水平
灭菌 （高，延时）
高效
中效 低效
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消毒和灭菌是保护人员和环境 不被病原微生物感染和污染的重要环节
含有病原微生物的废物必须经过消毒或灭菌才 能作为普通废物处理；
对操作中可能产生的迸溅或泄漏，必须通过消 毒达到对病原微生物的杀灭，对操作人员进行 保护,对环境保护。
—局部轻度污染。用有效氯1000-2000mg/L擦拭，保持湿润 30-60分钟；贵重或精密仪器用2%戊二醛擦拭30-60分钟 （按制造商说明），消毒完毕用清水与干净的布擦净；紧 急时对非芽孢污染仪器设备用75%乙醇溶液擦拭三遍。
134℃作用4min 注意事项：资质、装载、防护、监测、维护。
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1、压力蒸汽灭菌
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2、紫外线消毒
可达高水平消毒，使用方便；但由于对人皮 肤黏膜有刺激作用，并产生臭氧，在有人情况下 使用受到限制。 适用范围：室内空气消毒、
能直接照射到的光滑物体表面的消毒。 常见类型：①普通直管型；②高强度紫外线灯；
* 于阴凉避光、防潮、密封保存； * 避免接触银、铝和二价合金； * 用于敏感者与敏感组织需慎重； * 存在有机物，提高浓度或延长消毒时间。
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8、乙醇
别名酒精，无色透明液体，易挥发，易燃烧 。 杀菌能力：中水平消毒 适用范围：手、皮肤、小面积物表、医疗器械 使用方法：手与皮肤用75%溶液擦拭1min
污水、物体表面等消毒。 使用方法：用前活化，250-500-1000mg/L浓度。 注意事项：活化液不稳定，现配现用；
对金属腐蚀，对织物漂白； 操作时应做好个人防护； 消毒完成后用清水去除残留。
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7、碘伏
是碘以表面活性剂为载体的不定型结合物。 杀菌能力：中水平消毒 适用范围：适用于手、皮肤、粘膜等消毒。 注意事项：
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三、实验室消毒和灭菌制度
工作完毕：将器材与废弃物品收集在专用包装 与容器内压力蒸汽处理---对生物安全柜、仪器 设备、工作台面、地面等消毒---开启紫外线灯 照 射 60 分 钟 --- 用 清 水 擦 拭 去 除 消 毒 液 残 留 --逐一关闭送风和通风设备。
尖锐物品：直接丢入防渗漏防刺破的硬质密闭 安全处置容器内---压力蒸汽消毒---严防操作 过程中人员损伤与环境污染。
中效：杀灭除了细菌芽孢以外的所有微生物， 包括分支杆菌与亲水病毒。
低效：杀灭多数细菌繁殖体和亲脂性病毒。
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耐受 敏感
Prions
细菌芽孢
Cryptosporidium parvum
分枝杆菌（如 TB，M.terrae ） 非脂类或小病毒（如脊 髓灰质炎病毒 ,柯萨奇病毒） 真菌（如，念珠菌属，曲霉属） 细菌繁殖体（如：金葡，绿脓）
物表、污水、污物、排泄物、分泌物 注意事项：密闭干燥保存；消毒后去除残留；
使用液不稳定，加盖，有效期； 对织物漂白，对金属腐蚀用； 操作时应做好个人防护。
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5、过氧乙酸
酸性透明液体，易挥发易分解，爆炸危险。 杀菌能力：灭菌，高水平消毒 适用范围：餐饮具、果蔬、环境、物表、空气 薰蒸消毒：18-20%过氧乙酸5-6 ml（1g）/m3，
腐蚀性
+ + +/-
残留物 有害 被有机物 灭活
+
+
-
+
+
-
+
-
-
+
-
+
皮肤、眼 刺激性
+ + + + + +
呼吸道 刺激性
+ + -
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1、压力蒸汽灭菌
是最可靠、首选的消毒灭菌方法。 适用范围：耐湿热物品的消毒或灭菌。 常见类型：
- 下排气式压力蒸汽灭菌器：121℃作用20-30min - 预真空与脉动真空压力蒸汽灭菌器:
的专业单位辐照或环氧乙烷消毒。 -不能压力蒸汽消毒的废弃物品密封包装后交有
资质的单位收集、焚烧，严禁混入生活垃圾。
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三、实验室消毒和灭菌制度
实验设备：修理或维护前必须消毒，方法应符 合卫生部《消毒技术规范》。必需运出实验室 处理的物品应装入专用密闭包装与容器内，容 器外表面消毒后由专人专车运至指定单位处理， 在处理前严禁泄漏与扩散。
病原微生物实验室消毒灭菌
沈伟
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内容
基本概念 常用消毒和灭菌方法 病原微生物实验室消毒和灭菌制度 病原微生物实验室消毒和灭菌原则 不同设备与物品的消毒方法 消毒灭菌操作与效果监测
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一、基本概念
消毒（disinfection）
杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使 其达到无害化的处理。（不一定杀灭芽孢）
严重污染的物品能影响杀菌作用，许多杀菌剂只 对经过预清洁的物品才具有杀菌活性。
是否进行预清洁应根据工作性质和需要来决定。 预清洁时必须小心，以避免暴露于感染性物质。
预清洁时必须用与随后使用的杀菌剂相容的物质。 通常采用相同的化学杀菌剂进行预清洁和消毒。
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防止过度使用消毒剂!
正确使用化学消毒剂可以确保实验场所的安全， 减少来自感染性物质的危险。
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消毒与灭菌的方法
化学消毒灭菌 通过液体化学试剂杀灭微生物繁殖体或芽孢。 消毒对象：物体表面、空气、污染物品等。 消毒方式：擦洗、熏蒸、浸泡等。
物理消毒灭菌 包括压力蒸汽、紫外线、焚烧、HEPA过滤除菌等。
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清洁的作用
清洁（cleaning）：指去除污垢、有机物和污渍。 方法包括刷、吸、干擦、洗涤或擦洗。
物表用75%溶液浸泡或擦拭10min以上 注意事项：乙醇易燃，忌明火；
可使蛋白质变性凝固形成保护层， 消毒前应将物品表面的有机物清除， 不宜用于被血、脓、粪便等污染表面消毒； 破坏仪器胶粘物与镜头，橡胶塑料变硬膨胀。
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9、戊二醛
酸性戊二醛为存储形式，pH7.0-8.5的2%中碱 性戊二醛杀菌好腐蚀小作为使用液。 杀菌能力：灭菌，高水平消毒 适用范围：不耐热不耐腐蚀医疗器械与精密仪器。 使用方法：多浸泡，大型仪器设备用擦拭法；
—开启紫外线灯照射30～60分钟。 —然后用清水与干净的抹布擦净，以防消毒液腐蚀。 —消毒完毕，逐一关闭送风和通风设备。 —更换过滤器（网）前用甲醛进行熏蒸消毒，然后轻轻
取下过滤器（网）装入专用密闭包装与容器内，容器 外表面消毒后由专车运至指定单位焚烧处理。
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五、不同设备与物品的消毒方法
仪器设备
工作资质 * 消毒人员经传染病与消毒知识培训并合格 * 压力蒸汽灭菌与污水处理人员上岗培训证
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五、不同设备与物品的消毒方法
生物安全柜
—实验完毕，生物安全柜内所有物品(包括仪器设备)都 应进行消毒，并从生物安全柜内取出。
—用有效氯2000mg/L的含氯消毒剂溶液擦拭台面、内壁 和前后面玻璃，保持完全湿润30～60分钟。
放瓷或玻璃容器中，加热密闭薰蒸1-2h。 喷雾消毒：0.1-0.5%，20ml/m3，作用1h。 注意事项：性质不稳，用前配，有盖塑料容器；
对金属腐蚀，对织物漂白作用； 操作时应做好个人防护； 消毒完成后用清水去除残留。
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6、二氧化氯
有粉剂、片剂、液体，临用前须进行活化。 杀菌能力：高水平消毒 适用范围：食品加工工具、餐饮具、饮用水、
甲醛熏蒸：需操作不同的病原微生物前、实验 室内设备进行维修前、更换过滤器（网）前、 出现重大污染或意外暴露事故后进行。
效果监测：按规范进行，有书面记录。
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四、实验室消毒和灭菌原则
消毒顺序 清洁区、半污染区和污染区应分别 进行清洁、消毒处理；各区域按先上而下、先 左后右的程序，依次进行消毒。
灭菌（sterilization）
杀灭或清除传播媒介上所有微生物的处 理。（包括芽孢）
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一、基本概念
消毒剂（disinfectant）
用于杀灭微生物使其达消毒或灭菌要求的化 学制剂，但不一定杀灭孢子。
消毒剂常用于非生命物体或其表面。
灭菌剂（sterilant）
可杀灭一切微生物(包括细菌芽孢)使其达到 灭菌要求的化学制剂。