实验6-淀粉酶的固定化

高中生物第二部分酶的应用实验6α_淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测自我小测浙科版选修精编版第二部分酶的应用实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测1淀粉在有关酶的作用下依次生成的物质是…()①糊精②葡萄糖③果胶④麦芽糖⑤蔗糖A．①②③④⑤ B．⑤④①②③C．①③⑤② D．①④②2本实验中α-淀粉酶的固定是将其水溶性的酶用物理或化学的方法固定在下列的哪一物质上( )A．有机硅胶 B．活性炭C．石英砂 D．明胶3下列叙述中不属于本实验所使用的α-淀粉酶特性的是( )A．是大肠杆菌的α-淀粉酶B．其作用的最适pH是5.5～7.5C．其作用的最适温度是50～75 ℃D．其化学本质是蛋白质4将固定化酶装柱后，当底物经过该柱时，底物发生的变化是( ) A．底物被稀释了B．底物被浓缩了C．底物的结构变得更加稳定了D．底物被酶水解成产物了5本实验保存在冰箱中取出后再重复实验，将得到下列的哪一结果( )A．由于时间太久，酶已经失去了活性，因此，用淀粉指示剂鉴定后溶液不显色B．由于时间太久，酶已经失去了活性，因此，用淀粉指示剂鉴定后溶液显蓝色C．固定化酶是能够较长时间保持活性的，因此，用淀粉指示剂鉴定后溶液显红色D．固定化酶是能够较长时间保持活性的，因此，用淀粉指示剂鉴定后溶液显无色6(2009江苏高考，3)下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述，正确的是( )A．固定化细胞技术在多步连续催化反应方面优势明显B．固定化酶的应用中，要控制好pH、温度和溶解氧C．利用固定化酶降解水体中有机磷农药，需提供适宜的营养条件D．利用固定化酵母细胞进行发酵，糖类的作用只是作为反应底物7在淀粉水解成葡萄糖的过程中，依次起作用的酶是( )①糖化淀粉酶②β-淀粉酶③α-淀粉酶A．①②③ B．③②①C ．①③② D．③①②8下列关于对固定化酶中用到的反应柱的理解，正确的是( )A ．反应物和酶均可自由通过反应柱B ．反应物和酶均不能通过反应柱C ．反应物能通过，酶不能通过D ．反应物不能通过，酶能通过9关于固定化酶技术说法正确的是( )A ．固定化酶技术就是固定反应物，将酶依附着载体围绕反应物旋转的技术B ．固定化酶的优势在于能催化一系列的酶促反应C ．固定化酶中的酶无法重复利用D ．固定化酶是将酶固定在一定空间的技术10多孔玻璃可使木瓜蛋白酶固定，这一固定化酶的方法属于下列的( )A ．共价偶联法B ．吸附法C ．交联法D ．包埋法11参照教材实验，请简述用多孔玻璃固定木瓜蛋白酶的方法。

固定化-淀粉酶及活性测定要点实验六固定化α-淀粉酶及活性测定一、实验目的：学会交联法制备固定化酶的操作技术二、实验原理：制备固定化酶的方法很多，利用双功能试剂或多功能试剂在酶分子间，酶分子与惰性蛋白间，或酶分子与载体间进行交联反应，以共价键制备固定化酶的方法称为交联法，本实验即采用这种方法。

交联剂为戊二醛，载体为甲壳素。

三、实验器材：1．恒温水浴锅2．恒温振摇仪四、实验试剂1. 5%戊二醛2. 甲壳素3. 碘原液：称取碘1.1g。

碘化钾2.2g，置于小烧杯中，加10ml 蒸馏水使之溶解，然后转入容量瓶中。

再加少量的蒸馏水洗涤烧杯数次，洗涤液均转入容量瓶中，最后定容至50ml。

摇均后放于棕色试管中备用。

4. 比色稀碘液：取碘原液2ml，加碘化钾20g，再用蒸馏水定容至5000ml。

5. 2%淀粉溶液：称取2g可溶淀粉，放入小烧杯中，加少量蒸馏水做成悬浮液。

然后在搅拌下注入沸腾的蒸馏水中，继续煮沸一分钟，冷却后加蒸馏水定容至100ml。

6. pH6磷酸氢二钠——柠檬酸缓冲液：称取磷酸二氢钠（Na2HPO4.12H2O）45.23g,柠檬酸（C6H8O7.H2O）8.07g,先在烧杯中使之溶解，然后转入容量瓶中定容至1000ml。

7. 标准终点色溶液，A液：精确称取氯化钴（CoCl.6H2O）40.2493g和重洛酸钾（K2GrO7）0.4878g，用蒸馏水定容至500ml.B液:：精确称取络黑T40mg，用蒸馏水定容至100ml.同时取A液40ml、B液5ml、混合后置于冰箱中待用。

混合液在15天内使用有效。

五、实验操作1. 酶液的制备：精确称取α-淀粉酶2g，先用少量40℃pH6的磷酸二氢钠——柠檬酸缓冲液溶解，溶解过程中轻轻用玻璃棒捣研。

将上层液小心倾入100ml容量瓶，沉渣部分再加入少量上述缓冲液，如此反复捣研3—4次。

最后，将溶液与残渣全部移入容量瓶中，用缓冲液先定容摇匀后，通过四层纱布过滤，溶液供测定使用。

实验三、a-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测一、实验背景：酶：生物体内活细胞产生的具有催化作用的有机物。

在21世纪，酶已经大规模地应用于食品、化工、轻纺、医药等各个领域：-果汁制作（果胶酶分解细胞壁，促进果汁生成。

）•加酶洗衣粉（某些酶对污渍的作用一般碱性物质更大）•根据体内酶活性变化检测疾病（淀粉酶的活性大小可体现胰脏、肾脏的功能）固定化酶：将水溶性酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。

固定化酶载体应具备以下要求大体上有：1）在酶催化反应过程的惰性：载体应不与底物、产物及介质发生反应。

2）有良好的渗透性：制备成柱子后，能使底物和产物能快速通过减少吸附。

3）有生物亲和性和相容性，有利于酶活力发挥和稳定。

4）有较高酶负载量，载体表面能提供多个活性位点利于酶分子偶联。

二、实验原理：一般酶的固定化方法：吸附法、共价偶联法、交联法、包埋法。

1、一般酶固定化的传统：吸附法、共价偶联法、交联法、包埋法。

吸附法利用各种吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上而使酶固定的方法。

通常有物理吸附法和离子吸附法。

常用吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃等。

采用吸附法固定酶，其操作简便、条件温和，不会引起酶变性或失活，且载体廉价易得，可反复使用。

包埋法包埋固定化法是把酶固定聚合物材料的格子结构或微囊结构等多空载体中，而底物仍能渗入格子或微囊内与酶相接触。

这个方法比较简便，酶分子仅仅是被包埋起来，酶生物活性被破坏的程度低，但此法对大分子底物不适用。

包埋法制备固定化酶除包埋水溶性酶外还常包埋细胞，制成固定化细胞，例如可用明胶及戊二醛包埋具有青霉素酰化酶活力的菌体，可连续水解帑基青霉素，工业生产6-氨基青霉烷酸。

结合法酶蛋白分子上与不溶性固相支持物表面上通过离子键结合而使酶固定的方法，叫离子键结合法。

其间形成化学共价键结合的固定化方法叫共价键结合法。

共价键结合法结合力牢固，使用过程中不易发生酶的脱落，稳定性能好。

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实验6 α—淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测课标解读重点难点1。

制备固定化α—淀粉酶。

2.进行淀粉水解的测定。

3.通过此实验探讨固定化酶的应用价值。

1.固定化酶的方法和优点.2.固定化酶装柱后的使用。

一、酶与固定化酶1．酶活细胞产生的具有催化作用的一类有机物,它是生物体内各种化学反应的催化剂。

2．固定化酶将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上,使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。

3．将酶改造成固定化酶的原因由于酶在水溶液中很不稳定,且不利于工业化使用，所以要将酶改造成固定化酶。

4．酶固定化的方法吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。

本实验用的是吸附法。

5．固定化酶作用的机理将固定化酶装柱，当底物经过该柱时，在酶的作用下转变为产物。

在酶固定化的各种方法中，哪一种方法对酶的作用影响较小？【提示】吸附法二、α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用检测的实验1．实验目的(1）制备固定化α—淀粉酶。

(2)进行淀粉水解作用的检测。

2．实验原理将α—淀粉酶固定在石英砂上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后,可使淀粉水解成糊精。

实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测一、酶与固定化酶1．酶 活细胞产生的具有催化作用的一类有机物，它是生物体内各种化学反应的催化剂。

2．固定化酶将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。

3．将酶改造成固定化酶的原因由于酶在水溶液中很不稳定，且不利于工业化使用，所以要将酶改造成固定化酶。

4．酶固定化的方法吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。

本实验用的是吸附法。

5．固定化酶作用的机理将固定化酶装柱，当底物经过该柱时，在酶的作用下转变为产物。

在酶固定化的各种方法中，哪一种方法对酶的作用影响较小？【提示】 吸附法二、α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用检测的实验1．实验目的(1)制备固定化α-淀粉酶。

(2)进行淀粉水解作用的检测。

2．实验原理将α-淀粉酶固定在石英砂上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精。

用淀粉指示剂测试，若流出物呈红色，表明糊精生成。

3．本实验使用的酶及特性本实验使用的酶是枯草杆菌的α-淀粉酶，其作用的最适pH 为5.5～7.5，最适温度为50～75_℃。

4．实验材料及其制备(1)α-淀粉酶的固定化：在烧杯中将5 mg α-淀粉酶溶于4 mL蒸馏水中(由于酶不纯，可能有些不溶物)↓再加入5 g石英砂，不时搅拌30 min↓30 min后将上述溶液装入1支注射器中(该注射器的下端接有气门心，并用夹子封住)↓用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器，以除去未吸附的游离淀粉酶，流速为1 mL/min(2)可溶性淀粉溶液：取50 mg可溶性淀粉溶于100 mL热水中，搅拌均匀。

(3)KI-I2溶液：称取0.127 g碘和0.83 g碘化钾。

加蒸馏水100 mL，完全溶解后装入滴瓶中。

5．实验步骤(1)淀粉溶液流经固定化酶柱将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上，用滴管滴加淀粉溶液，使该溶液以0.3 mL/min的流速过柱。

(2)接取流出物待从固定化酶柱中流出5 mL淀粉溶液后，接收0.5 mL流出液。