体内药物分析方法的建立与验证

体内药物分析体内药物分析:药物分析的的重要分支，是研究生物体中药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分析方法学。

体内药物分析的特点◆生物样品基质复杂◆被测物浓度低◆分析方法要求高◆实验室仪器设备要求高◆测定目标与数据处理复杂体内药物分析方法的要求◆高灵敏度检测方法的应用◆建立高选择性、高专属性的分离方法◆建立的分析方法满足于分析目的相适应的精密度和准确度要求成分复杂、干扰众多——要求方法选择性高采样量小，浓度很低——要求方法灵敏度高原料药：容量分析为主制剂：仪器分析为主体内药物：高灵敏度；高选择性的方法第二章生物样品指含待测物质的生物基质最常见的生物基质为血液，最常用的生物样品是血浆或血清血样采集的时间、方式：血样的应用：血样包括全血、血浆、血清全血不能作为作用部位药物浓度的可靠指标，通常指测定血浆或血清中的药物的浓度。

当血浆中含有的抗凝剂对药物浓度有干扰时，使用血清样品血样制备的差异：尿液：尿液中必须加入防腐剂，非损伤性采样方法唾液：组织：头发：微量元素的测定生物样品的贮存：◆血浆和血清：采血后及时分离（2h），短期4℃，长期-20℃◆冷冻是最常用的生物保存方法◆生物样品总的原则：临时解冻，解冻的样品一次测完，不能反复冷冻→解冻→冷冻分析样品制备的目的：◆使药物从缀合物或结合物中释放，测定总浓度◆使样品纯化与药物组分富集◆满足测定方法对分析样品的要求◆保护仪器性能及改善分析条件有机破坏法主要应用于头发样品中金属元素的测定去除蛋白质法去除蛋白质目的：溶剂解法：◆常用溶剂——甲醇、丙醇◆原理——◆操作——盐析法：中性盐（置换蛋白结合的水，使蛋白脱水而沉淀）强酸沉淀法：10％三氯醋酸、6％高氯酸超滤法：不需加热，不需添加化学试剂、操作条件温和，没有相态变化，破坏性小，能耗少，工艺流程短。

酶水解法：避免酸碱、高温降解，改善回收率，无乳化，减少净化操作纯化与浓集应用范围：液－液提取法（LLE）大多数药物都是脂溶性，内源性物质基本上都是水溶性，当用有机溶剂萃取时，药物被萃取出来而内源性物质被除去，因此采用有机溶剂萃取法能够达到纯化目的优点：选择性；药物能与多数内源性物质分离缺点：乳化、有毒、不环保、不自动，对极性大的化合物的萃取效率低固相萃取(SPE)◆原理：根据液相萃取的原理，利用液相中溶质与吸附剂间的选择性吸附与洗脱原理。

体内药物分析的方法和重要性————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：2浙江大学远程教育学院本科生毕业论文（设计）开题报告题目体内药物分析的方法和重要性专业药学学习中心衢州姓名袁奕艺学号710013222002指导教师周新高2012 年03月24日一、文献综述体内药物分析是指通过分析手段了解药物在体内的数量和质量的变化，获得药物动力学的各种参数，以及药物在体内转变、代谢的方式、途径等信息。

从而为药物的生产、医疗临床、实验研究等方面对所研究的药物做出估计与评价，对药物改进和发展做出贡献。

随着体内药物分析的深入，必将对药物和人的内在关系作出更准确的表达和描述。

体内药物分析的首要任务是为临床药学和临床实际工作提供分析数据，这就决定了其独特的分析方法。

1样品必须净化。

供分析的样品来自不同生物体，组成复杂，干扰物质多。

如体液和组织中的内源性物质的成分可以与药物结合，且干扰测定。

因此测定前需进行不同程度分离、纯化，方可进行测定。

2样品浓缩。

一般而言，能供分析的样品量较少，其中所含药物及其衍生物的量更少，实际进行的是微量分析，另外，样品不易重新获得，所以经进化后的样品还应进行必要浓缩。

3方法简便、快速和准确。

样品若是临床药物浓度监测的分析，由于工作量大，故分析方法越简单越好；若为有关科研提供数据，则要准确性高；若与中毒解救有关，则要求越迅速越佳。

4还需有一定为检测服务的仪器设备。

总之体内药物分析的首要是适合体内样品中药物的灵敏性高、选择性好、准确可靠地分析方法。

生物样品经过适当的前处理后，选择合适的方法进行定性定量分析。

常用的体内药物分析方法包括：色谱法、各种联用技术、免疫分析法、光谱分析法、放射性核素标记法和微生物法等，其中色谱法和色—质联用技术是体内药物分析的最常用方法。

1色谱法包括高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、薄层色谱法等，是分析混合组分最有效的方法，尤其是当色谱与质谱、色谱与核磁共振波谱联用时，更显示出其强大的分离分析、定性定量的功能。

体内药物定量分析方法的评价与认证中国医院药学杂志1999年第3期第19卷综述作者：刘会臣单位：白求恩国际和平医院石家庄050082体内药物分析涉及的生物样品种类很多，有血清、血浆、尿液、粪便、淋巴液、唾液、胆汁、脑脊液、各种组织等。

目前，常用的各类药物有千余种，不同药物的使用剂量及体内处置过程等方面都有一定的差异，这就导致了不同药物即使在同一个体的同一组织中浓度的不同，如血药浓度从mg水平到pg水平都有；即使在同一个体内，同一种药物也会因分布不均一而使各种组织中的药物浓度不同，相差几倍到数百倍。

为了进行药物代谢动力学及生物利用度方面的试验研究，首先要建立一个合格的体内药物分析定量方法。

建立方法，应尽量了解和掌握药物理化性质及体内处置过程，主要应考虑分析测定方法灵敏度与样品中药物浓度水平相适应，参考相关文献资料并结合本实验室的实际情况，选择测定方法。

常见的体内药物定量分析方法及其特性见表1［1］。

测定方法在用于实际工作之前，须经过下列内容的评价(evaluation)和认证(validation)。

表1常用体内药物分析方法及其特性方法最低检测限(ng) 选择性UV 100 -FLU 1 +TLC-UV 10 ++TLC-FLU 1 ++GC-FID 1 ++GC-NPD 0.1 +++GC-ECD 0.01 +++GC-MS 0.001 ++++HPLC-UV 1 ++HPLC-FLU 0.1 +++HPLC-ECD 0.01 +++RIA 0.001 ++EIMT 0.001 ++FPIA 0.001 ++1选择性(selectivity)选择性表示在其它干扰组分共存的复杂样品中，准确和专一地测定待分析物的能力。

生物样品中内源性物质(蛋白质、多肽、激素、递质、类脂、色素、无机盐等)和外源性物质(合用药物、药物代谢产物、从食物中摄取的物质等)，都有可能干扰待测药物的定量。

此外，生物样品在提取、浓缩、衍生化等过程中，所用试剂纯度不高，亦会影响分析方法的选择性。

体内药物分析方法的选择与建立c1、根据待测药物的理化性质选择的分析方法不合适的是（）A、具有亲脂性应在适当的pH值下用溶剂萃取B、具有强极性或亲水性可进行沉淀蛋白、固相萃取、离子对萃取或衍生化后萃取等C、具有光谱或电化学特性应选择GC测定法D、对酸碱不稳定应避免使用强酸或强碱性溶剂E、对热不稳定应避免高温蒸发溶剂b2、进行极低浓度样品限度检测，要求高特异性和高灵敏度的样品分析时可选择（）进行检测A、紫外分光光度计B、质量碎片选择离子检测器C、薄层扫描法D、荧光分光光度计E、氢火焰离子化检测器a3、中毒患者的临床抢救体内药物分析方法的要求是（）A、药物浓度极高，不强调方法的灵敏度，要强调方法的特异性和分析速度B、不必强调方法的简便、快速C、大多采用色谱及其脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MSD、需同时测定原形药物和代谢产物E、应尽量简便、易行，可用于长期、批量样品的测定c4、GC与HPLC相比，在检测条件筛选时可无需考虑（）A、检测器类型B、色谱柱型号、牌号、填料性状与粒经、柱长度C、流动相组分及其配比D、柱温与进样量E、内标物质的浓度及其加入量d5、下列关于分离条件的筛选叙述错误的是（）A、在进行分离条件筛选时，应考察生物基质中的内源性物质及代谢产物对分离与检测的干扰B、筛选步骤：空白溶剂试验—空白生物基质试验—模拟生物样品试验—实际生物样品测试C、空白生物基质在待测药物(或特定的活性代谢物、内标物质等)的“信号窗”（信号附近的有限范围）内不应出现内源性物质信号D、模拟生物样品试验需经化学反应的预处理过程,应不干扰药物的测定E、确立分析方法后，可进行实际生物样品的测试，进一步验证方法的可行性。

197第15卷 第7期 2013 年 7 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 15 No. 7 Jul .，20134.2 类比要简单明了，形象生动，通俗易懂发掘教材中的类比因素，掌握丰富的类比资料。

教材、教参上的类比例子不多，教师在备课时有意识地发掘类比因素，把平时积累的类比资料选入教案，有的放矢。

否则，只凭课堂上的灵感，随便举例，打比方，不会有好的教学效果[8-10]。

类比过程中不可选取复杂的事物去比拟抽象的知识，也尽量不要选用难于理解或者很多人都不知道的现象去进行类比。

因此，类比法应用过程中避免将问题反而复杂化、模糊化。

简单明了是为了突出相比点，形象生动是为了让同学们在比较轻松的氛围中理解难懂的知识，这样的类比使学生茅塞顿开，收到很好教学效果。

4.3 把握好应用尺度类比教学是手段不是目的，只能起到过渡启发认知作用。

在使用时，不应在类比的对象本身上作过多的描述和渲染，以免喧宾夺主。

如果类比运用不恰当，则不但无助于问题的解决，反而会增加问题的抽象和难懂，使学生对概念、知识点造成更大的误解。

这就要求教师必须注意各种不同事物之间的同一性与差异性，只有这样，才能使学生更好地加深对所学内容的理解。

另外，对于本身就比较直观的知识，如果运用类比，反而显得啰嗦，使教学重点得不到突出，所以还要避免机械类比的错误。

总之，只要教师在生理学教学过程中把握好类比教学法的应用尺度，巧设类比，并结合其它教学方法，创设类比教学情境，可以改善生理学教学中课堂枯燥、难懂、难记的情况，增加课堂教学的趣味性和可听性，能更好的激发学生的学习兴趣，引导学生积极探究、自主学习，使其更好的掌握和理解生理学这门专业基础课程，同时又能培养了学生分析问题、解决问题和应用知识的能力。

◆参考文献[ 1 ] 袁希娟，龚耘.浅谈类比法[ J ] .河北理工学院学报：社会科学版，2003，3 ( 1 )：84-88.[ 2 ] 曹瑞.类比教学法初探[ J ] .宁波大学学报：教育科学版，2011，33 ( 6 )：5-8.[ 3 ] 曹瑞.类比教学法的研究与应用[ J ] .教学与管理，2011 ( 9 )：128-129.[ 4 ] 钱会南.案例式教学法在《内经》教学中运用的必要性[ J ] .中华中医药学刊，2012，29 ( 10 )：2169.[ 5 ] 李洪文，黄玉焕.类比法在解剖学教学中的应用 [ J ] .基层医学论坛，2009，14 ( 2 )：178-179.[ 6 ] 宋琳，谢宁，刘华生，等.PBL 教学方法在《中医基础理论》教学应用中的几点体会[ J ] .中华中医药学刊，2012，29 ( 4 )：835.[ 7 ] 郑旭锐，李长秦，董正华，等.案例式教学法在2010级中医创新实验班《温病学》教学中的应用[ J ] .河北中医，2012，34：155.[ 8 ] 潘丽红.类比教学法在医学免疫学理论教学中的应用[ J ] .井冈山学院学报：自然科学版，2009，30 ( 10 )：159-160.[ 9 ] 张慧卿，杨延龙，辛海量，等.《中药学》系统化教学模式的探索[ J ] .中华中医药学刊，2012，29 ( 5 )：1119.[ 10 ] 王华楠，毛兵，李宁.以案例引子为基础的中医学共享探究性建构学习的课堂教学模式探讨[ J ] .河北中医，2012，34：639.体内药物分析（Biopharmaceutical analysis）是药物分析学的重要分支，是一门研究生物机体中药体内药物分析实验教学方法实践初探杨燕云，许亮，张振秋，何凡，王静，英锡相（辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600）摘 要：论述了实验教学内容的选择应该与应用相联系，强调了实验规范操作的重要性，突出实验思路培养以及方法学研究是为实验课核心，初步探讨了体内药物分析实验教学的教学思路。