糖酵解
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山东大学实验报告2013年5月19 日
姓名陈少坤系年级 2011级生科2班同组者张劲松
科目生化实验题目肌糖原酵解
一、实验目的
1. 学习鉴定糖酵解作用的原理和方法。
2. 了解酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义。
3. 了解有关组织代谢实验应注意的一些问题
二、实验原理
在动物、植物、微生物等许多生物机体内，糖的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行。
本实验以动物肌肉组织中肌糖元的酵解过程为例。
肌糖元的酵解作用，即肌糖元在缺氧的条件下，经过一系列的酶促反应，最后转变成乳酸的过程。
肌肉组织中的肌糖元首先磷酸化，经过己糖磷
酸酯、丙糖磷酸酯、甘油磷酸酯、丙酮酸等一系列中间产物，最后生成
乳酸。
该过程可综合成下列反应式：
1/n(C6H10O5)n+H
O 2CH3CHOHCOOH
2
肌糖元的酵解作用是糖类供给能量的一种方式。
当机体突然需要大量的能量，而又供氧不足（如剧烈运动时），则糖元的酵解作用可暂时满足
能量消耗的需要。
在有氧条件下，组织内糖元的酵解作用受到抑制，而
有氧氧化则为糖代谢的主要途径。
糖元酵解作用的实验，一般使用肌肉糜或肌肉提取液。
在用肌肉糜时，必须在无氧条件下进行；而用肌肉提取液，则可在有氧条件下进行。
因为催化酵解作用的酶系统全部存在于肌肉提取液中，而催化呼吸作用
（即三羧酸循环和氧化呼吸链）的酶系统，则集中在线粒体中。
糖元或淀粉的酵解作用，可由乳酸的生成来观测。
在除去蛋白质与糖后，乳酸可以与硫酸共热便成乙醛，后者再与对羟基联苯反应生成紫
罗兰色物质，根据颜色的显现加以鉴定。
该法比较灵敏，每毫升溶液含1
——5ug乳酸即给出明显的颜色反应。
若有大量糖类和蛋白质等杂质存
在，则严重干扰测定，因此实验中应尽量除尽这些物质。
另外，测定时
所用的仪器应严格地洗干净。
三、实验用品
试剂
1. 材料：鸡或兔的肌肉糜。
2. 试剂：
1) 0.067mol/L磷酸缓冲液(pH7.4)；
2) 对羟基联苯试剂：称取对羟基联苯1．5g溶于100mL 0.5％NaOH中，配成1．5％的溶液。
若对经基联苯颜色较深，应用丙酮或无水乙醇重结晶，放置
时间较长后，会出现针状结晶，应摇匀后使用；
3) 0.5%淀粉溶液
4) 液体石蜡
5) CuSO4饱和溶液；
6) Ca（OH）2粉末；
7) 20%三氯乙酸；
8) 浓硫酸。
器材
试管及试管架；移液管：5mL、2mL、1mL、0.5mL；电子天平；滴管；玻璃棒；恒温水浴；沸水浴；漏斗；冰浴；滤纸；量筒；旋涡搅拌器。
四、实验步骤
1.处死动物和制备肌肉糜。
2.肌肉糜的糖酵解：
取4支试管，编号后各加入新鲜肌肉糜0.5克。
1，2号管为样品管，3，4号管为空白管。
向3，4号空白管内加入20%三氯乙酸4mL,用玻璃棒将肌肉糜充分打散，搅匀，以沉淀蛋白质和终止酶的反应。
然后分别向4支试管内加入4mL磷酸缓冲液和1mL0.5%淀粉溶液。
3，4管用玻璃棒充分搅匀，加液体石蜡以隔绝空气，并将4支试管同时放入37℃恒温水浴中保温。
1h后，取出试管，立即向1，2号试管内各加入20%三氯乙酸4mL，充分混匀，过滤。
然后向每管（一次性试管）内加入饱和硫酸铜溶液1mL，混匀，再加入0.4克氢氧化钙粉末，充分搅匀2min，放置10min，使还原糖沉淀完全，过滤，保留滤液。
3.乳酸的测定：
取4支洁净、干燥试管，编号，各加入浓硫酸2mL，将试管置于冰水浴中冷却，分别取每个样品的滤液2滴，直接加入到已冷却的上述浓硫酸溶液中，随加随摇动试管，避免试管内的溶液局部过热。
将每个试管混合均匀后，放入沸水浴中煮5min，加入对羟联苯试剂2滴，混匀试管内容物，比较和记录各管溶液的颜色深浅，并加以解释。
五、实验记录
照片
六、实验注意
1.空白组加完三氯乙酸后，不要急着加磷酸缓冲液，而是不断用玻璃棒搅动
肌肉糜，使肌肉糜完全失去血色，变为白色为止，即熟肉的颜色一样，此步骤是本实验的关键所在，要是没有使空白组中的酶没有完全失活，则空白组中也会发生酵解作用，所以会使最后的空白组有颜色。
2.加入淀粉溶液的目的是增加第五浓度，使酵解左右明显，从而使实验结果
明显。
3.实验中加入石蜡的目的是为了产生无氧环境，从而使酵解左右得以正常进
行，否则在有氧条件下会进行有氧呼吸，不产生乳酸。
4.实验中加入饱和硫酸铜溶液的目的是为了除去糖，加氢氧化钙的目的是为
了让蛋白质变质，原因是糖类和蛋白质会影响最乳酸的显色反应，此步骤也是实验的关键，加入这两样东西后，一定要充分振荡，除去糖类和蛋白质的影响。
5.用于检验乳酸产物的四只试管必须是干燥洁净的，否则可能会混入糖类或
蛋白质对最后结果产生影响。
