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实验三过氧化氢酶活性的测定一、实验目的：了解过氧化氢酶的作用，掌握碘量法测定过氧化氢酶活性的原理和方法；二、实验原理:过氧化氢酶是一类色素蛋白，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。
R（Fe＋2）2＋H2O2---R(Fe+3OH)2R(Fe+3OH)2+ H2O2 ----R（Fe＋2）2+2H2O+O2并合上式：H2O2 ----2H2O+O2据此，可根据消耗H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量的过氧化氢溶液，经酶促反应后，加入过量的KI溶液生成的I2用标准的Na2S2O3滴定，根据N a2SO3消耗的体积计算H2O2的消耗量。
三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：小白菜2、仪器：恒温水浴锅、研钵、容量瓶、刻度吸管、100mL三角瓶3、试剂：（1）0.05mol/L H2O2 （2）2mol/LH2SO4（3）0.1mol/L Na2S2O3（4）1%淀粉溶液（5）10%(NH4)6Mo7O24（6）pH7.8的磷酸缓冲液（7）20% KI（8）CaCO3四、实验步骤：（1）酶液提取：称取2.5g白菜叶，加少量CaCO3，2mLpH7.8的缓冲液少量，研成匀浆，移入100ml容量瓶，用上述缓冲液冲洗研钵数次转入容量瓶中定容，静置10分钟，过滤。
取滤液10mL于另一100mL的容量瓶中稀释定容待测（根据酶活高低而定）。
（2）酶促反应：取锥形瓶4个，编好号各加入10ml酶液之后，立即向两个瓶中加入2mol/L H2SO45mL，终止酶活性，作空白对照。
向另外两瓶各加H2O2 5mL，摇匀，在加入H2O2的那一刻起，记录时间，5分钟后迅速向实验瓶中加入2mol/LH2SO45mL，终止酶活性。
向三角瓶中加1mL 20% KI和3滴(NH4)6Mo7O24，摇匀后迅速用标准Na2S2O3溶液进行滴定至淡黄色，加入1mL1%淀粉指试剂，蓝色恰好消失，记录消耗的Na 2S 2O 3的体积V 0，V ；五、结果记录与数据处理：被分解的H 2O 2量（mg ）=（空白滴定值-样品滴定值）×Na 2S 2O 3摩尔浓度×17 过氧化氢酶活性（mg.g -1.min -1）=(min))()()(O H 22时间样品重测定取液量总体积量被分解的 g mg 六、 结果分析与问题讨论：实验十还原型V C含量测定一、实验目的学会从生物样品中提取维生素C方法,了解蔬菜中维生素C的含量。
一、实验目的了解过氧化物酶（POD）在植物生理学中的重要作用，掌握测定POD活性的方法，并分析不同因素对POD活性的影响。
二、实验原理过氧化物酶是一种广泛存在于植物组织中的酶，能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2）。
在实验中，通过测定在一定时间内POD分解H2O2产生氧气的量，来评价POD的活性。
反应方程式如下：2H2O2 → 2H2O + O2本实验采用愈创木酚法测定POD活性。
愈创木酚在POD催化下被氧化，生成对苯醌，进而与氯化铁形成紫色络合物，通过测定紫色络合物的吸光度变化来反映POD的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 植物叶片（如马铃薯、菠菜等）- 过氧化氢（H2O2）- 愈创木酚- 氯化铁- 磷酸氢二钠（Na2HPO4）- 磷酸氢钠（NaH2PO4）- pH计- 离心机- 分光光度计- 研钵- 试管- 移液器- 电子天平2. 实验试剂：- 0.1 M磷酸盐缓冲液（pH 7.0）- 0.1 M H2O2溶液- 0.5 M愈创木酚溶液- 0.1 M氯化铁溶液四、实验步骤1. 酶液提取：将植物叶片洗净、剪碎，加入预冷的磷酸盐缓冲液，在研钵中研磨成匀浆。
将匀浆液转移至离心管中，4℃、12,000 rpm离心10分钟，取上清液即为酶液。
2. 测定酶活性：取5支试管，编号为1-5，分别加入以下试剂：- 空白组：0.1 M磷酸盐缓冲液1.0 mL、0.1 M H2O2溶液1.0 mL、0.5 M愈创木酚溶液1.0 mL- 实验组：0.1 M磷酸盐缓冲液1.0 mL、0.1 M H2O2溶液1.0 mL、0.5 M愈创木酚溶液1.0 mL、酶液0.1 mL将各试管混匀，置于37℃恒温水浴中保温5分钟。
取出试管，立即放入冰浴中终止反应。
使用分光光度计在波长560 nm处测定各试管吸光度。
3. 计算酶活性：以空白组吸光度为基准，计算各实验组吸光度变化值（ΔA）。
根据下列公式计算酶活性：酶活性（U/g·min）= ΔA × 0.05 × 10^3 / 酶液浓度五、结果与分析1. 不同植物叶片POD活性比较：实验结果显示，不同植物叶片的POD活性存在差异。
竭诚为您提供优质文档/双击可除过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：实验35过氧化氢酶的活性测定植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使h2o2发生累积。
h2o2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶可以清除h2o2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。
因此，植物组织中h2o2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。
本实验用分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。
一、过氧化氢含量的测定【原理】h2o2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被h２so4溶解后，在415nm波长下比色测定。
在一定范围内，其颜色深浅与h2o2浓度呈线性关系。
【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】100μmol/Lh2o2丙酮试剂：取30%分析纯h2o257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（w/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。
【方法】1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。
待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml 刻度，415nm波长下比色。
2.样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织2~5g（视h2o2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。
(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。
沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。
(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。
一、实验目的1. 了解过氧化氢酶的作用和特性。
2. 掌握过氧化氢酶活力的测定原理和方法。
3. 通过实验，验证过氧化氢酶在催化过氧化氢分解过程中的活力。
二、实验原理过氧化氢酶（Catalase，简称CAT）是一种广泛存在于生物体内的酶，其主要功能是催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2），从而降低过氧化氢对生物体的毒害作用。
过氧化氢酶活力的测定通常通过测量在一定时间内过氧化氢的分解量或氧气的生成量来进行。
本实验采用碘量法测定过氧化氢酶活力。
碘量法的基本原理是：在一定条件下，过氧化氢酶将过氧化氢分解，生成氧气，使溶液中的碘离子（I-）氧化成碘单质（I2）。
然后，用硫代硫酸钠滴定溶液中的碘单质，根据消耗的硫代硫酸钠的量计算出过氧化氢的分解量，从而推算出过氧化氢酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如青菜、萝卜叶等）、蒸馏水、碘液、硫代硫酸钠溶液、盐酸、氢氧化钠溶液、0.1 mol/L过氧化氢溶液等。
2. 实验仪器：分析天平、研钵、漏斗、容量瓶、移液管、滴定管、锥形瓶、水浴锅、计时器等。
四、实验步骤1. 酶液提取：- 称取0.5 g新鲜植物叶片，置于研钵中，加入2 mL pH 7.0磷酸缓冲液和少量石英砂，研磨成匀浆。
- 将匀浆转入25 mL容量瓶中，用磷酸缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容至刻度。
- 将容量瓶置于4℃冰箱中静置10 min，取上清液即为过氧化氢酶粗提液。
2. 测定过氧化氢酶活力：- 取4个锥形瓶，分别编号为1、2、3、4。
- 向1、2、3号锥形瓶中分别加入0.5 mL过氧化氢酶粗提液，向4号锥形瓶中加入0.5 mL蒸馏水。
- 向各锥形瓶中分别加入1 mL 0.1 mol/L过氧化氢溶液，立即开始计时。
- 当加入0.1 mL 1 mol/L盐酸时，停止计时，此时溶液中剩余的过氧化氢量即为酶促反应所分解的过氧化氢量。
- 向各锥形瓶中加入1 mL碘液，充分振荡，静置3 min。
酶活力的测定实验26 过氧化氢酶活力的测定（必修）[目的与原理]掌握过氧化氢酶活力的测定原理和比色测定方法，并用此方法测定水产动物血清中过氧化氢酶的活力。
血清中的过氧化氢酶（CAT）分解H2O2的反应，可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其生成量，即可计算出CAT 的活力，CAT活力单位定义为：每1分钟分解1μmol的过氧化氢即为1个酶活力单位（U）。
[试剂与器材] 试剂：1、磷酸盐缓冲液（67mmol / l，pH=7.4）：取Na2HP04 7.60g，KH2P041.82g，溶于1L蒸馏水中，调pH至7.4。
2、基质液（65μmol/ l, H2O2）：取30% H2O2 3.69 ml加pH7.4磷酸盐缓冲液至500ml。
3、钼酸铵：称取［(NH4)6Mo7O24］20.2g溶于500ml蒸馏水中。
器材：721分光光度计 , 0.5cm比色杯，恒温水箱（37℃±0.5℃），试管16mm×100mm，移液管，吸耳球，可调微量进样器。
[实验步骤]1、样品测定：基质液置于37℃水浴 5 min，然后按下列步骤操作试剂基质液钼酸铵缓冲液血清对照管 1.0ml 1.0ml ― 0.2ml标准管 1.0ml 1.0ml 0.2ml ―测定管 1.0ml ― ― 0.2ml37℃水浴准确温育60s后，立即加入钼酸铵1.0ml摇匀，10min后于405nm以蒸馏水调零比色。
记录各管吸光度值（A）2、计算：过氧化氢酶活力(U/ L)= [(A对－A测)/ A标] ×（65×1×1000/0.2 ×1000）= [(A对－A测)/ A标]×325(式中65为标准管H2O2浓度，1为1.0ml H2O2体积，1000换算成1L血清，0.2为血清用量， 1000为μmol 换算成 mmol) [方法评估]本实验采用分光光度法测定底物（H2O2）的减少量来评价过氧化氢酶活力。
过氧化氢酶活性测定实验报告实验目的，通过测定过氧化氢酶活性，探究不同条件下过氧化氢酶的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供实验数据支持。
实验原理，过氧化氢酶是一种重要的酶类，在生物体内起着重要的氧化还原作用。
本实验采用比色法测定过氧化氢酶活性，其原理是过氧化氢酶催化过氧化氢分解成水和氧气，过氧化氢酶活性与生成的氧气量成正比。
实验材料与方法，实验中所需材料包括过氧化氢酶、过氧化氢、磷酸盐缓冲液、吡啶甲酸钠盐等。
首先，按照一定比例将过氧化氢酶和过氧化氢混合，然后加入磷酸盐缓冲液和吡啶甲酸钠盐，使混合液在一定温度下进行反应。
接着，通过比色法测定生成的氧气量，进而计算出过氧化氢酶的活性。
实验结果与分析，在不同温度、pH值、底物浓度等条件下，测得过氧化氢酶的活性数据。
通过对比分析不同条件下的活性数据，发现过氧化氢酶在不同条件下呈现出不同的活性变化规律。
在温度较低时，过氧化氢酶活性较低；在酸性环境下，过氧化氢酶活性受到抑制；随着底物浓度的增加，过氧化氢酶活性呈现出逐渐增加的趋势。
结论与讨论，通过本实验，我们得出了过氧化氢酶活性与温度、pH值、底物浓度等因素之间的关系。
这些结果对于深入研究过氧化氢酶的功能机制，以及在生物医学、生物工程等领域的应用具有一定的指导意义。
同时，我们也发现过氧化氢酶在不同条件下表现出不同的活性变化规律，这为进一步探究过氧化氢酶的调控机制提供了重要的实验数据支持。
综上所述，本实验通过测定过氧化氢酶活性，揭示了过氧化氢酶在不同条件下的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供了实验数据支持。
希望本实验结果能够为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
过氧化氢酶值的测定实验报告一、实验目的过氧化氢酶（CAT）广泛存在于生物体内，能催化过氧化氢分解为水和氧气，从而避免过氧化氢对细胞的毒害作用。
本次实验旨在掌握测定过氧化氢酶值的方法和原理，了解不同样品中过氧化氢酶的活性差异。
二、实验原理过氧化氢酶催化过氧化氢分解的反应式为：2H₂O₂ → 2H₂O ＋ O₂在一定条件下，反应速度与酶浓度成正比。
通过测量单位时间内过氧化氢的减少量或氧气的生成量，可以计算出过氧化氢酶的活性。
本次实验采用碘量法测定过氧化氢酶值。
在酸性条件下，过氧化氢与碘化钾反应生成碘，然后用硫代硫酸钠标准溶液滴定碘，根据硫代硫酸钠的用量计算过氧化氢的剩余量，从而间接求出过氧化氢酶分解的过氧化氢量，进而计算出过氧化氢酶值。
三、实验材料与仪器1、材料新鲜的植物叶片（如菠菜叶）、动物肝脏（如猪肝）、过氧化氢溶液（3%）、碘化钾溶液（10%）、硫酸溶液（2mol/L）、淀粉溶液（05%）、硫代硫酸钠标准溶液（001mol/L）。
2、仪器研钵、离心机、移液管、容量瓶、滴定管、锥形瓶、恒温水浴锅。
四、实验步骤1、酶液提取（1）植物叶片：称取5g 新鲜的植物叶片，洗净剪碎后放入研钵中，加入少量石英砂和 10mL 磷酸缓冲液（pH70），研磨成匀浆。
将匀浆倒入离心管中，在 4000r/min 下离心 15min，上清液即为酶液。
（2）动物肝脏：称取5g 新鲜的动物肝脏，用生理盐水洗净后剪碎，放入研钵中，加入少量石英砂和 10mL 磷酸缓冲液（pH70），研磨成匀浆。
将匀浆倒入离心管中，在 4000r/min 下离心 15min，上清液即为酶液。
2、反应取 3 个锥形瓶，分别标记为空白对照（A）、样品 1（B）和样品 2（C）。
（1）空白对照（A）：加入 2mL 磷酸缓冲液（pH70）、2mL 过氧化氢溶液（3%）和 2mL 碘化钾溶液（10%），摇匀后立即放入 25℃恒温水浴锅中保温 5min。
（2）样品 1（B）：加入 2mL 酶液（植物叶片提取液）、2mL 过氧化氢溶液（3%）和 2mL 碘化钾溶液（10%），摇匀后立即放入 25℃恒温水浴锅中保温 5min。
过氧化氢酶活性测定引言过氧化氢酶是一种广泛存在于生物体中的重要酶类。
它能够催化过氧化氢（H2O2）与还原物质反应，将H2O2分解成水和氧气。
过氧化氢酶在细胞中起着调节氧化应激及清除有害过氧化氢的作用。
因此，测定过氧化氢酶活性对于研究生物体的氧化应激反应以及评估细胞状态具有重要意义。
原理过氧化氢酶的活性可以通过测定其催化过氧化氢分解反应速率来确定。
本实验以庚酮过氧化物（DPI）为底物，通过酶反应将庚酮过氧化物氧化为二氧化碳和乙酰乙醛。
乙酰乙醛的生成量与过氧化氢酶的活性成正比。
实验中，首先准备一定浓度的庚酮过氧化物溶液，并将待测酶样品与庚酮过氧化物混合。
在特定条件下，观察反应体系中庚酮过氧化物的消耗程度。
通过测定庚酮过氧化物消耗量的变化，可以计算出过氧化氢酶的活性。
实验步骤1.准备实验所需试剂和仪器：庚酮过氧化物溶液、酶样品、缓冲溶液、试管、分光光度计等。
2.设置实验条件：温度、pH值等。
3.分别取适量的庚酮过氧化物溶液和酶样品，加入相应的缓冲溶液，混合均匀。
4.在一组对照实验中，将庚酮过氧化物溶液替换为缓冲溶液，以消除庚酮过氧化物自身的分解。
5.在指定的时间间隔内，从不同实验体系中取出一定量的反应液，用分光光度计测定庚酮过氧化物的吸光度。
6.计算不同时间点庚酮过氧化物消耗量的变化，并绘制庚酮过氧化物消耗曲线。
7.根据庚酮过氧化物的消耗速率计算过氧化氢酶的活性。
数据处理根据庚酮过氧化物的消耗曲线，可以确定反应速率。
通过比较对照组与实验组的反应速率，计算过氧化氢酶的活性。
过氧化氢酶的活性计算公式如下：活性（μmol/min/mg）= (△A/min * Vt) / (ε * d * Venz * t * Venz)其中，△A/min为每分钟庚酮过氧化物的吸光度变化量，Vt为总体系体积，ε为庚酮过氧化物的摩尔吸光系数，d为光程，Venz为酶样品的体积，t为反应时间。
结论通过测定过氧化氢酶的活性，可以评估生物体内的氧化应激程度以及细胞的状态。
过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：过氧化氢酶活性测定实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5.0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
过氧化氢酶活力的测定实验报告篇一：过氧化氢酶活性测定实验29 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1. 研钵；2. 三角瓶；3. 酸式滴定管；4. 恒温水浴；5. 容量瓶。
（三）试剂：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；4. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；5.0.1mol/L 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色（在30min内不消失）为终点。
四、结果计算酶活性用每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示：过氧化氢酶活性（H2O2mg/g/min）＝（A－B）×VT/(W ×VS×1.7×t)式中：A对照KMnO4滴定ml数；B酶反应后KMnO4滴定ml数；VT提取酶液总量（ml）；VS反应时所用酶液量（ml）；W样品鲜重（g）；t反应时间（min）；1.71ml0.1mol/L KMnO4相当于1.7mgH2O2。
过氧化氢酶的活性测定在植物体中，黄素氧化酶类的代谢产物常包含H2O2，如光呼吸中的乙醇酸氧化酶、呼吸作用中的葡萄糖氧化酶、氨基酸氧化酶、醛氧化酶等。
H2O2的积累可导致破坏性的氧化作用，而过氧化物酶和过氧化氢酶则可以清除H2O2，是植物体内重要的活性氧清除系统之一。
其活性还与植物的抗逆性有密切关系，本实验利用高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶活性。
一、原理：过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，H2O2则既是氧化剂，又是还原剂。
R(Fe+2)＋H2O2=====R(Fe+3OH-)2R(Fe+3OH-)2＋H2O2===R(Fe+2)2＋2H2O＋O2合并上式：2H2O2====2H2O＋O2据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
5H2O2＋2KMnO4＋4H2SO4→5O2＋2KHSO4＋8H2O＋2MnSO4即可求出消耗的H2O2量。
二、仪器和用具：研钵、三角瓶50cm3×4、铁架、酸式滴定管、恒温水浴、容量瓶三、试剂：10％H2SO4；0.2mol/l磷酸缓冲液pH7.8；0.1mol/l高锰酸钾标准液： 3.1605gKMnO4 (AR) 用新煮沸的蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/l的草酸溶液标定；0.1mol/l H2O2：市售30％H2O2大约等于17.6mol/l，取30％H2O2溶液5.68ml稀释至1000ml，用标准0.1mol/l KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定。
四、方法：1. 酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，将研钵冲洗干净，冲洗液转移至容量瓶中，并用同一缓冲液定容，4000rpm离心，上清液即为过氧化氢酶粗提液。
2. 取50ml三角瓶4个（两个测定两个对照），测定加入酶液2.5ml，对照为煮死酶液2.5ml；再加入2.5ml 0.1mol/l H2O2，同时计时间，于30℃恒温水浴中保温10分钟，立即加入10％H2SO4 2.5ml。
3. 用0.1mol/l KMnO4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色（在30分钟内不消失）为终点。
4. 结果计算：酶活性用每克鲜重样品在10分钟内分解H2O2的毫克数表示：(A-B)*Vt/V1*1.7酶活（酶分解的H2O2 mg/g鲜重）＝-------------------W式中：Ａ-----对照用KMnO4 ml数Ｂ-----酶反应后KMnO4滴定ml数Ｖt----酶液总量mlＶ1----反应所用酶液量mlＷ-----样品鲜重(g)1.7----1ml 0.1mol/l KMnO4相当于1.7mg H2O2[注意]．所用KMnO4溶液及H2O2溶液使用前要经过标定，0.1mol/l H2O2要新配制。
实验 48 过氧化物酶活性的测定（比色法）过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。
一、原理在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧化物酶活性。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料马铃薯块茎。
（二）试剂1 ． 100 mmol ／ L 磷酸缓冲液 pH6.0 （见附录）。
2 ．反应混合液： 100 mmol ／ L 磷酸缓冲液（ pH6.0 ）50 mL 于烧杯中，加入愈创木酚 28 μl ，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入 30 % 过氧化氢 19 μl ，混合均匀，保存于冰箱中。
（三）仪器设备分光光度计，研钵，恒温水浴锅， 100 mL 容量瓶，吸管，离心机。
三、实验步骤1 ．称取植物材料 1 g ，剪碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，以 4000 r ／ min 离心 15 min ，上清液转入 100 mL 容量瓶中，残渣再用 5 mL 磷酸缓冲液提取一次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，贮于低温下备用。
2 ．取光径 1 cm 比色杯 2 只，于 1 只中加入反应混合液3 mL 和磷酸缓冲液 1mL ，作为对照，另 1 只中加入反应混合液 3 mL 和上述酶液 1mL （如酶活性过高可稀释之），立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量波长 470 nm 下吸光度值，每隔 1min 读数一次。
四、结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA 470 /[min · g （鲜重） ] 表示之。
也可以用每 min 内A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。
过氧化物酶活性 [u/ （ g · min ） ]=式中：Δ A 470 ——反应时间内吸光度的变化。
W ——植物鲜重， g 。
V T ——提取酶液总体积， mL 。
V s ——测定时取用酶液体积 , mL 。
t ——反应时间， min 。
蒲圻贝母Fritillaria puqiensis G.D.Yu et G.Y.Chen 是贝母属中一新种，其有效成分生物碱含量较高，止咳效果显著［1，2］。
其中的蒲贝酮碱的效果与可待因相似，且无成瘾性，已被国家新药办立项进行一类新药开发。
但由于蒲圻贝母以野生为主，连年的采挖已使其资源逐渐枯竭，难以为新药开发提供资源保证，为此我们对其进行了组织培养。
蒲圻贝母鳞茎切块培养22d左右，可直接从切片边缘长出多个小鳞茎，以后小鳞茎逐渐长大。
为了探讨鳞茎发生的机理，并为研究提高组培贝母鳞茎的生长率，诱发多鳞茎形成的方法，我们在培养的不同时期取材，对鳞茎形成过程中的可溶性蛋白，过氧化物酶及酯酶同工酶的酶谱变化进行了分析。
1 材料和方法1.1 材料蒲圻贝母F.puqiensis取自湖北省蒲圻市，经中国药科大学生药教研室李萍博士鉴定。
新鲜的蒲圻贝母鳞茎在流水下冲洗3h，0.1%氯化汞表面消毒20min，无菌水冲洗5次，切成0.5cm×0.5cm×0.2cm 的小块接种于MS附加BA 2mg/L-1，IAA 1mg/L-1的培养基上，在25℃黑暗条件下培养，获得无菌材料。
分别在培养的不同时间取材，并以未进行培养的新鲜贝母鳞茎为对照，进行可溶性蛋白，过氧化物酶及酯酶同工酶酶谱分析。
1.2 方法1.2.1 试剂的配制与凝胶的制备：参考文献［3］的方法。
分离胶浓度为7.5%，间隔胶浓度为2.5%。
1.2.2 样品制备：称取新鲜的贝母鳞茎1g，在低温冰箱内放置1h后，加少许石英砂，加3ml提取缓冲液(0.1mol/L pH 8.0的Tris-HCl缓冲液，其中含0.5mol/L蔗糖，0.06mol/L 抗坏血酸，0.006mol/L半胱氨酸)，在低温下研磨后离心20min，5000r/min，取上清液置-20℃下保存。
1.2.3 电泳：采用垂直板式聚丙烯酰胺凝胶电泳，加入溴酚蓝作为指示染料。
稳定电流强度为12～24mA。
可溶性蛋白的点样量为50μl，用含0.05%考马斯亮蓝的12.5%三氯乙酸溶液染色4h。
过氧化物同工酶的点样量为30μl，用抗坏血酸-联苯胺染液染色，其组成为抗坏血酸70.4mg，联苯胺储存液20ml(2g联苯胺溶于18ml文火加热的冰醋酸中，再加水72ml)，0.6%过氧化氢20ml，水60ml。
酯酶同工酶的点样量为50μl，按薛应龙［4］方法，即凝胶在0.2mol/L，Tris-HCl缓冲液(pH 7.1)预浸10min，然后移入含有7%醋酸-α-萘酯的丙酮溶液0.5ml，坚牢蓝12.5mg，0.2mol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.1)1ml，水23.4ml的染色液中染色10～30min，棕红色的同工酶谱带即呈现。
