兔瘟组织灭活苗的制作

自家组织灭活苗制作鸡组织苗的制作用具及其消毒:手术剪/镊子、饭盒、三角瓶、量杯、纱布等高压消毒。

捣碎机:用温和消毒水浸4-5小时(浓度为正常浓度的2倍)之后用温开水冲洗掉消毒药。

1.采病料:发病死亡鸡的典型脏器，肝、脾、肺、肾、法氏囊、输卵管等典型病变脏器，也可从不同的鸡采取(结合猪的典型病料提取)。

将组织的结缔组织去除。

放在冰箱或冰柜冷冻室反复冻融，冰冻后拿出融化，升至常温再放冰箱冷冻，反复操作最少三次。

这样做的目底是让病毒从内脏组织病料中最大程度的释放。

(也可借此机会逐渐切碎)2. 称重:将采取的组织称重，一般按W:V比加入1:3或1:5的生理盐水稀释，即300克组织加入1000或1500毫升生理盐水。

3. 粉碎:用组织粉碎机粉碎组织，越碎越好，制成组织悬液。

4.过滤:先用2层灭菌纱布粗过滤，边过滤边搅拌组织悬液;滤液再用8层灭菌纱布精过滤;最好用12层纱布过滤。

5.配制1%~2%的甲醛灭活液:99%以上纯的甲醛用灭菌生理盐水配制成1%(或2%)，如果是福尔马林，2.78毫升相当于1毫升甲醛，如配制1000毫升1%的甲醛灭活液需加入27.8毫升。

6.灭活:将甲醛溶液加入滤液中，使甲醛的终浓度为0.1-0.3-0.5%。

在37?(30~40?之间也可)灭活48~72小时，每2小时振摇一次，以充分灭活。

7.进行安全性检测。

无菌检查: 取灭活的组织液0.2ml，各接种血琼脂斜面及肉汤培养基，37培养24--48小时，观察无菌生长; 安全检查: 选择1.5Kg以上健康兔4只，分两组，每组两只，试验组皮下接种灭活组织液5ml/只，对照组接种PBS液5ml/只，观察7天，无不良反应则为合格;效力检验: 选择1.5Kg以上健康兔4只，每只肌注1ml，20天后采集兔的血液并分离血清，进行HI试验，检测血清抗体效价;或取对照兔2只，连同试验兔一起，用兔瘟强毒进行攻毒，结果对照兔2/2死亡，试验验兔3/4保护或对照兔1/2死亡，试验兔4/4保护，说明所制的兔瘟组织灭活疫苗合格。

组织灭活苗的制备过程
1、病料采集
2、病料处理
3、配苗
4、灭活
一、材料：脾脏、淋巴结等组织、甲醛、硫
柳汞、恒温箱、剪刀、漏斗、镊子、三
角烧瓶、烧杯、移液器、匀浆机、纱布
二、步骤：
1、无菌处理：去除被膜、大血管、脂肪、
筋膜，称重。

剪成1平方厘米大小的小块，匀浆。

2、无菌检验，测定病毒效价
3、生理盐水4-6倍稀释，搅拌均匀
4、过滤。

纱布4-8层进行过滤，取上清液
5、灭活剂配制：计算甲醛用量，使甲醛最
终浓度达到0.5%。

（用甲醛的目的是使蛋白变性）。

6、缓慢加入甲醛，边加边搅拌。

用三角烧
瓶盛装。

7、牛皮纸扎好三角烧瓶，放入恒温箱内，
38摄氏度下放置24小时。

（病毒苗24
小时，细菌苗48小时。

）
8、分装灭菌瓶，每瓶100毫升。

9、成品检验：要求无菌、达到一定的效价、
安全等。

10、保存：4摄氏度冰箱保存，用时摇匀。

注：若长久保存，需加入硫柳汞（防腐剂）。

固体硫柳汞配制成1%浓度的水剂，加入到灭活苗中的终浓度为万分之一；也可加入有治疗作用的双抗（如青链霉素）。

简介兔瘟（兔病毒性出血性败血症）是由病毒引起的一种急性、热性、败血性和毁灭性的传染病。

一年四季均可发生，各种家兔均易感。

3月龄以上的青年兔和成年兔发病率和死亡率最高（可高达95%以上），断奶幼兔有一定的抵抗力，哺乳期仔兔基本不发病。

可通过呼吸道、消化道、皮肤等多种途径传染，潜伏期48～72小时。

临床症状可分为3种类型。

最急性型：无任何明显症状即突然死亡。

死前多有短暂兴奋，如尖叫、挣扎、抽搐、狂奔等。

有些患兔死前鼻孔流出泡沫状的血液。

这种类型病例常发生在流行初期。

病兔突然精神沉郁，不吃，趴卧不动，有的趴卧时四肢向左右伸开一数小时后呼吸突然急促、惊厥、不安、骚动．最后倒地抽搐呜叫死亡急性型：精神不振，被毛粗乱，迅速消瘦。

体温升高至41℃以上，食欲减退或废绝，饮欲增加。

死前突然兴奋，尖叫几声便倒地死亡。

血性分泌物。

散发，呈零星死亡，病死率100％。

以上2种类型多发生于青年兔和成年兔，患兔死前肛门松弛，流出少量淡黄色的粘性稀便。

慢性型：多见于流行后期或断奶后的幼兔。

体温升高，精神不振，不爱吃食，爱喝凉水，消瘦。

病程2天以上，多数可恢复，但仍为带毒者而感染其他家兔。

萎靡不振病理变化病死兔出现全身败血症变化，各脏器都有不同程度的出血、充血和水肿。

肺高度水肿，有大小不等的出血斑点，切面流出多量红色泡沫状液体。

喉头、气管粘膜淤血或弥漫性出血，以气管环最明显；肝脏肿胀变性，呈土黄色，或淤血呈紫红色，有出血斑；肾肿大呈紫红色，常与淡色变性区相杂而呈花斑状，有的见有针尖状出血；脑和脑膜血管淤血，脑下垂体和松果体有血凝块；胸腺出血。

出血实质性器官出血病例1a)发病情况2005 年8 月25 日, 临沂市某养兔场王某饲养的300余只，3~4 月龄新西兰肉兔，其中约20只突然发病开始患病兔表现精神不振，食欲减退，从鼻腔中流出粘性分泌物，打喷嚏，体温升高，进而呈现呼吸困难\抽搐\倒地而死等临床症状。

根据经验，随即用庆大霉素进行肌肉注射，但效果不理想。

2020年第5期（总第222期）@1中茗4莩龛4中西医结合治疗兔瘟刘力夫(甘肃省泾川县畜牧兽医中心高平工作站，744300)中图分类号：S858.291 文献标识码：B文章编号：1003-8655 (2020) 05-0098-01兔瘟是兔急性病毒性传染病，本病潜伏期短 (1-3天)、发病急、传染快、发病率和死亡率都很 高。

常流行于冬、春季节。

成年兔最易感染。

青年 兔，成年兔尤其是5月龄以上的兔死亡率最高。

2 月龄以下仔兔、乳兔不易感染。

感染途径为消化 道、呼吸道皮肤等。

被病兔、隐性感染兔污染的伺 料、饮水、器具等是传染媒介，配种也能传播本 病。

收购兔毛兔皮的外地人进人兔场或代剪兔毛 也是传播兔瘟的重要原因。

1典型病例2017年12月份，我镇某村养兔大户共有白 兔800只，近一周左右，陆续有部分兔突然死亡，还有部分兔精神沉郁，不喜走动，食欲减废，体温 升高，呼吸急促，耳壳潮红。

笔者现场对2只病死 兔进行解剖，发现喉头和气管内有红色粘液，肺 部有出血点，肝脏肿大等症状，根据工作经验和 临床检查，确诊为兔瘟。

2 临床症状2.1最急性型：无临床症状，突然死亡。

2.2急性型：表现精神萎顿，不喜走动，有的离群 昏睡，食欲减废，体温升到411左右，呼吸困难，耳壳潮红。

当体温降到常温以下时，病兔抽搐蹦 跳几下或惨叫几声死亡。

病程为1-3天。

2.3慢性型：多见于流行后期或断奶后的幼兔。

体温升高，精神不振，不爱吃食，爱喝凉水，消瘦。

病程2天以上，多数可恢复，但仍为带毒者而感 染其他家兔。

3 病理变化死兔呈角弓反张姿势，有的鼻流淡红色泡沫 液体或鲜血。

喉头和气管内有红色粘液，尤以气 管更为严重，故有“红气管”之称。

肺部有出血点。

肝脏肿大、质脆，淡黄色。

脾、肾瘀血肿大，脾呈黑 紫色,有的脾脏病变不明显。

胃内充满，胃粘膜易 脱落。

4 治疗措施4.1 一旦发现有兔瘟的病兔，应立即全群接种兔瘟疫苗和分别肌肉注射三氮唑核苷6-8mg/kg(2次/d)。

专利名称：一种兔瘟组织灭活疫苗及其制备方法专利类型：发明专利
发明人：吴红云,王卫芳,孙芳
申请号：CN201210273725.9
申请日：20120731
公开号：CN102755644A
公开日：
20121031
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种兔瘟组织灭活疫苗及其制备方法，其中,兔瘟组织灭活疫苗包含有兔瘟组织病毒液和蜂胶佐剂，加入比例为：每毫升病毒提取液中含有5—15mg蜂胶。

其制备方法主要包括以下步骤：病料处理与病毒液获取；病毒灭活；疫苗配置；疫苗的安全及免疫效力检验；疫苗分装。

采用本发明的疫苗病原体分离后进行了传代增值，较为全面的抗原成份对接种动物群体进行全面的，多方面的诱导，能达到预防和控制疾病的良好效果。

采用的蜂胶佐剂是一种良好的免疫增强剂和刺激剂,具有广谱生物学活性,它既能引起特异性免疫应答,又能启动非特异性防御机制,有增强免疫抗体生成和提高白细胞吞噬能力的明显效果。

申请人：郑州后羿制药有限公司
地址：451162 河南省郑州市郑州航空港区新港大道东侧
国籍：CN
代理机构：郑州睿信知识产权代理有限公司
代理人：牛爱周
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兔瘟蜂胶组织灭活苗的研制及免疫效果观察
宁康健;王慧
【期刊名称】《中国养兔》
【年(卷),期】2003(000)003
【摘要】采用人工感染兔瘟(兔病毒性出血症)病毒致死的兔的脏器(主要是肝),制成10%的兔瘟组织灭活苗和10%的兔瘟蜂胶组织灭活苗.采用常规血凝抑制实验,初步分析比较了注射兔疸组织灭活苗和兔瘟蜂胶组织灭活苗后兔体内抗体水平的消长情况.结果表明:兔瘟蜂胶组织灭活苗能明显提高抗体效价,增强免疫效果.
【总页数】3页(P20-22)
【作者】宁康健;王慧
【作者单位】安徽技术师范学院动物科学系,安徽凤阳,233100;安徽省泗县畜牧水产局,安徽泗县,234300
【正文语种】中文
【中图分类】S858.291
【相关文献】
1.兔瘟蜂胶组织灭活苗的研制及免疫效果观察 [J], 宁康健;王慧;杨靖松
2.兔出血症-巴氏杆菌病二联蜂胶灭活苗的研制及免疫效果的观察 [J], 刘来利;李元新;王必成
3.中国白兔IL-6基因真核表达质粒的构建及其对兔瘟组织灭活苗免疫效果的影响[J], 张夏兰;徐斌;何琴;苏兵
4.兔瘟强毒株的筛选和血清型鉴定——兔瘟H9组织灭活疫苗的研制 [J], 周学利;
朱传民;吴世义;汪丽
5.兔巴氏杆菌魏氏梭菌二联蜂胶灭活苗的研制 [J], 史同瑞;于万才;王铭杰;武克勤;许腊梅;刘文韬;鹿凌岩;苏永福;宋广涛;王长文
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兔瘟的攻毒实验报告
1、材料和方法
1.1试验兔：2~3月龄、体重1.5kg左右非免疫青紫兰和日本大耳兔，由xx种兔场和xx医科大学试验动物房提供。

1.2兔瘟种毒：为本实验室自兔瘟病死兔采集的病料经人工发病获得的肝毒，使用时1:10(w/v)稀释，HA滴度达1:1280以上。

1.3人红细胞：购自省立医院血库。

1.4常规苗的制备
1.4.1制苗毒的准备：用种毒制成1:10(w/v)肝组织悬液，皮下注射非免疫青年兔，1ml只，待兔死亡后无菌操作取出肝脏、测HA 效价达1:1280以上者，供制苗用。

1.4.2常规苗的配制：取上述肝组织称重、捣碎加入适量生理盐水匀浆过滤补足生理盐水制成1:10(w/v)的肝脏悬液，加入甲醛使其终浓度达0.4%，装入容器中置37°C定时振摇灭活48小时，无菌分装后置室温备用。

1.5安全试验：共研制8批佐剂苗，每批取4只试验兔，颈部皮下注射疫苗4ml只，观察14天。

1.6效力试验：每批苗接种4只试验兔，颈部皮下注射疫苗0.5ml 只(为免疫剂量的112)，14天后攻毒，另设3只非免疫兔作对照。

1.7攻毒试验：分别于免疫后6、8、10、12个月每组随机取6只试验兔攻毒，攻毒剂量为1:10肝毒悬液1ml/只，同时设3只非免
疫兔作对照。

2、实验结果：所有接种的兔，观察14天均健活，无任何全身反应和局部红肿现象，但手触注苗部位有蚕豆瓣大的硬结，2个月后硬结消退。

除试验兔外，在其他外贸种兔场和本所试验兔场共计使用这8批疫苗50万余头剂，均安全可靠。