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探究pH对酶活性影响

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编号 Ａ１ Ｂ１ Ｃ１ Ｄｌ Ｅ１
的淀粉就越多 ， 所观察到的透明区越清晰 ， 若酶失活 ，
则滤 纸片覆 盖处 的淀 粉仍会 被碘 液染 成蓝 紫色 。 １ 实验过 程
１ ． 】 从 绿 豆 中提取 淀粉 酶
０ ． １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ Ｏ ． ｏ ｏ １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 蒸馏 水 Ｏ ． ０ ｏ １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ Ｏ ． １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ
淀粉琼脂平板法是利用反应平板 ，将浸在不同
ｐ Ｈ淀粉 酶溶 液 的滤纸 片放 在淀 粉琼 脂 平板 上 ，滤纸 片上 的酶会 催化 其周 围的淀粉 分解 。 在恒 定且适 宜 的 温度 中反 应一段 时 间后 ， 将 碘 液倒 在平 板 上 ， 如果 ｐ Ｈ 适宜 ， 酶不 失活 ， 滤纸 片覆盖 处 就会 出现 透 明 区 ， 意 味 着该 处 的淀粉 已经完 全被分 解 。酶 活性 越 高 ， 被 分解
氢氧化钠 ， 装入试剂瓶 以备用 。 取 １ ０支 干净 的试 管 ，分别 标 记 Ａ１ 、 Ｂ １ 、 ｃ １ 、 Ｄ １ 、 Ｅ１ ， Ａ ２ 、 Ｂ ２ 、 Ｃ ２ 、 Ｄ ２ 、 Ｅ ２ ， 按表 １ 所示 分 别 加 入 ２ ｍ Ｉ 对 应 的溶 液 。
表 １ 实 验 设计
０ ． １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ ０ ． ０ ０ １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 蒸馏 水 ０ ． ｏ ｏ ｌ ｍｏ ｌ ／ Ｌ ０ ． １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ
ＨＣｌ ＨＣｌ Ｎａ ＯＨ Ｎａ ＯＨ
Ａ１ 、 Ｂ ｌ 、 Ｃ １ 、 Ｄ１ 、 Ｅ １ 试 管 中分别 加 入 ３ ｍ Ｌ收集 到
第３ ０卷第 １ ０期
２ ０ １ ４矩
中学 生物 学
Ｍｉ ｄ ｄ ｌ ｅ Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ
Ｖｏ １ ． ３ ０ Ｎｏ ． １ ０
２ ０ Ｉ １ ４
文件 编号 ： １ ０ ０ ３—７ ５ ８ ６ （ ２ ０ １ ４ ） １ ０—０ ０ ４ ８ —０ ２
ＨＣ ｌ ＨＣｌ Ｎａ ＯＨ Ｎａ ＯＨ
编号
Ａ２
Ｂ ２
Ｃ ２
Ｄ ２
Ｅ２
淀粉 酶是水解 淀 粉 和糖 原 酶类 的 总称 ， 广泛 存在 于动植 物 和微生 物 中。为 了确保 实 验 的成功 率 ， 本实 验将配 置两 种淀 粉酶溶 液 ， 分别 是从 绿 豆 中提取 出的 淀粉 酶 ； 从 市场上 购买 的 一 淀粉 酶 。
的绿豆研磨 液 ， Ａ ２ 、 Ｂ ２ 、 Ｃ ２ 、 Ｄ ２ 、 Ｅ ２试 管 中分 别 加 入
选取 １ ０ ０粒饱满新鲜的绿豆 ，清水浸泡 ３ ｄ 后，
放入研 钵 中 ， 加入 ５ ０ ｍ Ｌ的蒸馏 水 ， 充 分研 磨 。 用 滤纸 和漏斗 过滤 研磨液 ， 用 小烧 杯收集 滤 液 。 过 滤时 ， 滤纸 孑 Ｌ 径 比较 小 ， 残 渣 会堵 塞滤 纸孔 ， 使 得过 滤 速 度极 其
１ ． ４ 淀粉 酶 的反应
缓慢 ， 建议每隔 ２ ０ ｍ ｉ ｎ 更换滤纸 ， 收集 的滤液体积接
近２ ０ ｍＬ即可 。
在两个培养皿的外壁标示 Ａ １ ～ Ｅ １ ， Ａ ２ ～ Ｅ ２ ，把在
不同ｐ Ｈ 淀粉 酶 溶 液 中浸 泡 过 的 小 滤纸 片放 在 相 对 应 的淀粉 琼 脂平 板 上 ，将 这两 个 平 板放 置 在 ４ ０ ￣ Ｃ 的
３ ｍ ｉ ｎ ， 取出（ 注意 ： 用布垫一下 ， 以防烫手 ） ， 迅速倒人 两个事先准备好的培养皿里 ， 冷却几分钟后 ， 将平板 倒 置 以备用 。
１ ． ３ 滤 纸 片 的 处 理
分别 配置 ５ ０ ｍ Ｌ ０ ． １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ盐 酸 、 ５ ０ ｍ Ｌ ０ ． ０ ０ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ 盐酸、 ５ ０ ｍ Ｌ ０ ． ０ ０ １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ氢 氧化 钠 、 ５ ０ ｍ Ｌ ０ ． １ ｍ ｏ ］ ／ － Ｌ
关键 词 淀粉 琼脂 平板
中图分类 号
Ｇ ６ ３ ３ ． ９ １
文 献的制备
“ 探究 ｐ Ｈ 对 酶 活性 的影 响 ” 是 高 中生 物 必 修 一 《 分 子与 细胞》 的实验 内容 之一 ， 苏教 版 高 中生物 教材 提供 的实 验 方 案 是 从 定量 的 角 度分 析 ｐ Ｈ 对 酶促 反
３ ｍ Ｌ质量分数为 ３ ％的 ｏ 【 一 淀粉酶溶液 ， 混匀 ， 用ｐ Ｈ
试 纸测 定每 支试 管 中溶液 的 ｐ Ｈ， 并记录。
剪取 形 状 一 致 的滤 纸 片 （ １ ｃ ｍ ） １ Ｏ片 ， 将 滤 纸 片
分 别放 入 １ ０支试 管 中 ， 浸泡 ５ ａｉ ｒ ｎ 。
恒 温箱里 反应 ２ ｈ 。
分 别称 量 ４ ｇ淀 粉 和 ４ ｇ 琼 脂 糖粉 放 人 烧 杯 中 ， 加入 １ ０ ０ ｍ Ｌ蒸 馏 水 ， 搅拌均匀 ， 放 入 微 波 炉 里 加 热
应速率的影响。在实际操作过程中， 发现该实验方案
的操作 难 度大 ，得 至 ０ 的实 验数 据存 在较 大 的误 差 ， 导 致实 验成 功率低 。为 了更 好地 完成 该探 究 实验 ， 笔 者 查 阅 了图 书 、 文 献等 相 关 资料 ， 决 定 采 用 淀粉 琼 脂平 板法 展开探 究实 验 。
探究 ｐ Ｈ对 酶活 性影 响
刘泽龙 （ 南京师范大学附属 中学高三（ ２ ） 班 江苏南京 ２ １ ０ ０ ０ ０ ）
摘 要 采 用 淀粉 琼脂 平 板 法探 究 ｐ Ｈ 对酶 活性 的影 响 ， 测得 淀粉 酶适 宜的 ｐ Ｈ 范 围是 ５ － ８ ， 过 酸或
探 究 酶活性
过碱 均会 导致 淀粉 酶失 去 活性 ， 从 而影 响酶促 反 应。

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温度。PH对酶活性影响

温度。PH对酶活性影响

温度、PH对酶活性影响实验
酶：是活细胞产生的一类具有生物催化作用的有机物。

酶的作用受温度、酸碱度的影响。

一、实验原理
淀粉遇碘后，形成紫蓝色的复合物。

淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖。

麦芽糖和葡萄糖遇碘后，不形成紫蓝色的复合物。

麦芽糖和葡萄糖能够与斐林试剂发生氧化还原反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。

二、目的要求
1.初步学会探索影响酶活性条件的方法。

2.探索淀粉酶在不同温度和pH下催化淀粉水解的情况。

三、材料用具（略）
四、实验步骤
1.酶在不同pH下,催化活性的变化。

序号项目
试管
1 2 3
1 注入新鲜淀粉酶溶液1mL 1mL 1mL
2 注入蒸馏水1mL \ \
3 注入NaOH溶液\ 1mL \
4 注入HCl溶液\ \ 1mL
5 注入淀粉溶液2mL 2mL 2mL
6 ～60℃的热水5min 5min 5min 5min
7 碘液1滴1滴1滴
结论：淀粉酶在酸性和碱性环境中,都将失活性,不能把淀粉水解为可溶性还原糖。

2.酶在不同温度下,催化活性的变化。

序号项目
试管
1 2 3
1 注入新鲜淀粉酶溶液1mL 1mL 1mL
2 ～60℃的热水5min 热水\ \
3 沸水5min \ 沸水\
4 冰水5min \ \ 冰水
5 注入淀粉溶液2mL 2mL 2mL
6 各温度下保温5min5min5min5min
7 碘液1滴1滴1滴
结论:
淀粉酶在60℃可催化水解淀粉,在100℃和0℃时淀粉酶都不能发挥催化作用。

探究温度PH对酶活性影响的探究教学设计

探究温度PH对酶活性影响的探究教学设计

探究温度〔PH〕对酶活性影响的探究教学设计一、教学背景分析【教材分析】"探究温度(PH)对酶活性的影响〞是高中生物学教材必修一第5章第1节"降低化学反响活化能的酶〞的教学容。

教师采用探究式教学模式，通过设计问题情境和提出问题，引导学生自主合作地对问题进展探究，由学生自己通过实践获得对科学概念的认识。

这样的教学设计能表达学生自主、探究、合作的学习方式，有利于培养学生科学的思维方法和研究方法，提高学生的科学素养。

【学情分析】"探究影响酶活性的因素〞是在学生已经对酶的作用、化学本质及高效性和专一性有了一定认识的根底上，进一步通过实验探究活动来验证环境因素对酶活性的影响，并加深对酶作用及特性的理解。

影响酶活性的因素较多，如温度、pH、激活剂与抑制剂等。

基于高中学生学习能力的实际，本探究实验的容主要是探究温度和 pH 对酶活性的影响。

通过本探究实验的设计与具体实施，使学生熟悉"①发现问题；②提出假设；③设计实验方案并预测结果；④实施实验收集证据；⑤结果分析得出结论〞等科学探究的一般过程和方法；在对探究的问题作出假设进展合理解释、演绎实验原理；在设计实验方案过程过确认相关的变量关系及如何操作与控制，初步理解单一因子变量的原则；在具体实施实验、收集证据的过程中培养学生正确使用相关的实验器具，合理采集和处理实验材料、客观观察和描述实验现象等进展实验操作的根本技能；在分析实验结果得出结论的过程中理解科学的本质之一是实证，深入理解对照、单一因子变量等实验原则，表达实事和严谨的科学态度；在各实验组统筹安排实验过程中表达团结合作的团队意识与精神。

二、教学目标【知识目标】1、概述温度、pH 的变化对酶活性的影响；2、进一步说明酶与新代的关系；3、明确探究实验的一般步骤并能恰当评价和完善实验方案。

【能力目标】1、通过探究影响酶活性的因素，开展学生的科学探究能力；2、培养学生观察、分析问题，解决问题的能力；3、培养学生实验操作能力；4、提高学生收集资料和语言表达能力。

高中生物《探究PH值对酶活性的影响》公开课优质课PPT课件

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（3）以相同的方法测量其它pH下过氧化氢在酶催化下的氧
气释放量；
（4）记录实验数据，绘制pH与酶催化活性图；
（5）每个pH下重复3次；
（6）分析pH为______时，过氧化氢酶的活性较强。
借助数字化实验手段的优点： 1．可检测信号量的微小变化和瞬间变化 2．数据处理便捷化，实验结果定量化
改进：实验装置和数据采集设备
新增实验器具: 计算机、单机运行平台软件、GQY数据采集器、氧气传 感器、传感器连接线、USB连接线、试管等
界面准备： 装载实验模板、数据采集器与软件的连接，运行GQY数字化 实验室单机运行平台。打开通用界面，单击 ，进行传
感器连接，问号消失 备完成。
，显示设备连接成功，界面准
可从鲜肝匀浆中提取过氧化氢酶溶液（新鲜肝脏洗净、研 磨、过滤并稀释,置于冰箱中备用）。
自变量：不同pH的缓冲液 因变量：过氧化氢酶的活性
酶 2H2O2 = 2H2O + O2↑
因变量检测指标：相同反应时间内产生的氧气的量 无关变量：温度、底物浓度、酶浓度
方法步骤
1. 将托盘中的水加至快满为止。
2. 将大小相同的8片滤纸片放在培养皿里的鲜肝匀浆中（含过氧化 氢酶）浸泡1min，然后用镊子夹起滤纸片，靠在培养皿壁上，使多 余的匀浆流尽。 3. 将2片含有酶的滤纸片小心放入反应小室的一侧内壁上，使滤纸 片粘在内壁上。注意滤纸片不要碰到反应小室的瓶口。 4. 反应小室稍立起，使贴有滤纸片的一侧在上面，小心加入pH5.0 的缓冲液2mL，然后再加入2mL3%的H2O2溶液，切勿使上述混合液接 触到贴在内壁上的滤纸片。将小室塞紧。
讨论： 实验中存在的操作要点及难点： 1、实验以排出水的体积代表反应中释放氧气的量，要求整 个过程一直扶着量筒，繁琐；而且将横放的量筒倒立时可 能会残留少量气体； 2、旋转小室180。，可能影响装置气密性；也可能气体不 易放出； 3、改变pH时，冲洗小室不净会导致上一组pH缓冲液残留， 影响实验效果； 4、记录下的数据，还需要进一步处理才能直观呈现酶活性 的变化规律。
pH对酶活性的影响

pH对酶活性的影响

实验pH 对酶活性的影响和最适pH 的测定一、实验目的一、实验目的1、了解pH 对酶的活性的影响机理；对酶的活性的影响机理；2、掌握如何选择酶催化反应的最适pH 和获得最适pH 条件的确定。

条件的确定。

二、实验原理二、实验原理酶的生物学特征之一是它对酸碱的敏感性，这表现在酶的活性和稳定性易受环境pH 的影响。

pH 对酶的活性的影响极为显著，通常各种酶只在一定的pH 范围内才表现出活性，同一种酶在不同的pH 值下所表现的活性不同，其表现活性最高时的pH 值称为酶的最适pH 。

各种酶在特定条件下都有它各自的最适pH 。

在进行酶学研究时一般都要制作一条pH 与酶活性的关系曲线，即保持其他条件恒定，在不同pH 条件下测定酶促反应速度，条件下测定酶促反应速度，以以pH 值为横坐标，值为横坐标，反应速度为纵坐反应速度为纵坐标作图。

由此曲线，不仅可以了解反应速度随pH 值变化的情况，而且可以求得酶的最适pH 。

三、实验器材与试剂三、实验器材与试剂 1、试剂：磷酸氢二钠、乙酸钠、磷酸二氢钠、柠檬酸、乙酸。

、试剂：磷酸氢二钠、乙酸钠、磷酸二氢钠、柠檬酸、乙酸。

2、器材：可见分光光度计、恒温水浴锅、试管、酸度计、器材：可见分光光度计、恒温水浴锅、试管、酸度计四、操作步骤四、操作步骤1. 配置缓冲溶液配置缓冲溶液按下表配置缓冲溶液，其溶液pH 值以酸度计测定值为准。

值以酸度计测定值为准。

管号管号 0.2mol/L 磷酸氢二钠（ml ）0.1mol/L 柠檬酸钠(ml) 缓冲液pH 14.30 4.5 25.15 4.84 5.036.61 3.39 6.2 47.72 2.28 6.8 59.08 0.92 7.4 6 9.72 0.28 8.0 2. 反应液的配方反应液的配方准备二组各6支试管，第一组6支试管中，在每支都加入4.5ml 上表中相应的缓冲液，然后加入一定量浓度的6.5%蔗糖酶溶液1.0ml （此时的蔗糖酶只能用H 2O 稀释，酶的稀释倍数和加入量要选择适当，以便在当时的实验条件下能得到0.6-1.0的光吸收值A 520。