2021届高三一轮复习生物-例析菌落等微生物数目统计计数方法的几个常见问题

第2讲微生物的培养和应用考纲研读备考定位考纲要求核心素养1.进行微生物的分离和培养。

2.测定某种微生物的数量。

3.研究培养基对微生物的选择作用。

4.探讨微生物的利用。

5.活动：用大肠杆菌为材料进行平面培养，分离菌落。

6.活动：分离土壤中分解尿素的细菌，并进行计数。

1.理性思维——分析培养基的成分及其作用；比较平板划线法和稀释涂布平板法的异同。

2.科学探究——设计实验探究微生物培养的条件。

3.社会责任——关注有害微生物的控制和宣传健康生活方式。

基础梳理1．培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

(2)营养构成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。

此外还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。

(3)种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。

2．无菌技术(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

(2)关键：防止外来杂菌的入侵。

(3)不同对象的无菌操作方法(连线)思维辨析易错整合，判断正误。

(1)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上(×)(2)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害(√)(3)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落(×)(4)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落(√)延伸探究1．(教材选修1P16旁栏思考题)请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌？如果需要，请选择合适的方法：(1)培养细菌用的培养基与培养皿(2)玻璃棒、试管、烧瓶和吸管(3)实验操作者的双手[提示](1)、(2)需要灭菌；方法：(1)高压蒸汽灭菌。

(2)干热灭菌。

(3)需要消毒。

方法：化学药物消毒。

2．(教材选修1P17“倒平板操作讨论”)(1)为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？(2)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？[提示](1)通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

微生物的培育、分别、计数专题主讲教师：毕诗秀【考试说明对微生物培育、分别和计数部分的要求】微生物的培育、分别、计数要求掌握程度参照本考（1）微生物的分别和培育试纲领中的：（2）某种微生物数目的测定二、考试的能力要求（3）培育基对微生物的选择利用2. 实验与研究能力一、微生物培育的基本程序二、分别微生物纯种的方法1.平板划线法：线的尾端菌液渐渐稀释若线的尾端没有出现单菌落，其可能的可能原由？2.稀释涂布（平板）法3.利用选择培育基进行分别如利用只含尿素为氮源的选择培育基分别尿素分解菌如利用只含纤维素为碳源的选择培育基分别纤维素分解菌4.利用鉴识培育基进行鉴识后分别三、微生物的计数1.液体稀释涂布（平板）法2.显微察看法：用血球计数板计数计数室（中央大方格）的长、宽和高分别为：1 mm 、 1 mm和 0. 1mm3计数室的容积：0.1mm （万分之一毫升）取样：稀释必定倍数的菌液3.比浊法记数微生物细胞数目多→培育液浊度大→发生散射光芒多→分光光度计测得的吸光值增添核酸是遗传物质的凭证北京四中：毕诗秀一、 DNA 是遗传物质的凭证体内细菌转变实验思虑：格里菲斯实验能颠覆“遗传物质是蛋白质”这一学说吗？该实验为以后科学家证明 DNA 是遗传物质供给了什么帮助？体外细菌转变实验问题：（ 1） 1 和 2 结果比较，说明？（2） 1 和 3 结果比较，说明？从整个实验中，你能得出什么结论？（3）艾弗里设计实验的思路是如何的？噬菌体侵染细菌的实验（1）如何对噬菌体进行标志？（2）采用 S 和 P 做标志的原由？（3）混淆时间是否是越长越好？（4）使用搅拌器作用是什么？（5）对搅拌后的培育液进行离心目的？（6）积淀和上清液中主要的成分是什么？（7）进行噬菌体侵染实验的目的？二、 RNA 是遗传物质的凭证（1）烟草花叶病毒感染烟草叶实验是如何做的？实验结论说了然什么结论？（2）病毒重修实验说明所生殖的病毒种类取决于；证明RNA 是遗传物质，能控制。

细菌菌落总数检测常见误差原因分析细菌总数监测常见误差分析细菌菌落总数就是水源地与地面废水样品检测必做得一项指标。

菌落总数检测同其她检验一样,也存在检测误差。

平板计数法就是细菌总数常用方法之一, 因此,该值准确与否直接关系水质好坏。

微生物平板计数得通常方法为每个样品用3个稀释度,每个稀释度常做3个重复。

但如何对平板菌落进行正确计数、３个稀释度以哪一个稀释度进行计数及微生物检测允许误差等问题,在饲料标准中并未有所规定,而这些问题与统计值得准确性密切相关。

我们就实际检测芽孢杆菌工作中遇到一些菌落计数得问题,与大家进行探讨。

1材料与方法１.１试验材料1。

1。

1样品:随机抽取微生态饲料添加剂合生素样品3份。

1。

１.２培养基:营养琼脂。

1.１.3仪器设备:磁力搅拌器,无菌培养皿,培养箱,振荡器。

1.2 试验方法1。

2。

1样品得振荡时间对菌数检测得影响选择1个样品,称取１0 ｇ,放人无菌锥形瓶内,加入90 mＬ无离子水,磁力搅拌分别为l0、2０、３0、４0与6０ rａiｎ、用1 ｍL移液枪从中吸取1 mL样品悬浊液加入到盛有９mＬ去离子水得试管中,用振荡器使样品充分均匀,以此类推,制成10一～1Ｏ一’不同稀释度得样品溶液。

平板涂布法检测菌含量:用移液枪从样品稀释液中各吸取20０L,每个样品稀释液3个重复;将平板倒置于3５—37 ｃC培养箱中培养24 h。

1.2。

2 检测方法对菌数检测得影响各个样品称取l0 g,放入无菌锥形瓶内,加入9０ mL无离子水,磁力搅拌分别为40 raiｎ。

并稀释成1０～～l0 不同稀释度得样品溶液。

倾注平板法检测菌含量:用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取１mＬ,每个样品稀释液3个重复,待培养基表面干燥后,将平板倒置于３５37～(2培养箱中培养24 h、平板涂布法检测菌含量:用移液枪从各个平行样品相应稀释液中各吸取２０0 L涂布平板,每个样品稀释液３个重复;将平板倒置于35~37℃培养箱中培养2４ｈ、2结果2.1样品得振荡时间对菌数检测结果得影响采用细菌平板计数得方法,不同振荡时间对合生素中芽孢杆菌检出量得结果见表1。

考点加强课&微生物的筛选、鉴定、分离与计数展•操•妹重点题型1目标微生物的筛逸与鉴定I 展篇律方法I技法必备万攻关1. 分离微生物的原理与措施（1） 原理：自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离戏得纯培养物应首先 采用的方法是将单个的微生物与其他微生物分离，再给该微生物提供合适的营养 和条件，使其生长成为可见的群体。

（2） 常用措施① 接种过程中尽量使微生物分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。

② 运用选择培养基的作用特点，在培养基中添加某种特定的物质，抑制不需要的 微生物的生K ，促进所需微生物的生长。

2. 选择培养基四种常见制备方法或实例加入某些特定构质心即依抿某些俄生物对某些物成的抗性.在培养— 基中加入某些物皈,以.•抑林不需曳的畿生 物・'促进••所高要的微生折生长培养基中加入高E 食船时可抑制多种细L 菌的生长.但不影响金黄色佝萄球街的生咔制 K.从而诃将该俏分点出来」在培养基中加入青寄素时可抑制绢苗、放*1线俯的生长.从而分离得到怫毋偏叫霉带培芥基中缺王氮源时.可分腐「1*.固氮微村用墙养堰的-特定化学戚分 分离证过某些%殊亦岐“分离微1：物生物.非自生固氮微生物因缺乏鼠源而无改变斌养基 法生存牝寿成分 培养基中若缺乏有印碳源财异养微生.物无」法生存,而自芥微生物可利用空，中的（X%制造有机物而生存当石油以唯•碳源时.可抑制不能利用石 油的微生物的生长・使能够利用石油的微生物生存.从而分腐出能消除石油污染的微生物［在高纱孙境中叩分窝耐盐隋.其他湾在盆 i 浓度高时易失水血不能生存：［在高温环境中可分离样到州高温的徵生物. 其他微生物在高温环境中树伽失活而无法 〔生存I探高考真题I探究高考明考向『例证』＜2017-全国卷1,37）某些土壤细菌可将尿素分解成CO?和NHj供植物吸收和利用。

回答下列问题：（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生o能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是_______________________________________________________________________________________________________________________________________________f但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是________________________________________________________（答出两点即可）。

【导与练】2015届高考生物一轮总复习考点一统计微生物数目的
常用方法教师用书配套素材
考点一统计微生物数目的常用方法
考点归纳
显微镜直接计数法间接计数法(活菌计数法)
原理利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显
微镜下计算一定容积的样品中微生物数量
当样品的稀释度足够高时,培养基表面生
长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一
个活菌,通过统计平板上的菌落数,就能
推测出样品中大约含有多少活菌
操作方法用计数板计数时,先将待测样品制成悬液,
然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计
数。

根据在显微镜下观察到的微生物数目来
计算出单位体积内的微生物总数
①设置重复组,增强实验的说服力与准确
性
②为了保证结果准确,一定要选择恰当
的稀释度
缺点不能区分死菌与活菌,难以计数微小的细
菌。

不适于对运动细菌的计数;需要相对高
的细菌浓度
只能计活菌数,受稀释度影响很大
1。

人教版高中生物总复习知识点梳理重点题型（常考知识点）巩固练习高考总复习微生物的培养、分离、计数专题【考纲要求】1．简述微生物的培养过程，并总结其中的重要注意事项2．说明微生物培养基的特点及种类3．概述微生物的分离方法4. 概述微生物的计数方法及注意事项【考点梳理】考点一、微生物的培养条件微生物是形态微小，结构简单，需借助显微镜才能观察到的一类生物，包括细菌和蓝藻等原核生物、酵母菌和霉菌等真菌、病毒等。

本专题主要讲解关于“细菌”培养的内容。

1. 微生物培养所需要的营养物质（由培养基提供）来提供，一般培养真菌需将培养基调至酸性，培养细菌需调至中性或微碱性，培养厌氧微生物则要提供无氧条件。

2. 培养基的种类（如可用伊红－美兰培养基鉴别大肠杆菌，微生物的分离、鉴定、活菌计数、保存菌种观察微生物的运动；进行微生物的分类、鉴定3.无菌技术（1）在微生物培养中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，其主要技术是无菌操作。

主要包括以下几方面：①对实验操作的空间，操作者的手和衣着，进行清洁和消毒。

②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近或接种箱内进行。

④应避免已经灭菌处理的材料用具与周围其他物品相接触。

⑤进行接种等操作时，培养皿盖不应全揭开。

（2）消毒和灭菌的比较【微生物的培养、分离、计数专题 411406 微生物培养的基本程序】考点二、微生物培养的基本流程注意：使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃。

【微生物的培养、分离、计数专题 411406 分离微生物纯种的方法】考点三、微生物的分离纯化1.利用特殊的接种方法分离纯种：平板划线法、稀释涂布平板法（1）平板划线法：原理：用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上进行连续划线，在划线的过程中，菌体数量逐渐减少，菌体间的距离增大，距离足够大时，经培养，在划线末端处便可观察到由一个菌体繁殖产生的单菌落，挑取单菌落后继续培养，得到的便是纯种。

高中生物《微生物的计数》（含答案解析）高中生物《微生物的计数》一、实验题（本大题共1小题，共2.0分）1.在盛产柿子的某地，生物小组开展柿子酒、柿子醋生产的相关活动。

（1）土壤中的酵母菌计数：在秋季的柿子园中，落地的柿子流出果汁的周围土壤中有酵母菌大量生长繁殖。

①用灭过菌的小铁铲、信封取该处土样，并在________旁称取10g 土样，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。

而后进行系列稀释操作：吸取锥形瓶中土壤液的上清液________mL，转移至盛有9mL无菌水的大试管中充分摇匀，依次等比稀释，获得稀释至101、102、103、104倍的土壤液的稀释液。

②为测定土壤中酵母菌的数量，选用第①步中所获得的102、103、104倍的土壤液的稀释液，并依次分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。

在适宜条件下培养，当菌落数目稳定时，对各稀释度涂布的三个平板进行菌落计数（如下表）。

则每克土壤样品中的酵母菌数量约为________个。

要使该实验所得数据可靠，还应该实施的操作是________。

（2）柿子醋生产菌的制备：为去掉酵母菌，挑取变酸的柿子酒内的菌膜于________℃进行纯化培养，获得如图所示菌落分布。

应从________（填“甲”“乙”或“丙”）区域中挑取部分菌落制玻片观察，选择所需菌种。

（3）柿子酒、柿子醋的制作（发酵装置如下图所示）：①排气口弯管设置的目的是________。

②可通过装置中的________对发酵情况进行及时监测。

此时，若采用血细胞计数板对发酵液的酵母菌观察计数，与（1）中计数方法相比，该计数方法测得的酵母菌数自较________。

③柿子醋可在柿子酒生产的基础上改变________进行生产。

-------- 答案与解析 --------1.答案：（1）①火焰 1②1.75×107同时在各稀释度组中，另加一个平板接种无菌水作为对照（2）30～35 丙（3）①在酒精发酵时用来排出CO2，防止空气中微生物的污染②出料口多③菌种和环境条件解析：本题考查微生物的分离、数量测定、果酒和果醋的制作相关知识，意在考查考生运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论的能力。

菌落总数的计算方法举例说明计算菌落总数的方法： 1. 使用填充法：将一定量的样品液体倒入滴定瓶，用滴定瓶的滤布过滤，将滤布上的菌落洗到滴定瓶中，然后用滴定瓶的滤布将滴定瓶中的菌落洗到一个干净的培养皿中，将培养皿中的菌落洗到另一个干净的培养皿中，以此类推，直到滤布上没有菌落，最后将培养皿中的菌落数目加总，即为菌落总数。

2. 使用滤过法：将一定量的样品液体滤过纱布，将滤过纱布上的菌落洗到一个干净的培养皿中，然后将培养皿中的菌落洗到另一个干净的培养皿中，以此类推，直到滤过纱布上没有菌落，最后将培养皿中的菌落数目加总，即为菌落总数。

菌落总数的计算方法一般有两种： 1. 拉曼-摩尔法：拉曼-摩尔法是一种常用的计算菌落总数的方法，它使用一种特殊的紫外线技术，通过测量样本中菌落的紫外吸收光谱，来估算出菌落总数。

2. 尿液抗原测定法：尿液抗原测定法是一种常用的计算菌落总数的方法，它使用一种特殊的免疫学技术，通过测量样本中菌落的抗原，来估算出菌落总数。

计算菌落总数的方法有多种，下面以液体培养基中的菌落总数计算为例进行说明： 1. 把液体培养基倒入平板，用滴管滴取0.1ml的液体培养基，滴在平板上，形成一个菌落。

2. 用移液器把菌落均匀地挤压到一个新的平板上，每个菌落挤压成一个点。

3. 用放大镜观察菌落，计算出菌落总数。

4. 把菌落总数乘以10，即可得出液体培养基中菌落总数。

计算菌落总数的方法有多种，下面以一种计算菌落总数的方法为例说明：1. 在培养皿中放入一定量的培养基，把培养皿放入培养箱中，控制好培养箱的温度、湿度、光照等环境条件，使之符合待培养菌落的生长条件； 2. 在培养皿中接种待培养菌落； 3. 将培养皿放入培养箱，在适宜的条件下培养； 4. 根据观察结果，计算出培养皿中的菌落总数：菌落总数=菌落数量×培养皿数量。

菌落总数的计算方法： 1. 将待测样品涂到特定培养基上，在一定条件下培养，形成菌落； 2. 统计菌落总数：根据菌落的形状大小，使用特定的计数方法来统计菌落总数，如比较法、点数法、投影法等； 3. 计算菌落总数：根据统计的菌落总数，按照特定的公式计算出菌落总数。

2021届高三生物一轮复习——微生物的筛选和计数知识梳理1.微生物分离的原理与措施(1)原理：自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物应首先采用的方法是将单个的细胞与其他细胞分离，再给细胞提供合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。

(2)常用措施①接种过程中尽量使细胞分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。

②运用选择培养基的作用特点，在培养基中添加某种特定的物质，抑制不需要的微生物的生长，促进所需微生物的生长。

2.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)筛选菌株的原理在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。

(2)统计菌落数目的方法：一般用稀释涂布平板法。

具体操作如下。

①设置重复组，增强实验的说服力与准确性。

将待测样品经一系列10倍稀释，选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布于整个平板表面，放在适宜的温度下培养，计算菌落数。

为使结果接近真实值，可将同一稀释度的样液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。

②为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300个的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。

③计算公式：每克样品中的细菌数＝(C/V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。

[提醒]此种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

(3)实验流程：土壤取样→配制土壤溶液和制备培养基→系列稀释→涂布平板与培养→菌落计数选择培养基四种常见制备方法或实例1.(2015·江苏卷，19)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是()A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上解析本题考查微生物的分离与培养的相关知识。

高三生物复习——微生物的筛选和计数知识梳理1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。

(2)统计菌落数目一般用稀释涂布平板法。

样品的稀释和稀释液的取样培养流程如下。

①统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。

②从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是(某一稀释度下平板上生长的平均菌落数÷涂布平板时所用的稀释液的体积)×稀释倍数。

③利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度。

(3)实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。

2．分解纤维素的微生物的分离(1)纤维素酶①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C 1酶、C X 酶和葡萄糖苷酶。

②原理纤维素――→C 1酶C X 酶纤维二糖――――→葡萄糖苷酶葡萄糖 (2)纤维素分解菌的筛选①原理纤维素分解菌↓⎭⎪⎬⎪⎫刚果红纤维素→红色复合物――――→纤维素酶红色消失，出现透明圈。

②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

③培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。

④实验流程土壤取样：富含纤维素的环境↓选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度↓梯度稀释：制备系列稀释液↓涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上↓挑选产生透明圈的菌落(1)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类(×)(2)对细菌进行计数能采用稀释涂布平板法，也能用平板划线法(×)(3)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源(√)(4)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低(×)(5)刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌(×)易错警示尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基，前者所用的培养基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。