化学发光免疫技术与时间分辨技术的异同点

化学发光免疫分析与其他方法对比化学发光免疫分析（Chemiluminescent Immunoassay, CLIA）是一种高灵敏度和高特异性的分析方法，常用于检测血液中的生物标志物以及其他生物样品中的分析物。

与其他常用的分析方法相比，化学发光免疫分析具有以下特点：1. 高灵敏度：化学发光免疫分析使用化学荧光产生光信号，荧光强度较高，大大提高了检测灵敏度。

正常情况下，化学发光免疫分析的灵敏度可达到ng/mL或pg/mL级别。

2.高特异性：化学发光免疫分析使用特异性的抗体或配体与待测物结合，能够准确地检测目标物质，避免了其他背景物质的干扰，保证了结果的准确性和可靠性。

3. 宽线性范围：化学发光免疫分析可在一个较宽的浓度范围内进行定量分析，通常可以在pg/mL到μg/mL范围内准确测量待测物质的浓度。

4.快速：化学发光免疫分析的反应速度较快，通常只需要几分钟到几十分钟就可获得结果。

这使得化学发光免疫分析在临床医学等领域中得到广泛应用。

5.自动化程度高：化学发光免疫分析通常使用酶标仪或化学发光仪进行测量，并且具备连续连续、多重测量和自动分析等功能，可适应高通量、多样品同时处理的需求。

除了化学发光免疫分析，目前常用的其他方法包括酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）、放射免疫分析（Radioimmunoassay, RIA）和免疫荧光分析（Immunofluorescence Assay, IFA）等。

与这些方法相比，化学发光免疫分析具有以下优势：1.安全性高：化学发光免疫分析不需要使用放射性物质，相比放射免疫分析更为安全，没有放射性污染的风险。

2.操作简便：化学发光免疫分析的操作相对简单，只需将样本和试剂添加到试验板中，并通过酶标仪或化学发光仪进行测量，不需要繁琐的实验步骤和长时间的操作。

3.灵敏度更高：相对于常规的ELISA方法，化学发光免疫分析的灵敏度更高。

免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高，一般的酶免检测技术已逐渐无法适应这种形势的需要。

现今发展的主流已不再是用放射性同位素标记的测定方法(避免污染环境及对人体损害)，而是转向于能在任何地方操作的快速均相和固相测定，最终趋向于能够枪测到皮克或10负18摩尔级的、非同位素的、自动或半自动的实验室测定技术，发光免疫分析技术顺应了这一潮流，开创了免疫诊断的新纪元。

发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术。

70年代末以来得到了迅速发展，目前在国际上已经实现商品化和产业化的发光免疫分析产品，基本上可以分为：化学发光、时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光)、电化学发光(也称场致发光和电致发光)几种。

1、化学发光化学发光是指在化学反应过程中发出可见光的现象。

通常是指有些化合物不经紫外光或可见光照射，通过吸收化学能(主要为氧化还原反应)，从基态激发至激发态。

退激时通过跃迁(或将激发能转移至受体分子上)，释放能量产生光子，以光形式放出能量从而导致的发光现象。

其主要特点为消耗发光剂。

同时量子效率相对较低。

1.1 按化学反应类型分类：可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。

其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、碱性磷酸酶 (ALP)系统、黄嘌呤氧化酶系统等。

酶促发光的共同特点为发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，而反应体系中发光剂充分过最，因此发光信号强而稳定，且发光时间较长。

因此可采用速率法测量，故检测方式简单、成本较低。

酶促反应的主要缺点为工作曲线可能随时间漂移，而且低端斜率容易呈非线性下移。

而非酶促化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁一鲁米诺系统等。

非酶促发光的共同特点为发光过程中标记物被消耗，同时作为标记物的发光剂是发光反应的瓶颈，即含量总是相对不足，因此发光信号持续时间较短；如果直接在免疫反应杯中启动发光反应，由于发光剂被很快消耗，故只能进行一次性测量。

所以重复性较差。

时间分辨荧光免疫法和电化学发光法检测AFP的比较仝德胜;许国新;沈国强【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2010(028)001【摘要】目的对时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA法)国产试剂盒与电化学发光免疫分析法(ECLIA法)检测血清AFP作比较分析,了解两种方法特点.方法分别采用国产TRFIA法试剂盒与ECLIA法检测正常人50例、肝癌患者40例血清AFP的含量:用高、中、低3种浓度AFP标准品采用两种方法进行批内测定,n=10,观察重复性,所得结果计算CV值;将高值标准品血清(250 ng/ml)按1:1比例加入每份正常对照组血清中,肝癌组病人血清与生理盐水按1:1稀释后再按1:1比例加入高值标准品血清(250ng/ml).每份检测2 次(TRFIA法)取平均值,计算回收率.结果肝癌组AFP值(TRFIA法:558±319.10ng/ml;ECLIA法:552.31±302.67g/ml)明显高于正常组(TRFAIA:6.51+5.42ng/ml;ECLIA法:6.32±5.14ng/m)(P<0.05),两种方法结果无显著差异(P>0.05).其相关系数为0.9150,测定结果呈正相关.高、中、低3种浓度标准品的重复性试验TRFIA法与ECLIA批内变异系数分别低于7.9%和3.1%,后者优于前者,两种方法略有不同.无明显差异(P>0.05).回收试验结果 ,TRFIA 法回收率在92.3%～103.9%.结论国产TRFIA法试剂盒和ECLIA法检测AFP相比较具有良好的相关性,灵敏度和稳定性也较好,可应用于临床血清AFP检测.【总页数】2页(P45-46)【作者】仝德胜;许国新;沈国强【作者单位】江苏省血吸虫病防治研究所,江苏无锡,214064;无锡市第四人民医院;无锡市滨湖医院【正文语种】中文【中图分类】R446.62;R735.7【相关文献】1.酶联免疫法与电化学发光法检测AFP肿瘤标志物结果的对比分析 [J], 韩晓燕2.时间分辨荧光免疫法定量检测AFP试剂盒临床应用研究 [J], 徐伟文;吴英松;杭建峰;王从容;周志聪;余伟鸿;裘宇容;李明3.酶联免疫法与电化学发光法检测AFP肿瘤标志物结果的对比分析 [J], 韩晓燕;4.电化学发光法与时间分辨荧光免疫法检测AFP的临床应用 [J], 邬登敏;陈启红;柳兵;曾同祥5.时间分辨荧光免疫法与电化学发光法检测结直肠肿瘤标志CEA的比较 [J], 张青云;孙丽;张书耕;王琼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

化学发光免疫技术与时间分辨技术的异同点概念化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。

是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）是以镧系元素标记抗原或抗体，并与时间分辨测定技术结合而建立起来的一种新型非放射性微量免疫分析技术，它根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。

原理化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。

化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。

免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。

鲁米诺(1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinim?ester)衍生物、辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)和碱性磷酸酶(alkaline?phosphatase，ALP)是目前CLIA中使用最多的四类标记物。

时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）基本原理用三价稀土离子及其鳌合剂作为示踪物，代替荧光物质、同位素或酶，标记蛋白质、激素、抗原、抗体、核酸探针等物质，当免疫反应体系发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点，用时间分辨荧光分析仪测定免疫反应最后产物中荧光强度。

根据荧光强度或相对荧光强度比值，来判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析之目的。

化学发光免疫技术与时间分辨技术的异同点概念化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,),是将具有高灵敏度的测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。

是继放免分析、酶免分析、和之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）是以标记抗原或抗体，并与时间分辨测定技术结合而建立起来的一种新型非放射性微量免疫分析技术，它根据镧系元素的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。

原理化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和分析系统。

化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。

免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。

鲁米诺(1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinimester)衍生物、辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)是目前CLIA中使用最多的四类标记物。

时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）基本原理用三价稀土离子及其鳌合剂作为示踪物，代替荧光物质、同位素或酶，标记蛋白质、激素、抗原、抗体、核酸探针等物质，当免疫反应体系发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点，用时间分辨荧光分析仪测定免疫反应最后产物中荧光强度。

根据荧光强度或相对荧光强度比值，来判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析之目的。

应用（CLIA）各种激素、病毒抗原抗体、肿瘤标志物、感染性疾病、心脏标志物、治疗药物检测等各种抗原、抗体和半抗原时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）应用广泛1. 多肽类：蛋白质、激素（、甾体类激素）。

高级卫生专业资格（正高副高）临床医学检验临床免疫专业资格(正高副高)模拟题2021年(72)(总分94.XX02,考试时间120分钟)A1/A2题型1. 冷球蛋白出现沉淀时的温度是( )A. 25℃B. 37℃C. 20℃D. 4℃E. 8℃2. 流式细胞仪光学系统的组成为( )A. 激光系统B. 激光光源与分光镜C. 激光光源、分光镜与光束成形器D. 激光光源、分光镜、光束成形器和透镜组E. 激光光源、分光镜、光束成形器、透镜组、滤片和光电倍增管3. 在形成的连串均匀液滴中，大量液滴是( )A. 含有细胞B. 含有淋巴细胞C. 含被荧光染色的淋巴细胞D. 不含细胞的空白液滴E. 以上都不是4. 目前临床诊断淀粉样变性的“金标准”应当是( )A. 尿蛋白检查B. 血清蛋白免疫电泳分析检查C. 血液中某些前体蛋白的检查D. 利用组织学或免疫组化技术做组织学检查E. 血液常规分析检查5. 编码蛋白质都能与GTP结合的癌基因家族为( )A. mybB. mycC. sisD. rasE. erb6. 细胞内寿命最短的RNA是( )A. tRNAB. mRNAC. snRNAD. rRNAE. 环状RNA7. 检测经凝胶电泳分离后转移到膜上的RNA，常用的方法为( )A. 菌落印迹杂交B. 斑点杂交C. 原位杂交D. Southern印迹杂交E. Northern印迹杂交8. 肿瘤的发生发展经过不包括( )A. 激发阶段B. 浸润阶段C. 促发阶段D. 转移阶段E. 结束阶段9. 外分泌液中含量最高的Ig是( )A. IgMB. IgGC. IgAD. IgEE. IgD10. 免疫电泳最常用的载体是( )A. 醋酸纤维薄膜B. 琼脂糖凝胶C. 淀粉凝胶D. 果胶E. 葡聚糖11. 免疫固定电泳最常用于分析( )A. 异常免疫球蛋白B. 肌钙蛋白C. 肌红蛋白D. M蛋白的鉴定与分型E. 免疫球蛋白亚型12. 下列哪项方法不属于荧光免疫显微技术类型( )A. 直接法B. 间接法C. 夹心法D. 补体结合法E. 双标记法13. E-选择素主要表达在哪一种细胞上( )A. 中性粒细胞B. 红细胞C. 单核细胞D. 淋巴细胞E. 活化内皮细胞14. 细胞外可溶性粘附分子的最常用的测定方法是( )A. 原位PCRB. 原位RT-PCRC. 化学发光免疫测定方法D. RT-PCRE. ELISA15. 下列哪一种免疫分子具有粘附作用( )A. CD3B. mIgC. CD28D. CKRE. Igα/Igβ16. 细胞增殖法适用于下列哪类细胞因子的检测( )A. 促进细胞增殖的细胞因子B. TNFC. IFND. 具有趋化活性的细胞因子E. 细胞因子基因17. 用兔抗人Ig抗体包被塑料平皿或细胞培养板，则吸附于亲和层析板上的细胞是( )A. 淋巴细胞B. T细胞C. B细胞D. NK细胞E. 吞噬细胞18. 下列ANA中以第一位检出该抗体的患者命名的有( )A. 抗dsDNA抗体B. 抗SSA抗体C. 抗RNP抗体D. 抗DNP抗体E. 抗Sm抗体19. 位于HLA复合体Ⅰ类基因与Ⅱ类基因之间的Ⅲ类基因是( )A. HLA-E、F、GB. 编码补体、某些炎症因子的相关基因C. HLA-A、B、CD. HLA-E、F、G、H、X等E. HLA-DP、DQ、DR20. 流式细胞分析技术中设置的同型对照是( )A. 免疫荧光标记中的阳性对照B. 免疫荧光标记中的阴性对照C. 免疫荧光标记中的光校正D. 免疫荧光标记中的流路校正E. 免疫荧光标记中的绝对计数校正21. 关于时间分辨荧光免疫测定与电化学发光免疫分析的不同之处，下列说法错误的是( )A. 抗原抗体反应的原理不同B. 激发能源不同C. 发光的物质不同D. 检测系统不同E. 检测原理不同22. 目前公认类风湿关节炎的标志抗体是( )A. 抗Sm抗体B. 抗SSB抗体C. 抗环瓜氨酸肽抗体D. 抗dsDNA抗体E. 抗RNP抗体23. 下列几种细胞因子中，与多发性骨髓瘤关系最为密切是( )A. TNFB. IL-2C. IFND. TGFE. IL-624. 凝胶滞后实验的基本原理是( )A. 蛋白质与末端标记的核酸探针特异性结合B. 蛋白质与末端标记的蛋白质探针特异性结合C. 蛋白质与末端标记的单克隆抗体特异性结合D. 蛋白质与末端标记的某种酶特异性结合E. 蛋白质与末端标记的生物分子特异性结合25. 常采用质粒DNA小量提取的方法是( )A. 碱裂解法B. SDS裂解法C. 煮沸裂解法D. 酚抽提法E. 牙签少量制备法26. 关于PCR的建立，最早是( )A. 1983年，美国人建立B. 1985年，美国人建立C. 1983年，英国人建立D. 1985年，英国人建立E. 1983年，德国人建立27. 抑癌基因失活的常见方式是( )A. 点突变B. 碱化C. 甲基化程度降低D. 插入E. 染色体易位28. 下列属于隐蔽抗原的物质是( )A. AFPB. ABO血型物质C. 甲状腺球蛋白D. 受药物影响的细胞E. 免疫球蛋白29. 用于M蛋白鉴定( )A. 间接凝集试验B. 双向免疫扩散C. 免疫电泳D. 对流免疫电泳试验E. 免疫比浊30. 可作为定量测定的免疫电泳技术是( )A. 对流免疫电泳B. 火箭电泳C. 交叉免疫电泳D. 免疫电泳E. 免疫固定电泳31. 间接法ELISA中，形成的免疫复合物是( )A. 固相抗体-抗原-酶标抗体B. 固相二抗-IgM-抗原-酶标抗体C. 固相抗体-酶标抗原D. 固相二抗-抗体-酶标抗原E. 固相抗原-抗体-酶标二抗32. 下述哪种粘附因子测定可作为已分化的甲状腺癌的一个独立的预后指标( )A. LI-钙粘素B. 整合素C. 免疫球蛋白超家族D. E-钙粘素E. E-选择素33. 下列属于T细胞增殖试验的观察判定方法是( )A. 形态法和酶联免疫斑点实验B. 形态法和反向溶血空斑实验C. 形态法和放射性核素法D. 放射性核素法和反向溶血空斑实验E. 反向溶血空斑实验和酶联免疫斑点实验34. 细胞淘洗技术是指( )A. 利用阳性细胞吞噬磁铁颗粒进行细胞分离B. 利用阴性细胞吞噬磁铁颗粒进行细胞分离C. 直接用磁铁吸附阳性细胞进行细胞分离D. 直接用磁铁吸附阴性细胞进行细胞分离E. 将混合细胞在含磁铁颗粒的溶液中离心进行细胞分离35. 3H-TdR掺入法属于( )A. 免疫学定性B. 免疫学定量C. 生物学检测D. 原位杂交E. 斑点杂交36. 下列关于PEG比浊法的描述，错误的是( )A. PEG用于沉淀蛋白质具有可逆性，对蛋白质生物活性无影响B. 在pH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的PEG的浓度越小C. PEG比浊法特异性强D. 不能反映小分子循环免疫复合物的情况E. 受温度变化影响大，重复性差37. 下列关于自身抗体特性的描述，错误的是( )A. 自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志B. 病人血液中存在低效价自身抗体是免疫病特点之一C. 某些自身抗体对疾病判断有高度特异性D. 有些自身抗体与疾病活动性有关E. 少数自身抗体被证实参与了免疫病理性损伤38. 下列哪项属于HLA复合体的非经典Ⅱ类基因区( )A. HLA-E、F、GB. HLA-DN、DO、DMC. HLA-A、B、CD. HLA-E、F、G、H、XE. HLA-DP、DQ、DR39. 流式细胞仪进行细胞分选时采用高压静电场，则( )A. 分选细胞充电，未被分选的其他细胞和空白液滴不充电B. 分选细胞不充电，未被分选的其他细胞和空白液滴充电C. 分选细胞和空白液滴充电，未被分选的其他细胞不充电D. 分选细胞和未被分选的其他细胞充电，空白液滴不充电E. 分选细胞、未被分选的其他细胞及空白液滴均充电40. 一台好的流式细胞仪每秒钟可测定荧光染料粒子( )A. 5000个B. 4000个C. 3000个D. 2000个E. 1000个41. 肿瘤细胞表达的能介导肿瘤特异性T细胞凋亡的是( )A. CD28B. FasC. FasLD. TAP-1E. B742. p53 ( )A. 是抑癌基因B. 是癌基因C. 野生型p53是抑癌基因D. 既不是癌基因又不是抑癌基因E. 突变型p53是抑癌基因43. 作为理想质粒，应该具备下列条件，错误的是( )A. 具有松弛型复制子B. 在复制子外存在几个单一的酶切位点C. DNA聚合酶ⅢD. 具有粘性末端E. 分子量相对较少但有较高的拷贝数44. 下列质粒中属于天然质粒的是( )A. pBR322质粒载体B. RSF2124C. pUC质粒载体D. M13E. 粘粒45. 生物芯片作用的原理是( )A. 分子杂交B. 抗原抗体反应C. 生物分子间特异性相互作用D. 荧光定量E. 亲和层析46. 与蛋白质载体结合后才具有免疫原性的物质是( )A. 完全抗原B. TD抗原C. TI抗原D. 半抗原E. 自身抗原47. 免疫电泳是( )A. 区带电泳与双向免疫扩散相结合的技术B. 电泳与单向免疫扩散相结合的技术C. 电泳与双向免疫扩散相结合的技术D. 区带电泳与免疫沉淀反应相结合的技术E. 电泳与环状沉淀反应相结合的技术48. 用于抗原或抗体的定性、组成和两种抗原相关性分析的方法是( )A. 间接凝集试验B. 双向免疫扩散C. 免疫电泳D. 对流免疫电泳试验E. 免疫比浊49. 用于标记蛋白质醛基的，适用范围较BHZ宽的活化生物素是( )A. BCNHSB. BCHZC. BHZD. 光生物素E. 生物素脱氧核苷三磷酸50. CD28分子主要表达在哪一种细胞上( )A. 肥大细胞B. 单核细胞C. NK细胞D. T细胞E. MΦ51. Ficoll淋巴细胞分层液的主要成分是( )A. 聚蔗糖-泛影葡胺B. 聚蔗糖-聚乙二醇C. 聚乙二醇D. 聚蔗糖E. 泛影葡胺52. 下列有关免疫磁珠分离法的说法不正确的是( )A. 免疫磁珠分离法分为直接法和间接法，其分离效果可与流式细胞术媲美B. 直接法是利用特异性抗体与磁性微粒交联形成免疫磁珠，与表达相应膜抗原的细胞结合，应用强磁场分离，从而对特定细胞进行阳性或阴性分选C. 间接法是用第二抗体包被磁性微珠D. 免疫磁珠分离法阳性分选中抗体可导致细胞活化或细胞凋亡E. 免疫磁珠分离法不可同时进行细胞阳性分选和阴性分选。

时间分辨免疫荧光与化学发光法、酶联免疫法测定乙肝标志物的比较摘要目的: 比较化学发光免疫测定（CL）、酶联免疫（EIA）与时间分辨免疫荧光（TRFIA）三种方法检测乙肝病毒免疫标志物的优缺点。

方法: 用上述三种方法的检测试剂及仪器对189例临床血清标本分别进行检测，然后进行结果分析。

结果: 三者对乙肝表面抗原的检测灵敏度均达到了0.1ng/ml。

对HBcAb的测定，以CL的灵敏度最高，ELISA最低。

对表面抗体、E抗原及E抗体的检测，相互符合率均在95%以上，但对核心抗体的检测符合率，TRFIA与CL为83.23%，TRFIA与EIA为85.19%。

结论: 三种方法的检测性能相差不大，但操作性各有特点，应按各实验室具体情况加以选择。

关键词：化学发光法，酶联免疫试验，时间分辨荧光免疫测定本文作者:肖征周薇薇白立彦赵莉萍parison of chemiluminescence, ELISA and time-resolved fluoroimmunoassay in detecting Hepatitis B markers肖征，副主任医师，副教授周薇薇，主管技师白立彦，主管技师赵莉萍，主管技师解放军总医院微生物科，100853Zheng Xiao, Weiwei Zhou, Liyan Bai, Liping ZhaoGeneral Hospital of PLA, Beijing, 100853 PRCAbstractSubject:To pare three deferent assays to see their abilities in detecting hepatitis B markers.Methods：By using Chemiluminescence (CL), ELISA and Time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA), 189 serum samples were tested for hepatitis B markers, then the results were analyzed.Results:The three assays all can detect as low as 0.1ng/ml of HBsAg. But in HBcAb, The CL showed the highest sensitivity, ELISA showed the lowest sensitivity. The coincidences of the three methods in detecting HBsAb, HBeAg, and HBeAb are normally above 95%, but for HBcAb, the coincidence was 83.23% between TRIF and CL, and 85.19% between TRIFA and EIA.Conclusion:There were not much difference among these three methods regarding their abilities in detecting hepatitis B markers, but the maneuver flexibilities of each method differed a lot. One should consider his own lab's situation before making choice.Key words:chemiluminescence, ELISA, time-resolved fluoroimmunoassay自二十世纪七十年代以来，许多高灵敏度的测定方法应用于临床免疫学检测。

化学发光免疫分析技术原理及特点对比一、化学发光免疫分析技术原理自从二十世纪七十年代开创化学发光技术以来，世界各国科学家在这个技术的基础上不断研究发展，以改善此技术在人体医学检验上的应用，通过不懈的努力探索，最终化学发光技术进入临床测试应用，为人类健康检验做出了重要的贡献。

时至今日，化学发光免疫分析作为一种微量物质定量检测技术，已经发展的先进且成熟，在人体疾病筛查和健康检测等方面，有着十分重要的作用。

化学发光免疫分析结合了化学发光反应和免疫学的特点，通过将发光物质或酶标记在抗原或抗体上，抗原或抗体与待测物质发生特异性结合，随后加入氧化剂、化学发光底物或是电压的激发，通过氧化剂氧化发光物质，酶催化发光底物或是发光物质在电压的激发下形成高能的激发态，由于激发态不稳定，再回到基态过程中会以光的形式释放出能量，同时由于待测物浓度与发光强度在一定条件下呈线性定量关系，因此借助仪器检测发光的强度就可以确定待测物的含量。

以测定人绒毛膜促性腺激素(HCG)为例(图)，待测物HCG首先与酶标记的抗体以及发光标记物标记的抗体反应，形成双抗体夹心复合物，随后再加入与含有与发光标记物结合的磁珠，通过磁铁将复合物聚集，最后加入发光底物产生光信号进行定量。

图-人绒毛膜促性腺激素化学发光测定原理二、不同化学发光免疫分析技术特点对比根据标记物的不同，化学发光可大致分为：利用吖啶酯、鲁米诺等进行标记的直接化学发光免疫分析(Chemiluminescence immunoassay，CLIA)、利用如辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶等标记的酶促化学发光免疫分析(Chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA)和利用三联吡啶钌等标记的电化学发光免疫分析(Electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA)。

直接化学发光免疫分析发光过程十分快速，在几秒钟之内就可以完成，而酶在一般情况下稳定性较好，如辣根过氧化物酶处于室温下可以在几周内保持稳定，且具有较高的特异性，发光时间较直接化学发光法更长，可以持续几分钟到十几分钟，电化学发光法处于电解池介质中反应因而可以反复使用。

甲状腺功能的实验室检测的原理及方法甲状腺功能实验室检查主要包括甲状腺激素、促甲状腺激素、甲状腺激素结合球蛋白和相关自身抗体检测。

目前认为，联合进行游离三碘甲状腺原氨酸，游离甲状腺素和超敏促甲状腺激素测定，是甲状腺功能评估的首选方案和第一线指标。

甲状腺激素的测定多采用免疫分析法，但传统的放射免疫法灵敏度有限，不能区别正常人低值和原发性甲亢。

化学发光免疫法和时间分辨荧光免疫法都更为灵敏、准确，其检测限可达0.001mIU/L。

但无论检测方法灵敏度多高，结果多准确，都必须结合临床和其他甲状腺功能检查才能做出正确诊断和治疗决策。

一、甲状腺素甲状腺素（thyroxine，T4）检测具有多种方法，传统检测方法采用放射性碘标记的放射免疫法。

但其操作过程繁琐，在临床应用中受到一定限制。

时间分辨荧光免疫法和电化学发光法均是目前最先进的标记免疫测定技术，其检测快捷，敏感度高，近年来在临床T4 检测中被广泛应用。

时间分辨荧光免疫法测定血清总甲状腺素如下：1.原理加入待测血清、铕标记T4和鼠抗T4的单克隆抗体（单抗）温育，试剂中的8-苯胺-1-萘磺酸（ANS）能将结合状态的T4游离出来。

抗T4单抗和包被在微孔板上的二抗结合的同时，样本中的T4和铕标记T4竞争结合抗T4单抗上的结合位点，温育后洗板，加入解离增强液将标记在复合物中的铕离子解离至溶液中，与增强液中的有关成分形成荧光螯合物微囊，发出的荧光强度与样品中的总甲状腺素（total thyroxin，TT4）浓度成反比。

2.试剂与仪器购买成套的商品试剂盒，主要成分如下：已包被第二抗体的96微孔反应板，T4标准品（6瓶，分别含0、20、50、100、150和300nmol/L 的T4标准品），抗T4单克隆抗体（含ANS），铕标记T4（含ANS），浓缩洗液（25×），缓冲溶液，增强液。

3.操作（1）试剂准备：1）洗涤液：40ml浓缩洗液加960ml蒸馏水混合（pH 7.8）。

免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高，一般的酶免检测技术已逐渐无法适应这种形势的需要。

现今发展的主流已不再是用放射性同位素标记的测定方法(避免污染环境及对人体损害)，而是转向于能在任何地方操作的快速均相和固相测定，最终趋向于能够枪测到皮克或10负18摩尔级的、非同位素的、自动或半自动的实验室测定技术，发光免疫分析技术顺应了这一潮流，开创了免疫诊断的新纪元。

发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术。

70年代末以来得到了迅速发展，目前在国际上已经实现商品化和产业化的发光免疫分析产品，基本上可以分为：化学发光、时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光)、电化学发光(也称场致发光和电致发光)几种。

1、化学发光化学发光是指在化学反应过程中发出可见光的现象。

通常是指有些化合物不经紫外光或可见光照射，通过吸收化学能(主要为氧化还原反应)，从基态激发至激发态。

退激时通过跃迁(或将激发能转移至受体分子上)，释放能量产生光子，以光形式放出能量从而导致的发光现象。

其主要特点为消耗发光剂。

同时量子效率相对较低。

1.1 按化学反应类型分类：可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。

其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、碱性磷酸酶 (ALP)系统、黄嘌呤氧化酶系统等。

酶促发光的共同特点为发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，而反应体系中发光剂充分过最，因此发光信号强而稳定，且发光时间较长。

因此可采用速率法测量，故检测方式简单、成本较低。

酶促反应的主要缺点为工作曲线可能随时间漂移，而且低端斜率容易呈非线性下移。

而非酶促化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁一鲁米诺系统等。

非酶促发光的共同特点为发光过程中标记物被消耗，同时作为标记物的发光剂是发光反应的瓶颈，即含量总是相对不足，因此发光信号持续时间较短；如果直接在免疫反应杯中启动发光反应，由于发光剂被很快消耗，故只能进行一次性测量。

所以重复性较差。

比较几种免疫检测的异同免疫学课后作业比较几种免疫标记技术的异同。

答：根据标记物种类的不同，免疫标记技术可以分为放射免疫分析、酶标记免疫分析、荧光标记免疫分析、化学发光标记免疫分析、胶体金标记免疫分析技术，它们之间具有相同点，也有不同之处，现将其归纳如下。

一、相同点主要包括以下几个方面：1、均具有高特异性。

五种免疫标记技术的免疫技术都是采用抗原抗体反应，而抗原与抗体的结合是一一对应、特异性结合的，故它们都具有非常高的特异性。

2、均具有高灵敏性。

由于五种免疫标记技术的标记技术均采用示踪物标记，例如酶、放色性核素、荧光素、胶体金以及致密物质等，当与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物本身，只需测定复合物中的标记物，通过化学或物理的手段使不见的反应放大，转化为可见的、可测知的光、色、电、脉冲等信号，并可借助仪器精密测定，从而间接测出微量的抗原或抗体。

3、检测对象相同。

除了放射免疫技术只能检测抗原外，其他四种免疫标记技术均可检测抗原或者抗体，即通过已知抗原(或抗体)特异性结合待测抗体（或抗原），从而定性或定量地测出抗体或抗原。

4、免疫标记的程序基本相同。

其包括纯化抗原或抗体、确定标记物质（即决定了最终的检测方式）、进行标记、对标记产物分离纯化和分析鉴定等一系列程序。

二、不同点主要包括以下几个方面：1、检测原理不一样。

首先，酶免疫技术是以酶标记的抗体（或抗原）作为主要试剂，将抗原-抗体反应的特异性和酶催化底物反应高效性和专一性结合起来的一种免疫方法，其对作为标记用的酶具有特定的要求，如活性高、纯度高等；放射免疫标记技术是以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法；免疫荧光技术是以荧光素作为标记物与已知的抗体或抗原结合，然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂，用于检测和坚定未知的抗原，其对用于标记的荧光素也有特定的要求，如荧光效率高，与蛋白质结合稳定，易于保存等；发光免疫分析技术是将发光分析与免疫反应相结合而建立的一种新型超微量分析技术，它是使用发光剂标记抗体（或抗原），通过发光检测抗原（或抗体）反应的免疫分析方法；免疫胶体金标记技术则是以胶体金作为示踪标记物，而胶体金在碱性环境中带负电荷，与抗体蛋白质分子的正电荷基团因静电而形成牢固结合应用于抗原抗体反应的一种新型免疫检测方法。