酶相关实验复习总结

三一文库（）〔“酶工程”_暑期科研实践_实习_报告_总结 2100字 - 总结范文〕“酶工程”暑期科研实践总结报告生物科学与工程学院生物工程2班黄义林20xx30742333这次暑期科研实践，我和李洋、黄文潘都参加了有张俊辉师兄所负责的酶分子改造的项目，实际参加实验的时间是7月13至29号，以及8月16至19号。

在此之前，我们还参加了有郑穗平老师和林影老师讲授的关于酶的发展、现状以及前景的讲座，以及内容为负责各个项目的师兄对其项目讲解的培训。

参加实践前的讲座和培训都让我对酶的发展概况、研究方向有了更深刻全面的认识。

实验中，张俊辉师兄让我们从实验的开头开始，逐步学习实验过程中各阶段的实验操作，同时对专业知识进行讲解，让我们更好地掌握实验操作的原理。

在实验流程中，我们的操作都没有出现能直接导致实验失败的失误，但实验最后并没有得到想要的产物，原因应该是多方面的，也和我们的实验操作有很大关系。

实验没有得到很好的成果，但在实践过程中，我学习和掌握了一些基本实验操作技能及操作规范，并对实验室内的规章制度有了更多的了解。

下面说一下我在实验中学到的知识和其他心得体会。

首先是酶分子改造实验的思想：获得待改造酶分子的三维结构后，对其进行分析，从而确定可能改善酶某一方面性能的突变位点，通过反编译获得改造后的酶的基因，把这段基因再表达出来，就得到改造后的酶分子。

思想比较直接，但是实际操作却比较迂回，因为某些步骤看起来不复杂，但在现实中要实现就没有那么简单，比如要确定突变位点和突变的方向，目前的理论对蛋白质结构和功能的研究还达不到可以直接指导酶分子改造的那个层次，所以在改造的时候需要结合理性突变和随机突变，即理性确定突变位点，然后在那个位点进行全突变，或者增加突变位点；要获得反编译后的酶的基因，直接合成成本太高（1bp 要几块钱），所以需要对原来的基因进行操作（设计引物，通过PCR对酶基因进行全突变）；对改造后的酶的基因进行表达，需要利用基因工程技术，我们在实际操作中是先把基因和质粒连接，先转化大肠杆菌以增殖质粒，再从大肠杆菌中提取质粒，转化毕赤酵母进行最终的表达；因为设置多个突变位点以及每个突变位点都有二十种氨基酸，所以需要进行大量的筛选（筛选量随着突变位点的增长而呈指数增长）；基因既看不见有摸不着，在实验过程中需要对每一步的成果进行检测，比较多的就是依靠跑胶来检测DA分子的长度，确定是否得到目的基因，与突变后的酶基因进行连接的质粒上面要有抗生素抗性标记，转化后的大肠杆菌或毕赤酵母要用含抗生素的平板进行培养，以筛选出成功转化的菌落。

酶的对照实验总结归纳酶是一类具有生物活性的蛋白质分子，它在生物体内起到催化化学反应的作用。

针对酶的研究，对于深入了解酶的催化机理、酶的特性以及酶的应用具有重要意义。

对照实验是一种基于对比分析的实验方法，通过对照组与实验组进行对比，以期得出准确的实验结果和结论。

本文将对酶的对照实验进行总结归纳。

一、实验目的酶的对照实验旨在比较同一酶在不同条件下的活性差异，以研究影响酶活性的因素，如温度、pH值、底物浓度等，从而揭示酶的催化特性及其反应条件的最适合范围。

二、实验设计1. 温度对酶活性的影响：通过将酶溶液置放于不同温度下，分别进行活性测定，确定酶的最适温度。

2. pH值对酶活性的影响：将酶溶液置于不同酸碱度的缓冲液中，进行酶活性的测定，以确定酶的最适pH值。

3. 底物浓度对酶活性的影响：在一定温度和pH值条件下，分别使用不同浓度的底物进行酶活性测定，验证酶活性随底物浓度的变化趋势。

三、实验结果与讨论1. 温度对酶活性的影响：实验结果表明，在低温下，酶活性较低，随着温度的升高，酶活性呈增加趋势，但高温下酶活性开始降低。

最适温度为37摄氏度，超过或低于该温度都会导致酶活性下降。

2. pH值对酶活性的影响：酶在不同pH值条件下具有不同的活性。

实验结果显示，在碱性条件下（pH>7），酶活性较低；在酸性条件下（pH<7），酶活性逐渐增加。

最适pH值为7，也即中性条件下酶活性最高。

3. 底物浓度对酶活性的影响：酶活性随着底物浓度的增加而增加，但当底物浓度超过一定范围后，酶活性无明显增加。

这是因为酶分子的活性位点已饱和，无法再与更多底物结合进行反应。

四、实验结论酶的对照实验表明，酶活性受到温度、pH值和底物浓度等因素的影响。

最适温度为37摄氏度，最适pH值为7。

在适宜的温度和pH条件下，酶活性随底物浓度的增加而增加，但当底物浓度超过一定范围后，酶活性趋于稳定。

五、实验意义与应用酶的对照实验为深入研究酶的特性和催化机理提供了重要依据。

生物化学中的酶动力学实验与分析总结酶动力学是研究生物体内酶催化反应速率规律的一门学科。

通过实验与分析，可以深入了解酶的特性和反应机制。

本文将就酶动力学的实验设计、数据分析和结果解读进行总结。

一、实验设计1. 实验目的酶动力学实验的目的是测定酶催化反应的速率常数（Km和Vmax），以及研究酶的催化机制和底物浓度对反应速率的影响。

2. 实验方案a. 实验物质准备：选择适当的酶和底物，准备所需的酶活性测定试剂。

b. 实验条件设置：控制温度、pH值和离子浓度等实验条件，确保实验结果的准确性和可重复性。

c. 底物浓度梯度：制备一系列底物浓度不同的反应体系，并设置对照组。

d. 反应体系建立：将酶、底物和缓冲溶液等适量加入试管中，充分混合后开始定时记录反应时间。

e. 控制实验时间：观察反应的起始时间以及适当的结束时间，避免过长或过短的反应时间。

二、数据分析1. 绘制酶动力学曲线a. 计算反应速率：根据实验所记录的反应时间和底物浓度，计算得到反应速率。

b. 绘制底物浓度与反应速率的曲线：将底物浓度作为X轴，反应速率作为Y轴，用散点图的方式绘制。

c. 拟合动力学模型：根据实验所得数据，采用合适的拟合方法，得到符合实验结果的动力学模型。

2. 计算酶动力学参数a. Km值计算：通过酶动力学方程和数据拟合得到的动力学模型，计算得到酶底物复合物的解离常数Km。

b. Vmax值计算：由动力学模型计算酶饱和时的反应速率常数Vmax。

c. 其他参数计算：如果实验需要，还可以计算酶的催化效率、半饱和常数等。

三、结果解读1. Km值解读Km值表示底物浓度达到一半时酶反应速率的一半，是衡量酶与底物结合力强弱的指标。

较小的Km值表示酶与底物的亲和力较大。

2. Vmax值解读Vmax值表示酶催化反应速率的极限值，与酶的催化活性有关。

较大的Vmax值表明酶催化活性较高。

3. 反应机制解读根据实验结果和酶动力学方程，可以推断酶催化反应的可能机制，如竞争性抑制、非竞争性抑制等。

分子生物学实验常用工具酶总结————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期：现代分子生物学实验手册工具酶基因工程：在人工可以控制条件下,将基因剪切或重新组合,再导入另一生物体内,使这些基因在其中表达并遗传下去的一门技术。

核心:对基因进行人工切割、连接和重新组合，构建重组ＤNA。

工具酶:在基因工程的重组DNA过程中，所需要用到的酶的统称。

一、限制性内切酶(restriｃｔion endonuclease)主要功能:对外源性的双链ＤNＡ进行切割、水解，不允许外源性ＤNＡ存在于细菌自身细胞内。

(这种酶能对在自身细胞内存在的DＮA种类给予限制——限制性内切酶）限制-修饰系统:合成限制性内切酶的细胞,其自身的ＤNA不受酶的切割,这是因为细菌细胞还会合成一种修饰酶,可以对自身DNA进行修饰，即改变ＤNA 原来具有的可以被限制性内切酶识别的核酸顺序结构，从而不被限制性内切酶识别及切割、水解。

保护自身遗传物质稳定的机制。

限制性内切酶：从原核生物中发现的,约6０0种，可识别108种不同的特定ＤＮA顺序。

以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键，产生DＮA片段的5’端为P,3’端为-ﻩＯＨ。

命名：获得该酶的细菌属名的第一个字母（大写)＋该菌种名的前两个字母（小写）+株系的字母（小写）或数字+罗马数字(同一株菌种不同内切酶的编号）例:细菌属名细菌种名菌株名称限制酶名称Arthrobａcter luｔeuｓＡｌu IEｓcｈerichｉa coli RY１3Eco R ＩH Hａm H IBａｃiｌlus amyｌoｌiquｅｆaciｅnsHaemoｐｈilus influeｎzae Rd ＨinｄIII（一)三种常用内切酶1. I型限制性内切酶同时兼有切割DＮＡ的功能和修饰酶的修饰功能。

在酶的识别位点上,若ＤNA两条链菌没有发生甲基化,则行使内切酶的功能,对ＤＮA进行切割，同时转变成ATP酶。

一、鉴定酶的本质某科研小组经研究得知X酶存在于人的肝细胞中,能将糖原分解为还原糖.酶必须保持正常的结构才能发挥催化作用,请利用这一原理设计实验,探究X酶的化学本质究竟是蛋白质还是RNA.简要写出实验思路,并预期实验结果及结论(要求：实验包含可相互印证的甲、乙两个组).审题关键(1)据题干可知,X酶的功能是能将糖原分解为还原糖.(2)联想到蛋白酶可以改变蛋白质的空间结构从而使其失去功能.(3)RNA酶可以催化RNA发生水解从而使其失去功能.(4)若X酶的化学本质是蛋白质,被蛋白酶处理后,则不能将糖原分解为还原糖.(5)若X酶的化学本质是RNA,被RNA酶处理后,则不能将糖原分解为还原糖.(6)题干中要求设计甲、乙两组实验,二者之间要能相互印证,因此联想相互对照.答案(1)实验思路：甲组：将X酶用蛋白酶处理,再与糖原溶液混合,在适宜条件下保持一段时间后,检测是否有还原糖的产生.乙组：将X酶用RNA酶处理,再与糖原溶液混合,在适宜条件下保持一段时间后,检测是否有还原糖的产生.(2)预期结果及结论：①若甲组有还原糖生成,乙组没有还原糖生成,则说明X酶的化学本质是RNA；②若甲组没有还原糖生成,乙组有还原糖生成,则说明X酶的化学本质是蛋白质.鉴定酶本质的两种常用方法1．试剂检测法从酶的化学本质上来讲,绝大多数的酶是蛋白质,少数的酶是RNA.因此可利用双缩脲试剂与蛋白质作用产生紫色反应,RNA与吡罗红染液作用显红色的原理设计鉴定方案：2．酶解法从酶的化学本质上来讲,绝大多数的酶是蛋白质,少数的酶是RNA.酶必须保持正常的结构才能发挥催化作用,因此可以分别利用蛋白酶和RNA酶处理某酶,再观察其功能是否受影响来确定该酶的本质.设计鉴定方案：1．现有无标签的稀蛋清、葡萄糖、淀粉和淀粉酶溶液(淀粉酶的化学本质是蛋白质,可将淀粉水解成还原糖)各一瓶,可用双缩脲试剂、斐林试剂和淀粉溶液将它们鉴定出来.(1)用一种试剂将上述4种溶液区分为两组,这种试剂是____________,其中稀蛋清和________将发生________色反应.(2)用________试剂区分不发生显色反应的一组溶液.产生_________现象的为________溶液.(3)区分发生显色反应一组溶液的方法、鉴定结果及结论分别是：方法：将淀粉溶液分别与发生显色反应的两种溶液混合,一段时间后,用________试剂在一定条件下分别处理上述两种混合液.结果：其中一组产生了________________,另一组无明显现象.结论：发生显色反应的是__________溶液,不发生显色反应的是____________溶液.答案(1)双缩脲试剂淀粉酶紫(2)斐林砖红色沉淀葡萄糖(3)斐林砖红色沉淀淀粉酶稀蛋清解析(1)由于稀蛋清和淀粉酶溶液的化学本质是蛋白质,蛋白质能与双缩脲试剂发生紫色反应,而葡萄糖和淀粉属于糖类,不能与双缩脲试剂发生显色反应,所以可以用双缩脲试剂将4种溶液分为两组,其中稀蛋清和淀粉酶将发生紫色反应.(2)葡萄糖属于还原糖,可用斐林试剂鉴定,产生砖红色沉淀.(3)淀粉酶能将淀粉分解为麦芽糖,麦芽糖属于还原糖,所以加入淀粉后,用斐林试剂鉴定后出现砖红色沉淀的则为淀粉酶.所以可以将淀粉溶液分别与发生显色反应的两种溶液混合,一段时间后,用斐林试剂分别处理上述两种混合液,观察到无颜色变化的溶液是稀蛋清溶液,出现砖红色的是淀粉酶溶液.二、验证酶的高效性与专一性已知2H2O2===2H2O＋O2↑,可以通过观察反应过程中O2的生成速率(即气泡从溶液中释放的速率)来判断H2O2分解反应的速率.请用所给的实验材料和用具设计实验,使其能同时验证过氧化氢酶具有催化作用和高效性.要求写出实验步骤,预测实验结果,得出实验结论,并回答下列问题：实验材料与用具：适宜浓度的H2O2溶液,蒸馏水,3.5%FeCl3溶液,0.01%过氧化氢酶溶液,恒温水浴锅,试管.(1)实验步骤：①________________________________________________________________________.②________________________________________________________________________.③________________________________________________________________________.(2)实验结果预测及结论：整个实验中,不同处理的试管中O2的释放速率从快到慢依次是_____________________________________________________________,由此可得出的结论是______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________.(3)如果仅将实验中的恒温水浴改为80℃,重做上述实验,O2释放的速率最快的是______________________________________________________________________________,原因是________________________________________________________________________.审题关键(1)据题可知,该实验的目的是同时验证过氧化氢酶具有催化作用和高效性.(2)酶的催化作用和高效性是指分别与无催化剂和无机催化剂相对照,加快所催化反应的速率的现象,所以本实验的自变量为无催化剂、酶和无机催化剂(FeCl3).(3)由题干可知,本实验的因变量为H2O2分解反应的速率,表观因变量为气泡从溶液中释放的速率.无关变量有H2O2溶液量、温度及保温时间和蒸馏水、FeCl3溶液、过氧化氢酶溶液等液体的使用量等.(4)80℃恒温水浴条件下FeCl3催化作用加快,而过氧化氢酶因高温变性而失去了活性.答案(1)①取3支试管,各加入等量且适量的H2O2溶液,放入37℃恒温水浴锅中保温适当时间②分别向上述3支试管中加入等量且适量的蒸馏水、FeCl3溶液和过氧化氢酶溶液③观察各试管中释放气泡的快慢(2)加酶溶液的试管、加FeCl3溶液的试管、加蒸馏水的试管过氧化氢酶具有催化作用和高效性(3)加FeCl3溶液的试管在此温度下,过氧化氢酶因高温变性而失去了活性,而FeCl3仍有催化活性1．验证酶的高效性的实验设计模型项目实验组对照组材料等量的同一种底物试剂与底物相对应的酶溶液等量的无机催化剂现象反应速率很快,或反应用时短反应速率缓慢,或反应用时长结论酶具有高效性2.验证酶专一性的实验设计模型方案一方案二项目实验组对照组实验组对照组材料同种底物(等量) 与酶相对应的底物另外一种底物试剂与底物相对应的酶另外一种酶同一种酶(等量)现象发生反应不发生反应发生反应不发生反应结论酶具有专一性酶具有专一性2．甲、乙两位同学围绕酶的特性,设计了如下实验,请运用你所学的知识,指出该两位同学实验设计中存在的问题并提出修改方案.(1)甲同学探究酶的高效性：取一支试管,加入2mLH2O2,再加2滴新鲜土豆研磨液,观察到产生大量气泡,用带火星的卫生香检测,卫生香猛烈燃烧,说明酶的催化作用具有高效性.存在问题：_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________.修订方案：_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________.(2)乙同学利用下列相应的材料和用具设计验证酶具有催化性和专一性的实验.备选材料用具：蛋白质块,脂肪块,牛胰蛋白酶溶液,牛胰淀粉酶溶液,蒸馏水,双缩脲试剂,试管若干,恒温水浴锅,时钟等.实验步骤：①取两支洁净的相同试管,编号为甲、乙.②取5mL牛胰蛋白酶溶液加到甲试管中,再取等量牛胰淀粉酶溶液加到乙试管中.③将两支试管置于恒温水浴锅中,保温(37℃)5分钟.④分别加入等体积等质量的蛋白质块,其他条件相同且适宜.⑤一段时间后,分别加入等量的双缩脲试剂进行检测,记录实验结果. 上述实验步骤中,有二处明显错误,请找出这二处错误并更正第一处错误：__________________________________________________________________.修订方案：____________________________________________________________________.第二处错误：__________________________________________________________________.修订方案：____________________________________________________________________.答案(1)存在问题：甲同学缺少对照实验修订方案：增加对照组,用FeCl3溶液做对照(2)第一处错误：缺少对照组修订方案：增设一组加5mL蒸馏水和等体积等质量蛋白质块的试管第二处错误：不能用双缩脲试剂检测修订方案：应直接观测蛋白质块体积的大小三、探究酶的最适温度或最适pH为了探究某种淀粉酶的最适温度,某同学进行了如图所示的实验操作.实验步骤如下：步骤①：取10支试管,分为五组.每组两支试管中分别加入1mL某种淀粉酶溶液和2mL质量分数为5%的淀粉溶液.步骤②：将每组淀粉酶溶液和淀粉溶液混合并摇匀.步骤③：将装有混合溶液的五支试管(编号1、2、3、4、5)分别置于15℃、25℃、35℃、45℃、55℃水浴中.反应过程中每隔1分钟从各支试管中取出一滴反应液,滴在比色板上,加1滴碘液显色.回答下列问题：(1)实验原理：淀粉在淀粉酶的催化作用下分解成还原糖；淀粉酶的活性受温度影响；用碘液可检测淀粉,因为淀粉遇碘液变蓝,根据蓝色深浅来推断淀粉酶的活性.(2)该实验的设计存在一个明显的错误,即步骤②前应_________________________________________________________________________________________________________________.(3)在本实验中,各组溶液的pH要保证______________,该实验能否选用斐林试剂检测实验结果？__________,理由是________________________________________________________________________________________________________________________________________.(4)纠正实验步骤后,进行操作.一段时间后,当第3组试管中的反应物与碘液混合开始呈棕黄色时,各组实验现象如下表所示(“＋”表示蓝色程度).组别 1 2 3 4 5处理温度/℃15 25 35 45 55结果＋＋＋棕黄色＋＋＋分析上述实验结果,可以得出该淀粉酶的最适温度在____________________之间.某同学在进行本实验的过程中,发现反应时间过长.为缩短反应时间,请你提出合理的改进措施：________________________________________________________________________.审题关键(1)本实验的目的是探究某种淀粉酶的最适温度.(2)该实验中在酶溶液和反应物混合之前,需要先把两者分别放在各自所需温度下保温一段时间.(3)本实验的自变量为温度,因变量为酶的活性变化,本实验通过淀粉遇碘液变蓝的深浅来推断其变化,而各溶液pH属于无关变量,要保证相同且适宜.(4)低温抑制了酶的活性,但结构未被破坏,温度恢复升高时仍会有催化功能,所以该实验不能选用斐林试剂检测实验结果.(5)根据表中数据可知,第3组试管开始呈棕黄色,说明此试管中已经没有淀粉了,因此淀粉酶的最适温度介于25℃和45℃之间.为了加快反应,在不改变自变量的情况下,可适当增加酶量或适当降低底物的浓度. 答案(2)先将五组试管分别在15℃、25℃、35℃、45℃、55℃的水浴中保温一段时间(3)相同且适宜不能利用斐林试剂检测时需要水浴加热,会改变各试管的温度,最终影响实验结果(4)25～45℃增加淀粉酶的量或浓度(或降低底物的量或浓度)“梯度法”探究酶的最适温度或pH(1)探究酶的最适温度①设计思路②设计方案(2)探究酶的最适pH①设计思路②设计方案3．下面的表格分别是某兴趣小组探究温度对酶活性影响的实验步骤和探究过氧化氢酶作用的最适pH的实验结果.据此回答下列问题：探究温度对酶活性影响的实验(实验一)实验分组甲组乙组丙组①α­淀粉酶溶液1mL 1mL 1mL(1)pH在实验一中属于________变量,而在实验二中属于________变量.(2)实验一的①②③步骤为错误操作,正确的操作应该是___________________________.实验一的⑤步骤最好选用____________(试剂)测定单位时间内淀粉的_____________________.(3)如将实验一的新鲜α­淀粉酶溶液和可溶性淀粉溶液换为新鲜肝脏研磨液和H2O2溶液,你认为是否科学？________.为什么？_____________________________________________.(4)分析实验二的结果,可得到的结论是_________________________________________________________________________________________________________________________；在该预实验的基础上要进一步探究该过氧化氢酶的最适pH,可在pH为______之间设置梯度.答案(1)无关自(2)使新鲜α­淀粉酶溶液和可溶性淀粉溶液分别达到预设温度后再混合(其他合理答案也可) 碘液剩余量(3)不科学因为温度会直接影响H2O2的分解(4)该过氧化氢酶的最适pH约为7,pH降低或升高酶活性均降低(或在pH为5～7的范围内,随pH的升高该过氧化氢酶活性升高；在pH 为7～9的范围内,随pH的升高该过氧化氢酶活性降低) 6～8解析(1)实验一探究的是温度对酶活性的影响,因此自变量是温度,因变量是酶活性,pH属于无关变量；而实验二是探究过氧化氢酶作用的最适pH,自变量是pH.(2)探究温度对酶活性影响的实验中,应该先使酶和底物分别达到预设温度,然后再将底物和酶混合进行反应,否则会影响实验结果的准确性.因此,实验一的①②③步骤为错误操作.淀粉遇碘液变蓝,因此实验一的⑤步骤最好选用碘液测定单位时间内淀粉的剩余量,单位时间内淀粉的剩余量越多,说明酶活性越低.(3)温度会直接影响H2O2的分解,因此实验一的新鲜α­淀粉酶溶液和可溶性淀粉溶液不能换为新鲜肝脏研磨液和H2O2溶液.(4)由实验二的结果可知,在pH为5～7的范围内,随pH的升高该过氧化氢酶活性升高；在pH为7～9的范围内,随pH的升高该过氧化氢酶活性降低；该过氧化氢酶作用的最适pH约为7,pH降低或升高酶活性均降低.在该预实验的基础上要进一步探究该过氧化氢酶的最适pH,可在pH为6～8之间设置梯度.。

酶、ＡTP与细胞呼吸考纲解读知识框架重难点突破一、酶1、酶得化学本质及作用酶就是活细胞产生得具有催化作用得有机物,绝大多数酶就是蛋白质,少数酶就是ＲＮA①酶未必都就是蛋白质;未必均能与双缩脲试剂发生紫色反应;其合成原料未必都就是氨基酸;其合成场所未必都就是核糖体②酶未必只在细胞内发挥作用(如消化酶)③酶一定只能起催化作用(无其她功能)④酶、激素、载体、抗体与蛋白质得关系图:2、酶得特性⑴。

高效性:酶得催化效率大约就是无机催化剂得１07~１01３倍。

⑵。

专一性:每一种酶只能催化一种或一类化学反应。

⑶。

作用条件较温与①最适pＨ与温度下,酶活性最高,温度与pH偏高或偏低,酶活性都会明显降低。

②过酸、过碱或高温下,酶失活。

３、与酶有关得实验设计思路归纳(1)酶就是蛋白质得验证实验(利用双缩脲试剂)错误!通过对照,实验组若出现紫色,证明待测酶得化学本质就是蛋白质;不出现紫色,则该酶液得化学本质不就是蛋白质。

(2)酶具有催化作用得实验设计思路及结果分析错误!根据底物性质利用相应试剂检测,若底物被分解,则证明酶具有催化作用,否则不具有催化作用。

(3)验证淀粉酶得专一性错误!还原糖＋斐林试剂―→砖红色沉淀用淀粉酶分别催化淀粉与蔗糖后,再用斐林试剂鉴定,根据就是否有砖红色沉淀来判定淀粉酶就是否对二者都有催化作用,从而验证酶得专一性。

(4)验证H２O2酶具有高效性实验组:H２O2+鲜猪肝研磨液对照组:Ｈ2Ｏ2＋Fe3+观察标准:因变量:过氧化氢分解反应速率,观测指标:点燃但无火焰得卫生香燃烧得猛烈程度或气泡产生速率。

(5)探究酶得适宜温度设计思路:(5)就是否出现蓝色及蓝色得深浅(6)探究酶得最适PH设计思路:错误!→错误!(6)pH1ｐＨ2pHn检测O2产生得多少与速率或卫生香燃烧情况二、与酶有关得曲线分析1.表示酶高效性得曲线分析:(１)催化剂可加快化学反应速率,与无机催化剂相比,酶得催化效率更高、(２)酶只能缩短达到化学平衡所需时间,不改变化学反应得平衡点2.表示酶专一性得曲线分析:加入酶B得反应速率与无酶A或空白对照条件下得反应速率相同,而加入酶A得反应速率随反应物浓度增大明显加快,说明酶Ｂ对此反应无催化作用、进而说明酶具有专一性。

发酵实验总结生物技术1002 1610100311 刘小波摘要：1、实验目的：通过本次实验，学习用选择平板从自然界中分离胞外蛋白酶产生菌的方法，学习并掌握细菌菌株的药瓶液体发酵技术，了解碱性蛋白酶活力测定的原理，掌握碱性蛋白酶活力测定的方法。

2、实验方法：从玉米黄顶菊混种土壤中筛选蛋白酶，之后经液体发酵扩大培养，挑选出活力较强的菌落，通过碱性蛋白酶活力测定的方法测出蛋白酶活力的大小。

3、实验结果：实验原理：1、能够产生胞外蛋白酶的菌株在平板上生长后，其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈。

水解圈与菌落直径的比值常被作为判断该菌株蛋白酶产生能力的筛选依据。

2、蛋白酶在一定条件下不仅能够水解蛋白质中的肽键，也能够水解酰胺键和酯键，因此可以利用蛋白质或人工合成的酰胺及酯类化合物作为底物来测定蛋白酶的活力。

本实验选用酪蛋白为底物，测定微生物蛋白酶水解肽键的活力。

酪蛋白经蛋白酶作用后，降解成相对分子质量较小的肽和氨基酸，在反应混合物中加入三氯醋酸溶液，相对分子质量较大的蛋白质和肽就沉淀下来，先对分子质量较小的仍留在溶液中，溶解于三氯醋酸溶液中的肽的数量正比于酶的数量和反应时间。

在280nm 波长下测定溶液吸光度的增加，就可以计算酶的活力。

实验材料：玉米黄顶菊混种土样、酪蛋白、牛肉膏、磷酸氢二钠、氯化钠、琼脂、蒸馏水、0.02mol/l磷酸盐缓冲液（ph7.5）、1%酪蛋白溶液、5%三氯醋酸（TCA）溶液、烧杯、试管、容量瓶、量筒、玻璃棒、移液枪、电子秤、高温高压灭菌锅、恒温培养箱、离心机、水浴锅、紫外线分光光度计等。

实验方法：蛋白酶的筛选：1、准确称取玉米黄顶菊混种土样10g，放入装有90mL无菌水的250mL三角瓶中，用手震荡20min，使微生物细胞分散，静置20～30s，即成10－1稀释液；再用1mL无菌吸管，吸取10－1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10－2稀释液；再换一支无菌吸管，吸取10－2稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，也吹吸3次，成10－3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10－4、10－5、10－6、10－7、10－8一系列稀释菌液。