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如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？
首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。
发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）；
PE（藻红蛋白）
PI（碘化丙啶）
CY5（化青素）
preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。
激发光和发射光波长，如下：
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
流式•细胞仪交流论坛：/forum-181-1.ht ml
荧光染料谱。
Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L)产品简介：本Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L) (Alexa Fluor 647-labeled Goat Anti-Mouse IgG (H+L))为进口分装，用于免疫荧光染色。
Alexa Fluor 647是一种较常用的非常明亮的远红外荧光探针。
通常该荧光探针被激发后肉眼不能观察到激发出来的长波长荧光，但可以被很多成像系统例如激光共聚焦显微镜等所检测到。
Alexa Fluor 647的荧光光谱与Cy5比较接近。
AlexaIgG、牛IgG(bovine IgG)、兔IgG和猪IgG吸附纯化的优质二抗。
对人IgG、马IgG、牛IgG(bovine IgG)、兔IgG和猪IgG几乎没有结合能力。
特别适合于对于二抗种属特异性要求比较高的荧光染色实验。
本Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:500。
实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例，推荐的调节范围为1:200-1000。
本抗体如果用于常规的免疫染色，以每次检测需1毫升1:500稀释的荧光标记二抗计，至少可以检测50次。
如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗，至少可以多检测150-250次。
保存条件：-20℃避光保存，一年有效。
注意事项：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1.免疫荧光染色请参考相关实验步骤进行。
起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。
2.如果希望重复使用稀释的荧光标记二抗，稀释的荧光标记二抗4℃保存。
使用本产品的文献：1. Zhao G, Zhou A, Lu G, Meng M, Sun M, Bai Y, Han Y, Wang L, Zhou H, Cong H, Zhao Q, Zhu XQ, He S.Identification and characterization of Toxoplasma gondii aspartic protease 1 as a novel vaccine candidate againsttoxoplasmosis.Parasit Vectors. 2013 Jun 14;6:175. doi: 10.1186/1756-3305-6-175.2. Ge C, Song J, Chen L, Wang L, Chen Y, Liu X, Zhang Y, Zhang L, Zhang M.Atheroprotective pulsatile flow induces ubiquitin-proteasome-mediated degradation of programmed cell death 4 in endothelial cells.PLoS One. 2014 Mar 13;9(3):e91564. doi: 10.1371/journal.pone.0091564. eCollection 2014.。
AlexaFluor 荧光素是市场上效果最好的荧光素，比较传统荧光素，它具有以下优点：·多色彩选择的灵活性- 染料颜色区广，从蓝色到远红外；·更亮- 荧光强度明显高于近似波长的对应染料，可高达20 倍，镜下可持续3 分钟；·更不容易光淬灭；·对PH 变化极不敏感，可耐受PH2.5-10 广泛的PH 环境；·仪器适配性佳- 荧光显微镜、流式细胞仪等。
AlexaFluor 488 和FITC 的荧光强度对比AlexaFluor488 的荧光强度随时间降低的速度要远小于FITCAlexaFluor 488 的荧光强度几乎不随pH 变化，而FITC 变化显著麦生物™ AlexaFluor 荧光标记抗体实验推荐稀释浓度：使用前先离心，只使用上清，这样能避免保存过程中可能出现的任何微小的蛋白沉淀带来的背景染色。
染色步骤根据应用不同而有差异，所以抗体稀释精确倍数也需要摸索。
一般来说，可使用下表的荧光二抗浓度来进行初始实验：流式细胞术0.06-1.0 ug/106细胞免疫荧光1-10 ug/ml您需根据不同实验需要滴定抗体的最适稀释比例，即最佳工作浓度。
用PBS 进行稀释。
普通荧光素和Alexa Fluor® 替换对应表（括弧中为激发/ 发射波长最值）如果您使用... 那么您可以尝试...AMCA, coumarin (350/445) A lexa Fluor® 350 (346/442)Cascade Blue® (4000/423)Alexa Fluor® 405 (402/421) Alexa Fluor® 430 (434/539)Cy®2, FITC (488/519)Alexa Fluor® 488 (495/519) Alexa Fluor® 532 (531/554)PE, TRITC, TAMRA(547/572)Alexa Fluor® 546 (556/573) Cy®3 (550/570)Alexa Fluor® 555 (555/565) Rhodamine Red (570/576) Alexa Fluor® 568 (578/603)Texas Red® (589/615)Alexa Fluor® 594 (590/617) Alexa Fluor® 633 (632/647)Cy®5, APC (650/670,660)Alexa Fluor® 647 (650/668) Alexa Fluor® 660 (663/690)Cy®5.5 (675/694)Alexa Fluor® 680 (679/702) Alexa Fluor® 700 (696/719)Cy®7 (743/767) Alexa Fluor® 750 (752/779)。
Alexa Fluor 488抗体标记试剂盒试剂盒组分：A．AF488活性染料5瓶B．碳酸氢钠～84mgC．纯化树脂～10mlD．空柱5个E．收集管5个注意：纯化的蛋白buffer中不得含有铵离子或伯铵，因为它们会与蛋白质竞争结合活性染料。
不纯的抗体或者含BSA或明胶的抗体标记效果不好。
低浓度的叠氮钠（小于3mM）或thimerosal（小于1mM）不影响偶联效果。
一、实验步骤：1．标记蛋白1．1将1ml去离子水加入B组分瓶中，配成1M的碳酸氢钠溶液。
振荡或吹打至完全溶解。
该溶液pH约8.3，2～6度保存可用2星期；1．2若抗体是溶液，将抗体稀释至1mg/ml，再加入1/10体积的上述碳酸氢钠溶液；若抗体是冻干粉，将1M碳酸氢钠溶液用10倍去离子水稀释成0.1M后，用其将抗体溶成1mg/ml的溶液；1．3将上一步的蛋白溶液100μl加入活性染料瓶中。
盖上盖子轻轻翻动一会儿至染料完全溶解。
剧烈震动可能会导致蛋白降解（可将瓶上的标签撕掉后观察溶解情况）；1．4室温孵育溶液1小时，每10～15min轻轻翻动瓶子使两种反应物混合均匀（孵育期间进行2.1~2.4步准备树脂柱，这个过程需要大约15min）。
2．纯化标记上的蛋白2．1 将树脂柱放入一个13×100mm的玻璃管中；2．2 搅动纯化树脂（组分C），加入1.0ml悬浮液至空柱中静置；2．3 继续加入树脂至床体积为～1.5ml；2．4将树脂柱放入一个收集管中，用垂直转子1100g离心3min，rpm与相对离心力g的换算公式如下：相对离心力g=(1.12×10-5)(rpm)2(半径cm)；离心后静置待缓冲液全部流出，弃去缓冲液，保留收集管（若没有垂直转子，角转子也可）；2．5 将1.4步的反应液100μl逐滴加入树脂柱的中心部位，使溶液被吸入胶床中；2．6 将树脂柱放入空的收集管中，1100g离心5min；2．7 离心后，收集管内是标记好的蛋白，溶在100μlPBS中，pH7.2，包括2mM的叠氮钠。
这是来自于Salk的一个比较全的荧光染料列表，这些荧光染料可广泛用于流式细胞术以及荧光显微镜技术，汇集了各种荧光染料的特性，方便大家查找。
可根据实际所用的检测平台、染料的最大激发光波长和最大发射光波长来选择合适的荧光染料用于实验。
请注意这上面所显示的颜色可能会由于所用浏览器不同而有所不同，他们只是一个与实际颜色的近似值。
Ex: Peak excitation wavelength (nm)
Em: Peak emission wavelength (nm)
QY: Quantum yield
BR: Brightness; Extinction coefficient * Quantum yield / 1000 PS: Photostability; time to 50% brightness (sec)
光色波长λ(nm)代表波长
红（Red）780～630700
橙（Orange）630～600620
黄（Yellow）600～570580
绿（Green）570～500550
青（Cyan）500～470500
蓝（Blue）470～420470
紫（Violet）420～380420。
Alexa Fluor 488标记山羊抗兔IgG (H+L)产品简介：本Alexa Fluor 488标记山羊抗兔IgG (H+L) (Alexa Fluor 488-labeled Goat Anti-Rabbit IgG (H+L))为进口分装，用于免疫荧光染色。
Alexa Fluor 488是一种常用的非常明亮的绿色荧光探针。
它比绝大部分常用的绿色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭，IgG和大鼠IgG吸附纯化的优质二抗。
对人IgG、小鼠IgG和大鼠IgG几乎没有结合能力。
特别适合于对于二抗种属特异性要求比较高的荧光染色实验。
本Alexa Fluor 488标记山羊抗兔IgG (H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:500。
实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例，推荐的调节范围为1:200-1000。
本抗体如果用于常规的免疫染色，以每次检测需1毫升1:500稀释的荧光标记二抗计，至少可以检测50次。
如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗，至少可以多检测150-250次。
保存条件：-20℃避光保存，一年有效。
注意事项：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1.免疫荧光染色请参考相关实验步骤进行。
起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。
2.如果希望重复使用稀释的荧光标记二抗，稀释的荧光标记二抗4℃保存。
使用本产品的文献：1. Lu X, Zhang N, Meng B, Dong S, Hu Y.Involvement of GPR12 in the regulation of cell proliferation and survival.Mol Cell Biochem. 2012 Jul;366(1-2):101-10.2. Lu X, Zhang N, Dong S, Hu Y.Involvement of GPR12 in he induction of neurite outgrowth in PC12 cells.Brain Res Bull. 2012 Jan 4;87(1):30-6.3. Su J, Wang Y, Li R, Peng H, Hua S, Li Q, Quan F, Guo Z, Zhang Y.Oocytes selected using BCB staining enhance nuclear reprogramming and the in vivo development of SCNTembryos in cattle.PLoS One. 2012;7(4):e36181. doi: 10.1371/journal.pone.0036181. Epub 2012 Apr 27.4. Qiu M, Quan F, Han C, Wu B, Liu J, Yang Z, Su F, Zhang Y.Effects of granulosa cells on steroidogenesis, proliferation and apoptosis of stromal cells and theca cells derivedfrom the goat ovary.J Steroid Biochem Mol Biol. 2013 Jun 28. pii: S0960-0760(13)00120-9. doi: 10.1016/j.jsbmb.2013.06.005.5. Yang Z, Liu J, Liu H, Qiu M, Liu Q, Zheng L, Pang M, Quan F, Zhang Y.Isolation and Characterization of SSEA3(+) Stem Cells Derived from Goat Skin Fibroblasts.Cell Reprogram. 2013 Jun;15(3):195-205. doi: 10.1089/cell.2012.0080. Epub 2013 May 13.6. Liu J, Yang Z, Qiu M, Luo Y, Pang M, Wu Y, Zhang Y.Developmental potential of cloned goat embryos from an SSEA3(+) subpopulation of skin fibroblasts.Cell Reprogram. 2013 Apr;15(2):159-65. doi: 10.1089/cell.2012.0073. Epub 2013 Feb 26.7. Deng Z, Yan F, Jin Q, Li F, Wu J, Liu X, Zheng H.Reversal of multidrug resistance phenotype in human breast cancer cells using doxorubicin-liposome-microbubble complexes assisted by ultrasound.J Control Release. 2014 Jan 28;174:109-16. doi: 10.1016/j.jconrel.2013.11.018. Epub 2013 Nov 25.8. Miao SH, Sun HB, Ye Y, Yang JJ, Shi YW, Lu M, Hu G, Zhou JW.Astrocytic JWA Expression is Essential to Dopaminergic Neuron Survival in the Pathogenesis of Parkinson's Disease.CNS Neurosci Ther. 2014 Aug;20(8):754-62. doi: 10.1111/cns.12249. Epub 2014 Mar 17.9. Su J, Hu G, Wang Y, Liang D, Gao M, Sun H, Zhang Y.Recombinant human growth differentiation factor-9 improves oocyte reprogramming competence and subsequent development of bovine cloned embryos. Cell Reprogram. 2014 Aug;16(4):281-9. doi: 10.1089/cell.2014.0001. Epub 2014 May 19.10.Zhao ZW, Pan DD, Wu Z, Sun YY, Guo YX, Zeng XQ.Antialcoholic liver activity of whey fermented by Lactobacillus casei isolated from koumiss.J Dairy Sci. 2014 Jul;97(7):4062-71. doi: 10.3168/jds.2014-7954. Epub 2014 Apr 24.11.Jin Y, Sun C, Feng L, Li P, Xiao L, Ren Y, Wang D, Li C, Chen L.Regulation of SIV antigen-specific CD4+ T cellular immunity via autophagosome-mediated MHC II molecule-targeting antigen presentation in mice. PLoS One. 2014 Mar 26;9(3):e93143. doi: 10.1371/journal.pone.0093143. eCollection 2014.12.Zhang H, Xiao Y, Wang X, Riaz H, Li W, Fu S, Xin Y, Shi L, Ma F, Li X, Yang L.Effects of histone deacetylase inhibitors on the early development of bovine androgenetic embryos.Cell Reprogram. 2014 Feb;16(1):54-64. doi: 10.1089/cell.2013.0027. Epub 2014 Jan 4.13.Gao W, Gu Y, Li Z, Cai H, Peng Q, Tu M, Kondo Y, Shinjo K, Zhu Y, Zhang J, Sekido Y, Han B, Qian Z, Miao Y.miR-615-5p is epigenetically inactivated and functions as a tumor suppressor in pancreatic ductal adenocarcinoma.Oncogene. 2014 Apr 28;0. doi: 10.1038/onc.2014.101.14.Cheng J, Sun Y, Zhang X, Zhang F, Zhang S, Yu S, Qiu X, Tan L, Song C, Gao S, Wu Y, Ding C.Toll-like receptor 3 inhibits Newcastle disease virus replication through activation of pro-inflammatory cytokines and the type-1 interferon pathway. Arch Virol. 2014 Jun 17.15.Su J, Wang Y, Zhang L, Wang B, Liu J, Luo Y, Guo Z, Quan F, Zhang Y.Oocyte-secreted factors in oocyte maturation media enhance subsequent development of bovine cloned embryos.Mol Reprod Dev. 2014 Apr;81(4):341-9. doi: 10.1002/mrd.22302. Epub 2014 Feb 18.16.Ge XY, Yang LQ, Jiang Y, Yang WW, Fu J, Li SL.Reactive oxygen species and autophagy associated apoptosis and limitation of clonogenic survival induced by zoledronic acid in salivary adenoid cystic carcinoma cell line SACC-83.PLoS One. 2014 Jun 25;9(6):e101207. doi: 10.1371/journal.pone.0101207. eCollection 2014.17.Su J, Wang Y, Li W, Gao M, Ma Y, Hua S, Quan F, Zhang Y.Effects of 3-hydroxyflavone on the cellular and molecular characteristics of bovine embryos produced by somatic-cell nuclear transfer.Mol Reprod Dev. 2014 Mar;81(3):257-69. doi: 10.1002/mrd.22293. Epub 2014 Jan 10.。
荧光染料大荟萃！荧光染料荧光染料可对蛋白质、核酸和聚糖等其他结构进行染色，即便钙离子等非生物物质也可以检测出来。
利用荧光物质与相应抗体或抗原发生特异性结合后，可对待测物进行定位、定性和定量的分析，此方法具有高度特异性、敏感性和直观性，是最早出现的免疫标记技术。
本文就对几种常用的荧光剂进行了具体的介绍。
免疫荧光 (IF)在荧光显微镜技术中，可以通过两种方式观察到你的目的蛋白：利用内源荧光信号，即通过克隆手段，用遗传学方法将荧光蛋白与目的蛋白相连；或利用荧光标记的抗体特异性结合目的蛋白。
有些生物学问题采用第二种方法会更有用或更有必要。
比如，组织学样品无法使用荧光蛋白，因为通常来说，标本都是从无法保存荧光蛋白的生物体中获取。
此外，当有一个有功能的抗体可用时，免疫荧光法会比荧光蛋白技术快很多，因为后者必须先克隆目的基因再将DNA转染到适当的细胞中。
荧光蛋白的另一项劣势在于其本身属于蛋白质。
因此，细胞内的这些荧光蛋白具有特定的蛋白质特性，其会导致附着的目的蛋白质发生功能紊乱或出现误释的情况。
然而，荧光蛋白技术仍然是观察活细胞的首选方法。
免疫荧光法利用了抗体可以和相应抗原特异性结合的这个特性，对此它还有两种不同的表现形式。
最简单的方式是使用可与目的蛋白相结合的荧光标记抗体。
这种方法被称为“直接免疫荧光法”。
在很多情况下，我们可以利用两种不同特性的抗体。
第一种抗体可以结合目的蛋白，但其本身并未进行荧光标记（一抗）。
第二种抗体本身就携带荧光染料（二抗），并且可以特异性结合一抗。
这种方法被称为“间接免疫荧光法”。
这种方法存在诸多优势。
一方面，它会产生放大效应，因为不只一个二抗可以与一抗相结合。
另一方面，没有必要始终用荧光染料标记目的蛋白的每个抗体，但可以使用市售荧光标记的二抗。
免疫荧光中广泛使用的荧光染料包括FITC、TRITC 或一些Alexa Fluor?染料，下文均有提及。
FITC 和 TRITC异硫氰酸荧光素(FITC) 是一种有机荧光染料，目前，这种荧光染料仍用于免疫荧光和流式细胞术中。
生物荧光染料波长荧光染料是一种能够吸收特定波长的光并发射出不同波长的光的化合物。
它们在生物科学研究、医学诊断、药物开发等领域中起着重要作用。
本文将介绍几种常见的生物荧光染料及其波长特性。
一、荧光染料的波长定义荧光染料的波长通常由其吸收峰和发射峰决定。
吸收峰是指荧光染料能够吸收的最大波长，而发射峰则是指荧光染料在受到激发后发射的最大波长。
二、常见的荧光染料及其波长特性1. Alexa Fluor 488（波长：495 nm/519 nm）Alexa Fluor 488是一种常用的荧光染料，其吸收峰位于495 nm，发射峰位于519 nm。
它在细胞免疫荧光染色、蛋白质定位研究等方面广泛应用。
2. Cy3（波长：550 nm/570 nm）Cy3是一种红色荧光染料，其吸收峰位于550 nm，发射峰位于570 nm。
它常用于DNA、RNA等核酸的荧光标记，也可用于蛋白质荧光标记。
3. Texas Red（波长：595 nm/615 nm）Texas Red是一种红色荧光染料，其吸收峰位于595 nm，发射峰位于615 nm。
它在细胞荧光染色、分子探针等方面有广泛应用，常用于免疫荧光标记和显微镜观察。
4. FITC（波长：492 nm/520 nm）FITC是一种绿色荧光染料，其吸收峰位于492 nm，发射峰位于520 nm。
它常用于细胞免疫荧光染色、蛋白质标记等研究中。
5. Rhodamine B（波长：554 nm/576 nm）Rhodamine B是一种橙红色荧光染料，其吸收峰位于554 nm，发射峰位于576 nm。
它在细胞荧光染色、荧光显微镜观察等方面有广泛应用。
6. DAPI（波长：358 nm/461 nm）DAPI是一种蓝色荧光染料，其吸收峰位于358 nm，发射峰位于461 nm。
它可用于染色体核型分析、细胞核染色等。
三、荧光染料的应用领域荧光染料在生物科学领域中有着广泛的应用。
它们可以被用于细胞荧光染色、蛋白质定位、基因表达分析、药物荧光标记等方面。
常用红色荧光通道名称-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容可以描述该篇长文的主题和背景，以及讨论常用红色荧光通道名称的重要性和应用。
以下是一个例子：引言在生物学和医学研究领域，荧光探针已成为一种常用的实验工具，用于可视化和检测特定的细胞结构或生物分子。
不同的荧光通道可以用于探测不同的细胞组分或标记物，其中红色荧光通道由于其高透过性和低干扰性而备受关注。
本文将专注于研究常用红色荧光通道名称，并系统整理常见红色荧光探针的特点和应用。
通过对这些通道的深入了解，我们可以更好地选择适合特定实验需求的荧光标记，提高实验的准确性和可靠性。
本文结构如下：首先，我们将详细介绍常用红色荧光通道的命名规则和标准。
其次，我们将探讨不同红色荧光通道的光谱特性、荧光强度和检测灵敏度等关键要点。
最后，我们将总结当前研究中常用的红色荧光通道，并展望未来在该领域的发展方向。
我们相信，通过此文章的阅读，研究人员可以更清晰地了解常用红色荧光通道的特点和应用，为他们的实验设计和结果解读提供有价值的指导。
希望这篇文章能够为科研工作者在红色荧光探针选择和应用中提供有力的支持和参考。
1.2 文章结构文章结构部分在本篇文章中，我们将介绍常用红色荧光通道的名称。
文章分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分首先对本文的内容进行了概述，目的是为了让读者对接下来的内容有一个整体的了解。
文章的正文部分将重点介绍常用红色荧光通道的名称。
我将从两个要点入手进行讲解。
在第一个要点中，我将详细介绍常用红色荧光通道名称的选择原则、培养基的配套识别方法等。
通过对这些要点的介绍，读者可以更好地了解红色荧光通道的命名规则和使用方法。
在第二个要点中，我将介绍常用红色荧光通道名称的应用案例、特点以及与其他颜色荧光通道的对比等。
通过对这些要点的分析，读者可以更全面地了解不同红色荧光通道的特点和适用场景。
最后，在结论部分，我将对整篇文章的内容进行总结，并展望未来红色荧光通道名称的发展方向。
无论你的实验需要标记的一抗，
的键，但是四氟苯酯更不容易在结合反应中自发水解。
Alexa Fluor 488四氟苯酯也可以单独提供（表3）。
通过标记的二抗增强信号
如果所制备的标记一抗是不实用的，或者无法提供足够的灵敏度，那就需要高质量的二抗来解决问题。
尽管来自于一抗和二抗的非特异性结合可以提高背景水平，选择一个较好的标记了的二抗，通常可以通过显著性的信号扩增来克服升高了的荧光背景。
当然，不是每一个商业上可以提供的二抗都是完全被纯化或优化标记的(图3)。
Molecular Probes提供了在任何地方均可获得的可以进行最大选择的荧光二抗。
（全部目录详见在线手册的第7章，网址是/handbook）。
图3. Molecular Probes的Alexa Fluor 647山羊抗鼠IgG 抗体与可购买到的其它公司提供的Cy5 山羊抗鼠IgG抗体亮度的比较
这些包括具有强烈荧光的Alexa Fluor抗体耦合物，在各个光谱都胜过大多数常规使用的荧光二抗。
在制备每个二抗耦合物时，我们采用了质量最高的蛋白，然后优化标记，以形成最亮的的耦合物，最后使用细胞样品进行严格的测试，以确保低非特异性结合和高特异性染色。
Alexa Fluor二抗正快速成为所有基于荧光免疫测定的首选的二级试剂。
在我们新的Image-iT 试剂盒中还将包含几个Alexa Fluor 抗体耦合物—－每个Image-iT试剂盒都含一个明亮的并且光稳定的Alexa Fluor耦合物和所有用来优化固定细胞和组织成像的试剂。
通过酪胺信号放大技术（Tyramide Signal Amplification）促使信号增强
当实验样品的靶点不是很丰富的时候，通过二抗的信号扩增是不够的。
对于此种情况，我们已经开发了酪胺信号放大技术(TSA)试剂盒(表4)，它利用了超亮度的Alexa Fluor染料以达到最终的高清晰度信号扩增。
TSA 技术—有时也称作CARD（catalyzed reporter deposition）—是一种利用了辣根过氧化物酶(HRP)的催化活性在靶蛋白或核酸序列上产生高密度原位标记的酶介导检测方法(图4)。
据报道，与常规的亲合素-生物素酰化酶复合体（ABC）方法相比，TSA能将信号扩大100倍。
在目前可提供的24种Alexa Fluor TSA试剂盒中(表4)，每个耦合于二抗或链霉亲合素上的HRP激活大量的Alexa Fluor tyramide，它可以产生短寿命的，并能与反应位点临近的亲核残基发生强烈反应的tyramide基团，进而产生一个扩散程度最小的放大荧光信号。
使用Alexa Fluor TSA试剂盒能够在荧光原位杂交(FISH)、免疫组化、神经解剖学追踪实验、流式细胞仪测定、酶联免疫吸附分析(ELISAs)、微阵列和其它应用中完成超灵敏的测定。
由Invitrogen授权生物通制作。
