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离体大鼠肝脏灌流法制备氯吡格雷活性巯基代谢物
China Pharmacy2022V ol.33No.14中国药房2022年第33卷第14期氯吡格雷活性巯基代谢物（clopidogrel active thiol metabolite，CATM，化学结构式见图1）是氯吡格雷发挥抗血小板疗效的最终活性物质[1]。
CATM化学结构复杂，C3—C16双键和C4位手性结构使其具有4种构型，分别为H1（7S，3E，4S）、H2（7S，3E，4R）、H3（7S，3Z，4S）、H4（7S，3Z，4R），其中H1和H2为反式CATM、H3和H4为顺式CATM[1]。
已有研究表明，人体内CATM的构型为顺式构型[2]。
目前市面上仅有反式CATM异构体H1、H2的标准品，使CATM的体内研究受限。
对CATM进行合成的现有技术中，常用的方法有化学合成法和生物酶肝微粒体催化法，其中化学合成法需要对C3—C16双键构型和C4位手性构型进行选择，步骤复杂[3]；生物酶肝微粒体催化法具有较高的生物选择性和转化效率，但肝微粒体成本高，酶催化反应条件严苛，同时因底物量受限难以得到足够的目标代谢产物[2]。
已有研究显示，离体大鼠肝脏灌流法被广泛用于大鼠肝脏的生理、病理生理、肝损伤及药物代谢研究，兼具体外实验和整体动物实验的优点[4－6]。
本实验拟采用（S）-2-氧氯吡格雷为底物，采用离体大鼠肝脏灌流法通过代谢途径制备CATM，旨在为顺式CATM的合成提供参考。
Cl43167NHSO OHOOC图1CATM化学结构式离体大鼠肝脏灌流法制备氯吡格雷活性巯基代谢物Δ刘艺＊，陶婷，刘云，李艳丽，胡盼盼，姜艳娇，孙增先#（徐州医科大学附属连云港医院/连云港市第一人民医院药学部，江苏连云港222002）中图分类号R914；R969.1文献标志码A文章编号1001-0408（2022）14-1724-06DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2022.14.11摘要目的建立氯吡格雷活性巯基代谢物（CATM）的制备方法，为顺式CATM的合成提供参考。
《靶向c-Met的CAR-T细胞对人结肠癌细胞的作用》
《靶向c-Met的CAR-T细胞对人结肠癌细胞的作用》一、引言近年来，随着癌症治疗的不断发展，细胞治疗成为了一个热门的研究领域。
其中，CAR-T细胞疗法作为新一代的免疫治疗方式，已在某些肿瘤中显示出其独特的治疗效果。
在众多靶点中，c-Met作为一个重要的受体酪氨酸激酶，与结肠癌的发生、发展密切相关。
因此，以c-Met为靶点的CAR-T细胞在结肠癌的治疗上展现出极大的应用潜力。
本文将深入探讨靶向c-Met的CAR-T 细胞对人结肠癌细胞的作用。
二、c-Met在结肠癌中的作用c-Met是一种跨膜受体酪氨酸激酶，其在正常细胞中主要参与细胞生长、迁移和分化等生理过程。
然而，在结肠癌等肿瘤细胞中，c-Met的表达常常异常升高，并参与肿瘤的增殖、侵袭和转移等过程。
因此，针对c-Met的靶向治疗成为了一种有效的抗肿瘤策略。
三、CAR-T细胞的概述CAR-T细胞疗法是一种通过基因工程改造T细胞，使其能够识别并杀死肿瘤细胞的治疗方法。
CAR-T细胞通过表达针对肿瘤细胞的特异性受体，实现对肿瘤细胞的精确打击。
在针对c-Met 的CAR-T细胞中，通过将c-Met的单链抗体与T细胞的激活信号相结合，使得CAR-T细胞能够识别并杀死表达c-Met的肿瘤细胞。
四、靶向c-Met的CAR-T细胞对人结肠癌细胞的作用1. 识别与杀伤：靶向c-Met的CAR-T细胞能够通过其表面的特异性受体识别结肠癌细胞表面的c-Met蛋白，进而激活T细胞的杀伤机制，对结肠癌细胞进行精确打击。
2. 抑制肿瘤增殖：通过CAR-T细胞的持续作用，能够抑制结肠癌细胞的增殖，降低肿瘤细胞的数量。
3. 阻断肿瘤侵袭与转移：CAR-T细胞不仅能够杀死已经存在的肿瘤细胞，还能够阻断肿瘤细胞的侵袭与转移过程，减缓肿瘤的扩散。
4. 提高治疗效果：将靶向c-Met的CAR-T细胞应用于结肠癌患者的治疗中，能够显著提高治疗效果，延长患者的生存期。
五、结论综上所述，靶向c-Met的CAR-T细胞在结肠癌的治疗中展现出独特的应用潜力。
RP-HPLC直接测定水果中维生素C含量
RP-HPLC直接测定水果中维生素C含量
刘贵花;潘富友
【期刊名称】《科学技术与工程》
【年(卷),期】2009(009)018
【摘要】应用反相高效液相色谱法对时令水果中维生素C含量进行直接测定.方法: 色谱柱Eclipse XDB-C18 (5 μm 4.6×250 mm);流动相乙腈-水(40∶ 60 v/v);流速1.0 mL/min;检测波长275 nm.实验结果表明维生素C在(10 ～640) μg/mL范围内呈良好线性,R2=0.999 96,回收率为99.3% ～ 104.5%,RSD=1.65%.本法操作简便,结果准确、重现性好,为测定水果中维生素C的含量提供了一种有效方法.
【总页数】4页(P5307-5310)
【作者】刘贵花;潘富友
【作者单位】台州学院医药化工学院,临海,317000;台州学院医药化工学院,临海,317000
【正文语种】中文
【中图分类】R151.3
【相关文献】
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3.高效液相色谱法测定水果和蔬菜中维生素C含量的不确定度评定 [J], 王霞;张维谊;韩奕奕;陈美莲;丰东升
4.不同水果中维生素C含量的测定及其影响因素研究 [J], 邹荣
5.食用方式对水果中维生素C含量的影响 [J], 曾凡花;李家元;李超男
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miR-145-5p靶向调控MRGBP基因表达对晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响
【关键词】 ｍｉＲ１４５５ｐ；ＭＲＧＢＰ；晶状体上皮细胞；增殖；凋亡 【中图分类号】 Ｒ７７６．１ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 １００２－７３８６（２０２１）１２－１７６５－０６
ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｍｉＲ１４５５ｐｔａｒｇｅｔｅｄｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＲＧＢＰ ｇｅｎｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｌｅｎｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ ＨＵ Ｃｈａｏｑｉａｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＴｈｉｒｄＰｅｏｐｌｅ’ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＺｉｇｏｎｇＣｉｔｙ，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｚｉｇｏｎｇ ６４３０２０，Ｃｈｉｎａ
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】 ｍｉＲ１４５５ｐ；ＭＲＧＢＰ；ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
白内障是一种晶状体混浊的疾病，可导致严重的 视力 损 害 或 致 盲［１］。白 内 障 约 占 所 有 致 盲 原 因 的
作者单位：６４３０２０ 四川省自贡市第三人民医院眼科
照射完成后，细胞于 ３７℃、５％ ＣＯ２的条件下继续培养 ４ｈ，同时将正常培养的细胞设为对照。 １．３ ｑＰＣＲ检测 ｍｉＲ１４５５ｐ、ＭＲＧＢＰｍＲＮＡ水平 在 ＳＲＡ０１／０４细胞中加入 ＴＲＩｚｏｌ试剂提取总 ＲＮＡ，通过 逆转录试剂盒制成 ｃＤＮＡ，以 ｃＤＮＡ为模板，利用 ｑＰＣＲ 检测试剂盒测定 ｍｉＲ１４５５ｐ、ＭＲＧＢＰｍＲＮＡ表达。引 物序列分别为 ｍｉＲ１４５５ｐ：５’ＧＴＣＣＡＧＴＴＴＴＣＣＣＡＧＧ ＡＡＴＣ３’（正向），５’ＡＧＡＡＣＡＧＴＡＴＴＴＣＣＡＧＧＡＡＴ３’ （反 向 ），ＭＲＧＢＰ：５’ＧＧＡＧＧＡＧＡＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＧ３’ （正向），５’ＣＡＴＧＴＧＧＡＡＧＴＧＴＣＧＧＴＴＣＡ３’（反 向）， 内参 Ｕ６：５’ＣＴＣＧＣＴＴＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡ３’（正 向），５’ ＡＡＣＧＣＴＴＣＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣＧＴ３’（反 向 ）。 反 应 结 束 后，由 ２ΔΔＣｔ法计算 ｍｉＲ１４５５ｐ、ＭＲＧＢＰｍＲＮＡ表达。 １．４ 蛋白质印迹法（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ）检测 ＭＲＧＢＰ蛋白 表达 使用 ＲＩＰＡ裂解液提取 ＳＲＡ０１／０４细胞中的蛋 白，ＢＣＡ 法 定 量 后 进 行 １０％ 的 十 二 烷 基 硫 酸 钠 （Ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ，ＳＤＳ）聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 （Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＰＡＧＥ）电 泳，转 膜， 加入 ５％脱脂奶粉封闭 １ｈ，将膜与 １∶１０００稀释的 ＭＲＧＢＰ一抗 ４℃孵育过夜，次日使用 ＴｒｉｓＨＣｌＴｗｅｅｎ 缓冲盐溶 液 （ＴｒｉｓｂｕｆｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅｗｉｔｈＴｗｅｅｎ，ＴＢＳＴ）充 分漂洗膜，与 １∶５０００稀释的二抗室温孵育 １ｈ，ＴＢＳＴ 漂洗膜，加入增强化学发光液显色，以 β肌动蛋白（β ａｃｔｉｎ）为参照，分析 ＭＲＧＢＰ蛋白条带。 １．５ 细胞转染 将 ５×１０５ 个 ／ｍｌ密度的 ＳＲＡ０１／０４ 细胞接 种 于 ６孔 板，细 胞 生 长 至 ７０％ 融 合 时，利 用 Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００试剂，在细胞中转染 ａｎｔｉｍｉＲ１４５ ５ｐ、ｐｃＤＮＡＭＲＧＢＰ、ｓｉＭＲＧＢＰ及 其 相 应 阴 性 对 照，并 且依照 １．２所述方法进行紫外线照射，转染 ４８ｈ后， 收集细胞，分别根据 １．３和 １．４中的方法检测 ｍｉＲ １４５５ｐ和 ＭＲＧＢＰ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、Ｃｃａｓｐａｓｅ３蛋白表达。 １．６ 噻唑蓝（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，ＭＴＴ）检测细 胞增殖 调整 ＳＲＡ０１／０４细胞密度为 １×１０５ 个 ／ｍｌ， 接种 于 ９６孔 板，培 养 ４８ｈ后，每 孔 细 胞 加 入 ２０μｌ ＭＴＴ溶液，反应 ４ｈ，之后加入 １５０μｌ二甲基亚砜，摇 床震荡反应 １０ｍｉｎ，于酶标仪读取细胞 ４９０ｎｍ处的吸 光度（ＯＤ）值，计 算 细 胞 增 殖 率 （％）。细 胞 增 殖 率 （％）＝实验组 ＯＤ值 ／对照组 ＯＤ值 ×１００％。 １．７ 流式细胞术检测细胞凋亡 ＳＲＡ０１／０４细胞凋 亡的检测依照 ＡｎｎｅｘｉｎⅤＦＩＴＣ／ＰＩ凋亡检测试剂盒说 明书的指示，在 １×１０６ 个 ／ｍｌ密度的 ＳＲＡ０１／０４细胞 中加入 ５００μｌ缓 冲 液，使 细 胞 重 悬，依 次 加 入 ５μｌ ＡｎｎｅｘｉｎＶＦＩＴＣ、５μｌＰＩ染色液，分别混匀后于黑暗中 反应 １５ｍｉｎ，置流式细胞仪进行细胞凋亡的检测。
ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｍｉＲ１４５５ｐｔａｒｇｅｔｅｄｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＲＧＢＰ ｇｅｎｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｌｅｎｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ ＨＵ Ｃｈａｏｑｉａｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＴｈｉｒｄＰｅｏｐｌｅ’ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＺｉｇｏｎｇＣｉｔｙ，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｚｉｇｏｎｇ ６４３０２０，Ｃｈｉｎａ
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】 ｍｉＲ１４５５ｐ；ＭＲＧＢＰ；ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
白内障是一种晶状体混浊的疾病，可导致严重的 视力 损 害 或 致 盲［１］。白 内 障 约 占 所 有 致 盲 原 因 的
作者单位：６４３０２０ 四川省自贡市第三人民医院眼科
照射完成后，细胞于 ３７℃、５％ ＣＯ２的条件下继续培养 ４ｈ，同时将正常培养的细胞设为对照。 １．３ ｑＰＣＲ检测 ｍｉＲ１４５５ｐ、ＭＲＧＢＰｍＲＮＡ水平 在 ＳＲＡ０１／０４细胞中加入 ＴＲＩｚｏｌ试剂提取总 ＲＮＡ，通过 逆转录试剂盒制成 ｃＤＮＡ，以 ｃＤＮＡ为模板，利用 ｑＰＣＲ 检测试剂盒测定 ｍｉＲ１４５５ｐ、ＭＲＧＢＰｍＲＮＡ表达。引 物序列分别为 ｍｉＲ１４５５ｐ：５’ＧＴＣＣＡＧＴＴＴＴＣＣＣＡＧＧ ＡＡＴＣ３’（正向），５’ＡＧＡＡＣＡＧＴＡＴＴＴＣＣＡＧＧＡＡＴ３’ （反 向 ），ＭＲＧＢＰ：５’ＧＧＡＧＧＡＧＡＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＧ３’ （正向），５’ＣＡＴＧＴＧＧＡＡＧＴＧＴＣＧＧＴＴＣＡ３’（反 向）， 内参 Ｕ６：５’ＣＴＣＧＣＴＴＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡ３’（正 向），５’ ＡＡＣＧＣＴＴＣＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣＧＴ３’（反 向 ）。 反 应 结 束 后，由 ２ΔΔＣｔ法计算 ｍｉＲ１４５５ｐ、ＭＲＧＢＰｍＲＮＡ表达。 １．４ 蛋白质印迹法（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ）检测 ＭＲＧＢＰ蛋白 表达 使用 ＲＩＰＡ裂解液提取 ＳＲＡ０１／０４细胞中的蛋 白，ＢＣＡ 法 定 量 后 进 行 １０％ 的 十 二 烷 基 硫 酸 钠 （Ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ，ＳＤＳ）聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 （Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＰＡＧＥ）电 泳，转 膜， 加入 ５％脱脂奶粉封闭 １ｈ，将膜与 １∶１０００稀释的 ＭＲＧＢＰ一抗 ４℃孵育过夜，次日使用 ＴｒｉｓＨＣｌＴｗｅｅｎ 缓冲盐溶 液 （ＴｒｉｓｂｕｆｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅｗｉｔｈＴｗｅｅｎ，ＴＢＳＴ）充 分漂洗膜，与 １∶５０００稀释的二抗室温孵育 １ｈ，ＴＢＳＴ 漂洗膜，加入增强化学发光液显色，以 β肌动蛋白（β ａｃｔｉｎ）为参照，分析 ＭＲＧＢＰ蛋白条带。 １．５ 细胞转染 将 ５×１０５ 个 ／ｍｌ密度的 ＳＲＡ０１／０４ 细胞接 种 于 ６孔 板，细 胞 生 长 至 ７０％ 融 合 时，利 用 Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００试剂，在细胞中转染 ａｎｔｉｍｉＲ１４５ ５ｐ、ｐｃＤＮＡＭＲＧＢＰ、ｓｉＭＲＧＢＰ及 其 相 应 阴 性 对 照，并 且依照 １．２所述方法进行紫外线照射，转染 ４８ｈ后， 收集细胞，分别根据 １．３和 １．４中的方法检测 ｍｉＲ １４５５ｐ和 ＭＲＧＢＰ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、Ｃｃａｓｐａｓｅ３蛋白表达。 １．６ 噻唑蓝（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，ＭＴＴ）检测细 胞增殖 调整 ＳＲＡ０１／０４细胞密度为 １×１０５ 个 ／ｍｌ， 接种 于 ９６孔 板，培 养 ４８ｈ后，每 孔 细 胞 加 入 ２０μｌ ＭＴＴ溶液，反应 ４ｈ，之后加入 １５０μｌ二甲基亚砜，摇 床震荡反应 １０ｍｉｎ，于酶标仪读取细胞 ４９０ｎｍ处的吸 光度（ＯＤ）值，计 算 细 胞 增 殖 率 （％）。细 胞 增 殖 率 （％）＝实验组 ＯＤ值 ／对照组 ＯＤ值 ×１００％。 １．７ 流式细胞术检测细胞凋亡 ＳＲＡ０１／０４细胞凋 亡的检测依照 ＡｎｎｅｘｉｎⅤＦＩＴＣ／ＰＩ凋亡检测试剂盒说 明书的指示，在 １×１０６ 个 ／ｍｌ密度的 ＳＲＡ０１／０４细胞 中加入 ５００μｌ缓 冲 液，使 细 胞 重 悬，依 次 加 入 ５μｌ ＡｎｎｅｘｉｎＶＦＩＴＣ、５μｌＰＩ染色液，分别混匀后于黑暗中 反应 １５ｍｉｎ，置流式细胞仪进行细胞凋亡的检测。
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