植物组织中维生素c含量的测定

1 实验十：果蔬中维生素C的测定(2,6—二氯靛酚滴定法)

教学目的要求

基本知识点

1、 了解从果蔬中提取Ve的方法。

2、 掌握2,6—二氯靛酚滴定法测定果蔬中VC的原理、基本过程和操作关键。

3、 熟练采样、样品处理、称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。

4、 掌数据处理和结果计算技术。

重占

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2,6—二氯靛酚滴定法测定果蔬中Vc的基本过程和操作关键。

难点

2, 6—二氯靛酚滴定法测定果蔬中Vc的原理

课时教学方案：

复习与提问： 2 1、 2,6—二氯靛酚滴定法测定果蔬中VC的原理。

2、 2,6—二氯靛酚滴定法测定果蔬中Vc的基本过程和操作关键。

3、 检查学生实验准备情况。

【引入新课】

Ve在人体内的主要功能是：参加体内的氧化还原过程，促进人体的生长发育，增强人体对疾病的抵抗能力，促进细胞间质中胶原的形成，维持牙齿、骨骼、血管和肌肉的正常功能，增强肝脏的解毒能力。当人体中缺少VC时，就会出现牙龈出血、牙齿松动、骨骼脆弱、粘膜及皮下易出血、伤口不易愈合等症状。近年来，科学家们还发现，VC能阻止亚硝酸盐和仲胺在胃内结合成致癌物质一亚脱胺，从而减低癌的发病率。

据测定，成年男子每天约需VC65mg,成年女子每天约需VC60mgo

VC广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜,特别是獄猴桃、鲜枣、草莓、枇杷、橙、橘、柿子等含有丰富的％。以IOOg水果的VC的含量来计算，獄猴桃含420nιg,鲜枣含380mg,草莓含8Omg,橙含49mg,枇杷含36mg,橘含30mg,柿子含3Omg0但葡萄、无花果、苹果各自只有5nιg,香蕉、桃子各含IOmg,梨子仅含3 4mg。

实验十：果蔬中维生素C的测定

—2,6—二氯靛酚滴定法

维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸(ascorbicacid)。化学名称为：L-3-氧代苏己糖醛酸内酯【英文名:ASCOrbiCACid(INN)],分子式为C6H8O6,相对分子质量：176.13o4 自然界存在两种形式的维生索C:抗坏血酸（还原型VC）和脱氢抗坏血酸（氧化型DHVC）,抗坏血酸易氧化成脱氢抗坏血酸，脱氮抗坏血酸又易还原成抗坏血酸。，脱氢抗坏血酸水解后生成二酮古乐糖酸，失去抗坏血酸的生理活性。

９８　Ｉ｝　Ｈ　ｇｄｃｈｅｍ．ｃｏｍ　２０１０年第７期　第３７卷总第２０７期　蔬果中维生素Ｃ含量的检测方法　谷雪贤　（中山火炬职业技术学院生物医药系，广东中山５２８４３６）　【摘要】蔬菜、水果中维生素ｃ的测定方法有很多，如间接原子吸收分光光度法、分光光度法、高效液相色谱法等，各种方法各有特点。文章　对近年来有关维生索ｃ的测定方法进行了综述。　【关键词】维生素ｃ；原子吸收分光光度法；紫外光度分析法；高效液相色谱法；蔬菜、水果　【中图分类号］０６５　［文献标ｉＲ￣］Ａ　［文章编￣－］１００７—１８６５（２０１０）０７－００９８—０１　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｃ　ｉｎ　Ｆｒｕｉｔｓ　ａｎｄ　Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ　Ｇｕ　Ｘｕｅｘｉａｎ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　Ｔｏｒｃｈ　Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ，Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　５２８４３６，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍａｎｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｗａｙｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｃ　ｉｎ　Ｆｒｕｉｔｓ　ａｎｄ　ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｒｅｐｏｓｅｄ．ｆｏｒ　ｅｘａｍｐｌｅ　ＵＶ—Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ，ＨＰＬＣ　ｅｔｃ　Ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｐｅｒ，ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｔ、ｖｉｔａｍｉｎ　Ｃ　ｗｅｒｅ　ｒｅｖｉｅｗｅｄ　ｉｎ　ｒｅｃｅｎｔ　ｙｅａｒｓ　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｖｉｔａｍｉｌｌ　Ｃ；ａｔｏｍｉｃ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔ￣＇；ＵＶ—Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；ＨＰＬＣ；ｆｒｕｉｔ；ｖｅｇｅｔａｂｌｅ　维生素Ｃ又叫抗坏血酸（Ａｓｃｏｒｂｉｃｉｄ），广泛存在于植物组织　中，新鲜的水果、蔬菜中含量较多。是一种水溶性小分子生物　活性物质，也是人体需要量最大的一种维生素。维生素Ｃ具有　还原性（其结构式如图１），可以与许多氧化剂发生氧化还原反　应，因此可以利用其还原性测定维生素Ｃ的含量。目前食品中　测定维生素Ｃ含量的方法主要有碘量法０　Ｉ，是利用维生素Ｃ的　氧化还原性为基础的一种氧化还原方法。冈其酸度不易把握，　碘需要标定且易挥发，而Ｖｃ不易稳定保存，使测定结果易出　现偏差，且这种方法不适合微量分析；国标ＧＢ，Ｔ６　１　９５—１　９８６是　采用２，６一二氯靛酚滴定法　Ｊ。利用样品溶液由蓝色转变为粉红　色来辨别其滴定终点的到达。但是多数水果、蔬菜样品其提取　液都具有一定的色泽而导致滴定终点不明显，使测定准确度降　低。另外还有荧光光谱分析法　Ｊ、紫外一可见分光度法、色谱　法、电化学法等，这些方法都存在着一定的局限性，如操作过　程复杂，所用试剂不稳定，速度慢、背景¨ｒ扰大。　近年来，建立的测定Ｖｃ的其他方法还有催化动力学和光　度法相结合的方法，及ＶＣ传感器测定方法，固定ｐＨ滴定法等。　该论文将对蔬菜、水果常用的维生素Ｃ含量的检测方法进行综　述、比较。　０Ｈ　Ｈ　０Ｈ　０Ｈ０　ＣＨ，一ＣＨ—Ｃ—Ｃ—Ｃ—Ｃ　０Ｈ　ｕ　图１　维生素Ｃ的结构式　Ｆｉｇ．１　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｃ　１原子吸收分光光度法　利用原子吸收分光光度法问接测定维生素Ｃ的含量，是利　用维生素Ｃ可以与一些金属离子发生氧化还原反应，通过测定　反应掉的金属离子的量，进而间接计算出维生素ｃ的含量。　１．１以银离子作为氧化剂的间接原子吸收分光光度法　以银离子作为氧化剂的间接原子吸收分光光度法，是利用　维生素Ｃ分子中的有二烯醇基具强还原性，可被硝酸银氧化　为去氢维生素Ｃ，同时产生黑色银沉淀（反应式如罔２）。　Ｈ　图２　Ｆｉｇ．２　维生素Ｃ与银离子反应的反应式　沉淀经离心分离后，将分离得到的沉淀用硝酸溶解后，再　利用原子吸收分光光度计测定银离子的含量，从而接测得维生　素Ｃ含量，具体测定方法如下：　配制一系列浓度的维生素Ｃ标准溶液，依次吸取一定量的维　生素Ｃ标准溶液置于ｉＯ　ｍＬ离心管中，分别加入２　ｍＬ　１　ｍｇ／ｍＬ　Ａ　标准溶液，然后加水使总体积为４　ｍＬ，摇匀，在室温下避光放置　３５　ｍｉｎ离心分离弃去上清液，用２Ⅱ１Ｌ超纯水洗涤沉淀３次，然后　用ｌ：１的浓硝酸３　ｍＬ溶解沉淀，移人５０ｌｎＬＪ的容量瓶中，加水稀　释至刻度。喷入空气一乙炔火焰分别测定其吸光度，以维生素Ｃ　标准溶液的浓度为横坐标，以测得的吸光度值为纵坐标绘制标准　曲线。最后将处理过的待测样按上述方法测定其维生素Ｃ含量。　上述方法巾维生素Ｃ标准溶液及样品的配制都是利用２％　的柠檬酸作为溶剂，并在棕色瓶中保存，原因是维生素Ｃ在溶　液中不稳定，遇氧气、光、热、碱性物质易受破坏，而在适当　的酸性条件下比较稳定，用２％的柠檬酸溶液来配制维生素Ｃ　标准溶液，减缓了维生素Ｃ被氧化的速度，同时消除了一定外　界因素的十扰，使得测定结果比较稳定［４ｊ。　１．２以铜离子作为氧化剂的间接原子吸收分光光度法　文献中报道了以铜离子作为氧化剂的间接原子吸收分光　光度法。该方法也是利用维生素Ｃ在酸性介质中维生素Ｃ可　将Ｃｕ　定量的还原为Ｃｕ　，然后Ｃｕ　与ＳＣＮ一反应生成ＣｕＳＣＮ　沉淀，在高速离心机下有效地分离出ＣｕＳＣＮ沉淀，洗涤后再　经浓硝酸溶解，用原子吸收法测定沉淀中的含铜量，即可推知　样品中维生素Ｃ的含量。具体测定方法如下：　分别吸取１　ｍＬ配制的含一定量维生素Ｃ的标准溶液（随配　随用）（分别含维生素Ｃ　５０、１００、２００、３００、４００、５００　ｇｇ）和样　品提取液，依次放置于已编号的ｌ５　ｍＬ离心管中，各加入１　ｍＬ　ＣｕＳＯ４饱和溶液、１　ｍＬ浓度为２％硫氰酸铵溶液、Ｏ．５　ｍＬ盐酸一　醋酸钠缓冲液和０．５　ｍＬ饱和ＮａＣ　１溶液充分混和，稍后离心分　离，弃去上层清液，小心地用少量水洗涤沉淀２～３次（注意每　次用水不能超过１　ｍＬ），加入０．５　ｍＬ．ｆｉ￣ｊ酸溶解后，转移至ｌＯ０ｍＬ　的容量瓶中加水定容至刻度线，摇匀。分别用原子吸收分光光　度计测定其含铜量，由所得的维生素Ｃ含量的标准曲线，可以　得到相应样品的试验结果。　该方法所得的试验结果相对标准偏差ＲＳＤ在５％以内加标回　收率在９６．５６％～１００．６７％，其精密度和准确度均达到痕量分析要　求。此方法的线性相关系数尺＝Ｏ　９９８９，表明相关性很好　Ｊ。　２紫外可见分光光度法　利用紫外分光光度法测定维生素Ｃ的含量是基于维生素ｃ在　紫外光区有特征吸收，但是因为维生素Ｃ结构中具有不饱和键，　具有还原性，不易稳定存在，直接测定误差较大。所以在利用紫　外分光光度法测定时，维生素标准溶液和待测样的配制条件非常　重要。　［收稿Ｅｔ期】２０１０—０３—３　１　［作者简介］谷雪贤（１９７９一），女，河北邢台人，讲师，　＃要研究方向为精细化学品的合成及分析　（下转第１０６页）

实验一： 0.05mol/L I2标准溶液的配制与标定

一、目的要求：

（1）了解直接碘量法的过程

（2）掌握配制碘标准溶液的方法和注意事项

二、基本原理：

用升华法制得的纯碘可以直接配制碘标准溶液。但一般用市售的I2来配制，然后再标定它的准确浓度。

I2在水中的溶解度很小（20℃为1.33×10－3mol/L），而且容易挥发，所以常将它溶解在浓的KI溶液里，使I2与KI形成KI3配合物，这样既增大了I2的溶解度又降低了I2的挥发性。碘溶液遇光遇热浓度会发生改变，需放在棕色瓶内避光保存。贮存和使用碘溶液时应避免与橡皮塞橡皮管等接触。

在配制I2溶液时需加入少量盐酸。因为在KI中，可能存在少量KIO3，在酸性条件下，KIO3易与KI作用成为I2。另外，在配制Na2S2O3溶液时加入少量Na2CO3，为了使滴定反应不致在碱性溶液中进行，需加入一些盐酸。

I2标准溶液用Na2S2O3标准溶液标定，反应如下：

2S2O32-+I2 = S4O62-+2I-

三、试剂：（略）

四、操作步骤：

（1）I2溶液的配制：取I2 7g，加18g KI，加少量水充分搅拌，使完全溶解，加浓盐酸两滴，用蒸馏水稀释至500ml，盛棕色瓶中，摇匀，用垂熔玻璃滤器过滤。

（2）用Na2S2O3标定I2溶液：精密量取I2溶液25.00ml，加蒸馏水100ml及1：2的盐酸溶液5ml，用0.10mol/L的Na2S2O3滴定，近终点时加淀粉指示液2ml，继续滴至蓝色消失。根据Na2S2O3溶液消耗的体积算出I2溶液的浓度。平行测定三次。

五、数据记录与结果计算：

相关算式：

223223222NaSONaSOIICVCV

六、注意事项：

（1）I2必须溶解在浓KI溶液中，并充分搅拌，使I2完全溶解后，才可用水稀释。

（2）配制好的I2溶液必须放在棕色瓶中，并用玻塞盖紧。

实验二：维生素C片的含量测定

一、目的要求

（1）通过维生素C含量的测定了解直接碘量法的过程。

百度文库

1 姓名：郭沈杰 年级专业：2012级生物科学 同组者：蔡萍萍

学号：12050011012

实验六 维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）

一、实验目的

掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。

二、实验原理

维生素C又称抗坏血酸（ascorbic acid）。在1928年，从牛的肾上腺皮质中提取出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。

还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐。本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。

因此可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。若无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。

三、实验仪器

1、新鲜水果

2、电子分析天平

3、吸管

4、容量瓶 百度文库

2 5、滴定装置

6、锥形瓶

7、研钵

8、漏斗

四、实验试剂

1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水。

2、1%草酸溶液：草酸1g，溶于100ml蒸馏水。

3、标准维生素C液：准确称取10.0mg维生素C，溶于1%草酸溶液，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配制。此溶液浓度0.1mg/ml.

4、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液：称取500mg2，6-二氯靛酚溶于300ml含有104mg碳酸氢钠的热水中，冷却，加蒸馏水并稀释至500ml，滤去不溶物，贮于棕色瓶中，冷藏。每次临用时，以标准抗坏血酸液标定。

五、实验步骤

（一）样品中抗坏血酸的提取：

1、将水果用水洗干净，用滤纸吸取表面水分。

2、称取5.0g，加2%草酸试剂10ml置研钵中研成浆状。

3、称取浆状物5.0g，倒入50ml容量瓶中，用2%草酸溶液稀释并定容，混匀，静止10分钟，过滤（最初数毫升滤液弃去），滤液备用。