近年来，由于抗生素、磺胺等抗菌药物广泛应用，导致了耐药菌株不断出现。测定细菌对药物的敏感程度，对于临床治疗中选择用药，避免滥用药、及时有效地控制感染以及细菌鉴定，具有重要意义。
细菌敏感度的测定方法很多，世界卫生组织推荐的方法为Kirby-Bauer纸片法，该方法具有操作简便、易于掌握、且重视性好的优点，本法是将含药纸片贴敷在接种细菌的琼脂平板上，利用含药纸片在琼脂上的扩散作用来测定细菌对药物的敏感性。K-B纸片法的原理是建立在抗菌药物抑菌环直径大小与细菌的最小抑菌浓度（MIC）之间呈负相关的基础上，即抑菌环直径越大，则MIC越小。
结果判定：按抑菌环直径大小报告敏感、中度敏感或耐药。
敏感：是指被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的某种抗菌药物治疗。
中度敏感：是指通过提高种抗菌药物的剂量或在该药浓集的部位，细菌生长可被抑制，感染可被治愈。这类药物毒性较小，剂量可以加大。β-内酰胺类药物可出现中度敏感。
耐药：是指被测菌株所引起的感染不能用常规剂量的抗菌药物所治愈。
中介度：这一范围是“缓冲域”是由试验的误差造成的不作为报告形式。如确需明确的敏感度，应重复实验或做稀释法，抑菌环为中介度的药物不可提高剂量。 最低抑菌浓度（MID）：抗菌药物能够抑制细菌生长所需要的最低浓度。以针形接种器沾取菌液加至药盒各孔，35℃培养过夜，含抗菌素浓度最低而无细菌生长的（清亮孔），即为MIC。
最低杀菌浓度（MBC）：抗菌药物杀灭细菌所需要的最低浓度。经48小时35℃培养后，含抗菌素浓度最低而无细菌生长的（清亮孔），即为MBC。
由于纸片法影响因素多，很难控制精度，现大多数医院采用MIC测定盒。
MIC由经典二倍肉汤稀释演化而来，具有终点判断精确，重复性好，操作简便等优点。此方法采用病美国DYNATECH接种器，更具科学性。
使用国产“华士达微生物自动分析仪”所做的定量药敏（MIC）试验，报告自动由打印机印出，附印出抗菌素对受试菌的MIC外，还可提供各种药物的用量，给药途径（口服、肌注、静滴）及血和尿中可能达到的药物浓度一览表，供临床医师参考。
常用的抗菌药物敏感试验
1．药敏试验的抗菌药物选择
临床微生物学工作者应熟悉常用抗菌药物的药理学特征和临床适应症，并结合本医院、本地区的常用抗菌药物和常见病原菌的耐药状况进行药敏试验的抗菌药物选择。应重点选择预测药物即此种药物的药敏结果可预测同类药物的敏感性。
2．K-B纸片琼脂扩散法
（1）原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围可抑菌浓度范围内测定菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感性。
(2) 抗菌药物纸片：专用药敏纸片，用加样或浸泡的方法使每片的药量达到一定的规定量，冷冻干燥后密封，-20°C保存备用。
（3）培养基：水解酪蛋白（Mueller-Hinton MH）琼脂是对生长较快的需氧和兼性厌氧菌进行药敏试验的标准培养基，pH7.2-7.4，琼脂厚度为4mm。对营养要求较高的细菌进行药敏试验时，应在MH琼脂中加入相应的营养添加剂。
（4）细菌接种：接种物的准备可采用生长法或直接菌落悬液法。为使药敏试验的接种浓度标准化,应使用0.5麦氏比浊标准的菌液浓度，制备好的菌液应在15min内接种完毕。置35℃孵育16-18h后读取结果，苛养菌应孵育在含CO2的环境中，葡萄球菌和肠球菌必须孵育24h，以检测对苯唑西林和万古霉素的耐药性。
（5） 结果解释和报告：用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径，参照NCCLS标准判断结果。常分为以下三级：
敏感（susceptible）：表示测试菌可被测定药物常规剂量给药后的所达到的血药浓度所抑制或杀灭。中介（intermediate）：指测试菌对常规剂量用药后体液或组织中的药物浓度的反应性低于敏感株，但在测定药物浓集部位的体液（如尿液）或使用高于正常给药量（如β-内酰胺类）临床上使用有效。
（6）耐药（resistant）：指测试菌不能被在体内感染部位能达到的抗菌药物浓度所抑制。
药物敏感试验又称药敏。目的是指导临床针对性使用抗生素，减少细菌耐药的产生。使感染能够及时控制，做到有的放矢。
测定细菌在体外抗菌药物敏感性（以下称药敏试验）的试验方法很多。绝大多数临床实验室以琼脂扩散法作为常规方法测定常见的快速生长的病原菌。本文介绍的是标准纸片扩散法。本文提出的一系列建议有助于药敏试验的标准化。具体地叙述了现行推荐方法的操作步骤，及其适应性和局限性。本文还重温了国际协作研究会（ics）的有关建议和食品药物管理局（fda）的有关规定，并采纳了其中的有关章节。
只根据是否出现抑菌环而不考虑其大小来判断细菌对抗菌药物敏感性的试验方法，结果是不准确的。纸片扩散法试验必须遵循标准的方法学原理，并根据抑菌环与最低抑菌浓度的相关性，并结合临床上已知敏感或耐药菌株的状况进行标准化，结果才能可靠。
要得到可靠结果，必须严格地按照本文的方法进行操作。美国临床实验室标准化委员会（nccls）下设的纸片扩散法药敏试验分委员会推荐的标准方法，以bauer等介绍的方法为基础，是目前叙述最完整的试验方法。其中的解释标准是综合临床和实验室的数据发展而来，并得到证实。
要测定和报告给哪些药物，须与感染科医生、医院的药品委员会及感染控制委员会协商，然后由实验室制定最合适的方案。表1和表1a列出了治疗各类细菌感染有效的药物，其体外药敏试验结果也有助于感染的控制及流行病学研究。 做药敏试验，应从分离平板上挑选各种疑为致病菌的单个菌落，同时做菌种鉴定。不同菌种不可在同一平板上做混合细菌药敏试验。一般避免用临床标本（如无菌体液和尿液）直接做药敏，除非临床上急需且革兰氏染色只见到单一菌种，但随后应再以标准方法重做。对感染性质不同，标本中混有浑浊细菌或正常菌群的情况，其中的细菌也许与感染治疗关系不大，常不必做药敏，不然反会招致错误的引导。
中级临床医学检验技术微生物学及检验（抗菌药物敏感试验、细菌的分类与命名）模拟试卷1 (题后含答案及解析)
题型有：1. B1型题 2. A1型题
A．纸片扩散法
B．E-test试验
C．琼脂纸片洗脱法
D．微量棋盘稀释法E．绝对浓度法
1． 快速生长分支杆菌体外抗菌药物敏感性试验方法
正确答案：C 涉及知识点：抗菌药物敏感试验
2． 结核分支杆菌体外抗菌药物敏感试验方法
正确答案：E 涉及知识点：抗菌药物敏感试验
3． 缓慢生长分支杆菌体外抗菌药物敏感试验方法
正确答案：E
解析：结核分支杆菌和缓慢生长分支杆菌的体外抗菌药物敏感试验的方法使用的都是绝对浓度法，而快速分支杆菌体外抗菌药物敏感试验使用的方法是琼脂纸片洗脱法。 知识模块：抗菌药物敏感试验
4． 最有可能对青霉素敏感的细菌是
A．肺炎链球菌
B．肠球菌
C．铜绿假单胞菌
D．MRSE．沙雷菌
正确答案：A
解析：肺炎链球菌抵抗力较弱，56℃15～30分钟即被杀死。对一般消毒剂敏感。有荚膜株抗干燥力较强。对青霉素、红霉素、林可霉素等敏感。
知识模块：抗菌药物敏感试验
5． MIC是
A．最大抑菌浓度
B．最小抑菌浓度
C．最大杀菌浓度
D．最小杀菌浓度E．敏感
正确答案：B
解析：稀释法药敏实验的结果以完全抑制细菌生长的最低药物浓度(MIC)。
知识模块：抗菌药物敏感试验
6． 下列可使K-B法抑制圈直径扩大的因素是
A．测量时未经过纸片中心
B．接种细菌浓度为1麦氏比浊
C．孵育时间36小时
D．药敏纸片失效E．培养基厚度为3mm
