稳定表达stathmin Ser25磷酸化位点突变的肝癌细胞株的建立

稳定表达细胞色素P4501A1人肝癌细胞系的建立庞莉萍;崔景荣【期刊名称】《中国药科大学学报》【年(卷),期】2006(37)5【摘要】目的:建立稳定表达人细胞色素P4501A1(CYP1A1)的人肝癌细胞系(Bel-7402)。

方法:通过将人细胞色素P4501A1(CYP1A1)的表达质粒转染到人肝癌细胞系(Bel-7402),经G418抗性筛选得到稳定的克隆并扩大培养成系,WesternBlotting检测蛋白的表达。

细胞增殖试验鉴定CYP1A1的多环芳烃类底物二甲基苯并蒽(DMBA)对Bel-7402/1A1细胞的增殖抑制作用。

双核微核实验对Bel-7402/1A1细胞进行了遗传毒理的短期实验。

结果:转染后筛选得到的Bel-7402抗性克隆,Western Blotting检测表明有较高的CYP1A1蛋白表达。

细胞暴露于DMBA时,Bel-7402/1A1与Bel-7402细胞相比,细胞增殖明显抑制。

双核微核试验表明Bel-7402/1A1细胞的微核率随DMBA浓度增高而显著增加,Bel-7402无明显变化。

连续传代后仍有CYP1A1标志酶EROD的较高表达,该酶活性能被CYP1A1抑制剂α-萘黄酮抑制。

结论:建立了一个新的稳定表达CYP1A1的1个肝癌细胞系(Bel-7402/CYP1A1),可代谢多环芳烃化合物产生更大的毒性。

该细胞系可用来筛选能被CYP1A1代谢的化合物,或能抑制CYP1A1活性的化合物,并可用来研究CYP1A1的催化性质及被CYP1A1代谢的化合物的毒性机理。

【总页数】5页(P438-442)【关键词】CYPlA1;Bel-7402;稳定转染;3-甲基胆蒽;二甲基苯并蒽【作者】庞莉萍;崔景荣【作者单位】北京大学医学部天然药物与仿生药物国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.人细胞色素P450 ZE1 cDNA在鼻咽癌细胞系CNE-2的稳定表达 [J], 王水良;贺智敏;陈主初2.肝刺激因子稳定转染人肝癌细胞系的方法建立与表达鉴定 [J], 吴媛;张静;董凌月;安威3.细胞色素氧化酶Ⅱ在无线粒体DNA肝癌细胞系及亲本细胞系中表达的实验研究[J], 张国桥;凌贤龙;陈正堂4.细胞色素P4502 A13野生型/突变体稳定表达Flp-InTM CHO细胞系的建立 [J], 郑丹丹;李靖;王永林;李勇军;刘亭5.人细胞色素P450 2E1 cDNA在鼻咽癌细胞系CNE-2的稳定表达 [J], 王水良;贺智敏;陈主初因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Ｓｔａｔｈｍｉｎ蛋白与肿瘤的研究进展Stathmin蛋白不同的研究组给予其不同的命名，主要有P17、P18、P19、P19K、metablastin、癌蛋白18（Op18）、LAP18等。

研究发现，由于其特有的微管解聚活性，在细胞周期纺锤体的形成过程中发挥十分重要的作用。

多种恶性肿瘤中Stathmin都有高水平表达，通过抑制其表达可以干扰恶性细胞的分裂，从而使细胞生长停滞于G2/M期。

Stathmin的过表达会影响作用于微管化疗药物的疗效。

Stathmin基因反义核酸对多种恶性肿瘤有抗细胞增殖和抗肿瘤效应，为肿瘤生物治疗提供了一个分子新靶点。

1 Stathmin基因Stathmin基因定位于人染色体lp35～36.1上，这个区域在肿瘤中是杂合性丢失或删除频率非常高的位点，该基因全长6.3 kb，由5个外显子和4个内含子组成，翻译起始信号位于第二个外显子末端。

2 Stathmin蛋白的分子结构和生物学活性2.1 分子结构：Stathmin蛋白是从淋巴瘤中筛选出的特征性基因的表达产物，最初从牛大脑中提纯，位于核周体。

其家族成员包括Stathmin，SCG10，SCLIP 和RB3 。

SCG10、SCLIP和RB3 都与Stathmin蛋白在碳末端有高度的同源性，称为Stathmin样结构域。

各种Stathmin样结构域都具有共同的碳末端螺旋并具有共同的属性，仅在活性上稍有差异。

Stathmin由149个氨基酸组成，分子量20 kD，在脊椎动物细胞中普遍存在，是一种高度保守的胞质磷蛋白[1]。

Stathmin 有2个区域：一个是N端的“调节”区域，其16、25、38及63位点为4个丝氨酸( Ser16、Ser25、Ser38和Ser63) ，蛋白激酶作用于这些位点可以使Stathmin 磷酸化[2]；另一个是C端的“作用”区域，存在一个@螺旋结构以螺旋域的形式与其它蛋白相互作用。

2.2 生物学活性：Stathmin蛋白由于其在细胞周期中特有的微管解聚活性，在细胞的增殖和分化及肿瘤发生中有十分重要的作用。

Sedlin蛋白稳定表达细胞株的建立朱恒锐;汪云飞;张庆慧;武标;邢昕;刘晓颖;范礼斌【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2008(43)6【摘要】目的建立稳定表达Sedlin蛋白的细胞株,研究Sed-lin蛋白在细胞内的分布.方法扩增SEDL基因全长编码序列,经双酶切后克隆至真核表达载体pCDGFP 中,将重组表达质粒转染至HEK 293细胞,用G418筛选阳性克隆,荧光显微镜和Western blot检测Sedlin蛋白的表达,并观察Sedlin蛋白在HEK 293细胞中的分布.结果经测序鉴定,成功构建了SEDL基因的真核表达载体,转染HEK 293细胞后,Western blot检测,证明SEDL基因能够稳定有效的表达,荧光观察显示,Sedlin 蛋白在细胞核和细胞质中都有表达.结论成功建立了稳定表达Sedlin蛋白的细胞株,Sedlin蛋白广泛分布于整个细胞中.【总页数】4页(P612-615)【作者】朱恒锐;汪云飞;张庆慧;武标;邢昕;刘晓颖;范礼斌【作者单位】安徽医科大学生物教研室,合肥,230032;安徽医科大学生物教研室,合肥,230032;昆山市第一人民医院检验科,昆山,215300;安徽医科大学生物教研室,合肥,230032;安徽医科大学生物教研室,合肥,230032;安徽医科大学生物教研室,合肥,230032;安徽医科大学生物教研室,合肥,230032【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.稳定过表达人野生型及致病突变A30P、A53Tα-突触核蛋白单克隆SH-SY5Y细胞株的建立 [J], 东惟玲;方琪;张秀艳;赵昀;单立冬;惠国桢2.稳定表达野生型PINK1蛋白SH-SY5Y细胞株的建立 [J], 原相丽;张玉虎;廖书胜;赵保路;唐北沙3.逆转录病毒介导的稳定表达E40rf1和绿色荧光蛋白的胎肝窦内皮细胞株的建立[J], 李慧琳;岳文;裴雪涛;谢小燕;王思涵;韩毅;范增;白云;何丽娟;南雪;裴海云4.稳定表达T-钙黏蛋白的黑色素瘤顺铂耐药细胞株的建立及其生物学特性 [J], 陆海涛; 郭健; 何磊; 刘利君; 段昕所5.小鼠甲胎蛋白基因的克隆表达鉴定及稳定表达甲胎蛋白的小鼠肿瘤细胞株的建立[J], 田耕;易继林;刘积良;翁准因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

稳定表达点突变型DNA聚合酶β的细胞系的建立赵继敏;金戈;杨洪艳;赵国强;黄幼田;王涛;崔华娟;董子明【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2004(013)002【摘要】目的建立稳定表达点突变型DNA聚合酶β的细胞系.方法将已构建的点突变型DNA聚合酶β的真核表达载体用脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞,经G418筛选后得到稳定转染的细胞株,用RT-PCR方法鉴定点突变型DNA聚合酶β mRNA水平的表达.结果与结论建立稳定表达DNA聚合酶β的细胞株,为进一步研究突变的DNA聚合酶β的功能变化奠定基础.【总页数】2页(P114-115)【作者】赵继敏;金戈;杨洪艳;赵国强;黄幼田;王涛;崔华娟;董子明【作者单位】450052,郑州,郑州大学医学院;450052,郑州,郑州大学医学院;450052,郑州,郑州大学医学院;450052,郑州,郑州大学医学院;450052,郑州,郑州大学医学院;450052,郑州,郑州大学医学院;450052,郑州,郑州大学医学院;450052,郑州,郑州大学医学院【正文语种】中文【中图分类】Q555【相关文献】1.稳定表达T7RNA聚合酶的猪睾丸细胞系的建立 [J], 祁光宇;刘学荣;刘萍;刘斌;王凡;武发菊;杜平;董金杰;黄银君;牟克斌2.稳定表达野生型DNA聚合酶β的细胞系的建立 [J], 赵继敏;黄幼田;杨洪艳;金戈;郑智敏;董子明3.稳定表达缺失型DNA聚合酶β的CHO细胞系的建立 [J], 赵继敏;杨洪艳;赵国强;黄幼田;郑智敏;金戈;董子明4.稳定表达野生型和突变型DNA聚合酶β的NIH3 T3细胞系的建立及其生长特性 [J], 金戈;杨洪艳;赵继敏;黄幼田;郑智敏;赵国强;赵勤;吴景兰;董子明5.重组突变型 DNA聚合酶β表达载体pcDNA3.1-polβ的构建 [J], 赵国强;刘栋;赵勤;杨洪艳;金戈;赵继敏;高丽;董子明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

稳定表达siRNA-STAT3基因Hep-2细胞系的建立孙红村;王俊阁;皮丽宏;高昆【期刊名称】《中国耳鼻咽喉头颈外科》【年(卷),期】2010()8【摘要】目的建立稳定表达siRNA-STAT3基因的Hep-2细胞系,为进一步探讨STAT3在喉癌中的作用机制提供基础。

方法产生针对STAT3的小发卡状RNA寡核苷酸,连接到PGPU6/GFP/Neo载体,双酶切和质粒测序鉴定真核表达质粒PGPU6/GFP/Neo-siRNA-STAT3,G418筛选稳定转染细胞系,蛋白印迹法测定p-STAT3的表达。

分别用MTT法绘制生长曲线和平板克隆形成实验测定单细胞增殖能力。

结果构建了重组干扰质粒并筛选出了阳性克隆,蛋白印迹法鉴定STAT3被抑制后p-STAT3表达也明显下降。

生长曲线显示siRNA-STAT3组3天后抑制效应才较为明显(P=0.001),5d后抑制效应更加突出(P=0.000),其抑制效应呈时间-效应关系。

另外,siRNA-STAT3组单克隆形成率也明显低于对照组(P=0.000)。

结论本研究筛选了可稳定、较高水平表达siRNA-STAT3的Hep-2细胞系。

干扰STAT3表达对细胞增殖抑制的作用较为明显。

【总页数】4页(P399-402)【关键词】喉肿瘤;癌,鳞状细胞;转录激活因子3;转染;细胞增殖【作者】孙红村;王俊阁;皮丽宏;高昆【作者单位】煤炭总医院耳鼻咽喉科;河北省人民医院耳鼻咽喉科;河北省人民医院麻醉科【正文语种】中文【中图分类】R739.650.2【相关文献】1.口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体的构建及VP1基因稳定表达细胞系的建立[J], 代文君;王洪梅;刘晓;高运东;于力;王立群;仲跻峰;何洪彬2.应用重组慢病毒表达载体建立抑癌基因WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞系 [J], 马文霞;贺莉;刘椿;张庆玲;丁彦青3.HIV-1型Nef基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立 [J], 李苗苗;杨霄旭;杨朝霞;向双林;韩梅4.猪流行性腹泻病毒CH-HuN1301株N基因重组表达载体的构建及稳定表达细胞系的建立 [J], 唐青海;杨海;黎露;陈果亮;何丽芳;刘最;王芳宇5.RHBDF2基因过表达慢病毒载体的构建和稳定表达RHBDF2细胞系的建立 [J], 陈少凤;李胜男;邓福;朱佩仪;李友因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

stathmin表达及其磷酸化状态在肝癌发生发展中的作用的开题报告概述：肝癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在近年来不断上升。

尽管现有的治疗方法已经不断改进，肝癌仍然是一个难治疾病。

因此，深入探索肝癌发病及其发展机制对于该疾病的治疗和预防具有重要的意义。

Stathmin是一种微管相关蛋白，在肝癌中其表达水平升高。

研究表明，高表达的stathmin可以促进肝癌细胞增殖、侵袭和转移等生物学过程。

此外，stathmin的磷酸化状态也与肝癌的发生和发展相关。

因此，研究stathmin在肝癌中的表达及其磷酸化状态的变化对于深入了解肝癌发生和发展机制具有重要意义。

研究目的：1. 探究stathmin在肝癌中的表达及其与疾病发生和发展的关系。

2. 研究stathmin的磷酸化状态在肝癌发生和发展中的作用。

3. 探索调节stathmin表达和磷酸化状态的分子靶点，并寻找新的治疗方法和策略，促进肝癌的治疗和预防。

研究方法：1. 采用免疫组织化学、Western blot等技术分析stathmin在肝癌中的表达和分布，并对其常见磷酸化位点进行检测。

2. 通过stathmin和肝癌相关分子的高通量筛选，筛选出调节stathmin表达和磷酸化状态的新的分子靶点，包括肿瘤相关基因、信号通路等。

3. 建立肝癌细胞模型，观察干预stathmin表达和磷酸化状态对细胞增殖、迁移、侵袭和转移等生物学特性的影响，并研究其分子机制。

预期结果：1. 分析stathmin在肝癌中的表达及其表达水平与疾病相关的临床特征之间的关系。

2. 研究stathmin的磷酸化状态在肝癌发生和发展中的作用，进一步揭示stathmin参与肝癌恶性转化的分子机制。

3. 发现新的调节stathmin表达和磷酸化状态的靶点，并探索治疗肝癌的新方法和策略。

癌蛋白p18在细胞中的生物学作用段佳【摘要】@@ 癌蛋白p18(Stathmin/oncoprotein 18)是一个相对分子质量为19 kD的细胞质蛋白,与细胞微管的形成有关,是近来研究较多的微管不稳定蛋白.在细胞周期的不同阶段,癌蛋白p18通过自身的磷酸化和去磷酸化作用调节细胞微管系统的动态平衡.癌蛋白p18通过促进微管的解聚或阻止微管的聚合从而影响有丝分裂纺锤体的形成,影响细胞的增殖与凋亡[1].【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2011(040)005【总页数】3页(P498-500)【关键词】微管;肿瘤;癌蛋白p18【作者】段佳【作者单位】桂林医学院,广西桂林,541004【正文语种】中文癌蛋白p18(Stathmin/oncoprotein 18)是一个相对分子质量为19 kD的细胞质蛋白,与细胞微管的形成有关,是近来研究较多的微管不稳定蛋白。

在细胞周期的不同阶段,癌蛋白p18通过自身的磷酸化和去磷酸化作用调节细胞微管系统的动态平衡。

癌蛋白p18通过促进微管的解聚或阻止微管的聚合从而影响有丝分裂纺锤体的形成,影响细胞的增殖与凋亡[1]。

癌蛋白p18在多种恶性肿瘤细胞中都有高水平的表达,抑制癌蛋白p18表达可以干扰恶性肿瘤细胞的有丝分裂,抑制肿瘤细胞的增殖,诱导肿瘤细胞的凋亡。

同时能够协同某些化疗药物的抗癌作用,癌蛋白p18是一个潜在治疗肿瘤的新靶点。

癌蛋白p18的基因定位于人染色体1p35～36.1上,这个区域是肿瘤细胞基因组DNA杂合性缺失或删除频率非常高的位点,由5个外显子和4个内含子组成,翻译起始信号位于第2个外显子末端。

癌蛋白p18最初是从淋巴瘤中得到的,位于细胞核周围。

癌蛋白p18的家族成员包括癌蛋白 p18、SCG10、SCLIP和RB3等。

SCG10、SCLIP和 RB3与癌蛋白p18在碳末端有高度的同源性,称为癌蛋白p18样结构域。

癌蛋白p18样结构域都具有共同的碳末端螺旋和相同的属性,仅在活性上稍有差异。